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1、专题八 现代生物科技专题1.基因工程的诞生()。2.基因工程的原理及技术()。3.基因工程的应用()。4.蛋白质工程()。5.植物的组织培养()。6.动物的细胞培养与体细胞克隆()。7.细胞融合与单克隆抗体()。考纲要求基因工程和细胞工程第 讲1构建网络栏目索引考点一基因工程考点二细胞工程考点一基因工程u重点提炼u命题视角题组对基因工程的操作工具与操作步骤综合考查重点提炼1.基因工程的基本工具基因工程的基本工具限制酶限制酶DNA连接酶连接酶载体载体作用作用切割目的基因切割目的基因和载体和载体拼接拼接DNA片段，形片段，形成重组成重组DNA分子分子携带目的基因进携带目的基因进入受体细胞入受体细胞
2、作用作用部位部位两核苷酸的脱氧核糖与磷酸间形两核苷酸的脱氧核糖与磷酸间形成的磷酸二酯键成的磷酸二酯键作用特作用特点点(条件条件)(1)识别特定的识别特定的核苷酸序列；核苷酸序列；(2)在特定位点在特定位点上切割上切割DNA分分子子(1)EcoliDNA连连接酶只能连接黏接酶只能连接黏性末端；性末端；(2)T4DNA连接酶连接酶能连接黏性末端能连接黏性末端和平末端和平末端(1)能在宿主细胞能在宿主细胞内稳定存在并大内稳定存在并大量复制；量复制；(2)有一个至多个有一个至多个限制酶切割位点；限制酶切割位点；(3)具有特殊的标具有特殊的标记基因记基因2.基因工程的操作程序基因工程的操作程序(1)目的
3、基因的获取目的基因的获取从基因文库中获取。从基因文库中获取。利利用用PCR技技术术扩扩增增：其其实实质质是是在在体体外外对对目目的的基基因因进进行行大大量复制。量复制。用化学方法人工合成用化学方法人工合成a.对于核苷酸序列已知的直接人工合成。对于核苷酸序列已知的直接人工合成。b.可通过反转录法获取，即可通过反转录法获取，即mRNA逆转录酶逆转录酶单链单链DNADNA聚合酶聚合酶双链双链DNA。(2)基因表达载体的构建基因表达载体的构建基基因因表表达达载载体体的的组组成成：目目的的基基因因启启动动子子终终止止子子标标记基因复制原点。记基因复制原点。基因表达载体的构建方法基因表达载体的构建方法(3
4、)将目的基因导入受体细胞将目的基因导入受体细胞生物种类生物种类植物细胞植物细胞动物细胞动物细胞微生物细胞微生物细胞常用方法常用方法农杆菌转化法、基农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通因枪法、花粉管通道法等道法等显微注射技术显微注射技术感受态细胞感受态细胞法法(Ca2处处理法理法)受体细胞受体细胞体细胞体细胞受精卵受精卵原核细胞原核细胞(4)目的基因的检测与鉴定目的基因的检测与鉴定类型类型步骤步骤检测内容检测内容方法方法结果显示结果显示分子分子检测检测第一步第一步目的基因是否进目的基因是否进入受体细胞入受体细胞DNA分子杂交分子杂交(DNA和和DNA之间之间)是否成功显示是否成功显示出杂交带出杂交带
5、第二步第二步目的基因是否转目的基因是否转录出录出mRNA分子杂交技术分子杂交技术(DNA和和mRNA之之间间)是否成功显示是否成功显示出杂交带出杂交带第三步第三步目的基因是否翻目的基因是否翻译出蛋白质译出蛋白质抗原抗原抗体杂交抗体杂交是否成功显示是否成功显示出杂交带出杂交带个体个体水平水平鉴定鉴定做抗虫或抗病的接种实验，以确定是否有做抗虫或抗病的接种实验，以确定是否有抗性以及抗性的程度；基因工程产品与天抗性以及抗性的程度；基因工程产品与天然产品的功能进行活性比较，以确定功能然产品的功能进行活性比较，以确定功能是否相同是否相同1.携携带带链链霉霉素素抗抗性性基基因因受受体体菌菌的的筛筛选选必必须
