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1、邵阳医专大学生研究性学习和邵阳医专大学生研究性学习和创新性试验计划创新性试验计划 项项 目目 申申 报报 表表项目概述项目概述丹参酮丹参酮IIA对缺血再灌注损伤大鼠对缺血再灌注损伤大鼠心肌组织保护作用的实验研究心肌组织保护作用的实验研究立项时间：立项时间：2015年年5月月学校名称：邵阳医学高等专科学校学校名称：邵阳医学高等专科学校指导老师：李涛（职称：讲师，学科专业：医学）指导老师：李涛（职称：讲师，学科专业：医学）科研小组：黄赛帅，宁梦婧，薛晓斌，曾欣能，程丹科研小组：黄赛帅，宁梦婧，薛晓斌，曾欣能，程丹小组介绍：专业：口腔医学，入学年份：小组介绍：专业：口腔医学，入学年份：2014项目研
2、究和实验的目的、内容和要解项目研究和实验的目的、内容和要解决的主要问题决的主要问题 本研究通过测量丹参酮本研究通过测量丹参酮IIA对缺血再灌注对缺血再灌注大鼠心肌组织大鼠心肌组织缺血修饰白蛋白（缺血修饰白蛋白（IMA）、心）、心型脂肪酸结合蛋白（型脂肪酸结合蛋白（h-FABP）表达情况的表达情况的影响，研究丹参酮影响，研究丹参酮IIA减轻缺血再灌注心律失减轻缺血再灌注心律失常的作用机理及对缺血再灌注损伤心肌的保常的作用机理及对缺血再灌注损伤心肌的保护作用。护作用。本研究拟采用健康本研究拟采用健康Wistar大鼠大鼠50只，只，采用随机数字表法分为采用随机数字表法分为5组，假手术组、模组，假手术
3、组、模型组、丹参酮型组、丹参酮IIA高剂量（高剂量（20mgkg-1d-1）中剂量（中剂量（10mgkg-1d-1）、低剂量组）、低剂量组（5mgkg-1d-1）.假手术组和模型组给予生理盐水，高假手术组和模型组给予生理盐水，高中低三组分别给予相应药物灌胃中低三组分别给予相应药物灌胃7d，末次，末次给药给药2h后，除假手术组外均进行心肌缺血后，除假手术组外均进行心肌缺血的造模，记录各组大鼠的心肌组织缺血修的造模，记录各组大鼠的心肌组织缺血修饰白蛋白、心型脂肪酸结合蛋白以及心肌饰白蛋白、心型脂肪酸结合蛋白以及心肌细胞凋亡相关基因蛋白的表达情况。细胞凋亡相关基因蛋白的表达情况。国内外研究现状和发展
4、动态国内外研究现状和发展动态 自自19431943年心肌缺血再灌注损伤的概念提出后，年心肌缺血再灌注损伤的概念提出后，对损伤的发生机理以及预防、治疗措施的探索一对损伤的发生机理以及预防、治疗措施的探索一直受医学界重视，如何减轻再灌注损伤已经成为直受医学界重视，如何减轻再灌注损伤已经成为医学界的研究热点之一。医学界的研究热点之一。近些年来，中药在抗心律失常方面取得很大近些年来，中药在抗心律失常方面取得很大进展，其中以中药丹参为主要成分的丹参片、复进展，其中以中药丹参为主要成分的丹参片、复方丹参滴丸等药物一直位于一线药物行列。方丹参滴丸等药物一直位于一线药物行列。项目的创新点和特色项目的创新点和特
5、色 正常人体中并不存在心肌组织缺血修饰白蛋白，但是在心肌缺正常人体中并不存在心肌组织缺血修饰白蛋白，但是在心肌缺血血510min后血中即可升高，缺血停止后可持续后血中即可升高，缺血停止后可持续24h，12h后恢复后恢复正常。缺血修饰白蛋白诊断心肌缺血的敏感性很高，能在心肌缺血正常。缺血修饰白蛋白诊断心肌缺血的敏感性很高，能在心肌缺血早期可逆阶段被检出，因此缺血修饰白蛋白成为第一个被早期可逆阶段被检出，因此缺血修饰白蛋白成为第一个被FDA(美国美国食品和药物管理局食品和药物管理局)批准销售的心肌缺血标志物。冠心病患者经皮冠批准销售的心肌缺血标志物。冠心病患者经皮冠状动脉介入治疗也可导致血液循环状
6、动脉介入治疗也可导致血液循环IMA中水平一过性升高。中水平一过性升高。心型脂肪酸结合蛋白具有高度心脏特异性心型脂肪酸结合蛋白具有高度心脏特异性(也就是主要在心脏组也就是主要在心脏组织中表达织中表达)，但在心脏以外的组织中也有低浓度表达。心肌缺血性损，但在心脏以外的组织中也有低浓度表达。心肌缺血性损伤出现后，伤出现后，h-FABP可以早在胸痛发作后可以早在胸痛发作后1-3小时在血液中被发现，小时在血液中被发现，6-8小时达到峰值而且血浆水平在小时达到峰值而且血浆水平在24-30小时内恢复正常。小时内恢复正常。在本研究中：经过缺血再灌注实验后，观察在本研究中：经过缺血再灌注实验后，观察模型组大鼠心
