《脐血源神经干细胞移植治疗神经系统疾病临床总结和分析(完整版)实用资料.doc》由会员分享，可在线阅读，更多相关《脐血源神经干细胞移植治疗神经系统疾病临床总结和分析(完整版)实用资料.doc（50页珍藏版）》请在taowenge.com淘文阁网|工程机械CAD图纸|机械工程制图|CAD装配图下载|SolidWorks_CaTia_CAD_UG_PROE_设计图分享下载上搜索。
1、脐血源神经干细胞移植治疗神经系统疾病临床总结和分析（完整版）实用资料(可以直接使用，可编辑 完整版实用资料，欢迎下载）脐血源神经干细胞移植治疗神经系统疾病临床总结和分析杨万章 , 吴 芳 , 张 敏 , 杨佳勇 , 梁豪文 , 盛佑祥 , 胡 祥 , 赵 宁 , 杨志刚 , 唐 映摘要 :目的 客观总结和评价神经干细胞治疗神经系统疾病综合效果及临床存在的问题 。 方法 250例偏瘫 、 截瘫 、 脑瘫 、 神经 系统变性疾病等通过静脉输注 、 鞘内注射 、 局部注射使用脐血源神经干细胞 4次8次 , 每次间隔 1周 , 治疗前后进行常规 、 生化 、 免 疫检查 , 临床相关量表评定 , 并观
2、察其临床效果和副反应 。 结果 神经干细胞治疗对脊髓损伤 、 脑瘫 、 偏瘫 、 遗传性共济失调 、 多发性 硬化 、 脑炎后遗症 、 周围神经损伤等部分病例有明显效果 , 且临床使用安全 。 对运动神经元病有短期疗效 , 但不能阻止疾病发展 , 对 重症脑变性疾病 , 单一疗程效果不佳 。 结论 神经干细胞对神经系统疑难病有临床效果 , 但效果不齐同 。对病因尚不明确的疾病 , 能改善症状 、 体征 , 不能阻止其恶化 、 复发 。 副反应与细胞质量和个体差异有关 。关键词 :脐血源神经干细胞 ; 神经系统疾病 ; 临床评价 ; 安全性中图分类号 :R741 R255. 2 文献标识码 :B
3、 文章编号 :167221349(2021 0320287204 神经系统的疑难病以及各种原因引起的瘫痪都是难治性疾 病 。 过去 , 人们对于神经系统的认识是 , 损坏的神经不可修复和 再生 。 近年来有关中枢神经系统可塑性及神经干细胞再生理论 的出现 , 给该类疾病的治疗带来了希望 。神经干细胞的研究是众多医学 、 生物科学家都在努力的工 作方向 , 基础研究方兴未艾 , 临床研究还在探索中 。 动物实验证 明了神经干细胞的存在和有效性 , 并在理论上有所突破 , 但因人 类很多疾病无法在动物身上复制 , 没有更有效的办法 , 因此 , 接 受干细胞治疗 , 也是探索性研究 。但首先建立在
4、患者自愿及安 全 、 无害 、 无损伤的前提和基础上 , 观察和积累临床经验 ,广 。, 各种原因导致的偏瘫 、经系统疾病的临床康复 , , 其效果也不尽满意 。 尤 其是那些截瘫和脑瘫患者 , 残疾将可能伴随他们一生 , 传统康复 及现代康复的作用有限 , 在力所能及的范围内进行一些主动尝 试 , 利用神经干细胞治疗技术 , 让那些绝望的患者和家属看到希 望和光明 。 我们立足于基础研究 , 经过认真严格的预试验 , 进行 大量谨慎 、 安全地选择病种 , 应用神经干细胞治疗 , 积累了一些 临床资料 , 获得了一些临床体会 , 总结如下 , 与同仁共享 。 1 脐血源神经干细胞移植治疗神经
5、系统疾病总结1. 1 临床资料1. 1. 1 一般资料 2005年 7月 2007年 6月 , 治疗患者共 250例 。 男性 171例 , 女性 79例 ; 最大年龄 81岁 , 最小年龄 4. 5个 月 ; 职业无明显特殊性 。 疾病结构 :截瘫 64例 , 脑瘫 50例 , 中风 后遗症及脑外伤 23例 , 运动神经元病 23例 , 脊髓小脑性共济失 调 (SCA 1、 2、 3、 6、 不确定型 26例 , 弗里德里希共济失调 6例 , 多系统萎缩 (MSA 7例 , 多发性硬化 23例 , 自闭症 4例 , 遗传性 痉挛性截瘫 (HSP 5例 , 脑炎后遗症 4例 , 脊髓肌萎缩 3
