《2023年生化基础知识---全面汇总归纳终极版.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《2023年生化基础知识---全面汇总归纳终极版.pdf（33页珍藏版）》请在taowenge.com淘文阁网|工程机械CAD图纸|机械工程制图|CAD装配图下载|SolidWorks_CaTia_CAD_UG_PROE_设计图分享下载上搜索。
1、学习必备 精品知识点 1.2.常用临床生化项目的分类 1.2.1.按化学性质分类 大概分为四类：酶类、底物代谢类、无机离子类、特种蛋白类。1.2.1.1.酶类 包括 ALT（谷丙转氨酶），AST（谷草转氨酶），ALP（碱性磷酸酶），ACP（酸性磷酸酶），r-GT（谷氨酰转移酶），-HBDH（羟丁酸脱氢酶），LDH（乳酸脱氢酶），CK（肌酸激酶），CK-MB（肌酸激酶同功酶），-AMY（淀粉酶），ChE（胆碱脂酶）等。1.2.1.2.底物代谢类 包括 TG（甘油三脂），TC（总胆固醇），HDL-C（高密度脂蛋白胆固醇），LDL-C（低密度脂蛋白胆固醇），UA（尿酸），UREA（尿素氮），Cr（肌
2、酐），Glu（葡萄糖），TP（总蛋白），Alb（白蛋白），T-Bil（总胆红素），D-Bil（直接胆红素），TBA（总胆汁酸），CO2（二氧化碳）等。1.2.1.3.无机离子类 包括 Ca（钙），P（磷），Mg（镁），Cl（氯），Fe（铁）等。1.2.1.4.特种蛋白类 apoA1（载脂蛋白 A1），apoB（载脂蛋白 B），Lp(a)（脂蛋白 a）；补体 C3，补体 C4；免疫球蛋白 IgA、IgG、IgM 等。1.2.2.按临床性质分类 无机离子：包括 Ca，P，Mg，Cl 等；肝功能：包括 ALT，AST，r-GT，ALP，MSO，T-Bil，D-Bil，TBA，TP，Alb 等；肾功能
3、：UA，UREA，Cr 等；心肌酶谱：CK，CK-MB，LDH，-HBDH，AST，MSO 等；糖尿病：GLU 等；前列腺疾病：ACP，p-ACP等；胰腺炎：-AMY；血脂：TC，TG，HDL-C，LDL-C，apoA1，apoB，Lp(a)；痛风：UA；中毒：ChE；免疫性疾病：C3，C4，IgG，IgA，IgM；急性炎症反应：CRP（C 反应蛋白），AAG（a1 酸性糖蛋白），CER（铜蓝蛋白），ASO（抗链球菌溶血素 O）。1.3.常用临床项目的医学决定水平 医学决定水平（Medicine decide level，MDL）是指不同于参考值的另一些限值，通过观察测定值是否高于或低于这些限
4、值，可在疾病诊断中起排除或确认的作用，或对某些疾病进行分级或分类，或对预后做出估计，以提示医师在临床上应采取何种处理方式，如进一步进行某一方面的检查，或决定采取某种治疗措施等等。医学决定水平与参考值的根本区别在于：它不仅对健康人的数值进行研究，以决定健康人的数值区间，同时还对有关疾病的不同病情的数据进行研究，以定出不同的决定性限值。可提示及引导医师采取不同的临床措施。所医学决定水平看来更合理、更客观、更有助于临床的应用。当然，真正建立起每一项试验的医学决定水平是一个十分复杂的问题，存在着许多的实际困难。下列为一些常用检验项目的医学决定水平，仅供参考。1.3.1.钾 学习必备 精品知识点 参考值
5、 3.55.3mmol/L 3.0 mmol/L 此值低于参考范围下限，若测定值低于此值，可能会出现虚弱、地高辛中毒和（或）心律失常，应予以合适的治疗 5.8 mmol/L 此值高于参考范围上限。首先应排除试管内溶血造成的高钾。若测定值高于此值，应借助其他试验查找高钾原因，并考虑是否有肾小球疾病。7.5 mmol/L 高于此值的任何钾浓度都与心律失常有关，故必须给予合适治疗。（首先也应排除试管内溶血造成的高钾）1.3.2.钠 参考值 135-145mmol/L 决定水平 临床意义及措施 115mmol/L 等于或低于此水平可发生精神错乱、疲劳、头疼恶心、呕吐和厌食，在110mmol/L 时，病
6、人极易发生抽搐、半昏迷和昏迷，故在测定值降至 115mmol/L 时，应尽快确定其严重程度，并及时进行治疗。133mmol/L 此值稍低于参考范围下限，测定值低于此值时，应考虑多种可能引起低钠的原因，并加作辅助试验，如血清渗透压、钾浓度及尿液检查等。150mmol/L 此值高于参考范围上限，应认真考虑多种可能引起高钠的原因。1.3.3.氯化物 参考值 96110mmol/L 决定水平 临床意义及措施 90mmol/L 低于此水平，应考虑低氯血症的多种原因。120mmol/L 高于此水平，应考虑多种高氯血症的原因，并同时可作多种辅助诊断试验如血清 Na、K、Ca、HCT 等。1.3.4.钙 参考
