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1、四川道地药材川麦冬的研究方法比较分析学生： 指导教师：摘要：川麦冬，为百合科沿阶草属植物。本文通过文献分析方法，对川麦冬的研究方法进行了梳理，主要是对川麦冬总皂甙和粗多糖的传统和现代研究方法进行列举和对比，为今后川麦冬的研究提供参考和借鉴。 关键词： 四川道地药材 川麦冬 研究方法比较 Sichuan authentic medicinal material - sichuan radix ophiopogonis research methods are comparedStudent:c tutor:Abstract:Sichuan dwarf lilyturf, for the lily
2、 family of plants along the rank grass. This article through the literature review method, research methods and radix ophiopogonis sichuan is mainly polysaccharide total saponins and the traditional and modern research methods lists and contrast . The study for future sichuan dwarf lilyturf to offer
3、 reference .Keywords: Sichuan authentic medicinal material Sichuan dwarf lilyturf research methods compareing目 录前言31 川麦冬的特性31.1 化学成分.31.2 药理作用42 川麦冬主要药用成分的常规提取和分离方法42.1 皂甙的常规提取和分离的方法42.1.1皂甙的特性42.1.2皂甙的常规提取方法62.1.3皂甙的常规分离纯化方法62.2 多糖的常规提取分离方法92.2.1 特性92.2.2传统提取分离方法93川麦冬主要药用成分的现代提取分离方法113.1 皂甙的现代提取分离方
4、法113.1.1 复合酶法113.1.2常规酶提法113.1.3生物酶提法123.1.4溶剂提取法123.2 多糖的现代提取分离方法123.2.1微波提取法123.2.2 比色法123.2.3水提法134 总结13参考文献14致谢16四川道地药材川麦冬的研究方法比较分析 前 言麦冬别名麦门冬，为百合科沿阶草属植物，多年生草木，成丛生长，高30厘米左右，叶丛生，细长，深绿色，形如韭菜。花茎自叶丛中生出，花小，淡紫色。形成总状花序，托生于苞叶下，每个苞片内1-2朵，花期5-8月。果为浆果，圆球形，成熟后为深绿色或蓝黑色。根茎短，有多数须根，在部分的须根中部或尖端常膨大成纺锤形的肉质块根，即药用的麦
5、冬。1.生长特性 喜温暖和湿润气候，四川、浙江两省麦冬生产区年平均气温都在16-17摄氏度之间，年降雨量在1000毫米以上，稍耐寒，冬季-10摄氏度的低温植株不会受冻害，但生长发育受到抑制，影响块茎生长。在常年气温较低的山区或华北地区，虽亦能生长良好，但块茎较小且少，宜稍荫蔽，在强烈阳光下，叶片发黄，对生长发育不利，但过于荫蔽，易引起地上部分徒长，对生长发育也不利，干旱和涝洼积水对麦冬生长发育都有显著的不良影响。本品呈纺锤形，两端略尖，长1.5-3厘米，直径0.3-0.6厘米，表面黄白色或淡黄色，有细纵纹，质柔韧，断面黄白色，半透明，中柱细小，气味香，味甘、涩，爵之稍有粘性1。2显微特征 横切