6、须通通过过分分子子检检测测(2014天津，天津，4A)()2.转转基基因因抗抗虫虫棉棉植植株株抗抗虫虫效效果果的的鉴鉴定定必必须须通通过过分分子子检检测测(2014天津，天津，4C)()3.一一种种限限制制性性核核酸酸内内切切酶酶只只能能识识别别一一种种特特定定的的脱脱氧氧核核苷酸序列苷酸序列(2007全国全国，4A)()4.用限制性核酸内切酶切割烟草花叶病毒的核酸用限制性核酸内切酶切割烟草花叶病毒的核酸(2010浙江，浙江，2A)()错混诊断5.每每个个重重组组质质粒粒至至少少含含一一个个限限制制性性核核酸酸内内切切酶酶识识别别位位点点(2011浙江，浙江，6B)()6.自自然然界界中中天天
7、然然存存在在的的噬噬菌菌体体自自行行感感染染细细菌菌后后其其DNA整整合合到到细细菌菌DNA上上，属属于于基基因因工工程程(2010大大纲纲全全国国，5D)()7.转转抗抗虫虫基基因因的的植植物物，不不会会导导致致昆昆虫虫群群体体抗抗性性基基因因频频率率增加增加(2010江苏，江苏，18B)()8.重重组组质质粒粒与与探探针针能能进进行行分分子子杂杂交交是是因因为为DNA分分子子脱脱氧氧核糖和磷酸交替连接核糖和磷酸交替连接(2013安徽，安徽，6C)()9.应应用用DNA探探针针技技术术，可可以以检检测测转转基基因因抗抗冻冻番番茄茄植植株株中中目的基因的存在及其完全表达目的基因的存在及其完全表
8、达(2011四川，四川，5D)()10.动物的生长激素基因转入植物后不能表达动物的生长激素基因转入植物后不能表达(2010江苏，江苏，18C)()命题视角题组对基因工程的操作工具与操作步骤综合考查题组对基因工程的操作工具与操作步骤综合考查1.(2014重重庆庆，4)下下图图是是利利用用基基因因工工程程培培育育抗抗虫虫植植物物的的示示意意图。以下相关叙述，正确的是图。以下相关叙述，正确的是()A.的构建需要限制性核酸内切酶和的构建需要限制性核酸内切酶和DNA聚合酶参与聚合酶参与B.侵染植物细胞后，重组侵染植物细胞后，重组Ti质粒整合到质粒整合到的染色体上的染色体上C.的染色体上若含抗虫基因，则的
9、染色体上若含抗虫基因，则就表现出抗虫性状就表现出抗虫性状D.只要表现出抗虫性状就表明植株发生了可遗传变异只要表现出抗虫性状就表明植株发生了可遗传变异解解析析A项项，为为重重组组Ti质质粒粒，其其构构建建需需要要限限制制性性核核酸内切酶和酸内切酶和DNA连接酶。连接酶。B项项，含含重重组组Ti质质粒粒的的农农杆杆菌菌侵侵染染植植物物细细胞胞后后，重重组组Ti质质粒粒上上的的目目的的基基因因整整合合到到受受体体细细胞胞()的的染染色色体体上上，而并非整个重组而并非整个重组Ti质粒整合到质粒整合到的染色体上。的染色体上。C项，目的基因导入受体细胞后不一定能进行表达，项，目的基因导入受体细胞后不一定能
10、进行表达，所以抗虫基因导入植物细胞后，培育成的植株也不一所以抗虫基因导入植物细胞后，培育成的植株也不一定具有抗虫性状。定具有抗虫性状。D项项，转转基基因因抗抗虫虫植植株株是是否否培培育育成成功功，可可以以从从个个体体水水平平上上进进行行检检测测，即即观观察察植植株株是是否否具具有有抗抗虫虫性性状状，如如果果具有抗虫性状则说明发生了可遗传变异具有抗虫性状则说明发生了可遗传变异(基因重组基因重组)。答案答案D2.(2014海海南南，31)下下面面是是将将某某细细菌菌的的基基因因A导导入入大大肠肠杆杆菌内，制备菌内，制备“工程菌工程菌”的示意图。的示意图。请据图回答：请据图回答：(1)获得获得A有两
