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1、实验五实验五 果蝇饲养和杂交综合实验果蝇饲养和杂交综合实验实验项目：果蝇饲养和杂交综合实验实验项目：果蝇饲养和杂交综合实验实验学时：实验学时：6 学时学时实验类型：综合性实验类型：综合性每组人数：每组人数：4 人组人组一、实验目的本实验综合了遗传学实验课程中的果蝇实验室饲养本实验综合了遗传学实验课程中的果蝇实验室饲养和三个有性杂交实验。和三个有性杂交实验。1熟悉果蝇材料的动物学特性、果蝇食性和生活习熟悉果蝇材料的动物学特性、果蝇食性和生活习性、遗传性状识别；性、遗传性状识别；2掌握果蝇的饲养管理技术和有性杂交实验技术；掌握果蝇的饲养管理技术和有性杂交实验技术；3掌握杂交结果的统计分析和检验等方
2、法；掌握杂交结果的统计分析和检验等方法；4 检验孟德尔分离和自由组合定律；检验孟德尔分离和自由组合定律；5 明确伴性遗传和非性连锁基因的遗传方式之异明确伴性遗传和非性连锁基因的遗传方式之异同。同。二、实验要求1.掌握制备果蝇培养基的基本方法和果蝇的饲掌握制备果蝇培养基的基本方法和果蝇的饲养管理技术，学习并掌握果蝇杂交实验技术；养管理技术，学习并掌握果蝇杂交实验技术；2.通过杂交实验，验证基因分离规律、自由组通过杂交实验，验证基因分离规律、自由组合规律，加深对遗传学基本规律的理解；合规律，加深对遗传学基本规律的理解；3.分析伴性遗传的主要特点，了解伴性遗传和分析伴性遗传的主要特点，了解伴性遗传和
3、非伴性遗传之区别及其遗传方式之异同，理非伴性遗传之区别及其遗传方式之异同，理解伴性基因在正反交中的差异；解伴性基因在正反交中的差异；4.掌握实验结果的数据取得和统计学处理方法。掌握实验结果的数据取得和统计学处理方法。三、实验主要仪器和制剂恒温培养箱，超净工作台，显微镜；恒温培养箱，超净工作台，显微镜；培养瓶，麻醉瓶，白瓷板，毛笔，标签纸，培养瓶，麻醉瓶，白瓷板，毛笔，标签纸，乙醚；乙醚；黑檀体果蝇，白色复眼果蝇。黑檀体果蝇，白色复眼果蝇。四、实验内容1原种亲本果蝇品系纯化后，收集处女蝇，原种亲本果蝇品系纯化后，收集处女蝇，分别设计正反交杂交组合；分别设计正反交杂交组合；2定时观察，成蝇羽化后记
4、录正、反交子一定时观察，成蝇羽化后记录正、反交子一代果蝇性状数目；代果蝇性状数目；3子一代互交，定时观察，记录子二代正、子一代互交，定时观察，记录子二代正、反交结果；反交结果；4验证孟德尔遗传定律；分析伴性遗传的主验证孟德尔遗传定律；分析伴性遗传的主要特点；撰写实验报告。要特点；撰写实验报告。五、实验实施步骤1亲本果蝇的饲养（原种培养）亲本果蝇的饲养（原种培养）留种培养时，需要选取纯合基因型的个体作留种培养时，需要选取纯合基因型的个体作亲本，每瓶亲本，每瓶2对。将果蝇麻醉后，用毛笔轻对。将果蝇麻醉后，用毛笔轻轻扫入新制培养基的培养瓶内，待果蝇清轻扫入新制培养基的培养瓶内，待果蝇清醒后再将培养瓶
5、竖起，以防果蝇粘在培养醒后再将培养瓶竖起，以防果蝇粘在培养基上，每种保留两套原种，贴好标签（种基上，每种保留两套原种，贴好标签（种名，基因型和日期等）。名，基因型和日期等）。原种培养或长期保种宜低温（原种培养或长期保种宜低温（1015）培）培养；杂交实验培养温度养；杂交实验培养温度2025恒温培养，恒温培养，避免阳光直射。避免阳光直射。2收集处女蝇并进行杂交组合杂交实验前需要收集纯合体处女蝇与纯合雄性杂交实验前需要收集纯合体处女蝇与纯合雄性果蝇。将亲本成蝇移出培养瓶后，再过果蝇。将亲本成蝇移出培养瓶后，再过8 81212小时内所收集到的新羽化的雌性果蝇，即为小时内所收集到的新羽化的雌性果蝇，即