6、面，表皮为一系列长方形薄壁细胞，有的分化成根毛，根被细胞3-5列，壁木化，皮成宽广，外皮层细胞切向长方形，外切向壁和径向壁微木化，有的细胞含黄色油状物，内皮层外侧为一列石细胞，其内壁及侧壁增厚，纹孔细密，内皮层细胞的壁均匀增厚、木化。有通道细胞，皮层薄壁组织中有含针晶束的的粘液细胞散在。中柱甚小，中柱鞘为1-2列薄壁细胞，初生维管组织辐射型，韧皮束16-22个，与本质束相间辐射状排列，各木质束内侧由木化组织连接成环层，髓小，由薄壁细胞组成2,3。川麦冬，生产于四川绵阳、三台地区4，以涪江冲积平原所产麦冬为最佳。又称涪江麦冬，销全国并有出口，较浙麦冬抗病性强，产量高。1 川麦冬的特性1.1 化学
7、成分. 川麦冬含有皂甙，粗多糖，氨基酸等多种化学成分5，下面进行部分列举。1皂甙：已分离鉴定出23种皂甙6其基本化学结构是螺旋甾烷（spirostane）。已分离鉴定出麦冬皂甙（ophiopogonin）A、B、C、D7，除麦冬皂苷B/、C/、D/7苷元为薯蓣皂苷元（diosgenin）外，其余的均为假叶树皂苷元（nlscogenin）。2酮类：为高异黄酮（homoisoflavonoid）类化合物，主要有甲基麦冬二氢黄酮(methylophiopogonanone)A 、B，麦冬二氢黄酮（ophiopogonanone）A B,6-醛基异麦冬二氢黄酮（6-aldehydio-isoophio
8、pogonone）A、B，甲基麦冬黄铜A，麦冬黄铜（ophiopogonanone）A,去甲基异麦冬黄酮B，2/羟基麦冬黄铜A及5,7,2/-羟基-6-甲氧基-3-（3/，4/-亚甲基二氧苄基）色原酮等。3挥发油类：从麦冬挥发油中已鉴定出樟脑，沉香醇（linalool），松油醇（terpine-4-ol），-绿叶稀，-绿叶稀，长叶稀（ongifolene），莎草稀（cyperene），创木醇（cuaiol），4-羟基茉莉酮（jasmololone）。本文介绍川麦冬中主要药用成分总皂甙和粗多糖的提取分离方法。1.2 药理作用1.强心、抗绞痛与抗休克作用8：麦冬注射液对失血性休克具有改善左心室功能
9、与抗休克作用，麦冬皂能增强离体蟾蜍及兔心脏的收缩力，增强心输出量及冠脉流量。山麦冬的水提物尚能显著对抗垂体后叶素致大鼠急性心肌缺血及肾上腺素、氧化钙所致心律失常。麦冬氨基酸及多糖具有抗疲劳作用，麦冬注射液及多糖尚能提高小鼠的耐缺氧能力，麦冬在临床上能改善心绞痛症状和心电图，可能与上述作用有关2.降血糖作用8：麦冬水或醇的提取物及多糖多四氢嘧啶糖尿病小鼠有降血糖作用9并能促使胰岛细胞恢复，肝糖元作用增加。3.免疫增强作用10：麦冬多糖能增加小鼠肝脏重量，显著增强小鼠的炭粒廓清作用，刺激小鼠的血清中溶血素的产生，对抗实验性小鼠白细胞下降2 川麦冬主要药用成分的常规提取和分离方法2.1 皂苷的常规提
10、取分离方法2.1.1 皂苷的特性1.表面活性 多兼有亲水性（糖链）和亲脂性部位（苷元及脂基等），因亲水性与亲脂性达到分子内平衡而表现出表面活性，具有降低水溶液表面张力的作用。皂苷与水混合震荡能生成胶状溶液并产生持久泡沫，且此泡沫不因加热而消失。因此，皂苷有乳化剂的性质，当其水溶液与油脂或树脂混合研磨时能产生乳剂。但有些皂苷，或因亲水性强于亲脂性，或因亲脂性强于亲水性，使分子内部失去了平衡，其表面活性作用就不易表现出来，所以没有或微有产生泡沫的性质，如甘草酸的起跑性就很弱。2.刺激性 皂苷多具有苦而辛辣的味感，个别如甘草皂苷具有甜味。其粉末对人体各部分的粘膜均有强烈的刺激性，尤以鼻内粘膜最为敏感