6、例 , 缺 血缺氧性脑病 4例 , 进行性核上性麻痹 , 皮质底节变性 , 慢性格 林巴利 , 肾上腺脑白质营养不良 , 视神经萎缩 、 臂丛神经损伤 、 腓 总神经损伤 、 脊髓型颈椎病各 1例 。 其中 15例做过 (23 个疗 程治疗 。 分别来自中国 、 美国 、 英国 、 加拿大 、 意大利 、 匈牙利 、 罗 马尼亚等 28个国家和地区 。1. 1. 2 干细胞来源以及治疗途径 干细胞来自健康分娩孕妇 的脐带血 (检测艾滋病病毒 、 梅毒抗体 、 肝炎标志物 5项 、 Torch 5项等 , 经由深圳市北科细胞工程研究所进行分离 。 提取 、 培 养 、 扩增及向神经干细胞诱导传代
7、 4代6代 。每份细胞数量 约达 1. 5107/mL 3. 0107/mL , 其中约 80%间质干细胞 , 20%神经前体细胞 。 每次移植前由患者签署干细胞治疗知情同 意书 。神经干细胞治疗次数 1疗程 , 最多治疗次数 8次 , 最少 2次 脑瘫 、 3疗程 , 部分 2疗 :(侧脑室 、 查 和 评 价方 法 每 例 患 者 均 常 规 进 行 血 液 DNA 抗体 、 梅毒抗体 、 肝炎标志物 (甲 、 乙 、 丙 、 丁 、 戊 IgM 抗体 、 Torch 5项检查 。每例患者均采用自身前后对照的方式观察干细胞治疗期间 各项指标的变化 。 干细胞治疗前及结束后测定血液免疫球蛋白
8、 (IgA 、 Ig G 、 IgM 、 补体 C3、 补体 C4、 T 细胞亚群 、 肝肾功能 、 血 脂 、 血糖 、 电解质 、 血清酶学 (方法均按试剂盒要求进行 、 血尿常 规检查 。部分患者进行了脑脊液神经干细胞标志物巢蛋白 (Nestin 及 CD34表达检测 , 静脉血液及脑脊液神经原烯醇化酶 (NSE 及 2微球蛋白 (22M G 的检测 。所有患者治疗前后均经过全面的临床评价 、 影像学检查 (CT 、 MRI 。 截瘫患者检查尿流动力学及肌电图 ; 其他神经系 统疾病患者如肌萎缩侧索硬化 (AL S 均做肌电图检查 , 脊髓小 脑性共济失调者做眼底及心脏彩超检查 。功能量
9、表 :偏瘫患者采用 Fug 2myer 评分及日常生活能力评 分 (BI ; 截瘫患者采用 ASIA 评分 , 部分患者进行电生理 、 尿流 动力学的评价 ; 脑瘫患者采用 G esell 评分 、 肢体粗大运动功能 、 肌张力 、 儿童智能检测评分 ; AL S 用国际通行的 Norris 量表测 评 ; 多发性硬化 (MS 采用 MS 量表测评 ; 脊髓小脑性共济失调 采用 Berg 量表评价其平衡功能 ; 其他病种以临床检查及相应适 宜量表进行评定 。全部患者均记录详细的登记表 。1. 2 统计学处理 计量资料采用 t 检验或者配对 t 检验 , 同时 对数据用卡方检验进行校正 , 以期
10、提高可信度 。2 结 果儿童脑瘫 、 其他疾病儿童患者 , 成人患者的临床安全性评价 资料另文报道 。2. 1 临床效果宏观评价 据临床观察 , 所有接受干细胞治疗的 7 82中西医结合心脑血管病杂志 2021年 3月第 7卷第 3期 患者都有不同程度的自觉症状改变 , 目前认为这是干细胞的旁 分泌的营养因子作用所致 。但是实质性的改变 , 主要看瘫痪患 者运动能力及感觉的改变程度 ; 神经系统疾病要看引起主要障 碍的体征根本改变的程度 。 如果在常规技术及药物已无法取得 实质性进步的情况下 , 干细胞治疗的近期和远期效果 , 均有进一 步研究的价值 。2. 1. 1 截瘫 该类患者 64例
11、, 主要为四肢瘫 、 截瘫 ; 创伤为主 , 有 2例患者为脊髓血管闭塞引起 。病程最短 2个月 , 最长 24年 。 经 (12 疗程治疗后 , 在所能随访到的患者肌力改变的有 10例 , 尤其是伤后 4年10年的患者 , 由完全性损伤致截瘫的 患者股四头肌肌力达到 3级 , 强烈要求第二次进行干细胞治疗 。 明确随访到因截瘫后导致肌张力高达 Ashwoth 3级的患者 , 治 疗后肌张力或痉挛程度明显下降的患者随访到有 5例 , 均属于 实质性的改变 。 总体印象伤后时间短的患者效果较好 , 截瘫比 四肢瘫效果好 。2. 1. 2 脑瘫 脑瘫患儿逐年增多 , 达到 0. 4%0. 6%。来
12、本 院治疗的各类脑瘫患儿 50例 , 年龄 4. 5个月至 18岁 , 多数年龄 较大 (超过 5岁 , 病程长 , 运动障碍严重 , 且一半以上患儿伴有 其他问题如智障 、 癫痫等 , 影像学大多有脑实质的改变 , 严重的 约有 50%大脑有病变 。 经过治疗 (12 个疗程 , 运动和智力水 平明显改善 , 随访到 11例 。 尤其对于颈软而四肢肌张力高的患 儿 , 具有双向调节作用 。同时观察到 3岁以内的脑瘫患儿效果 好 , 反复治疗 , 效果有累加作用 。2. 1. 3 偏瘫 包括脑出血 、 脑梗死 、23例 。 其中脑干梗死 2例 , 脑梗死 3例 , 2例 。 主要表现在运动功能
