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1、实验二 细菌基本形态和特殊结构观察一 目的要求 1 了解普通光学显微镜原理及构造。2 学习并掌握普通光学显微镜油镜的正确使用方法。3 用油镜观察细菌基本形态。4 了解负染色原理、细菌芽孢染色基本原理，油镜观察细 菌的荚膜、芽孢形态。5 细菌运动性观察。二 基本原理 普通光学显微镜的结构 普通光学显微镜的光学成象原理 3 荚膜染色 4 芽孢染色普通光学显微镜的结构（1)机械系统包括镜座、镜臂、载物台、物镜转换器、镜筒及调节器等（2)光学系统 包括反光镜、聚光器、物镜、目镜等。普通光学显微镜的光学成象原理（1）显微镜的放大倍数 放大倍数：目镜的放大倍数与物镜的放大倍数之乘积。目镜：物镜低倍镜：10
2、X高被镜：40X油镜：100X10 X 100X目镜 物镜显微镜的分辨率 油镜比低倍镜、高倍镜观察物体更清晰。原因：油镜分辨率高于低倍镜、高倍镜 油镜汇聚光线的能力大于低倍镜、高倍镜 分辨率是指显微镜能够分辨的最小距离即鉴别限度（R）R=（2NA）(为入射光波波长；NA为显微镜数值孔径)NA=.sin 为标本、物镜之间介质的折射率。为光轴上物点发出的光线与物镜有效直径两端最大夹角角度的 一半。低倍镜=高倍镜=空气=1.0，油镜香柏油=1.52低倍镜 高倍镜 油镜，sin低倍镜 sin高倍镜 sin油镜NA低倍镜 NA高倍镜 NA油镜 所以，油镜的分辨力比高倍镜、低倍镜高。汇聚光线的能力油镜高于
3、低倍镜、高倍镜。3 荚膜染色主要成分多为糖类，无色透明且不易着色常用负染色观察。负染色是将细菌细胞和背景着色，从而把无色透明、不着色的荚膜结构衬托显现出来。菌体荚膜菌胶团：多个菌体的荚膜融合为一个团状物，内有多个菌体。菌胶团4 芽孢染色细菌芽孢壁厚而致密，透性低，难于染色，但一旦被染色又难于脱色。因此先用强着色力的染料（孔雀绿）处理，并同时加热，使菌体以及芽孢均着色，后使菌体脱色，而芽孢保留原色，经复染（蕃红），菌体与芽孢分别以不同颜色显现。芽孢菌体菌体芽孢对有芽孢的菌体进行简单染色（只用一种染料染色）。菌体和芽孢着色情况如何？菌体芽孢三 实验材料细菌基本形态标本片：大肠杆菌片 枯草杆菌片 八
4、叠球菌片 细菌特殊形态标本片：枯草芽孢杆菌芽孢片 示范片观察：荚膜片观察 悬滴法观察活细菌的运动 四 实验内容及步骤1 细菌基本形态观察2 细菌特殊结构观察3 悬滴法观察活细菌运动1 细菌基本形态观察学习油镜的正确使用方法。用油镜观察 大肠杆菌 枯草杆菌 八叠球菌2 细菌特殊结构观察学习油镜的正确使用方法。用油镜观察细菌特殊结构 枯草芽孢杆菌芽孢（油镜）钾细菌荚膜（高倍镜）（示范）荚膜菌体菌胶团菌体芽孢3 悬滴法观察活细菌运动悬滴片制好后，用低倍镜调焦，换高倍镜观察。注意：视野中暗光观察。运动的菌体发亮。观察前准备：显微镜的准备和调试视野明亮低倍镜观察高倍镜观察（此步可以省略）油镜观察：加香柏
5、油，油镜头浸入香柏油中后调焦显微镜油镜头的清洗和归位（二甲苯清洗）油镜使用主要步骤注意！显微镜调焦方法五 实验报告绘 大肠杆菌 枯草杆菌 八叠球菌形态示意图绘枯草芽孢杆菌芽孢形态示意图 菌 名：大肠杆菌 放大倍数：16100 X 细菌形态示意图绘图要求：选择形态典型的部分细菌细胞绘图。仅绘出细菌细胞轮廓，但不同细菌的细胞大小比例应 适宜，且形态上应有所区分。细菌与视野相对大小应符合实际，应将细菌细胞排布 在视野中离开中心的部位（即绘空心图）。必须注明菌名、放大倍数。思 考 题（1）观察细菌染色片时应如何调节光线？（即如何调亮光，如何调暗光）（2）油镜观测时，是否可以用除香柏油以外的其它液体作 介质？