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1、杂种植株筛选融合AB的原生质体再生出细胞壁脱分化愈伤组织再分化植物细胞的融合 植物组织培养植物细胞A原生质体B原生质体A 杂种细胞AB去 壁去 壁人工诱导方法？促进融合的方法？融合完成的标志植物细胞B植物体细胞杂交技术过程原理？原理？一、动物细胞融合1、动物融合的过程请同学们阅读课本P52动物融合.细胞融合的概念.诱导动物细胞融合的方法.意义 并用笔画出来2、动物细胞融合的概念 动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞形成一个细胞的过程思考题1、植物体细胞杂交时首先应用什么方法去掉细胞壁？酶解法，如纤维素酶或果胶酶2、动物细胞融合时需要进行去壁处理吗？为什么？无需，因为动物细胞无细胞壁
2、3、植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的方法有哪些？离心、电激等物理方法；PEG等化学方法4、动物细胞融合能利用上述两类方法吗？还有其他方法吗？能 还可以利用灭活的病毒进行诱导5、植物体细胞杂交应先进行原生质体的融合再进行组织培养形成完整的杂种个体，动物细胞融合后能形成杂种动物个体吗？不能不同DNA的两个细胞灭活病毒诱导细胞融合融合后的细胞进行有丝分裂1、动物细胞融合过程动物细胞融合杂种细胞愈伤组织杂种植株植物细胞A植物细胞B 原生质体A原生质体B植物体细胞杂交去壁原生质体融合植物组织培养杂种细胞物理法化学法生物法：灭活的病毒常用方法动物细胞A动物细胞B4、原理细胞膜的流动性5、最有价值的应用
3、制备单克隆抗体3、过程不同DNA 的两个细胞灭活的病毒PEG 等杂交细胞v 细胞融合完成的标志:细胞核融合成一个核主要用于制备单克隆抗体获得杂种植株用途物理、化学方法（同左）灭活的病毒物理（离心、振动、电刺激）化学（聚乙二醇）诱导方法使细胞分散后诱导细胞融合去除细胞壁后诱导原生质体融合细胞融合的方法细胞膜的流动性细胞膜的流动性、植物细胞全能性原理动物细胞融合植物体细胞杂交比较项目植物、动物细胞融合的比较 1.能使动物细胞融合的特有的诱导方法是A 离心 B 灭活的病毒 C 电刺激 D 振动 2.动物细胞融合的目的中最重要的是A 克服远源杂交不亲和 B 制备单克隆抗体C 培育新物种 D 生产杂种细
4、胞7、你推测一下动物细胞融合有哪些方面的应用吗？思考题 利用动物细胞融合技术诱导形成杂交瘤细胞8、在生产实际中杂交瘤细胞有怎样的应用？生产单克隆抗体请同学们阅读课本P52提问？1.抗体是由何种细胞产生的？、一个淋巴细胞(浆细胞)能分泌多种抗体吗？、一种抗原侵入机体之后，引起机体免疫反应产生的抗体只有一种吗？二、单克隆抗体 每个淋巴细胞只能分泌一种抗体，由一个淋巴细胞增殖产生的细胞群分泌的抗体化学成份是单一的。浆细胞一种抗体不纯 抗原 动物体刺激浆细胞 抗体抗原不纯.简述获得抗体的传统途径？、这种方法获得的抗体有什么缺陷？特异性差、纯度低；产量低、反应不够灵敏6.如何获得化学性质单一、特异性强的
5、抗体？体外培养单个淋巴细胞，提取分泌的抗体7.体外培养淋巴细胞能无限增殖吗?不能怎样解决这个问题？设计方案：一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体小鼠骨髓瘤细胞能无限增殖杂交细胞二、单克隆抗体 为什么用小鼠骨髓瘤细胞与B 淋巴细胞融合？思考：因为B淋巴细胞具有分泌特异性抗体的能力，而骨髓瘤细胞具有在体外培养条件下大量增殖的本领，所以由某种B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合产生的杂交瘤细胞，能够在体外大量繁殖，并且产生特定的单克隆抗体。B淋巴细胞注射特定抗原蛋白骨髓瘤细胞培养骨髓瘤细胞融合培养液中细胞有几种类型？（只考虑两两融合）融合细胞几种类型？5种B淋巴细胞、骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞-骨髓瘤细胞B淋巴细胞-
6、B淋巴细胞B淋巴细胞-骨髓瘤细胞3种骨髓瘤细胞-骨髓瘤细胞B淋巴细胞-B淋巴细胞B淋巴细胞-骨髓瘤细胞多种杂交细胞在具有筛选作用的培养基上培养专一抗体检验阳性克隆上述杂交细胞分开不同杂交细胞，克隆专一抗体，检验阳性细胞单克隆抗体注射到小鼠体内体外培养2、单克隆抗体的制备过程第第11次筛选目的：得到杂次筛选目的：得到杂交瘤细胞（多种）。交瘤细胞（多种）。第第22次筛选目的：在杂次筛选目的：在杂交瘤细胞中筛选出能产交瘤细胞中筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细生所需抗体的杂交瘤细胞。胞。该细胞继承双亲细胞的遗传特性，既能产生专一抗体又能无限增殖。杂交瘤细胞有何特点？特异性强，灵敏度高2.制备过程：诱导其
