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1、高效液相色谱法高效液相色谱法第十二章第十二章12.1高效液相色谱的特点与仪器 特点：高压、高效、高速、高灵敏度测试对象：高沸点的、热不稳定的、高极性的有机物及生物大分子或离子性化合物。以高效能固体细微粒为固定相，高压溶剂为流动相，配备高灵敏度检测器的液相色谱为高效液相色谱。一、高效液相色谱法的特点一、高效液相色谱法的特点 (feature of HPLC)12.1高效液相色谱的特点与仪器二、二、HPLCHPLC主要流程及部件主要流程及部件 (process and main assembly)贮液器高压泵梯度洗提装置进样器色谱柱检测器恒温器数据处理器12.1高效液相色谱的特点与仪器二二 HPL
2、CHPLC主要流程及部件主要流程及部件(process and main assembly)压力：150350105 Pa。应具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀等特性。1.高压输液泵主要部件(main assembly of HPLC)12.1高效液相色谱的特点与仪器二二 HPLCHPLC主要流程及部件主要流程及部件 (process and main assembly)高压梯度(进高压泵后再混合):利用两台高压输液泵，将两种不同极性的溶剂按一定的比例送入梯度混合室，混合后进入色谱柱。低压梯度(混合后进高压泵):一台高压泵,通过比例调节阀,将两种或多种不同极性的溶剂按一定的比例抽入高压
3、泵中混合。2.梯度洗脱装置按一定程序改变流动相中溶剂的配比和极性12.1高效液相色谱的特点与仪器二二 HPLCHPLC主要流程及部件主要流程及部件 (process and main assembly)流路中为高压力工作状态，通常使用耐高压的六通阀进样装置。柱体为直型不锈钢管，内径16 mm，柱长：15 30 cm等。发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。3.进样装置4.高效分离柱12.1高效液相色谱的特点与仪器二二 HPLCHPLC主要流程及部件主要流程及部件 (process and main assembly)(1)紫外检测器 应用最广，对大部分有机化合物有响应。作用原理基于被分析试样
4、组分对特定波长紫外线的选择性吸收。特点：灵敏度高；线性范围宽；对流动相的流速和温度变化不敏感；可用于梯度洗脱波长可选，易于操作；专属型检测器5.常用液相色谱检测器缺点：溶剂选择受限12.1高效液相色谱的特点与仪器（2）荧光检测器(fluorescence detector)对多环芳烃，维生素B、黄曲霉素、卟啉类化合物、农药、药物、氨基酸、甾类化合物等特别是具有对称共轭结构的有机芳环分子响应灵敏。高灵敏度、高选择性分子受紫外光激发后，能辐射出比紫外光波长较长的荧光。二二 HPLCHPLC主要流程及部件主要流程及部件 (process and main assembly)12.1高效液相色谱的特点
5、与仪器（3）示差折光检测器(differential refractive index detector)可连续检测参比池和样品池中流动相之间的折光指数差值1.通用型检测器2.灵敏度低、对温度敏感3.不能用于梯度洗脱 差值与浓度呈正比二二 HPLCHPLC主要流程及部件主要流程及部件 (process and main assembly)12.1高效液相色谱的特点与仪器（4）电导检测器广泛应用于离子色谱电导检测器是根据物质在某些介质中解离后所产生电导变化来测定解离物质含量。缺点：对温度敏感二二 HPLCHPLC主要流程及部件主要流程及部件 (process and main assembly)
6、12.1高效液相色谱的特点与仪器（5）蒸发光散射检测器蒸发光散射检测器是基于不挥发性溶质对光的散射现象，散射光的强度与被测组分浓度成正比。是通用型检测器优点：灵敏度高，不受溶剂和温度影响，可用于梯度洗脱，几乎所有样品的响应因子接近一致。缺点：不宜采用非挥发性缓冲溶液为流动相。二二 HPLCHPLC主要流程及部件主要流程及部件 (process and main assembly)12.1高效液相色谱的特点与仪器Summary of the Key PointsHPLC法的特点：高压、高效、高速、高灵敏度;梯度洗脱 通过改变流动相组成或配比来增强或减弱洗脱能力，是液相色谱法常用的技术，作用类似于气相色谱法中的程序升温技术;液相色谱常用的检测器有：紫外检测器，荧光检测器，折光检测器，电化学检测器，蒸发光散射检测器