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1、硅胶柱层析技术第1页，本讲稿共32页 常说的过柱子应该叫柱层析分离，常说的过柱子应该叫柱层析分离，也叫柱色谱。我们常用的是以硅胶或也叫柱色谱。我们常用的是以硅胶或氧化铝作固定相的吸附柱。氧化铝作固定相的吸附柱。其实硅胶柱层析技术也可以称作硅其实硅胶柱层析技术也可以称作硅胶吸附柱色谱技术胶吸附柱色谱技术第2页，本讲稿共32页色谱法，又称层析法。是一种以分配平衡为机理的分配色谱法，又称层析法。是一种以分配平衡为机理的分配方法。色谱体系包含两个相，一个是固定相，一个是流方法。色谱体系包含两个相，一个是固定相，一个是流动相。当两相相对运动时，反复多次的利用混合物中所动相。当两相相对运动时，反复多次的利
2、用混合物中所含各组分分配平衡性质的差异，最后达到彼此分离的目含各组分分配平衡性质的差异，最后达到彼此分离的目的。的。色谱法按固定相的状态可分为柱色谱、平板色谱和色谱法按固定相的状态可分为柱色谱、平板色谱和棒色谱三种，而实验室中最常用的是柱层析和薄层棒色谱三种，而实验室中最常用的是柱层析和薄层层析，以及它们之间的配合应用。层析，以及它们之间的配合应用。第3页，本讲稿共32页柱层析1 1、吸附色谱的原理、吸附色谱的原理 在一定条件下，硅胶与被分离物质之间产生作用，这种作用主要是物在一定条件下，硅胶与被分离物质之间产生作用，这种作用主要是物理和化学作用两种。物理作用来自于硅胶表表面与溶质分子之间的范
3、理和化学作用两种。物理作用来自于硅胶表表面与溶质分子之间的范德华力；化学作用主要是硅胶表面的硅羟基与待分离物质之间的氢键德华力；化学作用主要是硅胶表面的硅羟基与待分离物质之间的氢键作用。作用。2 2、操作步骤、操作步骤2.1 2.1 硅胶准备硅胶准备 硅胶一般选用硅胶一般选用250-400250-400目目(即即40-63m40-63m直径的硅胶颗粒直径的硅胶颗粒)，根据，根据RfRf选用选用硅胶的用量。硅胶的用量。2.2 2.2 实验仪器准备实验仪器准备 一支玻璃色谱柱一支玻璃色谱柱,一个铁架台一个铁架台,烧杯烧杯,锥形瓶锥形瓶,径口直径较大的玻璃漏斗径口直径较大的玻璃漏斗,一支玻璃棒一支玻
4、璃棒,等。等。第4页，本讲稿共32页2.3 2.3 装柱装柱2.3.1 2.3.1 吸附剂的加入吸附剂的加入干法：将吸附剂一次加入色谱管，振动管壁使其均匀下沉，然后沿管干法：将吸附剂一次加入色谱管，振动管壁使其均匀下沉，然后沿管壁缓缓加入开始层析时使用的流动相，或将色谱管下端出口加活塞，壁缓缓加入开始层析时使用的流动相，或将色谱管下端出口加活塞，加入适量的流动相，旋开活塞使流动相缓缓滴出，然后自管顶缓缓加加入适量的流动相，旋开活塞使流动相缓缓滴出，然后自管顶缓缓加入吸附剂，使其均匀地润湿下沉，在管内形成松紧适度的吸附层。操入吸附剂，使其均匀地润湿下沉，在管内形成松紧适度的吸附层。操作过程中应保
5、持有充分的流动相留在吸附层的上面。作过程中应保持有充分的流动相留在吸附层的上面。湿法：将吸附剂与流动相混合，搅拌以除去空气泡，徐徐倾入色谱管湿法：将吸附剂与流动相混合，搅拌以除去空气泡，徐徐倾入色谱管中，然后再加入流动相，将附着于管壁的吸附剂洗下，使色谱柱表面中，然后再加入流动相，将附着于管壁的吸附剂洗下，使色谱柱表面平整。平整。俟填装吸附剂所用流动相从色谱柱自然流下，液面将与柱表面俟填装吸附剂所用流动相从色谱柱自然流下，液面将与柱表面相平时，即加试样溶液。相平时，即加试样溶液。第5页，本讲稿共32页2.3.22.3.2试样的加入试样的加入 将试样溶于层析时使用的流动相中，再沿色谱管壁缓缓加入