13、 、 。 高 、15%。实质性改变 。2. 1. 4 运动神经元病和肌萎缩侧索硬化 共 23例 , 轻者仅舌 萎缩 , 说话不流利 , 重者不能言语 , 头颈不能举 , 双上下肢均不能 活动 , 日常生活完全依赖 。 资料完整的 18例患者干细胞治疗前 后的 Norris 评分为 (61. 1617. 96 分与 (64. 1117. 43 分 (P 0. 05 。 但经观察随访 , 该疗效可以持续约 3个月 , 之后又 进一步恶化 , 随访 3个月后死亡的患者有 5例 。效果不能持久 的原因主要是干细胞治疗只能修复受损的神经元细胞 , 但不针 对病因 。 致病的原因不消除 , 该类病的治疗前
14、景不明朗 。2. 1. 5 遗传性脊髓小脑性共济失调和弗里德里希共济失调 共 32例 , 其中 1,2,3,6未定型 SCA 26例 , 弗里德里希共济失调 6例 。 干细胞治疗前后除常规检查外 , 均对脊髓行 MRI 检查以 观察小脑脊髓的萎缩程度 。 最能反映患者治疗前后平衡能力的 Berg 量表结果如下 :完整资料 27例 , 评分分别为 (35. 6211. 25 分与 (45. 259. 33 分 , 治疗后 Berg 评分较之前增加 (P 0. 05 。 目前随访结果 , 平衡能力的改善持效较长 。迄今 为止发现干细胞治疗本类患者效果良好 。2. 1. 6 多发性硬化 共 23例
15、。本类患者症状表现较多样 , 中 枢神经系统症状有视力下降 , 局灶性或偏侧运动障碍 , 包括肌张 力增高或肌张力下降 , 发展到颈胸段 , 以高位截瘫多见 , 同时伴 有神经源性膀胱 。 1例 50岁 MS 患者双下肢运动障碍 , 小便排 出困难 , 经 1个疗程干细胞治疗后症状改善 , 次年再次前来接受 治疗时 , 小便已不需留置导尿 , 走路也不依赖拐杖 。 干细胞不能 预防复发 , 如果复发或恶化 , 需对症对因进行治疗 。2. 1. 7 MSA 和 HSP 分别为 7例和 5例 。 该类疾病属于神经 系统变性疾病 , 临床常出现语言含糊不流利 , 吞咽困难 , 平衡障 碍 , 下肢或
16、上下肢肌张力高 1。 接受治疗的患者最短超过 3个 月 , 近远期疗效是上述症状体征改变明显 , 且维持较好 。 典型病 例有 1家族姐妹兄弟 3人均有痉挛性截瘫伴帕金森叠加 , 脊髓 磁共振检查都已显著萎缩 。 接受治疗前哥哥 (47岁 、 姐姐 (57岁 均不能坐 , 更不能走 , 经干细胞治疗 1个疗程 , 并配合瘫痪综 合训练及平衡训练 ,1个月后姐姐自己扶栏杆可以站立 , 继而扶 栏行走 ; 哥哥恢复部分工作 , 在家可以做简单饮食 , 洗自己的衣 服等 。2. 1. 8 缺血缺氧性脑病和脑炎后遗症 分别为 4例 。缺血缺 氧性脑病病程最长 12年 , 最短 3年 , 其中 2例近于
17、植物生存 。 头颅 CT 扫描 , 均有明显脑萎缩 。 于 4岁游泳时溺水而致病者 , 接受治疗时已 14岁 , 发育畸形 , 对熟悉的声音有微弱的反应 。 经干细胞治疗 1疗程 ,2例植物生存患者亲属均发现患者对刺 激和言语的反应更加灵敏 。而脑炎后遗症患者 , 效果最佳的 1例 11岁男孩 , 在患病后 10个月求治 , 经过 2次静脉 、 2次腰椎 穿刺移植干细胞后 , , 康复治疗能够配合 。 再经 2。 迄今治疗后两年 , 学习 , , 项检查阴性 。2. 43, 表现语言障碍 、 部分患儿脑实质有改变 。 1个疗程治疗 , 可达 30%左右 。10 脊髓肌萎缩 4例 。幼儿或儿童发
18、病 , 是否遗传不完 全清楚 , 治疗后及其效果改善明显 , 且血清肌酸磷酸激酶也明显 降低 , 尤其是四肢肌力普遍可提高 2级 。但是 随访国内患 者 , 认为在半年后病情有反复 。2. 2 短期副反应评价 经 250例总结 , 神经干细胞治疗过程 中 , 整个 1305次的干细胞治疗 , 发生头痛有 29例次 , 发生率 2. 2%; 以 下依 次 为 腰 腿 痛 11例 次 (0. 84% ; 发 热 13例 次 (1. 00% ; 寒战 3例次 (0. 23% ; 呕吐 6例次 (0. 46% , 总反应 62例次 (4. 7% 。 发热的患者 38. 5 , 头痛 、 腰痛 ,3d