11、条途径：一是以有两条途径：一是以A的的mRNA为模板，在为模板，在_的催化下，合成互补的单链的催化下，合成互补的单链DNA，然后，然后在在_作用下合成双链作用下合成双链DNA，从而获得所，从而获得所需基因；二是根据目标蛋白质的需基因；二是根据目标蛋白质的_序列，推序列，推测出相应的测出相应的mRNA序列，然后按照碱基互补配对原则，序列，然后按照碱基互补配对原则，推测其推测其DNA的的_序列，再通过化学方法序列，再通过化学方法合成所需基因。合成所需基因。(2)利利用用PCR技技术术扩扩增增DNA时时，需需要要在在反反应应体体系系中中添添加加的的有有机机物物质质有有_、_、4种种脱脱氧氧核核苷苷酸
12、酸和和耐耐热热性性的的DNA聚聚合合酶酶，扩扩增增过过程程可可以以在在PCR扩扩增增仪仪中中完成。完成。(3)由由A和载体和载体B拼接形成的拼接形成的C通常称为通常称为_。(4)在基因工程中，常用在基因工程中，常用Ca2处理处理D，其目的是，其目的是_。解解析析(1)利利用用反反转转录录法法合合成成目目的的基基因因的的过过程程是是：以以mRNA为为模模板板，在在逆逆转转录录酶酶的的催催化化作作用用下下合合成成单单链链DNA，然然后后在在DNA聚聚合合酶酶的的作作用用下下，合合成成双双链链DNA分分子子；根根据据蛋蛋白白质质工工程程合合成成目目的的基基因因的的过过程程是是：根根据据目目标标蛋蛋白
13、白质质的的氨氨基基酸酸序序列列，推推测测相相应应的的mRNA序序列列，然然后后按按照照碱碱基基互互补补配配对对原原则则，推推测测DNA中中脱脱氧氧核核苷苷酸酸的的排列顺序，通过化学方法合成。排列顺序，通过化学方法合成。(2)PCR过过程程中中需需要要酶酶、底底物物、模模板板、引引物物和和能能量量等等条条件。件。(3)目的基因和载体结合，形成基因表达载体。目的基因和载体结合，形成基因表达载体。(4)在在利利用用大大肠肠杆杆菌菌做做受受体体细细胞胞时时，需需要要先先用用Ca2处处理理，使之成为感受态细胞，有利于其吸收重组使之成为感受态细胞，有利于其吸收重组DNA分子。分子。答案答案(1)逆转录酶逆
14、转录酶DNA聚合酶氨基酸脱氧核苷聚合酶氨基酸脱氧核苷酸酸(2)引物模板引物模板(A基因基因)(3)基因表达载体基因表达载体(4)使使其成为感受态细胞，有利于吸收重组其成为感受态细胞，有利于吸收重组DNA分子分子总结提升比较限制酶、DNA连接酶、DNA聚合酶和解旋酶项目项目限制酶限制酶DNA连接酶连接酶DNA聚合酶聚合酶解旋酶解旋酶作用作用底物底物DNA分子分子 DNA分子片段分子片段 脱氧核苷酸脱氧核苷酸DNA分子分子作用作用部位部位磷酸二酯键磷酸二酯键磷酸二酯键磷酸二酯键磷酸二磷酸二酯键酯键碱基对间碱基对间的氢键的氢键作用作用结果结果形成黏性末形成黏性末端或平末端端或平末端形成重组形成重组D
