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1、中西医结合学报年月第卷第期，不同浓度三硝基苯磺酸和乙醇诱导的大鼠克罗恩病模型杨舒，王新月，景姗，杨雪，盛益华，阎忻北京中医药大学东直门医院消化内科，北京目的：用三硝基苯磺酸（，）和乙醇灌肠建立克罗恩病（，）大鼠模型，并比较不同乙醇浓度和用量对模型的影响。方法：按标准，分别向大鼠肠道内灌注体积比为：的、乙醇混合液（实验组），体积比为：的、乙醇混合液（实验组），体积比为：的、无水乙醇混合液（实验组），体积比为：的、无水乙醇混合液（实验组）。生理盐水对照组注入等量生理盐水，正常对照组不予任何处理。于造模后第、和天分批处死大鼠，观察各时间点结肠大体形态改变和组织学改变。结果：实验组大鼠造模后周内主要表
2、现为肠壁非连续性糜烂、坏死及溃疡，镜下见大量炎性细胞浸润；第天时黏膜呈鹅卵石样改变；第天时病变明显好转，溃疡部位肠壁增厚明显，但光学显微镜下仍有明显炎症反应。实验组在第、天时与实验组的表现相似，第天取材时症状和组织学改变均较实验组轻，但组内大鼠间个体差异较大。实验组第天时大部分肠壁形态基本恢复正常。实验组死亡率过高，组织损伤严重，且病理表现与克罗恩病差异较大。结论：体积比为：的、无水乙醇溶液灌肠造成的模型与人类克罗恩病症状表现近似，病理表现典型，炎症持续时间较长，是一种研究克罗恩病发病机制和评价治疗效果的较好的模型制备方法。关键词：病；疾病模型，动物；三硝基苯磺酸；乙醇；大鼠克罗恩病（，）是一
3、种原因不亚洲各国少见，但国内近年来文献报告的患病人数有增加趋势。为了研究本病的发病机制和治疗方明的胃肠道慢性炎性肉芽肿性疾病，由遗传因素和环境因素相互作用所致。该病在北欧及北美常见，法，适宜的动物模型不可或缺。目前常用的动一蔓同髓【蕊鞠巨嚣邕（），：杨舒，王新月，景姗，杨雪，盛益华，阎忻不同浓度 三硝基苯磺酸和乙醇诱导的大鼠克罗恩病模型中西 医结合学报；（）：（），；（）：（，；，；，）：（：）基金项目：国家重点基础研究发展计划（计划）资 助项目（）：，；：，；：，中西医结合学报年月第卷第期，物模型造模方法主要有化学性炎症模型、免疫学模型、基因模型等。免疫学模型是年由等首先提出的，主要方法为三
4、硝基苯磺酸（，一，）加乙醇一次性氯醛（按）腹腔注射麻醉。取蝶翼采血针，剪去针头，取其后软管，从肛门插入肠道，按混合液标准，距肛门灌肠。大鼠头朝下，且拔出导管后再倒立左右，以防药液溢出。正常对照组不予处理。灌肠。是将与无水乙醇按体积比：配成每毫升含 的混合液，距肛门灌肠所致。这种造模方法的机制是乙醇破坏肠黏膜屏障，而作为一种半抗原，渗入结肠组织与大造模完成后，大鼠平卧至清醒，饲养于清洁级环境，给予正常饮食，每日观察其精神状态、进食、活动和大便性状等。于造模后第、和天，水合氯醛（按）腹腔注射麻醉，多聚甲醛心脏灌注后取肛门上和病变最重的结肠组织，置于多聚甲醛溶液中保存。常规石蜡包分子物质结合，形成全
5、抗原，诱发型免疫反应。此模型炎症持续时间长，慢性炎症表现突出，组织学改变与人类相似“，是目前较常用的造模方法。此外，有研究表明，引起的炎症性肠病（，）炎症埋，厚切片，苏木精和伊红（，）染色后光学显微镜下观察病理形态学改和溃疡持续时间长，病理特点突出。结合以上研究，我们根据等口的方法，探索造模过程中不同浓度的乙醇与的不同体积比制成的混合溶液灌肠造模对大鼠的影响。材料与方法变。参考王皓等 方法做大体形态评分和组织学评分。统计学方法应用统计软件对实验数据进行单因素方差分析，实验数据采用表示，组间两两比较采用 检验，方差不齐者采用 检验。认为差异有统计实验材料体质量（）的无特定病学意义。结果原级健康雄
6、性 大鼠只，购自中国人民解放军军事医学科学院实验动物中心，许可证号为一（军）。实验大鼠分笼饲养于北京中一般情况观察与体质量变化各组大鼠造模后均出现死亡，各组各时间点大鼠只数见表。实验组灌肠后出现大鼠死亡，解剖可见结肠脾区粘连，未见穿孑，腹腔少量血性腹水。大鼠在造模完成后第天表现为肉眼可见暗红脓血稀便，医药大学东直门医院屏障环境动物室，许可证号为（京）。水溶液，购自公司。乙醇等其他试剂，购自北京化学试剂公司。实验方法大鼠适应性饲养周，禁食不禁水后，随机分为组，分别为正常对照组、生理盐持续约，以后为稀便，持续周。食欲减退，体质量明显下降，后开始进食，体质量增加缓慢。实验组造模完成后第天出现倦怠懒动