19、之内可 以缓解 , 不影响日常生活 , 不加重原有病情 。 反复应用不会产生 抗原抗体反应 。 静脉输注的未见有静脉炎 。 腰椎穿刺蛛网膜下 腔移植神经干细胞及颈部小脑延髓池穿刺 、 侧脑室穿刺均未见 引起颅内感染者 。 这些副反应与部分细胞质量及个体敏感性有 关 。在治疗过程中意外地发现其他副反应 , 在治疗原发病时 , 有 秃顶的患者经过 2个月后长出了较多的新发 ; 白发苍苍的老者 , 长出很多黑发 。 尤其是白种人 , 全白的头发 , 在用过中国人的干 细胞后长出很多黑头发 。 中年女性 , 因其他原因闭经的患者 , 在 用过干细胞后再次有了月经 , 过去已经显示绝经的激素水平 , 在
20、 月经再潮后 , 激素水平亦有显著改善 。中年男性神经系统疾病 患者原本已经低下的性功能 , 经用干细胞后 , 其性能力得到恢 复 。3 讨 论3. 1 影响脐血源神经干细胞治疗的相关因素3. 1. 1 移植细胞的种类 本试验所用干细胞主要是脐血来源 的神经干细胞 , 仅有部分属于自体骨髓干细胞 。 所得结果仅代 表这一来源干细胞的结果 。 自体骨髓干细胞的使用不存在医学882 CHIN ESE J OU RNAL OF IN TEGRA TIV E M EDICIN E ON CARDIO 2/CEREBROVASCUL AR DISEASE March 2021 Vo1. 7 No. 3
21、伦理障碍 , 但短期反复自体骨髓采集 , 影响自身健康 。 对于神经 遗传病 、 自身免疫性疾病亦不适宜 。自体外周血干细胞理论和实践可行 , 但如经粒细胞集落刺 激因子动员后 , 大量干细胞进入血液 , 短期内白细胞总数达到 30109/L 50109/L , 有引起血栓形成的可能 , 且有胃肠道 的刺激副反应 。 老年患者应慎重选择 。3. 1. 2 影响神经干细胞移植效果的因素3. 1. 2. 1 干细胞移植数量 、 活力和存活率 理论上干细胞有强 大的分裂增殖能力 , 少量的干细胞移植后就应当起到明显作用 , 但进入体内后受各种理化因素影响 , 加上存活率和细胞活力的 变化 , 其发挥
22、作用的干细胞究竟有多少尚无定论 。 但据观察 , 进 入体内的干细胞数量 、 活力及活率 , 即转化为神经干细胞的数量 及实际到达病灶起修复作用的干细胞数量与疗效成正比 。 这与 实际进行脑脊液检测 Nestin 和 CD34阳性细胞比例的结果相一 致 。3. 1. 2. 2 移植时机 、 频率 干细胞移植时机主要看伤后的时 间 。 尽管脊髓损伤在 10年以后仍有进步 , 但休克期过后即行移 植效果会更理想 。 这当然看原发伤后手术是否成功 , 损伤的程 度 。 同样 ASIA A 级的脊髓损伤 , 其局部病变仍有差异 。如果 损伤后 1年肌张力仍是 0级 , 预示其损伤严重 , 产生效果的机
23、会 就低 。 移植频率初步采用 1周移植 1次的方案 。 这是因为毕竟 发现其免疫球蛋白和 T 细胞亚群部分指标 , 部分人还是偏低或 低下 。 频繁使用可能会影响免疫功能20多份神经干细胞的四肢瘫患者 ,严重 , 其整体身体状况 、 双上肢肌力 、 腹直肌 、力都有明显提高 , 接近 4级 , 级 , 脊髓 MRI 。3. 1. 2. 3 个体差异 ( 观察到年龄小的患 者因本身代谢旺盛 , 细胞更新分裂活跃 , 效果较好 。 而年龄过大 如 70岁以上的患者 , 全身的器官组织细胞都在退化 , 加上病情 较重 , 效果就不理想 。 目前无循证医学证据表明男女性别对干 细胞移植的敏感程度有差
24、异 。 脊髓损伤从表面看男性效果好于 女性 , 但神经系统疾病则差异不明显 。3. 1. 2. 4 病种差异 外源性损伤 、 炎症 、 变性疾病 、 遗传疾病 、 损伤的修复一般不反跳 , 如脊髓损伤产生疗效的患者一直走向 好转 。 但是变性疾病 、 自身免疫性疾病 、 运动神经元病 、 脊髓肌 萎缩患者 , 干细胞治疗后短期的效果较好 , 远期效果不能肯定 。 因为干细胞只负责修复重建神经 , 不能阻止病因的侵袭 。3. 1. 2. 5 移植途径 (静脉 、 鞘内注射 、 局部病变部位 尽管理 论上说静脉移植后 , 干细胞可以通过血脑屏障 , 但数量难以定 论 。 因此仍以局部治疗或通过脊髓