11、，吸入鼻内能引起大喷嚏。但也有少数皂苷不具这样的性质。溶解性 皂苷通常不溶于乙醚、笨、氯仿等亲脂性有机溶液，在冷酒精中的溶解度也很低。皂苷一般可溶于水，易溶于热水、含水稀醇、热甲醇和热乙醇中。皂苷在含水丁醇或戊醇中溶解度较好。丁醇与戊醇都能与水分层，故常用它们从水溶液中萃取皂苷，借以与亲水性打的糖、蛋白质的分离。当皂苷水解成次级皂苷后，在水中的溶解度就降低，易溶于中等极性的醇、丙酮、乙酸乙酯等；完全水解失去糖链的苷元大多难溶于水，易溶于石油醚氯仿极性溶。 3.物理性质 皂苷分子较大，一般不易结晶，大多数为白色或乳白色粉末。少数短糖链皂苷为结晶，但皂苷元大多有完好的结晶。皂苷的熔点往往较高，且常
12、融熔前分解，因此大多皂苷无明显熔点，一般测得的为其分熔点（多在200-350摄氏度之间）。甾体皂苷元的熔点随氧取代基数目的增多而升高，单羟基取代甾体皂苷元的熔点一般在280摄氏度以下，三羟基取代者则往往在242摄氏度以上，而双羟基或单羟基单酮基取代皂苷元的熔点多介于上述二者之间。三萜皂苷元的熔点也有类似的规律，如同时兼有羟基、酮基或羧基取代的三萜皂苷元（如齐墎果酸、熊果酸、商陆蒜等）的熔点常常也很高。皂苷的旋光度与其结构密切相关，如甾体皂苷及其苷元的旋光度几乎都是左旋的。双键、酮基等不饱和基团也影响皂苷的旋光度，不饱和苷元或饱和苷元的乙酰化衍生物一般都较相应饱和苷元的旋光值为负。4.形成分子复
13、合物 大多数皂苷可以与一些较大分子的的醇或酚类结合成分子复合物。例如，许多皂苷能被胆甾醇从乙醇溶液中沉淀析出。用乙醚回流这类分子复合物时，此类复合物被被破坏，胆甾醇转溶于乙醚，而皂苷不溶，从而达到分离目的。5.溶血作用 低浓度的皂苷水溶液即可破坏红血球而产生溶血作用，因此皂苷又称作皂毒素。这一作用可能是由皂苷与胆甾醇结合生成分子复合物所致，故皂苷类药物一般不能用于静脉注射。肌肉注射皂苷水溶液也易引起组织坏死，故一般不做成注射剂。但口服皂苷无溶血作用，可能因其在肠胃中不被吸收或被水解成无溶血作用的次生产物。各类皂苷的溶血作用可用溶血指数表示，溶血指数是指在一定条件下能使血液中红细胞完全溶解的最低
14、皂苷浓度。2.1.2 皂苷的常规提取方法常规提取方法11 ，从物材料中提取皂苷可以按两个方案进行：一是先以醇提取，再除去杂质得总皂苷，这一方案相对较为常用;二是先除杂质，而后用醇提取总皂苷。现将两种方案的操作步骤详述如下。1.醇提后除杂 先用乙醇或甲醇为溶剂抽提植物材料，浓缩后将提取物溶于水中，滤除不溶物后于水溶液中加石油醚、苯或乙醚等亲脂性强的有机溶剂进行两相萃取，亲脂性杂质转溶于這些亲脂性溶剂中，而皂苷几乎不溶于强亲脂性溶剂仍留在水相。而一些亲水性强的杂质仍留在水相。减压浓缩丁醇溶液，即获得总皂苷粗品。此法几乎被认为是提取皂苷的通法。2.脱脂后醇提 先用石油醚、乙醚等强亲脂性溶剂处理植物原