6、。注意勿将试样溶于层析时使用的流动相中，再沿色谱管壁缓缓加入。注意勿使吸附剂翻起。使吸附剂翻起。或将试样溶于适当的溶剂中，与少量吸附剂混匀，再使溶剂挥发去尽或将试样溶于适当的溶剂中，与少量吸附剂混匀，再使溶剂挥发去尽后使呈松散状；将混有试样的吸附剂加在已制备好的色谱柱上面。如后使呈松散状；将混有试样的吸附剂加在已制备好的色谱柱上面。如试样在常用溶剂中不溶解，可将试样与适量的吸附剂在乳钵中研磨混试样在常用溶剂中不溶解，可将试样与适量的吸附剂在乳钵中研磨混匀后加入。匀后加入。第6页，本讲稿共32页2.42.4洗脱洗脱 除另有规定外，通常按流动相洗脱能力大小，递增变换流动相的品种除另有规定外，通常按
7、流动相洗脱能力大小，递增变换流动相的品种和比例，分别分部收集流出液，至流出液中所含成分显著减少或不再和比例，分别分部收集流出液，至流出液中所含成分显著减少或不再含有时，再改变流动相的品种和比例。操作过程中应保持有充分的流含有时，再改变流动相的品种和比例。操作过程中应保持有充分的流动相留在吸附层的上面。动相留在吸附层的上面。2.5 2.5 检测检测2.5.1 2.5.1 初步检测初步检测 当冲洗溶剂流出一定量后，可对流出液进行初步检测，并且将锥形瓶当冲洗溶剂流出一定量后，可对流出液进行初步检测，并且将锥形瓶更换成小试管进行收集。一般只进行初步的快捷检测，因此通常是取更换成小试管进行收集。一般只进
8、行初步的快捷检测，因此通常是取一小薄层板，用铅笔和直尺将硅胶板分划成多个小方块，并按一定的一小薄层板，用铅笔和直尺将硅胶板分划成多个小方块，并按一定的次序编号。取一根内径为次序编号。取一根内径为0.3mm0.3mm左右的玻璃毛细管蘸取少量流出液，左右的玻璃毛细管蘸取少量流出液，点于薄层板的一个小格内，待半点干后，然后用物理的或化学的方法点于薄层板的一个小格内，待半点干后，然后用物理的或化学的方法检测。检测。第7页，本讲稿共32页2.5.2 2.5.2 正式检测正式检测点样点样:取分部收集的冲洗溶液进行分别直接点样取分部收集的冲洗溶液进行分别直接点样,如果冲洗溶液太稀如果冲洗溶液太稀,浓度太小浓
9、度太小,可先浓缩可先浓缩.点样的容器一般用玻璃毛细管点样的容器一般用玻璃毛细管,点样斑点的直径点样斑点的直径一般为一般为3-5mm.3-5mm.展开展开:在普通的展开槽中进行在普通的展开槽中进行,展开方式常选用上行展开展开方式常选用上行展开.展开剂展开剂:使用冲洗溶液使用冲洗溶液.显色显色:一般常用物理检测法和化学检测法一般常用物理检测法和化学检测法.物理检测法中首先有紫外光物理检测法中首先有紫外光法法,紫外光常用两种波长紫外光常用两种波长(254nm(254nm与与365nm).365nm).其次是碘蒸气显色法其次是碘蒸气显色法.化学化学检出法通常惊醒显色剂直接喷雾检出法通常惊醒显色剂直接喷
10、雾.显色剂有通用显色剂和专用显色剂显色剂有通用显色剂和专用显色剂.通用显色剂最常见的是硫酸通用显色剂最常见的是硫酸-乙醇或甲醇乙醇或甲醇(1:1)(1:1)溶液溶液,喷雾后喷雾后,有的化合有的化合物立即反应物立即反应,但多数化合物需加热后经历数分钟才显色但多数化合物需加热后经历数分钟才显色,不同化合物的不同化合物的反应不同反应不同,所以颜色也往往不同所以颜色也往往不同.专用显色剂是指对某个或某一类化合专用显色剂是指对某个或某一类化合物显色的试剂物显色的试剂,利用化合物本身的特有性质利用化合物本身的特有性质,或利用其所含的某些官能或利用其所含的某些官能团的特殊反应团的特殊反应.展开后根据斑点的展
11、开后根据斑点的,可以粗略的估计待分离物的含量的可以粗略的估计待分离物的含量的大小大小.第8页，本讲稿共32页2.6 2.6 合并合并 根据上面薄层检测的结果根据上面薄层检测的结果,我们可以将具有相同我们可以将具有相同RfRf值的部分进行合并值的部分进行合并,然后利用旋转蒸发器对合并部分进行旋转蒸发然后利用旋转蒸发器对合并部分进行旋转蒸发,最后得到我们需要的最后得到我们需要的目标产物目标产物.2.72.7色谱柱的洗涤色谱柱的洗涤 在绝大多数情况下在绝大多数情况下,硅胶分离柱中的硅胶是一次性使用硅胶分离柱中的硅胶是一次性使用,但在使用后的但在使用后的色谱柱中由于还含有冲洗溶剂色谱柱中由于还含有冲洗