25、腔输注干细胞作为首选 。 3. 1. 2. 6 细胞来源种类差异 仅有脐血源 、 自体骨髓 、 胚胎 、 胎 盘羊膜上皮干细胞使用和观察的经验 。 上述来源的干细胞 , 来 源的数量决定干细胞的数量 , 质量控制的条件决定干细胞的活 力 。 不同的细胞使用中是否安全性反应不同 , 观察到凡是静脉 途径使用 , 均未见有发热等不良反应 , 但是腰穿鞘注干细胞有约 3%的患者有腰痛或发热 , 胚胎干细胞亦不例外 。3. 1. 2. 7 是否配合其他治疗方法 (如诱导因子 诱导脐血间 质干细胞向神经元细胞转化 , 体外诱导因子的使用是必要的 , 我 们采用鼠神经生长因子 (9000Au , 厦门北大
26、之路生物 及三七总皂甙注射液 (0. 5g , 吉林省东北虎药业 进行 对比研究 , 总计 70例患者接受了试验 , 每次用干细胞输注到蛛 网膜下腔后 , 对随机分为神经生长因子组和三七总皂甙组的每 位患者连续使用 3d , 总计 12支药物 , 前者通过肌肉注射 , 后者 静脉滴注 。 每位患者治疗前后采集脑脊液 , 检测标志干细胞转 化为神经干细胞的巢蛋白 , 计算百分比 , 结果治疗前后比较差异 有统计学意义 (P 0. 05 。3. 2 神经干细胞移植需要甄别的一些问题3. 2. 1 干细胞移植配合康复训练时效果如何甄别 除部分炎 性神经病 , 大多复杂疑难神经系统疾病一经确诊 , 即
27、宣告无药可 用 。 尤其是遗传及部分变性疾病的治疗更是世界性难题 。 神经 系统疾病均有肌力 、 肌张力 、 关节活动度 、 平衡能力 、 认知 、 吞咽 、 语言的改变 , 神经康复治疗措施是各类瘫痪患者恢复肌力 、 抑制 高肌张力 、 维持关节活动度及平衡能力等的重要措施 。配合干 细胞治疗进行适宜的康复理疗 , 对患者丧失的各种功能恢复有 较大帮助 。 但是 , 对于一些外伤性的神经损伤如截瘫 、 颅脑损 伤 , 即使在 1年以上仍有通过康复训练达到恢复部分功能的效 果 , 尤其是不全损伤的截瘫 。 这成为一些学者质疑神经干细胞 移植效果的依据 。 实际上 , , 对于完全性截瘫 , 伤
28、后 8个月到 1年零 3, 也是评伤评残的法律 , ,ASIA A 级损伤的截 , 3年4年的患者 , 移植神经干细胞后 股四头肌的肌力逐渐恢复到 2级3级 , 不能说 , 因为患者此前 3年内间断作康复训练 , 干细 胞移植前的评估 , 下肢的 ASIA 评分依然是零分 。对于过高的 肌张力 (Ashwoth 3级 , 主要是大腿内收肌群 、 股四头肌 、 股二头 肌 , 干细胞治疗期间即可以降低至可以分腿达 30度 , 膝关节屈 曲 10度15度 , 不能说是训练的结果 , 如果是手法的结果 , 停 止治疗后即又恢复原样 , 但所见的患者 , 接受干细胞移植后 5个 月 , 其所产生的效果
29、一直维持 , 并继续进步 。事实上 , 神经干细 胞的作用凸现在其可双向调节 , 即低肌张力可以升高 , 并带动出 现肌力的增强 , 高的肌张力可以降低 。尤其是脊髓的伤病出现 的临床症状效果似乎更好 。干细胞移植结合现代 、 传统针灸推 拿的康复训练是一种模式 , 这样的方法可以减轻伤残程度 , 提高 自理生活的能力 , 也提高了生存质量 。3. 2. 2 把神经干细胞用于多种疾病是否滥用 医学科研的各 个方面 , 出现新技术 、 新方法 、 新药物后都是试图在多个领域应 用 , 以期解决各种棘手或者难治的疾病 。转基因 、 纳米技术 、 基 因疗法等等 , 都是在多领域使用来寻求效果 。
30、在不知道神经干 细胞对神经系统哪些疾病更有效果时 , 使用副反应小 、 几乎少有 排异的神经干细胞用于难治的神经系统伤病及疾病 , 然后总结 出效果产生的比例和有效病种 , 加以筛选 , 最后更具针对性的使 用 , 是一种明智的做法 。何况其副反应小到可以不计 2。这些 工作总需要人来做 , 或者说是探索治疗方法未涉及到的方面 , 因 此不能说是滥用 。3. 2. 3 神经干细胞临床应用存在的不齐同现象 人们普遍对 该治疗方法具有很高期望 。由于同类疾病表现的多样化 , 干细 胞的临床应用效果存在差异 。 对于脑部的变性疾病 、 脑损伤 、 脑 的血管病变 、 炎症后遗症 , 使用 (12 个