7、值 2.252.65mmol/L 决定水平 临床意义及措施 1.75mmol/L 血钙浓度低于此值，可引起手足抽搐，肌强直等严重情况，故应根据白蛋白浓度情况，立即采取治疗措施 2.74mmol/L 当测定值大于此值时，应及时确定引起血钙升高的原因，其中的一个原因是甲状旁腺机能亢进，所以要作其他试验，予以证实或排除。3.37mmol/L 血钙浓度超过此值，可引起中毒而出现高血钙性昏迷，故应及时采取有力的治疗措施。1.3.5.离子钙 参考值 1.131.32mmol/L 决定水平 临床意义及措施 0.37mmol/L 离子钙水平低于此值，常出现腕掌痉挛、手足抽搐、低血压、心律失常等症状，最终可致心
8、脏停止跳动，必须立即采取合适的治疗措施。3.3mmol/L 测定值在此水平，将导致严重的和持续的心律功能不良，以及血液动力的不稳定。1.3.6.磷 参考值 0.961.62mmol/L 决定水平 临床意义及措施 0.48mmol/L 等于及低于此值，往往与溶血性贫血有关，应考虑多种治疗方法进行治疗。0.81mmol/L 此值在参考范围下限以下，低于此值且有高血钙情况时，支持甲状旁腺机能亢进的诊断。同功酶淀粉酶胆碱脂酶等底物代谢类包括甘油三脂总胆固醇高密度脂蛋载脂蛋白脂蛋白补体补体免疫球蛋白等按临床性质分类无机离子包括等的医学决定水平医学决定水平是指不同于参考值的另一些限值通过观察学习必备 精品
9、知识点 1.62mmol/L 此值为参考范围上限，高于此值应考虑无机磷可能升高的多种原因，尤其应考虑是否有肾功能不全。1.3.7.镁 参考值 0.61.2mmol/L 决定水平 临床意义及措施 0.60mmol/L 等于或低于此水平时，常有虚弱、易怒、痉挛、震颤等症状，若有上述临床症状并伴有血清镁症降，则应给予适当的治疗。1.00mmol/L 此值在参考范围以内，如果低镁被认为是临床症状的起因，则测定值高于此值时，应被排除，而应考虑其他病因。2.5mmol/L 等于或高于此值，已超过参考范围上限，应给予必要治疗，另外，还应检查是否存在肾功能不全。1.3.8.铁 参考值 9.030.0umol/
10、L 决定水平 临床意义及措施 8.0umol/L 等于或低于此水平，多与缺铁性贫血有关，但作此诊断前，还需证明 RBC 为小细胞低血色素性且伴有总铁结合力（TIBC）的升高。如果 TIBC 升高不明显，则血清转铁蛋白降低也有利于此种诊断。39.4umol/L 等于或高于此水平，可涉及多种疾病，如血色素沉着病，由海洋性贫血，VB6缺乏性贫血等造成红细胞生成减少、溶血性贫血、急性肝损伤等。因此应作多种相应的试验以求确诊，并进行治疗。71.6umol/L 由于摄入量过多，造成血中水平等于或超过此值时，必须采取合适的治疗措施。1.3.9.葡萄糖 参考值 3.616.11mmol/L 决定水平 临床意义
11、及措施 2.8mmol/L 禁食后 12 小时血糖测定值低于此值，则为低血糖症，可出现焦虑、出汗、颤抖和虚弱等症状，若反应发生较慢，且以易怒、嗜睡、头痛为主要症状，则应作其他试验，以查找原因。7mmol/L 空腹血糖达到或超过此值，可考虑糖尿病的诊断，但应加作糖耐量试验。10mmol/L 饭后 1 小时测得此值或高于此值，则可高度怀疑为糖尿病。1.3.10.血尿素（Urea）参考值 3.67.1mmol/L 决定水平 临床意义及措施 3.0mmol/L 低于此值常见于血液释放过多或肝功能不全 7.1mmol/L 此值为正常上限，高于此值应考虑能引起尿素升高的多种可能原因，如肾功能不全、高蛋白饮
12、食及上消化道出血等，此时测定血清肌酐有助于正确评价肾脏功能。14.2mmol/L 高于此值常见于严重的肾功能不全，应选择其他有力的诊断方法及治疗措施。1.3.11.尿酸（UA）参考值 男性 120420umol/L 女性 90360umol/L 决定水平 临床意义及措施 110umol/L 此值在参考下限附近，等于或低于此水平，应采取多种诊断措施，以鉴别各种疾病。480umol/L 此值高于参考范围上限，等于或高于此水平时，应采取各种诊断措施，鉴别各种疾病。640umol/L 等于或高于此值，具有形成肾结石或痛风的高度危险，应及时采取适当的治疗同功酶淀粉酶胆碱脂酶等底物代谢类包括甘油三脂总胆固