12、溶剂,所以要将里面的硅胶到出是比较困难所以要将里面的硅胶到出是比较困难的的.取出硅胶的一种方法是将该柱放置一段时间取出硅胶的一种方法是将该柱放置一段时间,让溶剂自然挥发完后让溶剂自然挥发完后,倒出硅胶倒出硅胶.但这种方法既费时又污染环境但这种方法既费时又污染环境.第二种方法可以用一根比色第二种方法可以用一根比色谱柱稍长的木杆或塑料杆将含有溶剂的硅胶一段一段地掏出谱柱稍长的木杆或塑料杆将含有溶剂的硅胶一段一段地掏出,但这种但这种办法也比较麻烦办法也比较麻烦.第三种方法时利用一个一般地真空泵第三种方法时利用一个一般地真空泵,将柱中剩余的将柱中剩余的溶剂进行减压抽出溶剂进行减压抽出,在色谱柱和真空泵
13、之间加一个冷阱在色谱柱和真空泵之间加一个冷阱,这样抽出地溶这样抽出地溶剂既进行了有效地收集而不污染环境剂既进行了有效地收集而不污染环境,而色谱柱中地硅胶又能较快得而色谱柱中地硅胶又能较快得到干燥到干燥,使硅胶能够方便地倒出使硅胶能够方便地倒出.第9页，本讲稿共32页3 3、色谱柱的选择、色谱柱的选择 柱子可以分为：加压，常压，减压。柱子可以分为：加压，常压，减压。压力可以增加淋洗剂的流动速度，减少产品收集的时间，但是会减低压力可以增加淋洗剂的流动速度，减少产品收集的时间，但是会减低柱子的塔板数。所以其他条件相同的时候，常压柱是效率最高的，但柱子的塔板数。所以其他条件相同的时候，常压柱是效率最高
14、的，但是时间也最长，比如天然化合物的分离，一个柱子几个月也是有的。是时间也最长，比如天然化合物的分离，一个柱子几个月也是有的。减压柱能够减少硅胶的使用量，感觉能够节省一半甚至更多，但是由减压柱能够减少硅胶的使用量，感觉能够节省一半甚至更多，但是由于大量的空气通过硅胶会使溶剂挥发（有时在柱子外面有水汽凝结），于大量的空气通过硅胶会使溶剂挥发（有时在柱子外面有水汽凝结），以及有些比较易分解的东西可能得不到，而且还必须同时使用水泵抽以及有些比较易分解的东西可能得不到，而且还必须同时使用水泵抽气（很大的噪音，而且时间长）。气（很大的噪音，而且时间长）。加压柱是一种比较好的方法，与常压柱类似，只不过外加
15、压力使淋洗加压柱是一种比较好的方法，与常压柱类似，只不过外加压力使淋洗剂走的快些。压力的提供可以是压缩空气，双连球或者小气泵（给鱼剂走的快些。压力的提供可以是压缩空气，双连球或者小气泵（给鱼缸供气的就行）。特别是在容易分解的样品的分离中适用。压力不可缸供气的就行）。特别是在容易分解的样品的分离中适用。压力不可过大，不然溶剂走的太快就会减低分离效果。过大，不然溶剂走的太快就会减低分离效果。常压柱色谱，又称柱层析，是色谱法中最常见的一种。它的突出优点常压柱色谱，又称柱层析，是色谱法中最常见的一种。它的突出优点是，分离效率比经典的化学分离方法高的多，与其他色谱法相比，不是，分离效率比经典的化学分离方
16、法高的多，与其他色谱法相比，不需要昂贵的仪器设备，更换流动相和吸附剂方便，消耗材料少，成本需要昂贵的仪器设备，更换流动相和吸附剂方便，消耗材料少，成本低，适合分离取样量从克到微克级范围很宽的各种样品，因此在化学低，适合分离取样量从克到微克级范围很宽的各种样品，因此在化学实验室中至今仍被广泛应用。实验室中至今仍被广泛应用。第10页，本讲稿共32页4 4 溶剂的选择溶剂的选择 溶剂的选择也许是整个柱色谱分离操作中最困难之处溶剂的选择也许是整个柱色谱分离操作中最困难之处,也是实验成功也是实验成功的最关键之处的最关键之处.溶剂通常先利用简便的硅胶薄层色谱进行筛选溶剂通常先利用简便的硅胶薄层色谱进行筛选
