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1、湖南长郡卫星远程学校湖南长郡卫星远程学校2012年上学期制作 03主讲：胡昆主讲：胡昆微生物的实验室培养二微生物的实验室培养二湖南长郡卫星远程学校湖南长郡卫星远程学校2012年上学期制作 03三、无菌技术三、无菌技术湖南长郡卫星远程学校湖南长郡卫星远程学校2012年上学期制作 03三、无菌技术三、无菌技术1.无菌技术的概念无菌技术的概念 无菌操作泛指在培养微生无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。染的方法。湖南长郡卫星远程学校湖南长郡卫星远程学校2012年上学期制作 031.无菌技术的概念无菌技术的概念 无菌操作泛指在培养微生无菌操作泛指在培养微生
2、物的操作中，所有防止杂菌污物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。染的方法。成功地培养微生物的关键。成功地培养微生物的关键。三、无菌技术三、无菌技术湖南长郡卫星远程学校湖南长郡卫星远程学校2012年上学期制作 03（1）消毒定义：）消毒定义：2.消毒与灭菌的概念及两者的区别消毒与灭菌的概念及两者的区别（2）灭菌的定义：）灭菌的定义：湖南长郡卫星远程学校湖南长郡卫星远程学校2012年上学期制作 03微生物实验室培养的基本操作程序微生物实验室培养的基本操作程序1.1.器具的灭菌器具的灭菌2.2.培养基的配制培养基的配制3.3.培养基的灭菌培养基的灭菌4.4.倒平板倒平板5.5.微生物接种微生物接种6.
3、6.恒温箱中培养恒温箱中培养7.7.菌种的保存菌种的保存湖南长郡卫星远程学校湖南长郡卫星远程学校2012年上学期制作 03四、实验操作四、实验操作(一一)制备牛肉膏蛋白胨培养基制备牛肉膏蛋白胨培养基(用于培养细菌用于培养细菌)湖南长郡卫星远程学校湖南长郡卫星远程学校2012年上学期制作 03倒平板操作倒平板操作湖南长郡卫星远程学校湖南长郡卫星远程学校2012年上学期制作 03 1.培养基灭菌后，需要冷却到培养基灭菌后，需要冷却到50 左右时，才能用来倒平板。你用什么办左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？法来估计培养基的温度？关于关于倒平板操作倒平板操作的问题讨论：的问题讨论
4、：湖南长郡卫星远程学校湖南长郡卫星远程学校2012年上学期制作 03 1.培养基灭菌后，需要冷却到培养基灭菌后，需要冷却到50 左右时，才能用来倒平板。你用什么办左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？法来估计培养基的温度？答：可以用手触摸盛有培养基的答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。刚不烫手时，就可以进行倒平板了。关于关于倒平板操作倒平板操作的问题讨论：的问题讨论：湖南长郡卫星远程学校湖南长郡卫星远程学校2012年上学期制作 03 2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通为什么需要使锥形瓶的瓶口通
5、过火焰？过火焰？湖南长郡卫星远程学校湖南长郡卫星远程学校2012年上学期制作 03 2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？过火焰？答：通过灼烧灭菌，防止瓶口答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。的微生物污染培养基。湖南长郡卫星远程学校湖南长郡卫星远程学校2012年上学期制作 033.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，为什么要将平板倒置？湖南长郡卫星远程学校湖南长郡卫星远程学校2012年上学期制作 033.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，为什么要将平板倒置？答：平板冷凝后，皿盖上会凝答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿结
6、水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。基，造成污染。湖南长郡卫星远程学校湖南长郡卫星远程学校2012年上学期制作 03 4.在倒平板的过程中，如果不小在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？为什么？湖南长郡卫星远程学校湖南长郡卫星远程学校2012年上学期制作 03 4.在倒平板的过程中，如果
7、不小在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？为什么？答：空气中的微生物可能在答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微因此最好不要用这个平板培养微生物。生物。湖南长郡卫星远程学校湖南长郡卫星远程学校2012年上学期制作 03（二）纯化大肠杆菌（二）纯化大肠杆菌接种方法有：接种方法有：平板划线法和稀释涂布平板法平板划线法和稀释涂布平板法微生物的接种技术：微生物的接种技术：湖南长郡卫星远程学校湖南长郡卫星远
8、程学校2012年上学期制作 03平板划线的操作方法平板划线的操作方法湖南长郡卫星远程学校湖南长郡卫星远程学校2012年上学期制作 03湖南长郡卫星远程学校湖南长郡卫星远程学校2012年上学期制作 03湖南长郡卫星远程学校湖南长郡卫星远程学校2012年上学期制作 03湖南长郡卫星远程学校湖南长郡卫星远程学校2012年上学期制作 03湖南长郡卫星远程学校湖南长郡卫星远程学校2012年上学期制作 03湖南长郡卫星远程学校湖南长郡卫星远程学校2012年上学期制作 03湖南长郡卫星远程学校湖南长郡卫星远程学校2012年上学期制作 03湖南长郡卫星远程学校湖南长郡卫星远程学校2012年上学期制作 03问题