13、醇高密度脂蛋载脂蛋白脂蛋白补体补体免疫球蛋白等按临床性质分类无机离子包括等的医学决定水平医学决定水平是指不同于参考值的另一些限值通过观察学习必备 精品知识点 措施。1.3.12.肌酐（Cr）参考值 44133umol/L 40umol/L 在婴幼儿超过此值，应考虑肾功不全的可能性，因此必须进一步作肾脏功能的检查和评价。141umol/L 成人值若超过此水平，应考虑进一步进行其他肾功能检查试验，如肌酐清除率试验。530umol/L 高于此水平，几乎肯定有肾功能受损，所以此值具有重要的诊断及评估意义，应及时采取必要的治疗措施。1.3.13.总蛋白（TP）参考值 6080g/L 45g/L 低于此值
14、往往与水肿有关，应考虑给以相应治疗，同时可作更全面的检查如尿蛋白、肾及肝脏功能等。60g/L 此为参考范围下限，等于或低于此值时，多种可引起总蛋白偏低的原因均应考虑，并可选择上面的一些试验项目，作进一步检查。80g/L 高于此值已超出参考范围上限，能引起总蛋白升高的各种原因均应加以考虑，还可通过血清蛋白电泳等项目作进一步检查。1.3.14.白蛋白（Alb）参考值 3555g/L 20g/L 低于此值，一般在肝病病人提示严重预后不良。还应测定尿蛋白，以查明有无过多的蛋白丢失。35g/L 此亦为参考值下降，凡低于此值时，各种引起白蛋白降低的因素均应列入考虑范围，如肾病、肝功不全、严重的营养不良、急
15、、慢性炎症、恶性肿瘤等。57g/L 在此值以上的，应考虑脱水的可能性，并进行红细胞比积测定，以检查其是否增高。1.3.15.胆固醇 参考值 2.847.11mmol/L 1.81mmol/L 低于此值常提示有严重肝功不全，应考虑适当的诊断及治疗措施，若已知存在肝病，则低于此值提示预后不良。5.18mmol/L 此为 75%的成年男子血中胆固醇值，测定值高于此水平，提示有患冠状动脉粥样硬化的中度危险，故应采取相应措施，如采用低饱和脂肪酸、低胆固醇、高纤维素饮食。5.70mmol/L 此为 90%的成年男子血中胆固醇水平，高于此值有患冠状动脉粥样硬化的高度危险，若病人不接受低胆固醇饮食，则应采用药
16、物治疗。7.26mmol/L 高于此值会由于患动脉粥样硬化而预后严重，必须及时采取有力的治疗措施，如饮食控制，药物治疗等。1.3.16.高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）参考值 男 1.141.76mmol 女 1.221.91mmol 0.91mmol/L（男）低于此值提示易发生冠状动脉性心脏病的危险增加。1.03mmol/L（女）1.42mmol/L（男）高于此水平发生冠状动脉性心脏病的可能性很小。1.68mmol/L（女）1.3.17.甘油三酯（TG）参考值 0.561.70mmol/L（此值因年龄和性别有所差别）0.45mmol/L 此值正常下限附近，低于此值多与营养不良有关，应进行正确
17、的诊断和治疗。同功酶淀粉酶胆碱脂酶等底物代谢类包括甘油三脂总胆固醇高密度脂蛋载脂蛋白脂蛋白补体补体免疫球蛋白等按临床性质分类无机离子包括等的医学决定水平医学决定水平是指不同于参考值的另一些限值通过观察学习必备 精品知识点 1.69mmol/L 年轻男性此值接近参考范围上限，为动脉粥样硬化性心血管病的一个危险因子，应给予病人提供合适的预防建议。4.52mmol/L 高于此水平常预示会发生动脉粥样硬化性心血管疾病，应给予适当治疗，如控制饮食和用降脂药物等。1.3.18.胆红素（Bili）参考值 1.718.4umol/L 24umol/L 此水平在参考值范围以上，若测定值超过此水平，各种可能引起
18、Bili 增高的原因均应考虑，包括肝功能不全、肝外阻塞、溶血、Gilbert 综合征（家族性非溶血性黄疸）。此时进行 ALT、AST 凝血酶原时间和 ALP 测定，可帮助确认或排除肝脏疾病 43umol/L 测定值高于此水平往往出现黄疸，当出现黄疸，但 Bili 测定值又在此水平以下的，则提示应根据这一情况查找原因。340umol/L 婴胆红素超过这一水平，往往与脑损伤（核黄疸）有关，治疗时应根据临床及其他实验结果考虑换血。1.3.19.丙氨酸氨基转移酶（ALT）参考值 540U/L（37）20U/L 此水平在参考范围以内，低于此值可排除许多与 ALT 升高有关的病种，而考虑其他诊断。此值可以