15、料，提取除去亲脂性杂质，然后再用乙醚加热提取，冷置提取液由于多数皂苷难溶于冷乙醇而沉淀析出。2.1.3 皂苷的常规分离纯化方法皂苷的相对分子质量和极性都较大，而总皂苷常常是成分复杂且结构相近的混合物，这就给皂苷的分离纯化带来了较大困难。下文介绍几种进一步分离纯化皂苷的主要方法。分离纯化方法12。1.分段沉淀法 本法利用皂苷难溶于乙醚、丙酮等溶剂的性质进行分离。操作步骤：将总皂苷先溶于少量甲醇或乙醇中，然后逐渐加入数倍于醇体积的乙醚、丙酮或已醚-丙酮（1：1）的混合溶剂至皂苷从醇溶液中析出为止，摇匀，皂苷即以粉质沉淀的形式析出。如此处理数次，逐渐降低溶剂极性，分批析出皂苷即可。2.重金属盐沉淀法
16、(1)铅盐沉淀法 此法可以将酸性皂苷和中性皂苷分开。操作步骤：在总皂苷的乙醇溶液中加入过量的额20%30%中性醋酸铅溶液至沉淀完全，滤出沉淀，即获得酸性皂苷；再于溶液中再加入20%30%碱性醋酸铅溶液，中性皂苷又能沉淀析出，滤取沉淀；然后将所得沉淀分别溶于水或稀醇中进行脱铅处理。(2)钡盐沉淀法 于皂苷的浓水溶液中加入氢氧化钡的饱和水溶液，一些中性皂苷即可以沉淀析出；虑取沉淀并使其悬浮于水中，通入二氧化碳气体进行分解；滤去碳酸钡，将滤液蒸干后溶于乙醇，加乙醚沉淀出皂苷；再经重结晶或其他方法精制，即可得中性皂苷。(3)铜盐沉淀法 于粗皂苷的水溶液中加入碳酸铜溶液，搅拌，以沉淀鞣质、色素等杂质，过
17、滤；再于滤液中加氢氧化铜或硫酸铜溶液，煮沸，皂苷与铜盐结合成不溶于水的沉淀析出;用水洗涤沉淀后，悬浮于水中通入硫化氢气体以分解铜盐；滤去硫化铜沉淀，蒸干水溶液（必要时可先进行透析，使皂苷与无机离子分离），残渣溶于乙醇中，加乙醚进行沉淀，可以得到较纯的皂苷。3.氧化镁吸附法 取新锻制的氧化镁粉末加入粗皂苷的水或稀醇溶液中，拌匀，于水浴上蒸干，磨碎，用甲醇或乙醇回流提取（被吸附在氧化镁上的皂苷可以被热醇提取出来，而杂质仍留在氧化镁中）；浓缩提取液，冷置，皂苷即可析出；或将已醚加入冷醇溶液中，皂苷也能析出。4.胆甾醇沉淀法 本法的工作原理：皂苷因与胆甾醇生成难溶性复合物沉淀而与其他水溶性成分分离。操
18、作步骤：往粗皂苷的乙醇溶液中加入饱和胆甾醇乙醇溶液至沉淀完全为止（边加边混合并稍稍加热）；虑取沉淀，依次用水、醇、乙醚洗涤以除去糖类、色素、油脂和游离的胆甾醇；将此沉淀干燥后，用乙醚连续回流提取出胆甾醇，残留物即为较纯的皂苷。5.酰化精制法 大多数皂苷亲水性强，极性大，分离纯化的难度较大。若将水溶性大的粗皂苷制成乙酰化衍生物以增大其亲脂性，则可以将其溶于低极性溶剂中，无论是脱色、层析、重结晶都比较容易，待纯化后再用碱液水解，脱去乙酰基即得纯皂苷。6.酸碱处理法 甾体生物碱苷的盐易溶于水，几乎不溶于有机溶剂，而游离苷难溶于水，但易溶于正丁醇、乙酸乙酯、氯仿等有机溶剂。利用这一特点可进行总生物碱苷
19、的精制。具体操作步骤为：将醇提物用稀盐酸或醋酸(Ph23)于水浴（50左右）上温溶，放冷，滤去不溶物；于滤液中加入氨水（ph 1113），边加边搅拌，再用乙酸乙酯或氯仿或正丁醇萃取；用少量水从该有机溶剂中萃取除去氨水和混进来的盐类，无水硫酸钠干燥，蒸出有机溶剂即得总生物碱苷（可能混有较多的游离生物碱）。由于某些酸性皂苷难溶于冷水，易溶于碱性水溶液，则可采用加碱水溶解皂苷，而后再加酸酸化，皂苷又沉淀析出的方法。7.层析法(1)分配层析 由于皂苷的极性较大，采用分配柱层析法分离皂苷的效果远比吸附柱层析法好。多用低活性（先在市售硅胶中加适量的水碱活）的硅胶作支持物，用不同比例的氯仿-甲醇（-水）或其