31、疗程干细胞后 , 产生效 果的比例总是小于效果不明显的病例 。 而脊髓水平上的病变 , 9 82中西医结合心脑血管病杂志 2021年 3月第 7卷第 3期 效果明显的几率相对高一些 。 这是什么原因 ? 从粗放的临床观 察还难以得出明确的答案 。是脑细胞的结构和机能更高级 , 难 以修复 , 还是使用的数量不够 , 质量不能达到要求 ? 这些问题需 要进一步深化研究 。3. 2. 4 神经干细胞临床应用后部分现象的中医学思考 神经 干细胞使用后产生一些临床现象如发白转黑 、 秃发患者长出新 发 、 患者的性功能增强 、 卵巢早衰者使用后可以规律地行经 , 而 雌激素水平也相应提高 。 中医认为
32、 , “肾为先天之本 , 主生长发 育和生殖 , 主骨生髓通于脑 , 开窍于耳和二阴 , 其华在发” 。这些 生理作用都赖于肾阴肾阳的协调 、 气化作用而实现 。先天之精 充盛 , 禀赋敦厚 , 则阴平阳秘 , 身体强健 , 反之 , 体弱多病 。干细 胞来源于孕育精灵的胞宫脐带血 、 骨髓和胚胎 , 可以看作采集了 先天之精气 , 达到了生精益髓的作用 , 也即是抓住了治本求源这 一根本 。 上述干细胞治疗后的表象所反映的本质 , 也是因为干 细胞填补了患者先天之精 , 从而使肾精充盛 , 阴阳和顺 , 能使饮 食精微气化蒸腾 , 敷布全身 , 维持人体正常的生命活动 。因此 , 诸如生发
33、、 黑发 、 性机能的提高 、 经断再来 、 脑脊髓病变的改善 , 无不与干细胞这种 “ 滋补肾精” 的作用有关 。干细胞治疗神经系统疾病的方法 , 在国内的临床试验已达 7年之久 。 但干细胞在临床其他方面的应用已经有 70年的历 史 。 目前 , 干细胞在国内多家医院或研究机构进行包括神经系 统 、 循环系统 、 消化系统 、 骨骼系统等多种病种的临床和基础试 验 , 在截瘫 、 脑瘫 、 中风后遗症 、 早老性痴呆 、 遗传性共济失调 、 痉 挛性截瘫 、 视神经萎缩等神经系统疾病 、 心力衰竭 、 、 股 骨头坏死等疾病方面已显示良好的效果 ,认 。 而 2007的成果 。 , 完善从
34、基 础到临床的各个环节 , 包括质量标准 , 治疗方法的再选择 , 靶向 使用 , 长期安全性再评价等 , 使之成为人类利用自身资源攻克不 治之症的有力武器 。利用人体或者动物自身资源作为治疗工具 , 治疗人体自身 疾病的案例数不胜数 , 包括生化制药 、 生物合成 、 器官移植等等 , 无不与人体自身息息相关 。 来自于胎脑或者胚胎干细胞或许认 为怂恿了堕胎 , 践踏了人权 。 但是 , 来自于人体自身外周血 、 骨 髓 、 脐带血 、 胎盘羊膜的物质 , 分离 、 纯化干细胞却是利用自身的 价值或者说废物利用 。 尤其是胎盘 , 作为中药紫河进入中药房 使用多年 , 胎盘组织液一度也是临床
35、常用药 。 那么来自于分娩 后胎盘的脐带血干细胞 , 其临床使用效果远大于其原生态的本 身 , 其采集和使用亦应得到合理的支持和重视 。 使之产生的外 延价值造福于千千万万陷于绝望中的患者及其亲属 。参考文献 :1 杨万章 , 盛佑祥 , 张敏 , 等 . 近年肌萎缩侧索硬化症中西医结合临床 研究进展 J.中西医结合心脑血管病杂志 , 2006, 4(12 :10792 1081.2 杨万章 , 杨佳勇 , 梁豪文 , 等 . 脐血源神经干细胞治疗肌萎缩侧索硬 化的免疫学改变及安全性评价 J.中西医结合心脑血管病杂志 , 2007,5(10 :9112913.作者简介 :(, , , 主任医师
36、 , 医学院 ( ; 梁豪文、 盛佑祥 、 赵宁 、 杨志刚 , 工 ; 胡祥 , 工作于深圳市北科细胞工程 , 为湖南中医药大学硕士研究生 , 工作于深圳市第九人民医 院。(收稿日期 :2021210219 (本文编辑 王雅洁 征文通知 心脑舒通胶囊有奖征文通知 为了深入研究和全面总结心脑舒通胶囊的临床作用机制 , 扩展临床用途 , 为更多的心脑血管病患者解除病痛 , 吉林敖东洮 南药业股份与中西医结合心脑血管病杂志编辑部联合 向临床医学界心脑血管病专家征集心脑舒通胶囊的临床应用学 术论文 , 征文范围如下 :1. 心脑舒通胶囊治疗冠心病 、 心绞痛方面的临床观察总结 ;2. 心脑舒通胶囊在