19、作为病人自身的 ALT 的对照，与过去和（或）将来的值进行比较。60U/L 高于此值时，对可引起 ALT 增高的各种疾病均应考虑，并应进行其他检查以求确诊。300U/L 高于此值通常与急性肝细胞损伤有关，如病毒性肝炎、中毒性肝炎、肝性休克等，而酒精性肝炎的 ALT 往往低于此值，其他如传染性单核细胞增多症、多肌炎等也都往往低于此值。1.3.20.天门冬氨酸氨基转移酶（AST）参考值 840U/L（37）20U/L 此为排除值，低于此水平时可排除多种与 AST 增高有关的疾病。因此应考虑其他的诊断。这个参考范围内的值还可作为病人自身对照，可与过去和（或）将来的测定值进行比较。60U/L 此值高于
20、参考范围上限，当 AST 测定值超过此水平时，多种与 AST 增高有关的疾病均应加以考虑，如肝细胞损伤、心肌梗塞、肌肉与骨骼疾患，肝后胆道阻塞等，此时同时测定 ALT、ALP、Bili、CK 等鉴别是肝脏疾病还是心肌疾患有重要意义。300U/L 高于此值通常为急性肝细胞损伤，如病毒性肝炎、中毒性肝炎等，而一般酒精性肝炎、心肌梗塞、进行性肌营养不良等测定值均在此水平以下。1.3.21.碱性磷酸酶（ALP）参考值 成人 40160U/L（37）儿童 50400U/L 60U/L 此水平在参考范围以内，低于此水平时可以排除许多与 ALP 升高有关的病种，而考虑其它的诊断。此值可作为病人自身 ALP
21、的对照值，可与过去和（或）将来的值进行比。200U/L 此水平高于成人参考值范围上限，高于此值时，应考虑能引起 ALP 升高的多种疾病的可能性，如肝脏病变、胆管结石、肿瘤等引起肝外胆汗积郁、成骨细胞瘤、肿瘤等。为进一步鉴别肝胆或骨骼病变，可进行血中 r-GT测定。400U/L 此为儿童参考值范围的上限值，高于此值时，多种可引起 ALP 升高的病变均应列入考虑范围，但为进一步明确诊断，还应同时进行其他项目的测试。1.3.22.淀粉酶（amy）参考值 6080 somogyi unites 同功酶淀粉酶胆碱脂酶等底物代谢类包括甘油三脂总胆固醇高密度脂蛋载脂蛋白脂蛋白补体补体免疫球蛋白等按临床性质分
22、类无机离子包括等的医学决定水平医学决定水平是指不同于参考值的另一些限值通过观察学习必备 精品知识点 50 Som U 低于此值应考虑有广泛的胰腺损害或明显的胰腺功能不全，若已确认为胰腺病变，则 amy 低于此值往往提示有严重的预后。120Som U 此值在参考值范围之内，若低于此值，在大多数情况下应排除急性胰腺炎的可能性。另外一些疾病，如消化道穿孔、大量酒精摄入，唾液腺体疾病（流行性腮腺炎）、严重肾病、胆结石等可在此值以上。200Som U 此水平超过参考值上限、若超过此值，同时其他临床及实验室指标也支持的话，可以确诊为急性胰腺炎。1.3.23.谷胺酰转移酶（GGT）参考值 050U/L（37
23、）20U/L 此值在参考范围以内，低于此值可排除部分与 GGT 升高有关的疾病。此值并可作为病人以前或将来的对照值。60U/L 高于此值应考虑 GGT 升高的各种可能情况，测定值在 60150U/L 范围内，且ALP 在正常范围的病人，很可能在测定前有服药和饮酒的情况。150U/L 高于此值常有肝胆管疾病，应采取各种确诊措施，并进行积极治疗。1.3.24.肌酸激酶（CK）参考值 男 10200U/L 女 10170U/L 100U/L 此值在参考范围以内，低于此值则可排除许多种与 CK 升高有关的疾病，同时此值也可作为病人的对照，用于与以后的 CK 测定值比较。240U/L 急性心肌梗塞后 1
24、2天内，可高于此水平，其他有关诊断试验，如 CK-MB，可帮助确诊。1800U/L 当测定值高于此水平时，患其他疾病的可能性高于患单一急性心肌梗塞的可 能，包括横纹肌炎，震颤性谵妄、癫痫等。此时应及时进行其他项目的检验以便确诊。1.3.25.肌酸激酶同工酶（CK-MB）参考值 010U/L 15U/L 高于此值，且有持续性临床表现（胸痛、心电图显示特异性改变等），提示为急性心肌梗塞，应及时进行治疗。90U/L 高于此值多由于非心肌性CK-MB释放，如恶性肿瘤，应采取其他有关诊断方法，予以确诊。1.3.26.乳酸脱氢酶（LDH）参考值 100240U/L（LP）170U/L 此值在参考范围以内，
25、等于或低于此值可排除许多与 LDH 升高有关的疾病，而考虑其他的诊断。此值还可作为病人自身的对照，用来与以前或将来的测定值作比较。300U/L 高于此水平时，应考虑到可能引起 LDH 升高的各种疾病，如心肌梗塞、肝病变、传染性单核细胞增多症、进行性肌营养不良等。因此，应作其他各种试验，以作出明确诊断。血清溶血可使测定值增高，应予以注意。500U/L 高于此值，常见于巨幼细胞性溶血，急性白血病、慢性粒细胞性白血病、转移癌和肝昏迷等，此时应作其他多种检测来作出正确诊断。1.3.27.C-反应蛋白（CRP）参考值 抗原时成正相关，当抗体 胆绿素 pH3.0表面活性剂 钒酸盐氧化法，比色法，终点法，液
