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1、 实验七 厌氧性细菌形态染色性及培养特性(anaerobic bacteria)录像:无芽胞厌氧菌的感染 示教:破伤风梭菌及产气荚膜梭菌的形态染色性及培养特性 Nagler 反应 无芽胞厌氧菌的形态(脆弱类杆菌消化链球菌)厌氧培养方法 操作:产气荚膜梭菌致病性试验 肠道致病菌粪便标本的分离与鉴定(续)血清学反应厌氧菌G+有芽胞破伤风梭菌产气荚膜梭菌肉毒梭菌 艰难梭菌无芽胞G+双歧杆菌 消化链球菌G-脆弱类杆菌 韦荣菌属破伤风梭菌(C.tetani)革兰染色涂片:菌体细长,芽胞正圆,比菌体粗,位于菌体顶端,使细菌呈鼓槌状。破伤风梭菌电镜图形 态产气荚膜梭菌(C.perfringens)革兰染色涂
2、片:菌体粗大,两端几乎平切。芽胞呈椭圆形,位于次极端,不大于菌体,体外很少形成芽胞。产气荚膜梭菌荚膜(体内易形成):培 养 特 性血平板 庖肉培养基 紫牛奶培养基破伤风梭菌37 48h,薄膜状爬行生长物,边缘不齐,伴轻度 溶血肉汤混浊,肉渣部分被消化,呈灰白色无明显改变产气荚膜梭菌菌落平整,光滑,边缘齐。有双层溶血环:内层完全溶血(毒素引起),外层不完全溶血(毒素引起)分解肉渣中糖类而产生大量气体。分解乳糖产酸,指示剂变黄,培养基凝固,产生大量气体,呈蜂窝状,将液面凡士林上推,甚至冲走管口棉筛。Clostridium perfringens shows stormy fermentation
3、of litmus milk.Acid turns the pH indicator litmus from blue to pink,acid and enzymes coagulate the proteins in the milk,and gas tears the curds apart.汹涌发酵:stormy fermentationNagler 反应产气荚膜梭菌产生卵磷脂酶(毒素),在蛋黄琼脂平板上,卵磷脂酶分解蛋黄中的卵磷脂,生成的甘油二酯在菌落周围形成乳白色混浊圈。当加入相应抗毒素后,卵磷脂酶活性丧失,菌落周围不出现混浊圈。产气荚膜梭菌致病性试验培养液注入小鼠腹腔 断颈处死 剖腹肝脏印片石炭酸复红负染染色涂片自然干燥 染液 迅速水洗 印干 油镜检375-8h厌氧培养方法1.物理法:厌氧箱或厌氧缸。用物理方法将氧气吸走,充入氮气、二氧化碳、氢气。2.化学法:氢气+氧气 水3生物法:厌氧菌与需氧菌一起放入密闭空间培养。钯肠道致病菌粪便标本的分离与鉴定(续)血清学反应标本选择鉴别培养基(SS 平板)生化反应血清学鉴定双糖管等3724h已知Ab 检测未知Ag(玻片凝集试验)