15、NA分子分子形成新的形成新的DNA分子分子形成单链形成单链DNA分分子子考点二细胞工程u重点提炼u命题视角题组一从植物细胞工程进行命题题组二从动物细胞工程展开命题重点提炼1.细胞工程的几个流程图比较细胞工程的几个流程图比较细胞工程技术细胞工程技术技术过程图示技术过程图示植物组织培养植物组织培养动物细动物细胞培养胞培养植物体细植物体细胞杂交胞杂交动物细胞动物细胞的融合的融合核移植核移植单克隆单克隆抗体的抗体的制备制备2.容容易易混混淆淆的的三三种种细细胞胞杂杂种种细细胞胞、重重组组细细胞胞和和杂杂交细胞交细胞(1)杂杂种种细细胞胞：植植物物体体细细胞胞杂杂交交过过程程中中，两两种种细细胞胞去去掉
16、掉细细胞胞壁壁之之后后形形成成的的原原生生质质体体融融合合，融融合合的的原原生生质质体体出出现细胞壁之后形成的细胞叫杂种细胞。现细胞壁之后形成的细胞叫杂种细胞。(2)重重组组细细胞胞：体体细细胞胞的的细细胞胞核核移移植植到到去去核核卵卵母母细细胞胞之之后形成的细胞叫重组细胞。后形成的细胞叫重组细胞。(3)杂交细胞：动物细胞融合形成的细胞常称为杂交细杂交细胞：动物细胞融合形成的细胞常称为杂交细胞。胞。3.从结果来分析原理从结果来分析原理(1)植植物物体体细细胞胞杂杂交交：植植物物体体细细胞胞杂杂交交包包含含两两个个过过程程，一一是是植植物物细细胞胞融融合合，二二是是杂杂种种细细胞胞的的植植物物组
17、组织织培培养养。其其最最终终结结果果是是形形成成杂杂种种植植株株，产产生生了了一一个个生生物物体体，因因此其原理是：细胞膜的流动性和细胞的全能性。此其原理是：细胞膜的流动性和细胞的全能性。(2)动物细胞融合：动物细胞融合形成杂交细胞，杂交动物细胞融合：动物细胞融合形成杂交细胞，杂交细胞进行细胞培养，获得大量的克隆细胞，但没有形细胞进行细胞培养，获得大量的克隆细胞，但没有形成生物体，因此动物细胞融合的原理是细胞增殖和细成生物体，因此动物细胞融合的原理是细胞增殖和细胞膜的流动性，不包含细胞全能性。胞膜的流动性，不包含细胞全能性。4.对细胞核移植技术的分析对细胞核移植技术的分析(1)细细胞胞核核移移
18、植植技技术术形形成成重重组组细细胞胞并并发发育育成成一一个个新新个个体体，体现了细胞核的全能性而非动物细胞的全能性。体现了细胞核的全能性而非动物细胞的全能性。(2)克克隆隆属属于于无无性性繁繁殖殖，产产生生新新个个体体的的性性别别、绝绝大大多多数数性性状与供核亲本一致。状与供核亲本一致。(3)核移植技术获得的动物与供核动物性状不完全相同的核移植技术获得的动物与供核动物性状不完全相同的原因：原因：克隆动物绝大部分克隆动物绝大部分DNA来自于供体细胞核，但来自于供体细胞核，但其线粒体中的其线粒体中的DNA来自于去核卵细胞。来自于去核卵细胞。性状受基因与性状受基因与环境共同影响。环境共同影响。在个体
19、发育过程中有可能发生基因突在个体发育过程中有可能发生基因突变，产生供核动物没有的性状。变，产生供核动物没有的性状。1.产产生生抗抗人人白白细细胞胞介介素素8抗抗体体的的杂杂交交瘤瘤细细胞胞的的筛筛选选必必须须通过分子检测通过分子检测(2014天津，天津，4B)()2.21三三体体综综合合征征的的诊诊断断必必须须通通过过分分子子检检测测(2014天天津津，4D)()3.培培育育草草莓莓脱脱毒毒苗苗所所采采用用的的主主要要技技术术是是组组织织培培养养(2012广东，广东，2A)()4.去除植物细胞的细胞壁和将动物组织分散成单个细去除植物细胞的细胞壁和将动物组织分散成单个细胞均需酶处理胞均需酶处理(