26、体双剂型 胆红素的减少引起在波长 450nm处吸光度的下降，吸光度的变化与总胆红素含量成正比。升高见于各类肝脏疾病，也可见于溶血性疾病。D-Bil 重氮偶合法、比色法、终点法，冻干单剂型 偶氮胆红素的生成，导致 545nm吸光度的增加，增加的程度与 D-Bil 的含量成正比(终点法)。胆红素 钒酸盐 胆绿素 pH3.0表面活性剂 同功酶淀粉酶胆碱脂酶等底物代谢类包括甘油三脂总胆固醇高密度脂蛋载脂蛋白脂蛋白补体补体免疫球蛋白等按临床性质分类无机离子包括等的医学决定水平医学决定水平是指不同于参考值的另一些限值通过观察学习必备 精品知识点 钒酸盐氧化法，比色法，终点法，液体双剂型 胆红素的减少引起在
27、波长 450nm处吸光度的下降，吸光度的变化与直接胆红素浓度成正比。升高见于各类肝脏疾病和胆导阻塞。NH4+NADH 的减少，引起 340nm吸光度的下降，下降程度与 NH4+浓度成正比(终点法)。升高见于肝昏迷、肝性脑病。CO2 NADH 的减少，引起 340nm吸光度的下降，下降程度与 CO2 浓度成正比(终点法)。异常见于酸碱平衡失调。iP 络合物的生成，引起 340nm吸光度的上升，上升程度与 iP 浓度成正比(终点法)。升高见于慢性肾炎、甲状旁腺功能减退、VitD 过多；降低见于佝偻病、骨软化等。Ca 邻-甲酚肽络合酮(CPC)法 有色络合物的生成，引起 575nm吸光度的上升，上升
28、程度与 Ca 浓度成正比(终点法)，长征公司采用此法。甲基麝香草酚兰(MTB)法 有色络合物的生成，引起 612nm吸光度的上升，上升程度与 Ca 浓度成正比(终点法)，科华公司采用此法。升高见于甲状旁腺功能亢进、肿瘤骨转移、VitD 过多；降低见于甲状旁腺功能减退、佝偻病、肾病等。Mg 有色络合物的生成，引起 582nm吸光度的上升，上升程度与 Mg 浓度成正比(终点法)。升高见于尿毒症；降低见于吸收障碍、糖尿病性昏迷、急慢性酒精中毒、慢性肾病等。Cl 红色络合物的生成，引起 480nm吸光度的上升，上升程度与 Cl 浓度成正比(终点法)。升高见于柯兴综合症、酸中毒、尿毒症等；降低见于阿狄森
29、氏病、碱中毒、腹泻、尿崩等。ApoA1/apoB 抗原抗体复合物的形成，导致 340nm透射浊度的增加，增加的程度与 apoA1/apoB的浓度成正比(终点法)。ApoA1降低和 apoB 升高见于未控制的糖尿病、肾病综合症、肝功能低下；ApoA1 和 apoB 均降低见于长期血液透析；ApoA1 与 apoB 的比值可预测心血管疾病危险性的预测，比值高，危险性低。Lp(a)抗原抗体复合物的形成，导致 340nm透射浊度的增加，增加的程度与 Lp(a)的浓度成正比(终点法)。高浓度的 Lp(a)是动脉粥样硬化的独立危险因子。1.7.生化分析仪测定方法及反应度的计算 各项目的计算方法决定于其所采
30、用的测定方法和定标模式，临床生化检验测定方法总的来说可分为二大类：终点法和动力学法，其中动力学法又可分为零级动力学法和一级动力学法，下面分别介绍。1.7.1.终点法 1.7.1.1.概述 指经过一段时间的反应，整个反应达到平衡，所有的被测定物已转变为产物，反应液的吸光度不再增加（或降低），吸光度的增加（或降低）程度与被测定物的浓度成正比。如下图：同功酶淀粉酶胆碱脂酶等底物代谢类包括甘油三脂总胆固醇高密度脂蛋载脂蛋白脂蛋白补体补体免疫球蛋白等按临床性质分类无机离子包括等的医学决定水平医学决定水平是指不同于参考值的另一些限值通过观察学习必备 精品知识点 如图所示：t1 时刻加入试剂（体积为 V），
31、t2 时刻加入样本（体积为 S），然后搅拌并反应，之后测量反应液的吸光度，在 t3 时刻反应达到终点；t2-t3 为测定时间。1.7.1.2.反应度的计算 结果的计算包括三部分：反应度 R（Response）的计算、定标参数的计算和浓度（或活性）的计算。这里仅介绍 R 的计算，定标参数的计算和浓度（或活性）的计算在后面专门讨论。a)单试剂单波长法 反应度 R=t3时刻吸光度单试剂空白吸光度 b)单试剂双波长法 基本上同“单试剂单波长终点法”，只是对于每一个测定周期，其实际吸光度等于A1-A2。c)双试剂单波长法 t1 时刻加入第一试剂（体积为 V1），t2 时刻加入样本（体积为 S），之后搅拌