9、讨论问题讨论 1.为什么在操作的第一步以及每为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时线操作结束时,仍然需要灼烧接种环仍然需要灼烧接种环吗？为什么？吗？为什么？湖南长郡卫星远程学校湖南长郡卫星远程学校2012年上学期制作 03 答：第一步灼烧是为了避免接种环上答：第一步灼烧是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧是为了杀死上次划线结束后，接种前灼烧是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源上次划线的末端，从
10、环上的菌种直接来源上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧，能及时杀死接种环上残留的结束后灼烧，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。湖南长郡卫星远程学校湖南长郡卫星远程学校2012年上学期制作 03 2.在灼烧接种环之后，为什么要等在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？其冷却后再进行划线？湖南长郡卫星远程学校湖南长郡卫星远程学校2012年上学期制作 03 2.在灼烧接种环之后，为什么要等在灼烧接
11、种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？其冷却后再进行划线？答：以免接种环温度太高，杀答：以免接种环温度太高，杀死菌种。死菌种。湖南长郡卫星远程学校湖南长郡卫星远程学校2012年上学期制作 03 3.在作第二次以及其后的划线操在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？端开始划线？湖南长郡卫星远程学校湖南长郡卫星远程学校2012年上学期制作 03 3.在作第二次以及其后的划线操在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？端开始划线？答：划线后，线条末端细菌的答：划线后，线条末端细
12、菌的数目比线条起始处要少，每次从上数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。来的菌落。湖南长郡卫星远程学校湖南长郡卫星远程学校2012年上学期制作 03一旦划破，会造成划线不均匀，一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；难以达到分离单菌落的目的；二是存留在划破处的单个细胞无二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。处生长，会形
13、成一个条状的菌落。湖南长郡卫星远程学校湖南长郡卫星远程学校2012年上学期制作 03稀释涂布平板法稀释涂布平板法湖南长郡卫星远程学校湖南长郡卫星远程学校2012年上学期制作 03注意：注意：移液管需要经过灭菌。操作时，移液管需要经过灭菌。操作时，试管口和移液管离火焰试管口和移液管离火焰12cm处处.湖南长郡卫星远程学校湖南长郡卫星远程学校2012年上学期制作 03湖南长郡卫星远程学校湖南长郡卫星远程学校2012年上学期制作 03 涂布平板的所有操作都应在火焰附涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第菌操作要求，想一
14、想，第2步应如何进行步应如何进行无菌操作？无菌操作？问题讨论问题讨论湖南长郡卫星远程学校湖南长郡卫星远程学校2012年上学期制作 03 涂布平板的所有操作都应在火焰附涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第菌操作要求，想一想，第2步应如何进行步应如何进行无菌操作？无菌操作？应从操作的各个细节保证应从操作的各个细节保证“无菌无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。在酒精灯火焰周围等等。问题讨论
15、问题讨论湖南长郡卫星远程学校湖南长郡卫星远程学校2012年上学期制作 03微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养微生物的恒温培养湖南长郡卫星远程学校湖南长郡卫星远程学校2012年上学期制作 03微生物的恒温培养微生物的恒温培养湖南长郡卫星远程学校湖南长郡卫星远程学校2012年上学期制作 03菌种的保存菌种的保存1.临时保藏临时保藏：接种到固体斜面培接种到固体斜面培养基，菌落长成后置养基，菌落长成后置于于4冰箱保存。冰箱保存。2.长期保存长期保存：甘油冷冻管藏法甘油冷冻管藏法湖南长郡卫星远程学校湖南长郡卫星远程学校2012年上学期制作 03湖南长郡卫星远程学校湖南长郡卫星远程学校201
16、2年上学期制作 03四、实验操作成果评价四、实验操作成果评价 （一）培养基的制作是否合格（一）培养基的制作是否合格 如果未接种的培养基在恒温箱中如果未接种的培养基在恒温箱中保温保温12 d后无菌落生长，说明培养后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新基的制备是成功的，否则需要重新制备。制备。湖南长郡卫星远程学校湖南长郡卫星远程学校2012年上学期制作 03（二）接种操作是否符合无菌要求（二）接种操作是否符合无菌要求 如果培养基上生长的菌落的颜色、形如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求落
17、的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。求，需要分析原因，再次练习。湖南长郡卫星远程学校湖南长郡卫星远程学校2012年上学期制作 03（三）是否进行了及时细致的观察与记录（三）是否进行了及时细致的观察与记录 培养培养12 h与与24 h后的大肠杆菌菌落的后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同，及时观察记录的同学大小会有明显不同，及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其他一些细微会发现这一点，并能观察到其他一些细微的变化。这一步的要求主要是培养学生良的变化。这一步的要求主要是培养学生良好的科学态度与习惯。好的科学态度与习惯。