20、他极性较大的溶剂洗脱。(2)液滴逆流层析法 使用液滴逆流层析法（DCCC）分离皂苷效果较好常常可将结构十分相似的皂苷成分分开。例如柴胡皂苷A和D的结构差别仅在于C-16位羟基的构型不同，用一般柱层析法难以分开，采用DCCC法则可将他们完全分开，并能测定其含量。(3)低压液相层析 低压液相层析（LPLC）是用较粗粒度的RP-8或RP-18反相填料装柱并用氮气瓶或蠕动泵加压（压力比下述的高压液相层析低得多，故称低压液相层析）进行的一种柱层析方法，常用的溶剂系统有甲醇-水、乙？-水等。因为适用于高压液相的溶剂系统可直接（或稍加调整后）用于皂苷的分离，故低压液相层析条件可用高压液相层析来摸索确定。由于
21、此法分离效果好、简便、省时，它已逐渐成为分离皂苷的常用方法之一。另外，低压液相层析也可用于以硅胶等为填料的正相层析，操作步骤大致同前。(4)中压液相层析 中压液相层析（MPLC）与低压液相层析相似，只是工作压力比后者大得多。一般用功率较大的蠕动泵加压，适用于皂苷的分离制备。中压液相层析可为正相层析，也可为反相层析。在使用反相填料时，可直接使用HPLC的分析条件进行分离。(5)高效液相层析（HPLC法13） 高效液相层析（HPLC）的分离效率比LPLC和MPLC都高，适用于结构相似的皂苷的分离和半制备，常用于皂苷类成分的最后一步分离。在分离皂苷的实际操作中，常常需要同时结合多种分离手段。2.2多
22、糖的常规提取分离方法2.2.1 多糖的特性多聚糖（polysaccharride），简称多糖，是由10个以上的单糖基通过糖苷键连接而成的。一般多糖常由一百个以上甚至几千个单糖基组成，其性质已大大不同于单糖，如甜味和强的还原性已经消失。多糖按在生物体内的功能分为两类，一类是形成动植物的支持组织，如植物中的纤维素、甲壳类动物的甲壳素等，分子呈直糖链型，它们大多不溶于水。另一类为动植物的贮存养料，可溶于热水形成胶体溶液，经酶催化水解释放单糖以供应能量，如淀粉、肝糖元等，多数为支糖链型分子。由一种单糖组成的多糖称为均多糖。假如单糖基为六碳糖，则常忽视末端糖基，而把通式写成 （C6H10O5）n。由两种
23、以上单糖组成的多糖称为杂多糖。均多糖的系统命名时在糖名后加字尾-an，如葡聚糖为glucan，果糖为fructan等。多杂糖用几种糖名按字母顺序排列先后，再加字母-an，如葡萄甘露聚糖为glucomannan。许多多糖结构中除含单糖基之外，还带有糖醛酸、去氧糖、氨基糖、糖醇等，有时还有别的取代基，如O-乙酰基、N-乙酰基、磺酸酯等。植物多糖包括淀粉、纤维素、半纤维素、其他葡聚糖、果聚糖、树胶、粘液质和黏胶质。动物多糖有糖元、甲壳素、肝素、硫酸软骨素和透明质酸。林晓等14 认为麦冬多糖的单糖组成以果糖为主。2.2.2 多糖的常规提取分离常规提取分离方法15。自植物中提取多糖，一般用水浸醇16进行
24、抽提。由于植物体内有水解酶共存，必须采用适当的破坏或抑制酶的方法，方能提制原存形式的多糖。方法包括采集新鲜材料，迅速加热干燥，冷冻保存等。提取时宜用热水提取。 糖和低聚糖（二至五糖）在乙醇和水中均有很好的溶解性。黏液质、树胶、木聚糖、菊糖、糖元等则可溶于热水而不溶于乙醇。半纤维素只能溶于稀碱液，而纤维素类在各种溶剂中均难溶解。 提取以后需要进一步除去大量的非糖杂质，再进行混合糖类的相互分离，这是一项比较困难的工作，尤其是多糖类难以获得纯品。下面介绍几种分离纯化混合多糖的常用方法。 1.铅盐沉淀法 提取液中加入中性醋酸铅可沉淀去除大部分酸性、酚性杂质（如有机酸、氨基酸、蛋白质、树脂酸、黄酮、鞣质