37、二级预防和长期应用方面临床效果的总 结 ;3. 心脑舒通胶囊治疗脑梗死及脑梗死后期症状改善方面的 临床观察总结 。4. 心脑舒通胶囊治疗高黏血症方面的临床研究总结 ;5. 心脑舒通胶囊与同类产品对比应用方面的研究总结 ;6. 心脑舒通胶囊在长期应用中的安全性研究总结 ;7. 心脑舒通胶囊在其他方面的临床研究总结 。所有文章经专家评审后给予相应的奖励 :1. 收录入公司论文集的文章给予 3000元奖励 ;2. 在正式期刊发表的优秀文章给予 5000元奖励 ;3. 奖项设置 :1等奖 2篇 , 给予额外 10000元奖励 ;2等奖 5篇 , 给予额外 8000元奖励 ;3等奖文章 10篇 , 给予
38、额外 5000元 奖励 。欢迎广大医务工作者参与心脑舒通胶囊临床应用研究的征 文活动并积极投稿 , 投稿截止日期为 2021年 12月底 。所有文 章请以电子邮件的形式投稿 。心血管方面的文章投递至神经科方面的文章投递至中西医结合心脑血管病杂志 编辑部 吉林敖东洮南药业股份 2021年 9月92 CHIN ESE J OU RNAL OF IN TEGRA TIV E M EDICIN E ON CARDIO 2/CEREBROVASCUL AR DISEASE March 2021 Vo1. 7 No. 3论著文章编号:100025404(20030120004203胎牛血清对人胚胎神经干细
39、胞分化的影响李巍,李成仁,蔡文琴,姚忠祥(第三军医大学基础医学部组织学与胚胎学教研室,重庆400038提要:目的探索胎牛血清对人神经干细胞(NSCs的影响。方法采用细胞培养、免疫组化、流式细胞仪检测的方法,观察了不同浓度胎牛血清对人NSC分化的影响。结果胎牛血清促进人NSC分化为神经系统的主要的3种细胞(神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞,且培养基中胎牛血清浓度为15%时,人NSC分化为星形胶质细胞的数量占80% 90%。结论胎牛血清影响人NSC分化为神经元和神经胶质细胞的比例,并与胎牛血清的浓度有一定的关系。关键词:神经干细胞;胎牛血清;人中图法分类号:R392.7;R329.28;R322
40、.8文献标识码:AE ffects of fetal bovine serum on differentiation of human fetal neural stem cells in vitro LI Wei,LI Cheng2ren,C AI Wen2qin,Y AO Zhong2xiang(Department of Histology and Embry ology,Third M ilitary Medical University, Chongqing400038,ChinaAbstract:ObjectiveT o observe the effects of fetal b
41、ovine serum(F BSon differentiation of human neural stem cells(NSCs.MethodsThe effects of F BS with different concentrations on differentiation of human fetal NSCs were observed by cell culture,immunocytochemistry and flow cytometry.Re sultsHuman fetal NSCs could be induced to differentiate mainly th
42、ree types of nerve system cells(neuron,astrocyte and olig odentrocyte.There were 80%90%astrocytes of differentiated cells from human fetal NSCs with the concentration of15%F BS induced.ConclusionC oncentration2dependent F BS in culture medium may have effect on the ratio of neurons to glial cells di