17、.4.1 4.1 薄层色谱点样薄层色谱点样 把样品溶解在一种低沸点的有机溶剂中把样品溶解在一种低沸点的有机溶剂中(如氯仿如氯仿,丙酮丙酮.甲醇甲醇.乙醇等乙醇等)然后用毛细管或微量点样管将试液点到薄层板上然后用毛细管或微量点样管将试液点到薄层板上.点样量要适当点样量要适当,一般一般点样量少些点样量少些,则分离叫清晰则分离叫清晰.但要注意到检测灵敏度但要注意到检测灵敏度.4.2 4.2 展开展开4.2.14.2.1展开剂选择展开剂选择 选择展开剂时选择展开剂时,可采用微量圆环法和小型色谱法进行选择可采用微量圆环法和小型色谱法进行选择.第11页，本讲稿共32页微量圆环法微量圆环法:将欲分离的物质将
18、欲分离的物质,按常规方法点在薄板按常规方法点在薄板,两点相距两点相距2-3cm,2-3cm,再再用毛细管吸取所实验的溶剂系统用毛细管吸取所实验的溶剂系统,垂直放于样点中心垂直放于样点中心,让溶剂自毛细管让溶剂自毛细管中依中立流出进行展开中依中立流出进行展开,干燥后显色干燥后显色.观察斑点的分离情况观察斑点的分离情况.背试物质背试物质为未知化和物时为未知化和物时,常先用低极性溶剂展开常先用低极性溶剂展开,如式样留在圆点不动如式样留在圆点不动,则需则需增加溶剂的极性或增大洗脱液的量增加溶剂的极性或增大洗脱液的量,如移动过快如移动过快,则必须用较低极性的则必须用较低极性的溶剂来调整溶剂来调整.小型色
19、谱法小型色谱法.用普通的载薄片制成薄板用普通的载薄片制成薄板,把欲分离的物质点载薄板上把欲分离的物质点载薄板上,放放于小型玻璃缸或广口瓶中展开于小型玻璃缸或广口瓶中展开,干燥后显色干燥后显色,观察斑点分离情况观察斑点分离情况.第12页，本讲稿共32页4.2.2 4.2.2 展开展开薄层色谱的展开方法有上行法薄层色谱的展开方法有上行法,下行法下行法,双向展开法双向展开法,径向展开法等。径向展开法等。上行法上行法:使展开剂由下向上爬使展开剂由下向上爬.下行法下行法:使展开剂由上向下使展开剂由上向下.该法可使用极性较弱的展开剂该法可使用极性较弱的展开剂.双向展开法双向展开法:取方形薄板像纸色谱一样进
20、行双向展开取方形薄板像纸色谱一样进行双向展开.径向展开法径向展开法:可将吸附剂涂成圆形或扇形可将吸附剂涂成圆形或扇形,在圆心部分加如展开在圆心部分加如展开剂剂,使薄层径向展开使薄层径向展开.多次展开多次展开:用展开剂对薄层展开一次用展开剂对薄层展开一次.称为单次展开称为单次展开.一次展开一次展开后后,取出薄板取出薄板,挥发出去展开剂后再行展开挥发出去展开剂后再行展开.梯度展开梯度展开:该法所用的展开剂在连续不断的改变组成该法所用的展开剂在连续不断的改变组成.一般可把一般可把一个装有强极性展开剂的滴定管深入密闭的含弱极性的展开剂的层析一个装有强极性展开剂的滴定管深入密闭的含弱极性的展开剂的层析槽
21、中槽中,槽中用电磁搅拌器把滴下的强极性展开剂混匀槽中用电磁搅拌器把滴下的强极性展开剂混匀,此时此时,展开剂的展开剂的极性逐渐由弱变强极性逐渐由弱变强,使极性差别较大的多种组分混合物得以很好的分使极性差别较大的多种组分混合物得以很好的分离离.第13页，本讲稿共32页4.3 4.3 显色显色 展开后展开后,如物质有色如物质有色,可明显的在薄层上观察到它们的位置可明显的在薄层上观察到它们的位置.如无色如无色,则则要通过一定的方法显色要通过一定的方法显色,定位定位,一边确定斑点的位置及大小一边确定斑点的位置及大小.4.4 4.4 常用溶剂的极性常用溶剂的极性 常用溶剂的极性顺序：石油醚环己烷常用溶剂的
22、极性顺序：石油醚环己烷/己烷苯乙醚氯仿乙己烷苯乙醚氯仿乙酸乙酯正丁醇丙酮乙醇甲醇水。酸乙酯正丁醇丙酮乙醇甲醇水。在薄层色谱中在薄层色谱中,当溶剂的极性太大时当溶剂的极性太大时.会使待分离物全部接近溶剂会使待分离物全部接近溶剂前沿前沿,当溶剂的极性太小时当溶剂的极性太小时,又会使待分离物几乎全部保留在圆点又会使待分离物几乎全部保留在圆点,这这两种情况都是待分离物得不到分离两种情况都是待分离物得不到分离.使用单一溶剂，往往不能达到很好的分离效果，往往使用混合溶使用单一溶剂，往往不能达到很好的分离效果，往往使用混合溶剂通常使用一个高极性和低极性溶剂组成的混合溶剂，高极性的溶剂剂通常使用一个高极性和低