6、为处女蝇处女蝇。对新羽化的果蝇作雌雄鉴定，然后。对新羽化的果蝇作雌雄鉴定，然后分别饲养。为杂交试验做准备。分别饲养。为杂交试验做准备。控制黑檀体（控制黑檀体（e e）突变型的基因位于第三号染）突变型的基因位于第三号染色体上，控制白色复眼（色体上，控制白色复眼（w w）、的基因位于）、的基因位于X X染色体上。染色体上。故可利用故可利用E/eE/e这对常染色体上的等位基因作这对常染色体上的等位基因作单因子杂交组合，利用单因子杂交组合，利用E/e E/e 和和X X+/X/Xw w两对等两对等位基因作双因子杂交组合，用位于位基因作双因子杂交组合，用位于X X染色体染色体上一对等位基因上一对等位基因
7、 X X+/X/Xw w 作伴性遗传验证实作伴性遗传验证实验。验。可选取白色复眼果蝇与黑檀体果蝇作杂交可选取白色复眼果蝇与黑檀体果蝇作杂交组合，正反交各一，贴好标签（世代、杂组合，正反交各一，贴好标签（世代、杂交组合、日期、姓名），置于交组合、日期、姓名），置于2525恒温培恒温培养箱中培养。养箱中培养。3弃亲本蝇，观察子一代培养培养78天后可以看到天后可以看到F1代幼虫出现，倒去代幼虫出现，倒去亲本果蝇并处死，再过亲本果蝇并处死，再过23天，天，F1代成蝇出代成蝇出现；现；观察观察F1代果蝇的表型，统计各种性别和表型代果蝇的表型，统计各种性别和表型成蝇的数目，连续检查成蝇的数目，连续检查34
8、次（约次（约9天左右，天左右，数量大约数量大约150200只）。只）。如发现如发现F1代成蝇不符合预期结果，则说明杂代成蝇不符合预期结果，则说明杂交组合出现错误，不必继续，寻找出错原交组合出现错误，不必继续，寻找出错原因。因。4子一代互交麻醉麻醉F1代成蝇，对应正反交组合各选取雌雄代成蝇，对应正反交组合各选取雌雄果蝇各果蝇各23只移入新的培养瓶，开始第二只移入新的培养瓶，开始第二代杂交（代杂交（F1代互交）；代互交）；贴好标签（世代、交配组合、日期、姓名贴好标签（世代、交配组合、日期、姓名等）。置于等）。置于25恒温培养箱中培养。恒温培养箱中培养。5弃F F1 1亲本蝇，观察子二代过过78天后
9、，天后，F2代幼虫出现，倒掉代幼虫出现，倒掉F1代成蝇，代成蝇，继续培养继续培养23天后，天后，F2代成蝇出现，即可开代成蝇出现，即可开始观察统计始观察统计F2代成蝇。代成蝇。按照实验目的自行设计表格分性别、表型按照实验目的自行设计表格分性别、表型和日期进行统计，每和日期进行统计，每2天一次，共观察统计天一次，共观察统计45次（约次（约9天）。天）。F2果蝇总数不少于果蝇总数不少于250只，最理想的是超过只，最理想的是超过500只。只。6杂交结果统计分析对统计结果进行统计学分析和检验，验证对统计结果进行统计学分析和检验，验证孟德尔遗传定律；孟德尔遗传定律；分析伴性遗传和非伴性遗传的遗传方式之分析伴性遗传和非伴性遗传的遗传方式之异同。异同。六、思考问题哪些因素会影响果蝇的发育周期？哪些因素会影响果蝇的发育周期？杂交实验为何取杂交实验为何取25来来培养果蝇？培养果蝇？收集处女蝇的目的和意义？收集处女蝇的目的和意义？正交、反交的结果是否相同？为什么？正交、反交的结果是否相同？为什么？哪一杂交组合宜于验证自由组合规律？哪一杂交组合宜于验证自由组合规律？统计群体足够大的意义？统计群体足够大的意义？