25、等），包括酸性多糖。而用碱式醋酸铅则对酸性多糖的沉淀就更为完全除去杂质后的母液用H2S脱铅后，单糖、低聚糖和水溶性较大的中性苷类仍保留在滤液中。2.铜盐沉淀法 多糖的提取液尚可利用水不溶性铜复盐沉淀提纯，用Fehling试剂来沉淀多糖的例子很多，特别是甘露聚糖、木聚糖等。也可用纯氯化铜、硫酸铜、醋酸铜及铜乙二胺等试剂，最后以硫化氢分解去铜即得纯糖物质。3.活性炭柱层析 活性炭吸附量大，分高效率高，是分离水溶性成分的常用吸附剂。柱层析时活性炭中常拌入等量的硅藻土作稀释剂，以增加洗脱液的流速。含糖的水溶液通过柱后，先用水洗脱无机盐、单糖等，继而在水中增加乙醇的浓度，逐步洗出二糖、三糖以及更大的低聚
26、糖。由于市售的活性炭粉中常含有Fe3+、Ca2+、Na+等金属离子，這些离子不仅占据了活性炭的吸附表面，使其活力下降，而且有催化作用会引起组分变质；在用较高醇浓度洗脱时还会一起洗下，使产物中混有金属离子，因此应该预先处理除去。处理的方法：一般可用0.2mol/L枸橼酸缓冲液洗涤炭粉或用2-3mol/L盐酸煮沸几次，再用蒸馏水反复洗至中性。4.离子交换层析 阳离子和阴离子交换树脂对除去水提液中的酸、碱性成分和无机离子十分有效，留下中性的糖、苷可作进一步分离。但强碱性的树脂能与还原糖结合，不但用水不能洗脱，而且易进一步引起糖的异构化和降解。而强酸性树脂易使不稳定的苷键裂解，尤其是呋喃糖苷键。所以在
27、分离糖和苷元时宜采用弱酸弱碱型的交联度比较小的离子交换树脂。根据纸层析分离糖类极为方便和有效的事实，将纤维素改性，将离子交换和纤维层析结合起来制成一系列离子交换纤维素，用于分离糖类效果良好。中性糖与硼酸络合后可增加酸性，所以在硼酸处理过的强碱性阴离子交换树脂中可以起选择性的交换作用。然后用不同浓度的硼酸盐溶液洗脱。5.凝胶过滤法 凝胶过滤可分离大小和形状不同的分子。葡聚糖凝胶，琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶都广泛用于糖类及其衍生物的纯化。低聚糖和苷一般用孔隙小的凝胶分离，如sephadexG-25、G-50等。而多糖纯化时可以先用孔隙小的凝胶除去无机盐和小分子化合物；分离时则用大孔隙的，如各种植物
28、淀粉中直链和支链多糖的分离。在洗脱过程中大分子的糖比小分子先洗下。6.季铵氢氧化物沉淀法 季铵氢氧化合物是一类乳化剂，可与酸性多糖形成不溶性沉淀，常用于分离酸性多糖。季铵氢氧化物与中性多糖不生成沉淀，但当调高ph，使某些OH基解离，或加硼酸缓冲液增高糖的酸度，中性糖也能被沉淀。常用的季铵氢氧化物如CTA-OH和CP-OH,它们可在酸性、中性、微碱性和碱性中分级沉淀分离多糖。7.分级沉淀或分级溶解法 常用的分级沉淀法是在混合多糖的浓水溶液中逐步加入乙醇，收集不同醇浓度下析出的沉淀。为了多糖的稳定，常在PH=7时进行。但酸性多糖在PH=7时-COOH多以-COO-离子形式存在，故需在PH=2-4时
29、进行分离；为防止酸水解苷键，操作宜迅速。分级沉淀也可用糖的衍生物，如甲醚、乙酸乙酯，在醇溶液中分次加乙醚等极性更低的溶剂，各次沉淀需经反复溶解与醇析，直到测得的物理常数恒定，最常用的是旋光度测定和电泳检查。8.蛋白质除去法 用分级沉淀法得到的多糖，常混有较多的蛋白质，必须予以去除。一般选择那些使蛋白质沉淀而使多糖不沉淀的试剂来处理，如酚、三氯乙酸、鞣酸等。但必须处理时间短，温度低，避免多糖降解。三氟三氯乙烷法和sevag法（用氯仿：戊醇或丁醇4:1）在避免降解上有较好的效果。但要达到除尽游离蛋白质的目的仍需反复多次处理。如能配合加入蛋白质水解酶（胰蛋白酶、胃蛋白酶、链酶蛋白酶诶等），使蛋白质大