23、极性溶剂组成的混合溶剂，高极性的溶剂还有增加区分度的作用，常用的溶剂组合有：还有增加区分度的作用，常用的溶剂组合有：Petroleum ether/Ethyl Petroleum ether/Ethyl acetate,Petroleum ether/Acetone,Petroleum ether/Ether,acetate,Petroleum ether/Acetone,Petroleum ether/Ether,Petroleum ether/CH2Cl2,CH2Cl2/ethyl acetate,ethyl acetate/Petroleum ether/CH2Cl2,CH2Cl2/et
24、hyl acetate,ethyl acetate/MeOH,CHCl3/ethyl acetateMeOH,CHCl3/ethyl acetate第14页，本讲稿共32页柱层析极性小的用乙酸乙酯：石油醚系统极性小的用乙酸乙酯：石油醚系统极性较大的用甲醇：氯仿系统极性较大的用甲醇：氯仿系统极性大的用甲醇：水：正丁醇：醋酸系统极性大的用甲醇：水：正丁醇：醋酸系统拖尾可以加入少量氨水或冰醋酸拖尾可以加入少量氨水或冰醋酸第15页，本讲稿共32页1、称量 200-300目硅胶，称30-70倍于上样量；如果极难分，也可以用100倍量的硅胶H。干硅胶的视密度在0.4左右，所以要称40g硅胶，用烧杯量100
25、ml也可以。2、搅成匀浆 加入干硅胶体积一倍的溶剂用玻璃棒充分搅拌。如果洗脱剂是石油醚/乙酸乙酯/丙酮体系，就用石油醚拌；如果洗脱剂是氯仿/醇体系，就用氯仿拌。如果不能搅成匀浆，说明溶剂中含水量太大，尤其是乙酸乙酯/丙酮，如果不与水配伍走分配色谱的话，必须预先用无水硫酸钠久置干燥。氯仿用无水氯化钙干燥，以除去1%的醇。如果样品对酸敏感，不能用氯仿体系过柱。匀浆法第16页，本讲稿共32页3、装柱 将柱底用棉花塞紧，不必用海沙，加入约1/3体积石油醚（氯仿），装上蓄液球，打开柱下活塞，将匀浆一次倾入蓄液球内。随着沉降，会有一些硅胶沾在蓄液球内，用石油醚（氯仿）将其冲入柱中。4、压实 沉降完成后，加
26、入更多的石油醚（氯仿），用双联球或气泵加压，直至流速恒定。柱床约被压缩至9/10体积。无论走常压柱或加压柱，都应进行这一步，可使分离度提高很多，且可以避免过柱时由于柱床萎缩产生开裂。第17页，本讲稿共32页5、上样 干法湿法都可以。海沙是没必要的。上样后，加入一些洗脱剂，再将一团脱脂棉塞至接近硅胶表面。然后就可以放心地加入大量洗脱剂，而不会冲坏硅胶表面。6、过柱和收集 柱层析实际上是在扩散和分离之间的权衡。太低的洗脱强度并不好，推荐用梯度洗脱。收集的例子：10mg上样量，1g硅胶H，0.5ml收一馏分；1-2g上样量，50g硅胶（200-300目），20-50ml收一馏分。第18页，本讲稿共3
27、2页7、检测 要更多地使用专用喷显剂，如果仅用紫外灯，会损失较多产品，紫外的灵敏度一般比喷显剂底1-2个数量级。8、送谱 收集的产品旋干，在送谱前通常需要重结晶。如果样品太少或为液体，可过一小凝胶柱，作为送谱前的最后纯化手段。可除去氢谱1.5ppm左右所谓的“硅胶”峰。第19页，本讲稿共32页TIPS:1.1.先根据先根据TLCTLC方法筛选好洗脱剂，使两相邻物质方法筛选好洗脱剂，使两相邻物质RfRf值之差最大化值之差最大化2.2.将柱子必须装平整、均匀将柱子必须装平整、均匀3.3.考虑有限柱填料的吸附量考虑有限柱填料的吸附量4.4.可考虑用梯度法分开并洗脱可考虑用梯度法分开并洗脱第20页，本
