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1、球菌及其检验球菌及其检验王频佳王频佳检验医学院检验医学院球菌球菌(coccus)需氧或兼性需氧或兼性厌氧菌厌氧菌触酶阳性：葡萄球菌属、微球菌属触酶阳性：葡萄球菌属、微球菌属触酶阴性：链球菌属、肠球菌属触酶阴性：链球菌属、肠球菌属G+cG-c 奈瑟菌属、奈瑟菌属、卡他布兰汉菌卡他布兰汉菌专性厌氧菌专性厌氧菌G+c消化球菌属、消化链球菌属消化球菌属、消化链球菌属G-c韦荣球菌属韦荣球菌属病原性球菌病原性球菌(pathogenic coccus)n n又称为化脓性球菌又称为化脓性球菌(pyogenic coccus)n n根据革兰染色性的不同可分成根据革兰染色性的不同可分成n n革兰阳性：葡萄球菌、
2、链球菌、肠球菌等。革兰阳性：葡萄球菌、链球菌、肠球菌等。革兰阳性：葡萄球菌、链球菌、肠球菌等。革兰阳性：葡萄球菌、链球菌、肠球菌等。n n革革革革兰兰兰兰阴阴阴阴性性性性：脑脑脑脑膜膜膜膜炎炎炎炎奈奈奈奈瑟瑟瑟瑟菌菌菌菌、淋淋淋淋病病病病奈奈奈奈瑟瑟瑟瑟菌菌菌菌、卡卡卡卡他他他他布兰汉菌等。布兰汉菌等。布兰汉菌等。布兰汉菌等。第一节第一节 葡萄球菌属葡萄球菌属(Staphylococcus)概概 述述n n分布广泛分布广泛n n医院内交叉感染的重要传染源医院内交叉感染的重要传染源n n所致疾病（常见、特殊）所致疾病（常见、特殊）n n化脓性炎症化脓性炎症n n食物中毒食物中毒n n烫伤样皮肤综
3、合征烫伤样皮肤综合征n n毒性休克综合征毒性休克综合征n n耐药性耐药性Percentage of strains of methicillin-resistantStaphylococcus aureus(MRSA)by year.一、生物学特性一、生物学特性1.分类及分型分类及分型n nBergs 分类：分类：32个种个种15个亚种个亚种n n凝固酶分类：凝固酶分类：凝固酶阳性凝固酶阳性 如：金黄色葡萄球菌如：金黄色葡萄球菌(S.aureus)凝固酶阴性凝固酶阴性 如：表皮葡萄球菌如：表皮葡萄球菌(S.epidermidis)、腐生葡萄球菌、腐生葡萄球菌(S.saprophyticus)n
4、 n噬菌体分类：将金葡分为噬菌体分类：将金葡分为5群群26型型 2.形态与染色形态与染色n n革兰阳性球菌革兰阳性球菌n n球形或略呈椭圆形，典型排列呈葡萄串状球形或略呈椭圆形，典型排列呈葡萄串状n n无鞭毛，无芽胞，某些菌株能形成荚膜无鞭毛，无芽胞，某些菌株能形成荚膜 葡萄球菌葡萄球菌 葡萄球菌葡萄球菌金黄色葡萄球菌镜下形态金黄色葡萄球菌镜下形态(电镜和光镜电镜和光镜)Scanning electron micrograph of Staphylococcus aureus3.培养特性培养特性n n需需氧氧或或兼兼性性厌厌氧氧菌菌，营营养养要要求求不不高高，最最适适生生长长温温度度为为353
5、7。最适最适pH为为7.47.6。n n具具有有耐耐盐盐性性，能能在在含含10%15%的的NaCl的培养基中生长。的培养基中生长。3.培养特性培养特性n n菌落特点：菌落特点：n n普普通通琼琼脂脂平平板板：中中等等大大小小、圆圆形形凸凸起起、表表面面光光滑滑、湿湿润润、边边缘缘整整齐齐，不不透透明明，菌菌落落因因种种不不同同而而出出现现金金黄黄色色、白白色色或或柠柠檬色等色素。檬色等色素。3.培养特性培养特性n n血血琼琼脂脂平平板板：金金黄黄色色葡葡萄萄球球菌菌菌菌落落周周围围形形成成明明显显的的透透明明溶溶血血环环（溶血）。溶血）。S.aureus3.培养特性培养特性n n高盐卵黄琼脂平