32、，t3 时刻加入第二试剂（体积为 V2）并立即搅拌，t4 时刻反应达到终点。t3-t2 为孵育时间,t4-t3为测定时间。R=t4时刻吸光度双试剂空白吸光度；（反应起始时间设置为 0）R=t4时刻吸光度双试剂空白吸光度t3 前一时刻的吸光度体积校正因素；（反应起始时间设置为0）d)双试剂双波长法 基本上同“单试剂单波长终点法”，只是对于每一个测定周期，其实际吸光度等于A1-A2。1.7.2.零级动力学法 1.7.2.1.概述 指反应速度与反应物（底物）浓度无关。因此，在整个反应过程中，反应物可以匀速地生成某个产物，导致被测定溶液在某一波长下吸光度均匀地减小或增加，减小或增加的速度（A/min）
33、与被测物（催化剂）的活性或浓度成正比。零级动力学法即通常所说的动力学法，也被称为连续监测法；主要用于酶活性的测定。实际上，由于底物浓度不可能足够大，随着反应的进行，底物消耗到一定程度后，反应速度不再与酶活性成正比（参见米氏方程），因此，零级动力学法是针对于特定时间段而言的，各试剂商对这段时间有严格规定，见下图中的 t3-tn：t1 时刻加入试剂（体积为 V），t2 时刻加入样本（体积为 S），t3 时刻反应稳定，tn 时刻停止对反应进行监测；t3 到 tn 之间的时间内，吸光度匀速变化，变化的速率和反应物的浓度成线性关系。t2-t3 为延迟时间，t3-tn 为测定时间。1.7.2.2.反应度的
34、计算 a)单波长 其中：同功酶淀粉酶胆碱脂酶等底物代谢类包括甘油三脂总胆固醇高密度脂蛋载脂蛋白脂蛋白补体补体免疫球蛋白等按临床性质分类无机离子包括等的医学决定水平医学决定水平是指不同于参考值的另一些限值通过观察学习必备 精品知识点 nt3 到 tn 间的数据个数 Ti时间 Ai=某一时间的吸光度 b)双波长 基本同单波长，只是某一时间的吸光度等于主波长吸光度次波长吸光度 1.7.3.一级动力学法 1.7.3.1.概述 一级动力学法是指在被测物参与反应的条件下，在一定的反应时间内，反应速度与反应物浓度的一次方成正比，由于反应物在不断的消耗，因此整个反应速度在不断的减小，表现为吸光度的增加（或降低
35、）速度越来越小，由于这类反应达到平衡的时间很长，必需在特定时间段内进行监测，该段时间内吸光度的增加（或）降低与被测定物的浓度成正比，见下图。一级动力学法又被称为初速率法、固定时间法、二点动力学法等。如图所示：t1 时刻加入试剂（体积为 V），之后测量试剂空白的吸光度，t2 时刻加入样本（体积为 S），t3 时刻反应稳定，t4 时刻停止对反应进行监测；t2-t3 为延迟时间，t3-t4为测定时间。1.7.3.2.反应度的计算 a)单波长 反应度 R=（t4 时刻吸光度t3 时刻吸光度）/（t4 t3）b)双波长 基本同单波长，只是某一时间的吸光度等于主波长吸光度次波长吸光度 1.8.定标参数和浓
36、度的计算 1.8.1.定标的意义 定标就是要找出一个参考点，就是一个 K 值（或 F 值）。它是由仪器与试剂状态确定下来的。当我们测定一个标本时，无论您是用手工的方法或全自动生化分析仪，测出来的值只是一个吸光度，这个吸光度对我们没有什么意义，我们要把这个吸光度转换成一个浓度或是酶的活性。那就要乘上一个 K 值，计算并打印出来的结果对我们就有意义了。K 值就是我们通过定标找出来的。一般上最低要求是有试剂空白与标准品。经过仪器测定出两个吸光度，则：标准液的浓度我们是知道的，这两个吸光度可以由仪器测出，这样就得出一个 K 值。之后无论什么样的标本，我们只要测出一个吸光度，用吸光度乘以这个 K 值，就
37、可以得到标本的浓度了。因此，K 值具有非常决定性的意义，可以决定测量标本的准确性。1.8.2.定标参数的计算 定标方法分为两大类，即线性定标和非线性定标，其中线性定标又包括单点线性定标（又称因数法）、两点线性定标（又称线性法）和多点（大于 3 点）线性定标（又称线性回归法），主要适用于比色法测定的项目；非线性定标主要包括 Logistic-Log 4P、Logistic-Log 5P、Exponential5P、Polynomial5P、Parabola和 Spline，主要适用于比浊法测定的项目，下面分别予以介绍：1.8.2.1.几点说明 同功酶淀粉酶胆碱脂酶等底物代谢类包括甘油三脂总胆固醇
