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1、血液细胞分析仪原理及应用第1 页，本讲稿共31 页 人类生理和病理变化，往往会引起血液组分的变化，所以及时了解血液组分的变化，可以为医生提供诊断与治疗疾病的重要依据。第2 页，本讲稿共31 页 红细胞 双凹圆盘 无核 红细胞的直径在6 9m 之间，平均为7.2m。成年男子的红细胞个数为(4.6 6.2)1012个/L 成年女子的红细胞个数为(4.2 5.4)1012个/L第3 页，本讲稿共31 页 白细胞 有核 球形 直径为7 25m。正常人的白细胞数目为(4 10)109个/L第4 页，本讲稿共31 页 血小板 两面微凹的圆盘，受刺激时伸出伪足 正常人的血小板值为(100 300)109个/
2、L，直径为2 4m。第5 页，本讲稿共31 页 血红蛋白（血色素或血红素）血红蛋白存在于红细胞中，是一种含铁的色蛋白 成年男子为120 160g/L 成年女子为110 150g/L第6 页，本讲稿共31 页血液细胞分析仪测量参数 红细胞RBC 白细胞WBC 血小板PLT 血红蛋白HGB 红细胞比容HCT 平均红细胞容量MCB 平均血红蛋白量MCH 平均血红蛋白浓度MCHC第7 页，本讲稿共31 页一、血液细胞分析仪的发展简史 1956 年美国科学家W.H.Coulter 将电阻法计数粒子的专利技术应用于血细胞计数获得成功 其原理是根据血细胞非传导的性质，以电解质溶液中悬浮血细胞在通过计数小孔时
3、引起的电阻变化进行检测为基础，进行血细胞计数和体积测定，这种方法称为电阻法或库尔特原理。第8 页，本讲稿共31 页 国外厂商：日本SYSMEX 美国beckman-coulter 日本KOHDEN 美国DANAM 瑞典BOULE 美国BAYER 美国ABBOTT 国内厂商：南昌特康 南昌百特 深圳迈瑞 桂林百利特第9 页，本讲稿共31 页二、血细胞计数检测原理1.库尔特计数原理2.白细胞分类及计算方法3.红细胞计数核红细胞比容测定原理4.血红蛋白测定原理5.血小板计数原理6.其它参数计算方法7.五分类血液分析仪原理及应用机型第10 页，本讲稿共31 页1.库尔特计数原理 库尔特原理（coult
4、er principle）：二、血细胞计数检测原理第11 页，本讲稿共31 页库尔特原理 悬浮在电解液中的颗粒/细胞，随电解液通过小孔管时，因取代了相同体积的电解液，在恒电流设计的电路中导致小孔管内外两电极间电阻发生瞬时变化，而产生了电位脉冲。脉冲信号的大小和次数与颗粒的大小和数目成正比。二、血细胞计数检测原理第12 页，本讲稿共31 页2.白细胞分类及计算方法 根据脉冲的大小，即可人为地将血内地白细胞分成几群（二分群或三分群）三分类：淋巴细胞LY，单核细胞MO，粒细胞GI。五分类：淋巴细胞LY，单核细胞MO，粒细胞GI（中性细胞，嗜酸性细胞，嗜碱性细胞）电阻抗法白细胞“分类”不能代替显微镜涂
5、片检查二、血细胞计数检测原理第13 页，本讲稿共31 页 在进行血细胞测定之前，全血标本必须用稀释液在仪器外部或内部进行一定比例的稀释，一般用1：251的稀释倍数来测量白细胞 仪器将从白细胞计数池中测量到体积35fl 颗粒产生的电子脉冲的数量作为白细胞计数，根据细胞稀释倍数进行计算，得到正确的白细胞计数结果。二、血细胞计数检测原理第14 页，本讲稿共31 页仪器是如何进行细胞分群的呢？仪器除给出细胞数据结果外，同时提供出细胞体积分布图形，这些可以表示出细胞群体分布情况的图形被称为直方图 它可以显示出某一特定细胞群的平均细胞体积、细胞分布情况和是否存在明显的异常细胞群 直方图是由测量通过感应区的