28、讲稿共32页柱子可以分为：加压，常压，减压。压力可以增加淋洗剂的流动速度，减少产品收集的时间，但是会减低压力可以增加淋洗剂的流动速度，减少产品收集的时间，但是会减低柱子的塔板数。所以其他条件相同的时候，常压柱是效率最高的，但柱子的塔板数。所以其他条件相同的时候，常压柱是效率最高的，但是时间也最长，比如天然化合物的分离，一个柱子几个月也是有的。是时间也最长，比如天然化合物的分离，一个柱子几个月也是有的。减压柱能够减少硅胶的使用量，感觉能够节省一半甚至更多，但是由减压柱能够减少硅胶的使用量，感觉能够节省一半甚至更多，但是由于大量的空气通过硅胶会使溶剂挥发（有时在柱子外面有水汽凝结），于大量的空气通
29、过硅胶会使溶剂挥发（有时在柱子外面有水汽凝结），以及有些比较易分解的东西可能得不到，而且还必须同时使用水泵抽以及有些比较易分解的东西可能得不到，而且还必须同时使用水泵抽气（很大的噪音，而且时间长）。气（很大的噪音，而且时间长）。加压柱是一种比较好的方法，与常压柱类似，只不过外加压力使淋洗加压柱是一种比较好的方法，与常压柱类似，只不过外加压力使淋洗剂走的快些。压力的提供可以是压缩空气，双连球或者小气泵（给鱼剂走的快些。压力的提供可以是压缩空气，双连球或者小气泵（给鱼缸供气的就行）。特别是在容易分解的样品的分离中适用。压力不可缸供气的就行）。特别是在容易分解的样品的分离中适用。压力不可过大，不然溶
30、剂走的太快就会减低分离效果。过大，不然溶剂走的太快就会减低分离效果。关于无水无氧柱，适用于对氧，水敏感，易分解的产品。关于无水无氧柱，适用于对氧，水敏感，易分解的产品。第21页，本讲稿共32页关于柱子的尺寸柱子长了，相应的塔板数就高。柱子粗了，上样后样品的原点就小柱子长了，相应的塔板数就高。柱子粗了，上样后样品的原点就小（反映在柱子上就是样品层比较薄），这样相对的减小了分离的难度。（反映在柱子上就是样品层比较薄），这样相对的减小了分离的难度。试想如果柱子十厘米，而样品就有二厘米，那么分离的难度可想而知，试想如果柱子十厘米，而样品就有二厘米，那么分离的难度可想而知，恐怕要用很低极性的溶剂慢慢冲了
31、。而如果样品层只有恐怕要用很低极性的溶剂慢慢冲了。而如果样品层只有0.50.5厘米，那厘米，那么各组分就比较容易得到完全分离了。当然采用粗大的柱子要牺牲比么各组分就比较容易得到完全分离了。当然采用粗大的柱子要牺牲比较多的硅胶和溶剂了，不过这些成本相对于产品来说也许就不算什么较多的硅胶和溶剂了，不过这些成本相对于产品来说也许就不算什么了（有些不环保的说，了（有些不环保的说，不过溶剂回收重蒸后也就减小了部分浪费）。不过溶剂回收重蒸后也就减小了部分浪费）。第22页，本讲稿共32页现在见到的柱子径高比一般在现在见到的柱子径高比一般在1 1：5 51010，书中写硅胶量是样品量的，书中写硅胶量是样品量的
32、30304040倍，具体的选择要具体分析。如果所需组分和杂质分的比较倍，具体的选择要具体分析。如果所需组分和杂质分的比较开（是指在所需组分开（是指在所需组分rf rf在在0.20.20.40.4，杂质相差，杂质相差0.10.1以上），就可以少用以上），就可以少用硅胶，用小柱子（例如硅胶，用小柱子（例如200200毫克的样品，用毫克的样品，用2cm20cm2cm20cm的柱子）；如的柱子）；如果相差不到果相差不到0.10.1，就要加大柱子，我觉得可以增加柱子的直径，比如，就要加大柱子，我觉得可以增加柱子的直径，比如用用3cm3cm的，也可以减小淋洗剂的极性等等。的，也可以减小淋洗剂的极性等等。第
33、23页，本讲稿共32页关于湿法、干法上样湿法上样，一般用淋洗剂溶解样品，也可以用二氯甲烷、乙酸乙酯等，湿法上样，一般用淋洗剂溶解样品，也可以用二氯甲烷、乙酸乙酯等，但溶剂越少越好，不然溶剂就成了淋洗剂了。很多样品在上柱前是粘但溶剂越少越好，不然溶剂就成了淋洗剂了。很多样品在上柱前是粘乎乎的，一般没关系。可是有的上样后在硅胶上又会析出，这一般都乎乎的，一般没关系。可是有的上样后在硅胶上又会析出，这一般都是比较大量的样品才会出现，是因为硅胶对样品的吸附饱和，而样品是比较大量的样品才会出现，是因为硅胶对样品的吸附饱和，而样品本身又是比较好的固体才会发生，这就应该先重结晶，得到大部分的本身又是比较好的