20、2008全国全国，5B)()错混诊断5.培培养养保保留留接接触触抑抑制制的的细细胞胞在在培培养养瓶瓶壁壁上上可可形形成成多多层层细胞细胞(2010浙江，浙江，4A)()6.动动物物杂杂交交瘤瘤细细胞胞产产生生单单克克隆隆抗抗体体体体现现了了细细胞胞的的全全能能性性(2012江苏，江苏，22C)()7.体体细细胞胞杂杂交交技技术术可可用用于于克克隆隆动动物物和和制制备备单单克克隆隆抗抗体体(2011江苏，江苏，14B)()8.单克隆抗体技术可以用于治疗老年痴呆症单克隆抗体技术可以用于治疗老年痴呆症(2010江苏，江苏，17C)()命题视角题组一从植物细胞工程进行命题题组一从植物细胞工程进行命题(
21、1)培培育育胚胚状状体体利利用用了了_这这一一项项生生物物技技术术，胚胚状状体体再再继继续续培培养养，则则可可培培育育出出完完整整的的植植株株，这这体体现现了了_。培培养养基基中中除除了了含含有有一一定定的的营营养养外外，还还必必须须含含有有_等等植植物物激激素素，还还需需要要对对培培养养基基进进行行严严格格的的_。(2)如果愈伤组织是三七叶肉细胞培养产生的，若为了获得三如果愈伤组织是三七叶肉细胞培养产生的，若为了获得三七的细胞产物，则只需要培养到七的细胞产物，则只需要培养到_；若为了获；若为了获得三七的人工种子，则需要培养到得三七的人工种子，则需要培养到_。如果愈。如果愈伤组织是棉花叶肉细胞
22、培养产生的，通过基因工程要获取抗虫伤组织是棉花叶肉细胞培养产生的，通过基因工程要获取抗虫棉，目的基因导入棉花愈伤组织细胞常用的方法是棉，目的基因导入棉花愈伤组织细胞常用的方法是_法。法。(3)从从叶叶片片的的叶叶肉肉细细胞胞到到获获得得胚胚状状体体的的过过程程中中，必必须须要要经过经过_。无丝分裂无丝分裂有丝分裂有丝分裂减数分裂减数分裂原代培养原代培养传代培养传代培养植物体细胞杂交植物体细胞杂交细胞融合细胞融合脱脱分化分化再分化再分化解解析析(1)离离体体植植物物细细胞胞通通过过脱脱分分化化形形成成愈愈伤伤组组织织，通通过过再再分分化化形形成成具具有有根根和和芽芽的的胚胚状状体体，再再通通过过
23、细细胞胞分分裂裂、分分化化发发育育成成一一个个完完整整的的植植株株。该该技技术术称称为为植植物物组组织织培培养养，其其原原理理为为植植物物细细胞胞的的全全能能性性。培培养养基基的的成成分分为为水水、无无机机盐盐、维维生生素素、氨氨基基酸酸、蔗蔗糖糖、植植物物激激素素(生生长长素素和和细胞分裂素等细胞分裂素等)等；培养基要求进行严格的灭菌。等；培养基要求进行严格的灭菌。(2)三三七七的的细细胞胞产产物物为为细细胞胞的的代代谢谢产产物物，将将三三七七叶叶肉肉细细胞胞培培养养到到愈愈伤伤组组织织即即可可；获获得得人人工工种种子子需需培培养养至至胚胚状状体体；棉棉花花为为双双子子叶叶植植物物，导导入入
24、抗抗虫虫基基因因常常用用农农杆杆菌菌转转化法。化法。(3)离体叶肉细胞培养到胚状体的过程中必须经过脱分离体叶肉细胞培养到胚状体的过程中必须经过脱分化和有丝分裂形成愈伤组织，再分化和有丝分裂形成化和有丝分裂形成愈伤组织，再分化和有丝分裂形成具有根和芽的胚状体。具有根和芽的胚状体。答案答案(1)植物组织培养植物细胞的全能性细胞分植物组织培养植物细胞的全能性细胞分裂素、生长素灭菌裂素、生长素灭菌(2)愈伤组织胚状体农杆菌愈伤组织胚状体农杆菌转化转化(3)2.下图是细胞融合示意图，请据图回答下列问题：下图是细胞融合示意图，请据图回答下列问题：(1)过过程程应应使使用用_处处理理细细胞，以去除植物细胞壁
