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1、梅毒的实验室检查与技术规范 朱穗兰 2013年3月2日主要内容u 梅毒概述u 梅毒血清学检测方法u 梅毒检测技术规范梅毒概述（一）性接触是主要的传染途径 未经治疗的患者在感染后的1年内最具有传染性 随着病期的延长，传染性越来越小 到感染后2年，通过性接触一般无传染性 母 婴 传 播 在妊娠7周时，梅毒螺旋体即可通过胎盘传染未经治疗者，虽已无性传播（病期2年），但妊娠时仍可传染给胎儿,病期越长，传染性越小;梅毒概述（二）n 一期梅毒硬下疳和(或)腹股沟淋巴结肿大n 二期梅毒 可有一期梅毒史，病期在2年以内有多形性皮疹、扁平湿疣等n 三期（晚期）梅毒可有一期或二期梅毒史，病期在2年以上皮肤黏膜损害
2、等，包括神经梅毒、心血管梅毒n 隐性（潜伏）梅毒 早期：病期在2年以内；晚期：病期在2年以上。无任何梅毒性的症状和体征n 胎传（先天）梅毒早期：在2岁前发生；晚期：在2岁以后发病。胎传隐性梅毒：无临床表现梅毒概述（三）疑似病例、确证病例诊断依据：病史 症状 实验室检查梅毒的实验室检查结果对诊断有决定性意义梅毒实验室检测技术 病原学检测 血清学检测梅毒血清学检测方法梅毒血清学检测分类(1)非梅毒螺旋体抗原血清学试验（非特异性梅毒抗体）(2)梅毒螺旋体抗原血清学试验（特异性梅毒抗体）两类方法。为什么梅毒实验室诊断需要两类血清学检测方法？为什么梅毒实验室诊断需要两类血清学检测方法？非梅毒螺旋体抗原血
3、清学试验l 原理n 人体感染了梅毒螺旋体后，组织受到破坏，释放出来的一种类脂成分，与梅毒螺旋体结合形成完全抗原，刺激机体在3周-4周产生类脂质抗体（反应素）。主要是IgM和IgG混合抗体。l 抗体的作用n 无保护作用，治疗监测。未经治疗的病人，其血清内的反应素可长期存在。经正规治疗后，反应素可以逐渐减少至转为阴性。临床上非梅毒螺旋体抗原血清学试验为什么有定性和定量两种检测法 临床上非梅毒螺旋体抗原血清学试验为什么有定性和定量两种检测法？非梅毒螺旋体抗原血清学试验l 所有非梅毒螺旋体抗原血清试验的抗原基本成分都是一样l 方法包括：（1）快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)（2）甲苯胺红不加热血清
4、试验（TRUST）（3）性病研究实验室试验(VDRL)等。l 基本成分是心磷脂 卵磷脂和胆固醇l 抗原抗体结合形成复合物，凝集成网状沉淀颗粒被肉眼所见l 上述方法的敏感性和特异性都基本相似 试验特点n 原理和成分与试验相同n 血清不需要灭活n 不需要显微镜观测结果n 可作定量试验n 有现成的试剂盒携带方便n 操作简单n 价格便宜操作要点1.仪器：水平旋转仪。2.定性实验n 加样：吸取50ul血清(浆)放在卡片圈中，并均匀地涂布在整个圈内n 加抗原：将抗原轻轻摇匀，用9号针头加1滴抗原n 反应：将卡片置水平旋转仪旋转8分钟，立即在亮光下观察结果3.定量试验n 稀释夜准备：在圈内加入50uL生理盐
5、水（根据需要确定稀释度），勿将盐水涂开。n 加样：吸取50uL血清（浆）与各圈中盐 水作系列稀释，并涂布整个圈内。n 下同定性试验。非梅毒螺旋体抗原血清学试验结果判断RPRTRUST非梅毒螺旋体抗原血清学试验临床意义u 早期梅毒硬下疳出现1周-2周后，血清可呈阳性。u 经治疗后血清滴度可下降并转阴性，故可作为疗效观察、判愈、复发或再感染的指征。为什么要做定量检测？非梅毒螺旋体抗原血清学试验临床意义u 一期梅毒1年后转为阴性u 二期梅毒2年后转为阴性。u 晚期梅毒 治疗后血清滴度下降缓慢，2年后约50%病人血清反应仍为阳性。TRUST结果解释示意图假阳性问题 假阳性：非梅毒患者的血清反应呈阳性技
6、术性假阳性 由于标本的保存不当（如细胞污染或溶血）、试剂质量差或过期、或实验室操作错误所造成。生物学假阳性 是由于患者有其他疾病或生理状态发生变化，使梅毒血清试验出现阳性 某些疾病：结核、疟疾、肝病、红斑狼疮、流感、肺炎、类风湿性关节炎、风湿性心脏病、风疹、系统性硬化症等，疾病发展过程中释放心磷脂到血液中呈假阳性。老年人。生理机能发生变化：少数孕妇也可发生生物学假阳性。梅毒假阳性反应的处理u技术性假阳性反应一般是由于操作错误引起的假阳性反应，经过重复试验即可除外。u 对生物学假阳性反应，应做TPHA（TPPA）等试验进行排除。前带现象l 指非梅毒螺旋体抗原血清试验中，有时血清中存在高浓度的抗体
7、时出现的弱阳性、不典型或阴性反应的结果，而临床上又象二期梅毒，此时将血清稀释后再进行试验，出现了阳性的结果，该现象称为前带现象。l 处理：将血清稀释后再进行试验。耐血清性（血清固定）l 指经抗梅毒治疗后，非梅毒螺旋体抗原血清试验在一定时期内不阴转。早期的耐血清性常与治疗量不足或不规则治疗、复发、再感染或有神经系统梅毒等因素有关。梅毒螺旋体抗原血清学试验梅毒螺旋体抗原血清学试验方法u 梅毒螺旋体颗粒凝集试验(TPPA)u 梅毒螺旋体血球凝集试验(TPHA)u 梅毒酶联免疫吸附试验（ELISA）u 梅毒免疫层析法-梅毒快速检测(RT)u 荧光螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS）u 化学发光免疫分析
8、法（CLIA）u 梅毒螺旋体蛋白印迹试验（WB）TPPAu TPPA试验用梅毒螺旋体致敏明胶颗粒，此致敏颗粒与人血清中的抗梅毒螺旋体抗体结合，产生可见的凝集反应，具有较高的敏感性和特异性。u TPPA是目前WHO认可的梅毒抗原血清学试验的“金标准”，常用于新方法、新试剂评价的参照标准。TPPA(TPHA)试验原理示意图梅毒螺旋体抗原血清试验的临床意义u 一般情况下，一旦梅毒患者梅毒螺旋体抗原血清试验呈阳性，即使经过正规有效治疗治，仍将终身阳性。所以TPPA等试验不能作为疗效观察的指标。u 作为非梅毒螺旋体抗原血清试验初筛阳性标本的确证试验。u TPPA等阳性不能区分既往感染和现症感染，应结合非梅毒螺旋体抗原血清试验结果进行诊断。TPPA结果解释示意图梅毒血清学试验结果解释 梅毒血清学试验结果解释 梅毒检测技术规范简介