7、融合的方法有哪些？注射抗原的目的是什么大量增殖杂交瘤细胞获得单抗的方法融合后培养液中有几种细胞两次筛选的原因2、单克隆抗体制备过程B淋巴细胞骨髓瘤细胞诱导融合B-B细胞B-瘤细胞瘤-瘤细胞选择培养杂交瘤细胞（B-瘤细胞）克隆化培养抗体检测产生所需抗体的杂交瘤细胞体外培养小鼠腹腔内增殖单克隆抗体课堂小结单克隆抗体制备过程中应用哪些细胞 工程技术手段？动物细胞融合技术动物细胞培养技术B淋巴细胞骨髓瘤细胞【堂堂清】1.单克隆抗体的优点是_特异性强、灵敏度高、可大量制备2.单克隆抗体具有特异性强、灵敏度高的原因是_每一种B淋巴细胞只能分泌一种特异性抗体3.产生抗体的细胞是_ 产生单克隆抗体的细胞是_效
8、应B细胞（浆细胞）杂交瘤细胞4.杂交瘤细胞的特点:_既能无限增殖，又能分泌特异性抗体5.首次筛选是为了获得_ 第二次筛选时为了获得_杂交瘤细胞既能无限增殖，又能分泌所需特异性抗体的杂交瘤细胞第一步：从一只小鼠体内提取T淋巴细胞，然后与骨髓瘤细胞诱导融合。第二步：再用普通培养基进行筛选，在该培养基上，未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死去。第三步：对上述经选择性培养的杂交瘤细胞直接在体外条件下做大规模培养，这样从细胞培养液中就可以提出破伤风杆菌单克隆抗体。1、已注入过灭活破伤风杆菌的小鼠2、B淋巴细胞3、选择培养基4、必须经过专一抗体阳性检验下面是某同学根据单克隆抗体技术的方法，设计的
9、 下面是某同学根据单克隆抗体技术的方法，设计的生产破伤风杆菌抗体的实验方案。指出不足之处。生产破伤风杆菌抗体的实验方案。指出不足之处。3.单克隆抗体的应用：在基础理论研究中具有重要意义 在疾病诊断、治疗和预防方面，具有 特异性高、灵敏度高等优越性。生物导弹二、单克隆抗体4、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓疤细胞融合的是 A.经过免疫的B淋巴细胞 B.没经过免疫的T淋巴细胞C.经过免疫的T淋巴细胞 D.没经过免疫的淋巴细胞5、单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞。在这种培养基上不能存活、增殖
10、的细胞是B淋巴细胞 小鼠骨髓瘤细胞B淋巴细胞自身融合细胞小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞杂交瘤细胞A、B、C、D、6下图是单克隆抗体制备过程示意图，据图回答：（1）图中A 过程是从小鼠的脾脏中取得_细胞，该细胞能够产生_。从小鼠体内提取分离该细胞之前，应给小鼠注射_类物质。（2）B 过程是一个_过程，该过程的进行需要灭活的_或_的诱导。免疫的B淋巴 特异性抗体特定抗原细胞融合 病毒 聚乙二醇 7右图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌抗体的实验方案。据图回答：（1）该方案能达到预期效果吗？。原因是.。（2）图中为过程，常用作为诱导剂。该细胞继承了，因此不仅能分泌，还能。（3）该方案的目
11、的是。不能 无法获得产生单一抗体的B淋巴细胞.细胞融合 灭活病毒 双亲细胞的遗传物质 特异性抗体 在体外培养条件下大量增殖 制备单克隆抗体 没有将抗原注入小鼠体内，7、下图是单克隆抗体制备流程阶段示意图。动物细胞培养选择特异性强,灵敏度高灭活的病毒在体外大量增殖分泌特异性抗体骨髓 造血干细胞主动运输（1）_技术是单克隆抗体技术的基础。（2）根据培养基的用途分类，图中HAT培养基属于_培养基。（3）单克隆抗体与常规的血清抗体相比，最大的优越性是_。（4）动物细胞融合除了采用植物细胞原生质体融合常用的诱导剂外，还可以采用_。（5）选出的杂交瘤细胞既具备骨髓瘤细胞的_特点，又具备淋巴细胞的_特点。（6）淋巴细胞是由动物体_中的_细胞分化、发育而来。（7）杂交瘤细胞从培养基中吸收葡萄糖、氨基酸的主要方式是_。五种（B淋巴细胞、骨髓瘤细胞、B-B、骨骨、杂交瘤细胞）其中三种融合细胞。融合后培养液中有几种细胞比较项目 第一次筛选 第二次筛选原理 在选择性培养基中添加某种药物，特异性杀死骨髓瘤细胞和骨髓瘤细胞自身融合的细胞抗原抗体的特异性结合目标筛选出杂交瘤细胞既能无限增殖，又能产生所需特异性抗体的杂交瘤细胞