34、固体才会发生，这就应该先重结晶，得到大部分的产品后再柱分，如果不能重结晶那就不管它了，直接过就是了，样品产品后再柱分，如果不能重结晶那就不管它了，直接过就是了，样品随着淋洗剂流动会溶解的。随着淋洗剂流动会溶解的。干法上样，一般用于固体或粘度大的液体样品。样品用低沸点易溶溶干法上样，一般用于固体或粘度大的液体样品。样品用低沸点易溶溶剂溶解，加入剂溶解，加入1-31-3倍的粗硅胶，晾干或旋干，干燥的标准是硅胶成细倍的粗硅胶，晾干或旋干，干燥的标准是硅胶成细粉而不粘在瓶壁上。装好的柱子上留一段溶剂，把吸附了样品的硅胶粉而不粘在瓶壁上。装好的柱子上留一段溶剂，把吸附了样品的硅胶慢慢到进去，震动柱子或再
35、加一些溶剂，把粘在柱壁上的硅胶洗下。慢慢到进去，震动柱子或再加一些溶剂，把粘在柱壁上的硅胶洗下。第24页，本讲稿共32页溶剂的选择当然是最便宜，最安全，最环保的了。所以大多选用石油醚，乙酸乙当然是最便宜，最安全，最环保的了。所以大多选用石油醚，乙酸乙酯。文献中有写用正己烷的，太贵了，除非特别需要不要用不然银子酯。文献中有写用正己烷的，太贵了，除非特别需要不要用不然银子哗哗的，流的比淋洗剂还快，不过因为极性很小，有时还是非它不可。哗哗的，流的比淋洗剂还快，不过因为极性很小，有时还是非它不可。乙醚也可以用，但是就是容易睡觉，注意保持清醒别让溶剂流干了，乙醚也可以用，但是就是容易睡觉，注意保持清醒别
36、让溶剂流干了，那样柱子也就不爽了。二氯甲烷也有用的，但是要知道，它和硅胶的那样柱子也就不爽了。二氯甲烷也有用的，但是要知道，它和硅胶的吸附是一个放热过程，所以夏天的时候经常会在柱子里产生气泡，天吸附是一个放热过程，所以夏天的时候经常会在柱子里产生气泡，天气冷的时候会好一些。甲醇，据说能溶解部分的硅胶，所以产品如果气冷的时候会好一些。甲醇，据说能溶解部分的硅胶，所以产品如果想过元素分析的话要留神，应该经过后继处理，比如说重结晶等。其想过元素分析的话要留神，应该经过后继处理，比如说重结晶等。其他的溶剂用的相对较少，要依个人的不同需要选择了。他的溶剂用的相对较少，要依个人的不同需要选择了。第25页，
37、本讲稿共32页由于某些原因，用到的淋洗剂多是大包装的（便宜嘛），我们这里是由于某些原因，用到的淋洗剂多是大包装的（便宜嘛），我们这里是用用1010升或升或2525升的塑料桶装的，就要注意这些工业品的纯度是较低的。升的塑料桶装的，就要注意这些工业品的纯度是较低的。经常能够从送来的大桶底部看见有色的杂质，其他的杂质就可想而知经常能够从送来的大桶底部看见有色的杂质，其他的杂质就可想而知了，所以在比较严格的柱分时就要对溶剂重蒸。当然过原料时就可以了，所以在比较严格的柱分时就要对溶剂重蒸。当然过原料时就可以免去这一步了，反正下面还有提纯的方法。另外溶剂在过柱子后最好免去这一步了，反正下面还有提纯的方法。
38、另外溶剂在过柱子后最好也回收使用，一方面环保，另一方面也能节省部分经费，缺点是要消也回收使用，一方面环保，另一方面也能节省部分经费，缺点是要消耗一定的人工。这里要注意的是，一般在过柱同时进行的是减压旋蒸，耗一定的人工。这里要注意的是，一般在过柱同时进行的是减压旋蒸，石油醚和乙酸乙酯的比例由于挥发度的不同会导致极性的变化，一般石油醚和乙酸乙酯的比例由于挥发度的不同会导致极性的变化，一般会使得极性变大，在梯度淋洗时比较合适，正好极性越来越大了。在会使得极性变大，在梯度淋洗时比较合适，正好极性越来越大了。在过完柱子后，溶剂最后回收要采用常压，因为在减压旋蒸时会有部分过完柱子后，溶剂最后回收要采用常压