38、高密度脂蛋载脂蛋白脂蛋白补体补体免疫球蛋白等按临床性质分类无机离子包括等的医学决定水平医学决定水平是指不同于参考值的另一些限值通过观察学习必备 精品知识点 a)所有比色法的项目都是是线性定标，比浊法的项目都是非线性定标；b)后面的定标公式中：R 表示反应度，C 表示浓度（活性），K、R0、a、b、c、d 表示定标参数。c)标准液：指浓度已经准确测知的溶液。1.8.2.2.线性定标 a)单点线性定标 定标公式：R=KC，只有 1 个定标参数 K，K=定标曲线如下图：只需提供 1 个标准品。大多数酶学项目可以不定标而直接输入因数(输入值 F=1/K)。b)两点线性定标 定标公式：R=KC+b，有
39、2 个定标参数，K 和 b，其中，；要求提供 2 个标准品，C1、C2 为标准品 1 和 2 的浓度，R1、R2 为标准品 1 和 2 的反应度。定标曲线如下图：c)多点线性定标 定标公式：R=KC+b，有 2 个定标参数，K 和 b，其中：要求提供 n（n3）个标准品，Ci 为标准品 i 的浓度，Ri 为标准品 i 的反应度。1.8.2.3.非线性定标 a)Logistic-Log 4P 定标公式：，有 4 个参数，即 R0、K、a 和 b。要求提供至少 4 个标准品，其中第 1 个标准品的浓度（活性）为零，其对应的 R 就等于 R0，用最速下降法+拟牛顿法求解。适用于随着浓度增加，其反应度
40、增加越来越小的定标曲线，如图：b)Logistic-Log 5P 定标公式：，有 5 个参数，即 R0、K、a、b 和 c。要求提供至少 5 个标准品，其中第 1个标准品的浓度(活性)为零，其对应的 R 就等于 R0，用最速下降法+拟牛顿法求解，适用范围同 Logistic-Log 4P，只是曲线拟合程度更高。c)Exponential5P 定标公式：，有 5 个参数，即 R0、K、a、b 和 c。要求提供至少 5 个标准品，其中第 1个标准品的浓度(活性)为零，其对应的 R 就等于 R0，用最速下降法+拟牛顿法求解。适用于浓度增加到一定程度后，其反应度增加越来越大的定标曲线，如图：d)Pol
41、ynomial5P 定标公式：，有 5 个参数，即 R0、a、b、c 和 d。要求提供至少 5 个标准品，其中第 1个标准品的浓度(活性)为零，其对应的 R 就等于 R0，用最速下降法+拟牛顿法求解。同功酶淀粉酶胆碱脂酶等底物代谢类包括甘油三脂总胆固醇高密度脂蛋载脂蛋白脂蛋白补体补体免疫球蛋白等按临床性质分类无机离子包括等的医学决定水平医学决定水平是指不同于参考值的另一些限值通过观察学习必备 精品知识点 e)Parabola 定标公式：R=aC2+bC+c，有 3 个参数，即 a、b 和 c。要求提供至少 3 个标准品，解 3元线性方程组，用全选主元高斯消去法求解。f)Spline 定标公式：
42、C-Ci=R0i+ai(C-Ci)+bi(C-Ci)2+ci(C-Ci)3-R有 4i 个参数，即 R0i、ai、bi和 ci。要求提供 2-6 个标准品，用最速下降法+拟牛顿法求解。由于是分段拟和，其拟和程度在所有定标类型中最高。1.8.3.浓度（活性）的计算 浓度(或活性)C 的计算根椐选用的不同定标类型而计算公式不同，下面一一列举：1.8.3.1.线性定标 a)单点线性定标 ，K 为定标参数；或 C=R F，F 为输入的因数。b)两点线性定标 ，K 和 b 为定标参数。c)多点线性定标 ，K 和 b 为定标参数。1.8.3.2.非线性定标（略）1.8.3.3.其他相关计算 a)平衡点判断
43、，仅适用于终点法 取设定的反应终点附近的连续 4 个周期吸光度值 Ai，从 i=0 查起，若有连续|Ai-Ai+1|、|Ai+1-Ai+2|和|Ai+2-Ai+3|(暂取 0.03，依据重复性指标给出),则认为找到平衡点，否则在结果上标明“未找到平衡点”。b)线性限判断，仅适用于动力学法 测定点大于 9 个：线性限=(前 6 个点吸光度的变化率后 6 个点的吸光度变化率)/所有点的吸光度变化率 4测定点8：线性限=(前 3 个点吸光度的变化率后 3 个点的吸光度变化率)/所有点的吸光度变化率 下列情况不计算线性限：测定点数3；吸光度变化率小于 0.006/分或吸光度变化率的差值小于 0.006
44、/分；计算出的线性限与设定值比较，若大于设定的线性限，则在结果上标明“超过线性限”。c)底物耗尽判断，仅适用于动力学法 仅对动力学法和固定时间法有效，一些高浓度（活性）样品使底物耗尽，使反应不再为 0级(动力学法)或 1 级(固定时间法)反应，为能正确反映测定结果，需设置底物耗尽限(某一特定吸光度)，该吸光度限应正好是反应曲线中线性区与非线性区(动力学法)或 1 级反应区与多级反应区(固定时间法)的临界点，是在反应时间内反应没有发生底物耗尽时所能达到的最小(反应曲线向下)或最大(反应曲线向上)的吸光度值。一旦出现底物耗尽，系统给予相应标记，并自动稀释重测和提示用户手工稀释后再测定。d)抗原过剩