25、。胞，以去除植物细胞壁。(2)如如果果将将已已去去除除细细胞胞壁壁的的植植物物细细胞胞放放入入等等渗渗溶溶液液中中，细胞呈现什么形状？细胞呈现什么形状？_。(3)过过程程的的诱诱导导方方法法有有_和和_两两大大类。类。(4)过过程程是是细细胞胞壁壁的的再再生生过过程程，与与此此过过程程密密切切相相关关的的细胞器是细胞器是_。(5)过过程程中中进进行行的的细细胞胞分分裂裂方方式式是是_，该该过过程程先先诱诱导导细细胞胞分分裂裂形形成成_，再再由由它它分分化化形形成成杂杂种种植植物幼苗。物幼苗。(6)融合的细胞需要在培养基上进行培养。人工合成的融合的细胞需要在培养基上进行培养。人工合成的培养基中除
26、水、蔗糖、维生素、有机添加物、无机物质培养基中除水、蔗糖、维生素、有机添加物、无机物质外，外，_是植物细胞培养成杂种植物幼苗不是植物细胞培养成杂种植物幼苗不能缺少的调节物质。能缺少的调节物质。解解析析(1)过过程程应应使使用用纤纤维维素素酶酶和和果果胶胶酶酶去去除除细细胞胞壁获得原生质体。壁获得原生质体。(2)去去除除细细胞胞壁壁的的原原生生质质体体是是球球形形的的，在在等等渗渗溶溶液液中中，细胞形态不变。细胞形态不变。(3)用物理法和化学法可诱导过程用物理法和化学法可诱导过程完成原生质体融合。完成原生质体融合。(4)高尔基体与植物细胞壁的形成有关。高尔基体与植物细胞壁的形成有关。(5)杂种植
27、株形成杂种幼苗的过程中进行的是有丝分裂，杂种植株形成杂种幼苗的过程中进行的是有丝分裂，该过程先经过脱分化形成愈伤组织，再由它分化形成该过程先经过脱分化形成愈伤组织，再由它分化形成杂种植物幼苗。杂种植物幼苗。(6)植植物物组组织织培培养养基基中中除除水水、蔗蔗糖糖、维维生生素素、有有机机添添加加物物、无无机机物物质质外外，还还需需要要加加入入植植物物激激素素(或或生生长长调调节节物物质质)，诱诱导导愈愈伤伤组组织织完完成成再再分分化化过过程程，形形成成杂杂种种植植物物幼幼苗。苗。答案答案(1)纤维素酶、果胶酶纤维素酶、果胶酶(2)球形球形(3)物理法化物理法化学法学法(4)高尔基体高尔基体(5)
28、有丝分裂愈伤组织有丝分裂愈伤组织(6)植物激素植物激素(或生长调节物质或生长调节物质)易错警示1.杂种细胞形成的标志：新的细胞壁的生成。杂种细胞形成的标志：新的细胞壁的生成。2.杂种植株遗传物质的变化：杂种植株的变异类型属杂种植株遗传物质的变化：杂种植株的变异类型属于染色体变异，杂种植株的染色体数目通常是两亲本于染色体变异，杂种植株的染色体数目通常是两亲本细胞染色体数目之和，杂种植株属于异源多倍体。细胞染色体数目之和，杂种植株属于异源多倍体。命题视角题组二从动物细胞工程展开命题题组二从动物细胞工程展开命题3.动动物物细细胞胞体体外外培培养养时时，通通常常要要在在培培养养基基中中补补充充一一定定
29、浓浓度度的的某某些些物物质质。如如图图是是血血清清对对正正常常细细胞胞和和癌癌细细胞胞培培养养的的影影响响的实验结果。据图回答下列问题：的实验结果。据图回答下列问题：(1)与与体体细细胞胞的的增增殖殖相相比比，癌癌细细胞胞的的细细胞胞周周期期_(填填“较长较长”“”“较短较短”或或“不变不变”)。(2)在在动动物物细细胞胞培培养养时时，通通常常在在合合成成培培养养基基中中加加入入适适量量血血清清，其原因是其原因是_。(3)细细胞胞培培养养应应在在含含5%CO2的的恒恒温温培培养养箱箱中中进进行行，CO2的的作作用是用是_。(4)在在两两种种细细胞胞生生长长过过程程中中，正正常常细细胞胞铺铺满满