6、板高盐卵黄琼脂平板：金黄色葡萄球菌产：金黄色葡萄球菌产生卵磷脂酶，分解卵黄，在菌落周围出生卵磷脂酶，分解卵黄，在菌落周围出现一圈白色沉淀环。现一圈白色沉淀环。n n高盐甘露醇琼脂高盐甘露醇琼脂：金黄色葡萄球菌分解：金黄色葡萄球菌分解甘露醇，呈黄色菌落。甘露醇，呈黄色菌落。Mannitol-Salt AgarStaph.epidermidisStaph.aureusControl mannitol-salt plate4.生化反应生化反应n n触酶阳性触酶阳性、O/F试验为发酵型试验为发酵型n n金黄色葡萄球菌能分解甘露醇，且凝固酶金黄色葡萄球菌能分解甘露醇，且凝固酶试验阳性，耐热核酸酶试验阳性
7、。试验阳性，耐热核酸酶试验阳性。5.抗原构造抗原构造n n葡萄球菌葡萄球菌A蛋白（蛋白（staphylococcal protein A,SPA）n n多糖抗原多糖抗原二、临床意义二、临床意义(一一)致病物质致病物质n n酶酶n n凝凝凝凝固固固固酶酶酶酶、纤纤纤纤维维维维蛋蛋蛋蛋白白白白溶溶溶溶酶酶酶酶、耐耐耐耐热热热热核核核核酸酸酸酸酶酶酶酶、透透透透明明明明质酸酶、脂酶等质酸酶、脂酶等质酸酶、脂酶等质酸酶、脂酶等n n毒素毒素n n细细细细胞胞胞胞毒毒毒毒素素素素（、杀杀杀杀白白白白细细细细胞胞胞胞素素素素）、表表表表皮皮皮皮剥剥剥剥脱脱脱脱毒毒毒毒素素素素、毒毒毒毒性性性性休休休休克克
8、克克综综综综合合合合征征征征毒毒毒毒素素素素-1-1、肠肠肠肠毒素等毒素等毒素等毒素等n n其他其他n n粘附素、荚膜、胞壁肽聚糖等粘附素、荚膜、胞壁肽聚糖等粘附素、荚膜、胞壁肽聚糖等粘附素、荚膜、胞壁肽聚糖等1.凝固酶（凝固酶（coagulase）意意意意义义义义：鉴鉴鉴鉴别别别别有有有有无无无无致致致致病病病病性性性性的的的的重重重重要指标。要指标。要指标。要指标。n n致病机理：致病机理：致病机理：致病机理：n n抵抗吞噬细胞的吞噬抵抗吞噬细胞的吞噬抵抗吞噬细胞的吞噬抵抗吞噬细胞的吞噬n n保保保保护护护护细细细细菌菌菌菌不不不不受受受受血血血血液液液液中中中中杀杀杀杀菌物质的破坏菌物质
9、的破坏菌物质的破坏菌物质的破坏n n使使使使感感感感染染染染局局局局限限限限化化化化和和和和形形形形成成成成血血血血栓栓栓栓Coagulase testA=negative,B=positive2.葡萄球菌溶素（葡萄球菌溶素（staphylolysin）n n损伤细胞膜的毒素，主要是损伤细胞膜的毒素，主要是 溶素。溶素。n n 溶溶素素，对对多多种种哺哺乳乳动动物物RBC有有溶溶血血作作用用。对对白白细细胞胞、血血小小板板、肝肝细细胞胞、成成纤纤维维细细胞胞、血管平滑肌细胞等均有损伤作用。血管平滑肌细胞等均有损伤作用。n n 溶溶素素是是一一种种外外毒毒素素，具具有有良良好好的的抗抗原原性性，
10、经甲醛液脱毒后可制成类毒素。经甲醛液脱毒后可制成类毒素。3.杀白细胞素（杀白细胞素（leukocidin）n n攻击中性粒细胞和巨噬细胞，在抵抗宿主攻击中性粒细胞和巨噬细胞，在抵抗宿主吞噬细胞，增强病菌侵袭力方面有意义。吞噬细胞，增强病菌侵袭力方面有意义。4.肠毒素（肠毒素（enterotoxin）n n约约30%50%临床分离的金黄色葡萄球菌可临床分离的金黄色葡萄球菌可产生肠毒素。产生肠毒素。n n引起急性胃肠炎即食物中毒。引起急性胃肠炎即食物中毒。n n作用机制：到达中枢神经系统后刺激呕吐作用机制：到达中枢神经系统后刺激呕吐中枢而导致以呕吐为主要症状的食物中毒。中枢而导致以呕吐为主要症状的