45、检查，仅适用于比浊法 仅适用于通过光的透射测定的终点法项目，在抗原抗体的反应中，生成的不溶性抗原抗体复合物与抗原抗体的比例密切相关，在适当比例时生成的不溶性抗原抗体复合物量最大，此时透过的光最少，相当于吸光度最大；大于和小于这个比例时，生成的不溶性抗原抗体复合物量都会减少，透过的光增加，吸光度减小。在这种情况下，浓度相差很大的两份样本（抗原），同功酶淀粉酶胆碱脂酶等底物代谢类包括甘油三脂总胆固醇高密度脂蛋载脂蛋白脂蛋白补体补体免疫球蛋白等按临床性质分类无机离子包括等的医学决定水平医学决定水平是指不同于参考值的另一些限值通过观察学习必备 精品知识点 生成的不溶性抗原抗体复合物量可以相等，如果不进
46、行抗原过剩检查，会得到相同的测定结果。附录 A，检验常识 A.1 生物化学 生物化学是生物学的分支学科，它的研究对象是生物体，它从分子水平阐述生命的物质组成和运行机理，因此生物化学是生命体的化学。分子生物学是研究生物大分子（蛋白质、酶、核酸、多糖等）的结构、功能及遗传信息传递与表达的学科，有时特指研究核酸大分子的学科。生物化学及分子生物学已经成为现代生物学的带头学科。A.2 生物分子的组成 生物体内的物质分为有机物和无机物两大类，其中无机物有水和无机盐两类，有机物主要要蛋白质、核酸、糖和脂类等，以下就人体内的主要物质进行描述。图 A 1 A.3 蛋白质的介绍 蛋白质是生物体的第二大化合物，在细
47、胞的干重中，约一半以上是蛋白质，在活细胞中的含量在 15%以上。蛋白质是大分子物质，分子量在 6000 至百万道尔顿。蛋白质的英文名叫做protein，源自希腊文，它是“最原初的”，“第一重要的”意思。“朊”这个词就是根据 protein的原意翻译的，但由于蛋白质一词沿用已久，所以“朊”并未被广泛采用。蛋白质在生物体内占有特殊的地位。蛋白质和核酸构成原生质中的主要成分，而原生质是生命现象的物质基础。蛋白质分子中含有碳、氢、氧、氮，还有硫和磷。蛋白质是人体氮的唯一来源。人体的脏器心、肺、肾、皮肤甚至头发、指甲等等都是由蛋白质组成。蛋白质其生理功用在于新生和修补机体组织，同时也是能量的来源（由蛋白
48、质所供的热量约占总热量的 815）。蛋白质还能调节生理功能，人体所有的生理功能活动几乎都有蛋白质参加（物质和能量代谢过程中的各种酶、各类激素及抵抗疾病的抗体都是蛋白质）。蛋白质是由氨基酸组成的，已经发现的氨基酸有 20 种。A.3.1 蛋白质的基本单位：-氨基酸 蛋白质彻底水解后，用化学分析方法证明其基本组成单位是 -氨基酸。存在于自然界的氨基酸有 300 余种，但构成天然蛋白质的氨基酸仅有 20 种，除甘氨酸外，蛋白质中的氨基酸均属 L-氨基酸。图 A 2 种 类 结构式 中文名 英文名 三字 符号 一字 符号 等电 点 pI 非 极 性 同功酶淀粉酶胆碱脂酶等底物代谢类包括甘油三脂总胆固醇
49、高密度脂蛋载脂蛋白脂蛋白补体补体免疫球蛋白等按临床性质分类无机离子包括等的医学决定水平医学决定水平是指不同于参考值的另一些限值通过观察学习必备 精品知识点 疏 水 性 氨 基 酸 甘氨酸 glycine Gly G 5.97 丙氨酸 alanine Ala A 6.00 缬氨酸 valine Val V 5.96 亮氨酸 leucine Leu L 5.98 异亮氨酸 isoleucine Ile I 6.02 苯丙氨酸 phenlalanine Phe F 5.48 脯氨酸 proline Pro P 6.30 极 性 中 性 氨 基 酸 色氨酸 tryptophan Trp W 5.89
50、丝氨酸 serine Ser S 5.68 酪氨酸 tyrosine Tyr Y 5.66 半胱氨酸 cysteine Cys C 5.07 蛋氨酸 methionine Met M 5.74 天冬酰胺 asparagine Asn N 5.41 谷氨酰胺 glutamine Gln Q 5.65 苏氨酸 threonine Thr T 5.60 酸 性 氨 同功酶淀粉酶胆碱脂酶等底物代谢类包括甘油三脂总胆固醇高密度脂蛋载脂蛋白脂蛋白补体补体免疫球蛋白等按临床性质分类无机离子包括等的医学决定水平医学决定水平是指不同于参考值的另一些限值通过观察学习必备 精品知识点 基 酸 天冬氨酸 aspart