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1、天然药物化学天然药物化学 色谱分离法 按操作方式不同进行分离按操作方式或色谱场所不同进行分类,色谱法分为:柱色谱法(CC)、纸色谱法(PC)、薄层色谱法(TLC)色谱分离法 按操作方式不同进行分离1.薄层色谱法(TLC)u系将适宜的固定相涂布于玻璃板、塑料或铝片上,成一均匀薄层。u在薄层上进行点样、展开后,根据比移值(Rf f)与适宜的对照物按同法所得的色谱图的比移值(Rf f)作对比,用以进行药品的鉴别、杂质检查或含量测定的方法。u薄层色谱法中原点到斑点中心的距离与原点到溶剂前沿的距离的比值。又称Rf f 值,是色谱法中表示组分移动位置的一种方法的参数。u是一种吸附薄层色谱分离法,它利用各成
2、分对同一吸附剂吸附能力不同,使在移动相(溶剂)流过固定相(吸附剂)的过程中,连续的产生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附,从而达到各成分的互相分离的目的。u薄层色谱法是快速分离和定性分析少量物质的一种很重要的实验技术,也用于跟踪反应进程。可用于判断两个化合物是否相同(同一展开条件下是否有相同的移动值)可用于检测反应过程;可用于确定混合物中含有的组分数;可用于为柱色谱选择合适的展开剂,监视柱色谱分离状况和效果;色谱分离法 按操作方式不同进行分离薄层色谱(TLC)法应用点样展开显色制板具体操作过程如下:空白薄层板层析装置显色后薄层板2.柱色谱u又称柱层析。固定相装于柱内,流动相为液体,样品沿竖直方向由
3、上而下移动而达到分离的色谱法。u它既区别于用于分离分析的气相色谱(GC)和高效液相色谱(HPLC)法,也区别于样品在平面形固定相内移动的纸层析和薄层色谱法。本法主要用于分离,有时也起到浓缩富集作用。色谱分离法 按操作方式不同进行分离u本实验成败的关键是:装柱要紧密,要求无断层、无缝隙;在装柱、洗脱过程中,始终保持有溶剂覆盖吸附剂;一个色带与另一色带的洗脱液的接收不要交叉。色谱分离法 按操作方式不同进行分离柱层析装置图如下:u又称纸层析法。是以滤纸为载体的色谱法。3.纸色谱(PC)u固定相一般为滤纸纤维上吸附的水分,流动相为不与水相溶的有机溶剂;也可使纸吸留其他物质作为固定相,如缓冲液,甲酰胺等。色谱分离法 按操作方式不同进行分离u将试样点在纸条的一端,然后在密闭的槽中用适宜溶剂进行展开。当组分移动一定距离后,各组分移动距离不同,最后形成互相分离的斑点。将纸取出,待溶剂挥发后,用显色剂或其他适宜方法确定斑点位置。根据组分移动距离(Rf f值)与已知样比较,进行定性。色谱分离法 按操作方式不同进行分离层析室休息一下