30、分子进行一定程度降解，再用sevag法处理，一般效果更好。3 川麦冬主要药用成分的现代提取分离方法3.1 皂甙的现代提取分离方法3.1.1 复合酶法 取麦冬粉末置于烧瓶中, 加入蒸馏水, 用柠檬酸钠- 柠檬酸缓冲液调节不同pH 值, 加入一定量的复合酶(纤维素酶和果胶酶), 酶解一定的时间后迅速升温使酶失活, 所得滤液真空浓缩至一定体积后正丁醇萃取17, 合并正丁醇部分, 冷冻干燥得皂苷粗粉 18 。3.1.2 常规酶提法 取50g麦冬粉末加入80%的乙醇溶液500ml,采用热回流的方法提取3次，每次1h19 ，合并提取液，蒸发至粉末状得麦冬总皂甙粗品。麦冬总皂甙粗品用50ml水饱和正丁醇萃取
31、3-4次，合并上层正丁醇萃取液，蒸干至粉末，称重，即得常规酶提法提取的麦冬总皂甙。3.1.3 生物酶法提法 取30ml 0.02mol/LpH值为6.0的磷酸盐缓冲液，充分溶胀50g麦冬粉末。与等体积的自制酶液混匀，在45下反应11h。反应结束后在室温下加入3倍体积95%乙醇，静置4h以上20。过滤，滤液蒸发至粉末状即为麦冬总皂甙粗品。麦冬总皂甙粗品用50ml水饱和正丁醇萃取3-4次，合并上层正丁醇萃取液，蒸干至粉末，称重，即得生物酶提法提取的麦冬总皂甙。3.1.4 溶剂提取法 水提取: 将川麦冬块根粉碎, 用水于室温提取, 提取液过滤, 得皂苷粗提物, 用水稀释后通过大孔树脂柱, 乙醇洗脱得
32、皂苷粗粉21。乙醇提取: 取麦冬粉末加70% 乙醇, 加热提取, 提取液过滤, 滤液减压蒸馏至干, 蒸馏水溶解后用水饱和正丁醇萃取4次, 合并正丁醇部分, 再用正丁醇饱和水洗涤, 减压浓缩至干, 得皂苷粗粉22。3.2 多糖的现代提取分离方法3.2.1 微波提取法 取麦冬加水, 在特定的功率下微波辐射90s, 取出冰水降温至0 , 再继续辐射90s, 如此反复直至达到预定的提取时间, 提取液抽滤, 滤液经活性碳脱色、Sevag 法除蛋白, 减压浓缩后, 加入无水乙醇使含醇量达80%, 冰箱静置过夜, 沉淀用无水乙醇、乙醚、丙酮洗涤数次, 60& 烘干, 即得麦冬多糖23 。麦冬多糖的分离方法主
33、要是醇沉法, 也有用DEAE 纤维素柱分离制备精制麦冬多糖24。3.2.2 比色法 取干燥麦冬块根1kg用90%乙醇渗漉，渗漉后麦冬晾干去醇，常法水提3次，每次30min，趁热过滤。滤液加0.2%活性碳搅拌均匀、静置过夜。滤出碳的提取液减压浓缩至原体积的1/10，加95%乙醇醇析，使含醇量达80%，静置析出沉淀，醇析物抽干，依次用无水乙醇，丙酮，乙醚洗涤5次，60烘干，得灰白色麦冬多糖无定形粉末，溶于水后形成胶体溶液，与硫酸-苯酚试剂呈棕红色，与硫酸-蒽酮试剂呈深绿色。3.23 水提法 取麦冬干燥块根, 水煎煮, 过滤, 合并滤液, 70& 减压浓缩后加乙醇至含醇量80%, 离心取沉淀, 加水
34、溶解, 1万分子量超滤膜超滤, 滤液浓缩后加乙醇至含醇量80%, 离心取沉淀干燥得麦冬多糖25 。4 总结应当注意的是，在植物材料中有些皂甙可能会与共存的甾醇形成分子复合物，故用醇提后除杂提取时可能会有部分皂甙不能被稀醇或醇提出。分段沉淀法虽较简便，但分离不完全，不易获得纯品。铅盐沉淀法操作较繁，带入得无机离子也多，对人体也有害，而且多数皂甙经碱式醋酸铅处理后有变质的可能。酰化精制法不适用于分子中本来就有酰基和或酯键的皂甙的分离精制。液滴逆流层析法装置及操作相对复杂。传统的多糖提取分离方法操作复杂且多糖提取率低。复合酶法提高提取液中川麦冬皂甙的含量且排除麦冬中糖类的干扰。生物酶法去掉川麦冬植物