30、瓶瓶壁壁时时，其其生生长长_。药药物物实实验验需需要要大大量量细细胞胞，两两种种细细胞胞频频繁繁传传代代，癌细胞比正常细胞可以传代的次数更癌细胞比正常细胞可以传代的次数更_。(5)为了防止细胞培养过程中细菌的污染，可向培养液中加为了防止细胞培养过程中细菌的污染，可向培养液中加入适量的入适量的_。解解析析(1)与与体体细细胞胞相相比比较较，癌癌细细胞胞分分裂裂速速度度更更快快，细细胞胞周周期较短。期较短。(2)动动物物细细胞胞培培养养时时通通常常要要在在培培养养基基中中加加入入血血清清等等物物质质，血血清清含含有有多多种种未未知知的的促促细细胞胞生生长长因因子子及及其其他他活活性性物物质质，能能
31、促促进细胞的生长、增殖。进细胞的生长、增殖。(3)向培养基中通入一定浓度的向培养基中通入一定浓度的CO2以维持培养液的以维持培养液的pH。(4)正常细胞铺满瓶壁时，会出现接触抑制现象，使其生长正常细胞铺满瓶壁时，会出现接触抑制现象，使其生长停止；因为癌细胞的遗传物质发生改变，能无限增殖，因停止；因为癌细胞的遗传物质发生改变，能无限增殖，因此传代次数更多。此传代次数更多。(5)动动物物细细胞胞培培养养过过程程中中，应应向向培培养养液液中中加加入入适适量量的的抗抗生素以防止细胞培养过程中细菌的污染。生素以防止细胞培养过程中细菌的污染。答案答案(1)较短较短(2)血清可以补充合成培养基中缺乏血清可以
32、补充合成培养基中缺乏的物质的物质(3)维持培养液的维持培养液的pH(4)停止多停止多(5)抗生抗生素素4.(2014新新课课标标，40)某某研研究究者者用用抗抗原原(A)分分别别免免疫疫3只只同同种种小小鼠鼠(X、Y和和Z)，每每只只小小鼠鼠免免疫疫5次次，每每次次免免疫疫一一周周后后测测定定各各小小鼠鼠血血清清抗抗体体的的效效价价(能能检检测测出出抗抗原原抗体反应的血清最大稀释倍数抗体反应的血清最大稀释倍数)，结果如下图所示。，结果如下图所示。若若要要制制备备杂杂交交瘤瘤细细胞胞，需需取取免免疫疫后后小小鼠鼠的的B淋淋巴巴细细胞胞(染染色色体体数数目目为为40条条)，并并将将该该细细胞胞与与
33、体体外外培培养养的的小小鼠鼠骨骨髓髓瘤瘤细细胞胞(染染色色体体数数目目为为60条条)按按一一定定比比例例加加入入试试管管中中，再再加加入入聚聚乙乙二二醇醇诱诱导导细细胞胞融融合合，经经筛筛选选培培养养及及抗抗体检测，得到不断分泌抗体检测，得到不断分泌抗A抗体的杂交瘤细胞。抗体的杂交瘤细胞。回答下列问题：回答下列问题：(1)制制备备融融合合所所需需的的B淋淋巴巴细细胞胞时时，所所用用免免疫疫小小鼠鼠的的血血清清抗抗体体效效价价需需达达到到16 000以以上上，则则小小鼠鼠最最少少需需要要经经过过_次次免免疫疫后后才才能能有有符符合合要要求求的的。达达到到要要求求后后的的X、Y、Z这这3只只免免疫
34、疫小小鼠鼠中中，最最适适合合用用于于制制备备B淋淋巴巴细细胞胞的的是是_小鼠，理由是小鼠，理由是_。(2)细胞融合实验完成后，融合体系中除含有未融合的细胞融合实验完成后，融合体系中除含有未融合的细胞和杂交瘤细胞外，可能还有细胞和杂交瘤细胞外，可能还有_，体系中出现多种，体系中出现多种类型细胞的原因是类型细胞的原因是_。(3)杂杂交交瘤瘤细细胞胞中中有有_个个细细胞胞核核，染染色色体体数数目目最最多是多是_条。条。(4)未融合的未融合的B淋巴细胞经多次传代培养后都不能存活，淋巴细胞经多次传代培养后都不能存活，原因是原因是_。解解析析(1)据据图图分分析析可可知知，第第四四次次注注射射后后X、Y、