11、食物中毒。5.剥脱毒素剥脱毒素（exfoliative toxin）n n表皮剥脱毒素引起的烫伤样皮肤综合征表皮剥脱毒素引起的烫伤样皮肤综合征（staphylococcal scalded skin syndrome,SSSS），又称剥脱性皮炎，多见于新生），又称剥脱性皮炎，多见于新生儿、幼儿和免疫功能低下的成人。儿、幼儿和免疫功能低下的成人。n n具有抗原性，可被甲醛液脱毒成类毒素。具有抗原性，可被甲醛液脱毒成类毒素。烫伤样皮肤综合征烫伤样皮肤综合征6.毒性休克综合征毒素毒性休克综合征毒素-1（TSST-1）n nTSST-1TSST-1可引起机体发热，增加对内毒素的敏感性。可引起机体发热，
12、增加对内毒素的敏感性。可引起机体发热，增加对内毒素的敏感性。可引起机体发热，增加对内毒素的敏感性。n n感染产毒菌株后可引起机体多个器官系统的功能感染产毒菌株后可引起机体多个器官系统的功能感染产毒菌株后可引起机体多个器官系统的功能感染产毒菌株后可引起机体多个器官系统的功能紊乱或毒性休克综合征（紊乱或毒性休克综合征（紊乱或毒性休克综合征（紊乱或毒性休克综合征（TSSTSS）。）。）。）。n nTSST-1TSST-1可能不是引起可能不是引起可能不是引起可能不是引起TSSTSS的唯一病因，革兰阴性的唯一病因，革兰阴性的唯一病因，革兰阴性的唯一病因，革兰阴性杆菌内毒素、葡萄球菌肠毒素和溶血素等与杆菌
13、内毒素、葡萄球菌肠毒素和溶血素等与杆菌内毒素、葡萄球菌肠毒素和溶血素等与杆菌内毒素、葡萄球菌肠毒素和溶血素等与TSSTSS的发病也有密切关系。的发病也有密切关系。的发病也有密切关系。的发病也有密切关系。7.耐热核酸酶（耐热核酸酶（heat-stable nuclease）n n致病性葡萄球菌能产生该酶。耐热，经致病性葡萄球菌能产生该酶。耐热，经100 15min或或60 2h不被破坏；能较强的不被破坏；能较强的降解降解DNA和和RNA。n n耐热核酸酶可作为测定葡萄球菌有无致病耐热核酸酶可作为测定葡萄球菌有无致病性的重要指标之一。性的重要指标之一。(二二)所致疾病所致疾病n n侵袭性疾病侵袭性
14、疾病侵袭性疾病侵袭性疾病(化脓性炎症化脓性炎症化脓性炎症化脓性炎症)n n局部感染局部感染局部感染局部感染n n全身感染全身感染全身感染全身感染n n毒素性疾病毒素性疾病毒素性疾病毒素性疾病n n食物中毒食物中毒食物中毒食物中毒n n假膜性肠炎假膜性肠炎假膜性肠炎假膜性肠炎n n烫伤样皮肤综合征烫伤样皮肤综合征烫伤样皮肤综合征烫伤样皮肤综合征n n毒性休克综合征毒性休克综合征毒性休克综合征毒性休克综合征三、微生物检验z标标本本采采集集：根根据据病病变变部部位位不不同同，采采集集相相应应的的标本。标本。z直接涂片镜检直接涂片镜检z分离培养和鉴定分离培养和鉴定z葡萄球菌肠毒素检查葡萄球菌肠毒素检查
15、检验程序检验程序脓、穿刺液、尿液、痰脓、穿刺液、尿液、痰脑脊液脑脊液血液血液粪便、呕吐物粪便、呕吐物增菌培养增菌培养分离培养分离培养分离培养分离培养分离培养分离培养直接涂片染色直接涂片染色鉴定试验和药敏试验鉴定试验和药敏试验菌落涂片染色菌落涂片染色血浆凝固酶血浆凝固酶耐热核酸酶耐热核酸酶药敏试验药敏试验其它试验其它试验报告报告Novobiocin susceptibility葡萄球菌与类似菌的鉴别葡萄球菌与类似菌的鉴别n n与链球菌的鉴别：触酶试验与链球菌的鉴别：触酶试验与链球菌的鉴别：触酶试验与链球菌的鉴别：触酶试验n n与微球菌的鉴别：与微球菌的鉴别：与微球菌的鉴别：与微球菌的鉴别：Bacitracin susceptibility