35、中的多糖类干扰物质，可以使川麦冬皂甙更容易的被提取出来，提高提取的率，操作简便。水提成本低, 但提取效率也低; 有机溶剂提取率较高, 但是提取成本较贵, 并且存在产品有溶剂残留的安全性问题。酶提取法是近几年来发展起来的一种提取方法, 用纤维素酶酶解可以促进葡萄糖苷键的裂解, 破坏植物细胞壁,有利于植物有效成分的浸出, 还能促进残留半乳甘露聚糖主链的降解, 降低提取液的黏度, 提高皂苷含量, 是一种成本低、提取效率高的一种提取方法。利用微波加热提取多糖, 能较大程度地提高多糖提取率26。参考文献1田宏,王蕾蕾.湖北麦冬的生药鉴别J.时珍国药研究,1997,8（6）:525-526.2吴美枢,柏官
36、发,姚家国等.湖北麦冬与杭、川麦冬的生药学比较研究J.第二军医大学学报,1990,11(1):31.3田宏,王蕾.湖北麦冬的生药鉴别J.时珍国药研究,1997,8(5):525.4郭军战，彭少兵，陈铁山.树莓和黑莓引种品种果实营养成分分析J.西北林学院学报.2004,19（1）:108-109.5林晓，周强峰，徐德生.麦冬药理作用研究进展J.上海中医药杂志，2004,38（6）：59-61.6 易进海.麦冬研究进展J.华西医学杂志,1993,8（1）:32-38.7W atanabe Y，Sanada S, Tata A, et al Stud ies on the Constituens O
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39、7):71.18胡瑞君,车振明,徐丹等.复合酶法提取麦冬总皂苷工艺条件的研究J.食品研究与开发,2007,28(7):71.19周跃华，徐德生，冯怡等.麦冬总皂甙提取工艺的研究J.中草药，2002,3（12）：1076-1078.20王何.中草药中麦冬总皂甙的分离提取工艺的研究J.大连大连工业大学，2007.21徐暾海,陈萍,徐雅娟等.川麦冬中的新呋甾皂苷的分离与鉴定J.高等学校化学学报,2007,28:286-288.22钱斯日古楞,王红英,金凤燮.正交设计研究麦冬皂苷提取工艺J.中成药,2005, 27(5):594.23王晓君,王维香.川麦冬多糖的微波提取J.食品工业科技,2007(4)
40、:128.24折改梅,石阶平.麦冬多糖Md-1、Md-2化学结构的研究J.西北药学杂志, 2003,18(2):58.25冯怡,韩宁,徐德生.麦冬多糖含量测定方法的研究J.中成药,2006,28(5): 705.26杨文杰,黄惠华.螺旋藻多糖的水提与微波辅助提取的比较J.食品工业科技,2003(8):4042.致 谢 在此论文撰写过程中，要特别感谢我的导师徐作英教授的指导与督促，同时感谢她的谅解与包容。没有徐老师的帮助也就没有今天的这篇论文。求学历程是艰苦的，但又是快乐的。感谢我的辅导员罗老师，谢谢她在这四年中为我们全班所做的一切，她不求回报，无私奉献的精神很让我感动，再次向她表示由衷的感谢。在这四年的学期中结识的各位生活和学习上的挚友让我得到了人生最大的一笔财富。在此，也对他们表示衷心感谢。 谢谢我的父母，没有他们辛勤的付出也就没有我的今天，在这一刻，将最崇高的敬意献给你们！ 本文参考了大量的文献资料，在此，向各学术界的前辈们致敬！16