35、Z小小鼠鼠的的血血清清抗抗体体效效价价几几乎乎都都达达到到16000以以上上，小小鼠鼠Y的的血清抗体效价最高，最适合用于制备单克隆抗体。血清抗体效价最高，最适合用于制备单克隆抗体。(2)融合体系中除了未融合的细胞和杂交瘤细胞之外，融合体系中除了未融合的细胞和杂交瘤细胞之外，还有骨髓瘤细胞的自身融合细胞和还有骨髓瘤细胞的自身融合细胞和B淋巴细胞的自身淋巴细胞的自身融合细胞。细胞的融合是随机的，并且不可能所有细融合细胞。细胞的融合是随机的，并且不可能所有细胞都融合，故体系中会出现多种类型的细胞。胞都融合，故体系中会出现多种类型的细胞。(3)动动物物细细胞胞融融合合后后形形成成的的是是具具有有原原来
36、来两两个个或或多多个个细细胞胞遗遗传传信信息息的的单单核核细细胞胞。杂杂交交瘤瘤细细胞胞的的细细胞胞核核中中的的染染色色体体数数目最多为目最多为4060100(条条)。(4)正正常常细细胞胞的的分分裂裂次次数数是是有有限限的的，且且经经过过免免疫疫的的B淋淋巴巴细细胞胞高高度度分分化化，不不能能无无限限增增殖殖，而而是是经经多多次次传传代代培培养养后后逐渐衰老死亡。逐渐衰老死亡。答案答案(1)4YY小鼠的血清抗体效价最高小鼠的血清抗体效价最高(2)B淋巴淋巴细胞相互融合形成的细胞、骨髓瘤细胞相互融合形成的细胞相互融合形成的细胞、骨髓瘤细胞相互融合形成的细胞细胞融合是随机的，且融合率达不到细胞细
37、胞融合是随机的，且融合率达不到100%(3)1100(4)不能无限增殖不能无限增殖总结提升1.动物细胞培养的特殊条件归纳(1)胰胰蛋蛋白白酶酶的的使使用用：首首先先用用胰胰蛋蛋白白酶酶处处理理动动物物的的器器官官或或组组织织，以以制制备备单单细细胞胞悬悬液液；培培养养过过程程中中发发生生接接触触抑抑制时，同样需要用胰蛋白酶使细胞分散开。制时，同样需要用胰蛋白酶使细胞分散开。(2)避免杂菌污染的措施：培养液及培养用具灭菌处理；避免杂菌污染的措施：培养液及培养用具灭菌处理；加入一定量的抗生素；定期更换培养液。加入一定量的抗生素；定期更换培养液。(3)特殊的营养条件特殊的营养条件液体培养基。液体培养
38、基。加入动物血清、血浆等。加入动物血清、血浆等。通入氧气以满足代谢的需要。通入氧气以满足代谢的需要。通入二氧化碳以维持培养液的通入二氧化碳以维持培养液的pH。2.动物细胞融合与单克隆抗体制备的归纳(1)制制备备单单克克隆隆抗抗体体时时选选用用一一种种抗抗原原处处理理的的B淋淋巴巴细细胞胞与与骨骨髓髓瘤瘤细细胞胞进进行行细细胞胞融融合合，产产生生杂杂交交瘤瘤细细胞胞，杂杂交交瘤瘤细细胞胞兼兼有有两两个个亲亲本本细细胞胞的的特特性性在在体体外外培培养养条条件件下能不断增殖，同时能产生出某种特异性的抗体。下能不断增殖，同时能产生出某种特异性的抗体。(2)进行动物细胞的诱导融合，形成的杂种细胞有三种：进行动物细胞的诱导融合，形成的杂种细胞有三种：AA型、型、BB型、型、AB型。只有型。只有AB型才是我们所需要的杂型才是我们所需要的杂种细胞，所以需要用选择性培养基进行筛选。种细胞，所以需要用选择性培养基进行筛选。(3)相相比比植植物物体体细细胞胞杂杂交交，动动物物细细胞胞融融合合特特有有的的诱诱导导方方法法是是用用灭灭活活的的病病毒毒处处理理，其其他他物物理理、化化学学诱诱导导融融合合的的手手段段与与植植物物体体细细胞胞杂杂交交过过程程中中原原生生质质体体诱诱导导融融合合的的方法相同。方法相同。谢 谢 观 看！更 多 精 彩 内 容 请 登 录更 多 精 彩 内 容 请 登 录