6、每个细胞脉冲累积得到的，根据库尔特原理可以在计数的同时进行分析测量。二、血细胞计数检测原理第15 页，本讲稿共31 页直方图与脉冲信号的关系二、血细胞计数检测原理第16 页，本讲稿共31 页 在进行白细胞分析时，仪器的计算机部分可以将白细胞体积从35 450fl 分为256 个通道，每个通道约为1.64fl，细胞根据其体积大小被分别放在不同通道中，从而得到白细胞体积分布的直方图 二、血细胞计数检测原理第17 页，本讲稿共31 页二、血细胞计数检测原理第18 页，本讲稿共31 页 经过溶血剂处理后的白细胞根据体积大小可以初步确认其相应的种类：第一亚群（小细胞群）是淋巴细胞LYM；第二个亚群是单个
7、核细胞群MONO，也被称为中间细胞MID；相当于粒细胞的细胞群GRAN 位于第三亚群（大细胞群）。二、血细胞计数检测原理第19 页，本讲稿共31 页二、血细胞计数检测原理第20 页，本讲稿共31 页 仪器根据各细胞群占总体积的比例计算出各细胞群的百分比，如果与该标本为的白细胞总数相乘，即得到各项的绝对值 注意，由于各厂家血细胞分析仪使用的稀释液和溶血剂成分不完全相同，对白细胞膜的作用程度不同，所以仪器对各类白细胞区分界限的规定有所不同，在使用时不应随意更换生产厂家试剂，防止造成错误报告。二、血细胞计数检测原理第21 页，本讲稿共31 页3.红细胞计数和红细胞比容测定原理 大多数血细胞分析仪使用
8、库尔特法进行红细胞计数核红细胞比容测定，其原理同白细胞检测一样。红细胞通过小孔时，形成大小相应的脉冲，脉冲的多少即红细胞的数目，脉冲的高度代表单个脉冲细胞的体积 脉冲高度叠加，经过换算可得到红细胞的比容 HCT二、血细胞计数检测原理第22 页，本讲稿共31 页 红细胞比容的测定方法：红细胞比容指红细胞在全血中所占的容积百分比是用来检测红细胞数量的一个比值。先以单个脉冲细胞的高度计算红细胞的平均体积MCV，再乘以红细胞的数，得出红细胞比容 正常成年人的红细胞比容,男性为40%-50%,女性为37%-48%。二、血细胞计数检测原理第23 页，本讲稿共31 页4.血红蛋白测定原理 一般采取比色法 加
9、入溶血剂，释放血红蛋白 用HiCN 生成氰化血红蛋白，或是用SLS，光谱最大吸收在540nm 附近。二、血细胞计数检测原理第24 页，本讲稿共31 页二、血细胞计数检测原理第25 页，本讲稿共31 页双波长法测量血红蛋白含量二、血细胞计数检测原理第26 页，本讲稿共31 页 设在540nm 处为1，690nm 处为2，则在1时的吸光度为：式中，A1为在1时的吸光度；K1为在1时的吸光系数；C 为待测物质浓度；L 为吸收池厚度。AS1为光散射和背景吸光度。同样对于2也有：二、血细胞计数检测原理第27 页，本讲稿共31 页 因540nm 和690nm 相差不远，可以吧AS1和AS2视为相等。因此透
10、过比色皿的参考信号和样品信号的吸光度之差A 为：二、血细胞计数检测原理第28 页，本讲稿共31 页5.血小板计数原理 血小板随红细胞一起在一个系统中进行检测，由于血小板体积与红细胞体积有明显的差异，仪器设定了特定的阈值，将高于阈值者定于红细胞，反之为血小板。二、血细胞计数检测原理第29 页，本讲稿共31 页 血小板分别贮存于64 个通道内，直方图范围为2-30fl。为了使血小板计数更准确，有些仪器专门设置了增加血小板准确性的计数，如鞘流计数、浮动界标、拟合曲线等 二、血细胞计数检测原理第30 页，本讲稿共31 页6.其它参数计算方法 根据以上的方法检测出的参数套用相应公式就可计算出：红细胞比容(HCT)、平均血红蛋白量(MCH)、平均血红蛋白浓度(MCHC)、淋巴细胞计数百分比(LY)血小板压积(PCT)等。二、血细胞计数检测原理第31 页，本讲稿共31 页