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1、HIV的实验室检测一、概述常用方法包括：1.HIV抗体检测2.HIV核酸检测3.病毒载量测定4.P24抗原测定5.免疫缺陷实验检查一、概述实践经验：在疾控中心艾滋病实验室以及其他医学实验室中，常用的筛查与确证的方法是HIV抗体检测。在特殊情况下，如HIV表型耐药监测、生物学特性研究等，我们才会运用实验动物或者细胞培养的方法分离培养病毒。一、概述实践经验：免疫缺陷实验检查一般是在确诊感染HIV病毒以后进行。出于了解HIV耐药性分析和检测的目的，并用于指导临床医生判断治疗效果和修改治疗方案，还可以对HIV病毒进行耐药性检测。二、标本类型与处理方法1.标本类型HIV抗原检测可采用血清、血浆或病毒培养
2、上清液。HIV核酸的定性检测可采用、血浆、淋巴细胞富集液、外周血淋巴细胞及干血点样品。二、标本类型与处理方法1.标本类型HIV-1病毒载量测定用血浆。HIV-1基因型及耐药检测可用血浆和干血点样品。HIV抗体检测可采用全血、血清、血浆、唾液、尿液以及干血点。二、标本类型与处理方法1.标本类型HIV-1分离培养可用外周血淋巴细胞、全血和淋巴细胞富集液等。CD4+和CD8+T淋巴细胞测定用抗凝全血。二、标本类型与处理方法2、标本处理 淋巴细胞富集液的制备过程：将采集的抗凝全血15003000r/min离心15分钟，吸取血浆层下的淋巴细胞富集液，置于合适的容器中，备用。整个过程要注意个人防护，并谨慎
3、操作。三、直接检测病毒1.HIV-1抗原检测 HIV p24抗原出现时间较HIV抗体早，所以HIV p24抗原检测可以用于HIV早期感染的诊断；如果在HIV 抗体检测与HIV p24检测同时进行，可以有效较少假阴性结果。三、直接检测病毒1.HIV-1抗原检测实践经验：需要注意的是，HIV p24在血浆中出现较早，但是一旦产生抗体，因p24抗原和抗p24抗体形成复合物，p24抗原就检测不到了，所以潜伏期患者p24抗原常为阴性。即出现了血清转换，平均在感染后3-4周发生。常用的抗原检测方法有夹心酶免疫检测法。三、直接检测病毒2.HIV核酸检测：包括定性测定和定量测定。分别使用反转录PCR和定量反转
4、录PCR。三、直接检测病毒2.HIV核酸检测：这类方法灵敏度高，特异性好，HIV核酸检测通常用于早期诊断，如新生儿的HIV感染早期。在HIV抗体未产生之前（窗口期）辅助诊断原发感染。疑难样本的辅助诊断遗传变异检测三、直接检测病毒2.HIV核酸检测：这类方法灵敏度高，特异性好，HIV核酸检测通常用于病毒耐药性的检测和监测病程监控及预测检测临床药物治疗反应。四、HIV抗体检测 检测血清中的HIV抗体是目前最常用的感染病毒的证据。检测抗体的假阳性和假阴性率都很低，准确率可达99%。被用于病毒感染的诊断、筛查和监测等。四、HIV抗体检测实践经验：HIV抗体加测的程序分为筛查试验和确证试验，并分别在艾滋
5、病筛查实验室与艾滋病确证实验室分别完成 HIV病毒从感染人体到产生并被检测到抗体，大约需要6-12周的时间。抗体被检测到之前的时期，我们称之为“窗口期”。四、HIV抗体检测1.筛查试验 HIV抗体筛查试验所选择的方法要求灵敏度高，不能出现假阴性，但允许出现少量的假阳性。四、HIV抗体检测1.筛查试验常用的方法有：酶联免疫吸附试验。化学发光或免疫荧光试验。其他快速检测试验：包括免疫渗滤试验、免疫层析实验、明胶颗粒凝集试验。四、HIV抗体检测2.确证试验 依据全国艾滋病检测技术规范(2020年修订版)免疫印迹试验（Western Blot,WB）重 组/线 性 免 疫 印 迹 试 验（Recomb
6、ination immunoblotassay/Line Immunoassay,RIBA/LIA）四、HIV抗体检测2.确证试验基本原理：可使用血清、血浆和干血斑样本，采用间接法检测样本中的抗 HIV-1/HIV-2特异性抗体。采用聚丙烯酰胺凝胶电泳把分子量大小不等的 HIV-1 蛋白分离开来，然后再把这些分离的不同蛋白带转移到硝酸纤维素膜上（或 PVDF 膜）。将此膜切割成条状，每一膜条上均含有经电泳分离过的 HIV 抗原。待测样本经适当稀释后，加至硝酸纤维素膜上，恒温振荡，使其充分接触反应，血清中若含有 HIV 抗体，就会与膜条上抗原带相结合。加入抗人-IgG 酶结合物和底物后，根据出现条带情况,按照试剂盒说明书的判定标准，判断待测样本为 HIV 抗体阳性、阴性或不确定。五、免疫缺陷实验室检查 通常以抗凝血为标本，使用流式细胞仪进行检测。获得CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞的绝对值，以及CD4/CD8的比值。HIV病毒感染，并出现CD4+T淋巴细胞200/微升时，可诊断典型AIDS期。