39、，因为在减压旋蒸时会有部分低沸点的杂质一起出来，常压时就会减少这种现象，如果杂质和你下低沸点的杂质一起出来，常压时就会减少这种现象，如果杂质和你下面要过的样品有反应那就惨了。面要过的样品有反应那就惨了。第26页，本讲稿共32页关于操作问题1 1 装柱装柱 柱子下面的活塞一定不要涂润滑剂，会被淋洗剂带到产品中的，可以柱子下面的活塞一定不要涂润滑剂，会被淋洗剂带到产品中的，可以采用四氟节门（采用四氟节门（T T型四氟节门三通接头）的。干法和湿法装柱觉得没型四氟节门三通接头）的。干法和湿法装柱觉得没什么区别，只要能把柱子装实就行。装完的柱子应该要适度的紧密什么区别，只要能把柱子装实就行。装完的柱子应
40、该要适度的紧密（太密了淋洗剂走的太慢），一定要均匀（不然样品就会从一侧斜着（太密了淋洗剂走的太慢），一定要均匀（不然样品就会从一侧斜着下来）。书中写的都是不能见到气泡，我觉得在大多数情况下有些小下来）。书中写的都是不能见到气泡，我觉得在大多数情况下有些小气泡没太大的影响，一加压气泡就全下来了。当然如果你装的柱子总气泡没太大的影响，一加压气泡就全下来了。当然如果你装的柱子总是有气泡就说明需要多练习了。但是柱子更忌讳的是开裂，甭管竖的是有气泡就说明需要多练习了。但是柱子更忌讳的是开裂，甭管竖的还是横的，都会影响分离效果，甚至作废！还是横的，都会影响分离效果，甚至作废！第27页，本讲稿共32页2 2
41、 加样加样 用少量的溶剂溶样品加样，加完后将下面的活塞打开，待溶剂层下降用少量的溶剂溶样品加样，加完后将下面的活塞打开，待溶剂层下降至石英砂面时，再加少量的低极性溶剂，然后再打开活塞，如此两三至石英砂面时，再加少量的低极性溶剂，然后再打开活塞，如此两三次，一般石英砂就基本是白色的了。加入淋洗剂，一开始不要加压，次，一般石英砂就基本是白色的了。加入淋洗剂，一开始不要加压，等溶样品的溶剂和样品层有一段距离（等溶样品的溶剂和样品层有一段距离（2 24cm4cm就够了），再加压，就够了），再加压，这样避免了溶剂（如二氯甲烷等）夹带样品快速下行。这样避免了溶剂（如二氯甲烷等）夹带样品快速下行。第28页，
42、本讲稿共32页3 3 淋洗剂的选择淋洗剂的选择 感觉上要使所需点在感觉上要使所需点在rf0.2rf0.20.30.3左右的比较好。不要认为在板上爬高左右的比较好。不要认为在板上爬高了分的比较开，过柱子就用那种极性，如果了分的比较开，过柱子就用那种极性，如果rf rf在在0.60.6，即使相差，即使相差0.20.2也也不容易在柱子上分开，因为柱子是一个多次爬板的状态，可以通过公不容易在柱子上分开，因为柱子是一个多次爬板的状态，可以通过公式的比较：式的比较：0.6/0.80.6/0.8一次的分离度，肯定不如（一次的分离度，肯定不如（0.2/0.30.2/0.3）的三次方或）的三次方或四次方大。四次
43、方大。第29页，本讲稿共32页4 4 样品的收集样品的收集 用硅胶作固定相过柱子的原理是一个吸附与解吸的平衡。所以如果样用硅胶作固定相过柱子的原理是一个吸附与解吸的平衡。所以如果样品与硅胶的吸附比较强的话，就不容易流出。这样就会发生，后面的品与硅胶的吸附比较强的话，就不容易流出。这样就会发生，后面的点先出，而前面的点后出。这时可以采用氧化铝作固定相。另外，收点先出，而前面的点后出。这时可以采用氧化铝作固定相。另外，收集的试管大小要以样品量而定，特别是小量样品，如果用大试管，可集的试管大小要以样品量而定，特别是小量样品，如果用大试管，可能一根就收到了三个样品。如果都用小试管那工作量又太大。能一根就收到了三个样品。如果都用小试管那工作量又太大。第30页，本讲稿共32页5 5 最后的处理最后的处理 柱分后的产品，由于使用了大量的溶剂，其中的杂质也会累积到产品柱分后的产品，由于使用了大量的溶剂，其中的杂质也会累积到产品中，所以如果想送分析，最好用少量的溶剂洗涤一下，因为大部分的中，所以如果想送分析，最好用少量的溶剂洗涤一下，因为大部分的杂质是溶在溶剂里的，一洗基本就没了，必要时进行重结晶。杂质是溶在溶剂里的，一洗基本就没了，必要时进行重结晶。第31页，本讲稿共32页第32页，本讲稿共32页