43、fferentiated from human NSCs in vitro.K ey w ords:neural stem cell;fetal bovine serum;human随着神经干细胞的分离、培养成功,探索神经干细胞的增殖、分化机制,成为人们关注的焦点。首先,它将为阐明神经系统发育机制提供有力证据;其次,为神经干细胞的应用,提供更有价值的资料。许多退行性疾病、缺血、损伤等均有神经元的大量丢失。若能离体或在体诱导神经干细胞向神经元方向分化,提供相对于各种疾病的神经细胞,将成为治疗疾病的理想材料。目前已知,细胞因子、生长因子以及周围环境等因素的作用可诱导神经干细胞向不同的终末神经细胞分
44、化,如睫状神经生长因子(Ciliary neurotrophic factor,C NTF诱导神经干细胞向神经元方向分化1;脑源性生长因子(Brain2derived neurotrophic factor,BDNF和神经营养素23(Neurotrophic23,NT23使其更多地分化为神经元2;骨形成蛋白(Bone m orphogenetic protein,BMP可诱导神经干细胞向胶质细胞分化3。本实验利用分离基金项目:国家自然科学基金资助项目(30130110作者简介:李巍(1964-,女,四川省双流县人,博士,实验师,主要从事神经发育和再生方面的研究。 :(02368752229通信
45、作者:蔡文琴, :(02368752233,E2mail:wenqinpublic.cta.cq 收稿日期:2002209210;修回日期:2002212210培养第5代的人胚胎神经干细胞,用不同浓度的胎牛血清在培养条件下诱导神经干细胞分化,了解神经干细胞分化为神经元和神经胶质细胞的比例,为神经干细胞的定向分化,提供基础资料。1材料和方法111分组培养第5代的人胚胎神经干细胞分成4组:无血清培养组,5%胎牛血清组,10%胎牛血清组,15%胎牛血清组,每组的基础培养基均为DME MF12(G ibco公司,胎牛血清(G ibco公司。112用于光镜免疫组化检测的诱导分化实验将每组的神经干细胞分别
46、置入(预先放有涂有多聚赖氨酸的盖玻片35mm培养皿中,1.52ml培养液皿,50100个细胞集落ml,培养7d后收集各组贴有细胞的盖玻片,用4%多聚甲醛加3%饱和苦味酸固定液固定812h后,行NF2200和G FAP免疫组化染色(常规免疫组化染色步骤,光镜观察。113用于流式细胞仪检测的诱导分化实验将每组的神经干细胞分别置入50ml培养瓶中,56ml培养基瓶,200300个细胞集落ml,培养7d后,用0.25%胰酶4第25卷第1期2003年1月第三军医大学学报ACT AAC ADE MI AEME DICI NAEMI LIT ARISTERTI AEV ol.25,N o.1Jan.2003
47、消化2030min ,并用吸管反复吹打细胞使之脱落,收集分化细胞于10ml 离心管中离心510min ,收集细胞用4%多聚甲醛加3%饱和苦味酸固定液固定812h 后,行NF 2200和G FAP 免疫荧光染色(常规免疫组化染色,流式细胞仪检测,数据采用SPSS 软件包进行统计学处理,计算分化细胞的百分率(%,并进行组间2检验。2结果211相差显微镜下观察和免疫组化结果在相差显微镜下,未分化的神经干细胞呈集落样悬浮生长见图1,培养基中去除碱性成纤维细胞生长因子(bFG F 以后,有血清组神经干细胞很快贴壁(约4h ,而无血清培养组细胞贴壁则相对较慢,培养12h 以后各组均见有贴壁的细胞,并有突起长出。培养过程中可见有血清培养组的细胞长得很快、数量较多,并可见到3种类型的细胞,见图2:具有一个或两个突起、突起较长,折光性很好,细胞核圆形或椭圆形的神经元样细胞。具有多个粗、长突起,细胞较大,紧贴底部的星形胶质细胞。具有多个细胞突起,突起有分枝的少突胶质细胞,此种细胞常成群分布在神经干细胞分化所形成放射状分化细胞团的周边。用S ABC 2硫酸镍铵增强法,更进一步地证实了我们的以上观察,即,有12个长突起的,折光性很强的为NF 2200阳性神经元,见图3;细胞较大、突起粗大,细胞平贴在盖玻片上的为G FAP 阳性星形胶质细胞,