7、肌缺血损伤指标模型组大鼠心肌缺血损伤指标IMA和和H-FABP于实于实验有何不同，并观察不同浓度丹参酮验有何不同，并观察不同浓度丹参酮IIA溶液灌胃溶液灌胃对缺血再灌注大鼠心肌组织中对缺血再灌注大鼠心肌组织中IMA和和H-FABP的含的含量控制与丹参酮量控制与丹参酮IIA溶液浓度的相关性；记录模型溶液浓度的相关性；记录模型组大鼠的心律失常和组大鼠的心律失常和T波变化幅度，并与假手术组、波变化幅度，并与假手术组、高中低三组对比，可显示大鼠发生心肌缺血再灌高中低三组对比，可显示大鼠发生心肌缺血再灌注后，心肌组织结构损伤明显，心律失常显著发注后，心肌组织结构损伤明显，心律失常显著发生严重，若实验组大
8、鼠心肌细胞结构损伤明显减生严重，若实验组大鼠心肌细胞结构损伤明显减轻，心律失常显著改变，提示丹参酮轻，心律失常显著改变，提示丹参酮IIA对心肌缺对心肌缺血再灌注损伤以及心律失常具有良好的防治作用。血再灌注损伤以及心律失常具有良好的防治作用。项目的技术路线、进度安排及预期成果项目的技术路线、进度安排及预期成果技术路线技术路线:(1)动物级分组动物级分组 健康雄性健康雄性Wistar大鼠大鼠50只，体重只，体重250300g，平均体重，平均体重（27313.6）g；采用随机数字表法分为；采用随机数字表法分为5组，假手术组组，假手术组（F组）、模型组组）、模型组(M组组)、丹参酮、丹参酮A高剂量（高
9、剂量（HT组，组，20mgkg-1d-1）、中剂量（）、中剂量（MT组，组，10mgkg-1d-1）、）、低剂量组（低剂量组（LT组，组，5mgkg-1d-1）。）。(2)造模及给药方法造模及给药方法五组大鼠于实验前五组大鼠于实验前7d开始进行适应性喂养，开始进行适应性喂养，F组和组和M组给组给予生理盐水，予生理盐水，HT、MT、LT三组分别按三组分别按20mgkg-1d-1、10mgkg-1d-1、5mgkg-1d-1标准将丹参酮标准将丹参酮A灌胃灌胃7d，末次给药，末次给药4h后，除后，除F组不采取冠脉结扎外，其余四组大组不采取冠脉结扎外，其余四组大鼠结扎冠状动脉左前降支鼠结扎冠状动脉左前
10、降支15min后松开使再灌注后松开使再灌注30min制制备模型。备模型。(3)指标检测方法指标检测方法实验结束后取大鼠左心室心肌，经预冷的生理盐实验结束后取大鼠左心室心肌，经预冷的生理盐水洗涤后水洗涤后-80保存备用，检测时取保存备用，检测时取0.2 g心肌组织心肌组织剪碎后加入剪碎后加入4倍体积的裂解液，匀浆提取心肌组织倍体积的裂解液，匀浆提取心肌组织总蛋白，然后转入总蛋白，然后转入EP管，管，4静置静置0.5h，12000 rmin、4离心离心0.5h，取上清按，取上清按bradford法进行法进行蛋白质定量，蛋白质定量，IMA、h-FABP水平定量检测采用双水平定量检测采用双抗体两步夹心
11、抗体两步夹心ELISA法法,IMA检测灵敏度为检测灵敏度为1.0 mgmL，h-FABP检测灵敏度为检测灵敏度为0.01 ngml。(4)统计学分析统计学分析所有收集数据录入所有收集数据录入Excel2003，在，在spss17.0中进中进行统计分析。计量资料以（行统计分析。计量资料以（s）表示，多组间比）表示，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验。检验水准取检验。检验水准取=0.05。进度安排：进度安排：2015年年5-8月月 实验前期准备，资料收集、设备采购、实验实验前期准备，资料收集、设备采购、实验动物采购等，完成开题报告；动物采购等，完成开题报告；2015年年9月月-2016年年2月月 进行动物实验，采集实验数据，完成中期检进行动物实验，采集实验数据，完成中期检查报告；查报告；2016年年3月月-2016年年5月月 实验数据分析及提炼，撰写并发表学术论文，实验数据分析及提炼，撰写并发表学术论文，完成结题报告。完成结题报告。预期成果：预期成果：通过本次研究，公开发表相关学术论文通过本次研究，公开发表相关学术论文2-3篇。篇。