7、、食欲下降、腹泻，稀便夹有黏液等症状，第天症状达高峰，并出现只大鼠死亡，解剖可见部分结肠出现粘连。其余大鼠腹泻持续周左右，体质量渐增。至周末取材时体质量低于实验组（）水对照组（予生理盐水灌肠）、实验组（予体积比为：的、乙醇混合液）、实验组（予体积比为：的、乙醇混合液）、实验组（予体积比为：的、无水乙醇混合液）、实验组（予体积比为：的、无水乙醇混合液），每组只。除正常对照组外，其余组大鼠均以水合潘燕，欧阳钦八味锡类散对小鼠恶唑酮结肠炎的治疗作用及其机制中西医结合学报；（）：，；（）：？王智君，李为民电针对肠易激综合征大鼠肠道运动异常的调节作用中西医结合学报；（）：，；（）：？：？中西医结合学报年
8、月第卷第期，实验组造模后第天和第天与实验组的表现相同，但在第天即开始进食，周后上述症状末取材时仍为稀便，食欲低下，周后进食量缓慢增加，倦怠懒动，毛色枯槁，形体瘦小，体质量明显低于其余组。生理盐水对照组无上述表现。趋向好转，体质量开始增加。至周末取材时，大便已基本成型，肉眼观察未见黏液和脓血。实验组大鼠造模后前大便表现为肉眼可见暗红脓血的稀便，约周后脓血消失，但直至周各组大鼠的体质量见表。表各组大鼠不同时间点体质量（，），；，；，口；口口，；一，一一，结肠大体形态观察实验组大鼠造模后第理盐水对照组结肠基本无病理变化。各组大鼠大体形态评分见表。天时末端结肠壁可见非连续性糜烂、坏死及多个溃疡形成，肠
9、壁与周围组织粘连严重；第天时糜 光学显微镜下观察病理改变典型的组织学改变为裂隙状溃疡、结节病样肉芽肿、固有膜底部和黏膜下层淋巴细胞聚集。固有膜中量炎症细胞浸润及黏膜下层增宽，非干酪性肉芽肿是主要的组织学特征 。实验组大鼠造模后第天时出现透壁性炎烂和坏死有所减轻，但出现多个节段性深大溃疡；第天时肉眼未见明显黏膜坏死、糜烂及粘连，黏膜呈典型的鹅卵石样改变，原有溃疡开始愈合，但病变部位肠壁增厚；第天时病变明显好转，溃疡愈合但溃疡部位肠壁明显增厚，部分大鼠伴有肠道狭窄。症，溃疡深达肌层，淋巴细胞浸润较多；第天时仍实验组大鼠在第天和第天时的表现与可见透壁性炎症，偶见隐窝脓肿；第天时炎症减轻，溃疡开始愈合
10、，黏膜下有大量炎性细胞浸润，结缔组织增生伴腺体杯状细胞减少，有典型肉芽肿形实验组相似，但溃疡的范围较小，程度较轻，且组内大鼠间个体差异较大。在第天除有只大鼠仍有较浅溃疡和轻度肠壁增厚外，其余大鼠均基本恢复正常。实验组大鼠造模后第天仅出成；第天时黏膜基本正常，但仍有黏膜下炎性细胞浸润，结缔组织增生明显。实验组大鼠在第现肠壁糜烂，未见溃疡和粘连，第天时即见糜烂好转。实验组大鼠死亡率过高，造模完成后第天即出现死亡，解剖可见死亡大鼠出现严重肠穿天和第天时光学显微镜下表现与实验组相似，但溃疡的范围和程度均较实验组减小或减轻；在第天除只仍有较浅溃疡和轻度纤维结缔组织孔和粘连，并有血性腹水；存活大鼠第天和第
11、天表现均较实验组严重；第天时仍可见糜烂、坏死和粘连，溃疡恢复缓慢。正常对照组和生增生外，其余均表现为黏膜下轻、中度炎症，未见肉芽肿形成。实验组大鼠造模后第天仅出现中度黏膜下炎症，而未见明显溃疡；第天时即见炎症好中西医结合学报年月第卷第期，讨论与溃疡性结肠炎（，）同属于范畴，是一种原因不明的胃肠道慢性炎性肉芽肿性疾病，发病机制目前尚不完全清楚，可能与肠道绌菌作用于遗传易感人群，导致肠黏膜免疫反应过高有关。尽管对动物模型的研究已有多年，各种造模方法各有特点，但目前仍未得到与人类病因、发病机制、病理改变、临床表现及病程发展完全相似的理想模型。乙酸致炎模型操作简单，重复性好，症状和肠黏膜病理损害与人类
12、非常相似，但病变进展及愈合迅速，难以从细胞水平观察药物对结肠黏膜的直接作用机制，不能确切地反映人类的免疫学变化。葡聚糖硫酸钠模型既可用于急性期又可用于慢一 期的研究，制作简便、经济，易于复制。但有报道称本法诱导的炎症性肠病模型更趋向于溃疡性结肠炎，引发的是以型为主的免疫反应。免疫复合物加乙醇法是将结肠黏膜组织致敏模型 乙醇模型相结合，达到全身免疫异常与局部炎症病变的共存，可产生与人类较为接近的临床症状及肠道病变，为较理想的研究免疫机制的动物模型。基因模型虽然针对性强，但由于造价偏高，不利于推广和大规模采用。是一种半抗原，诱发的确切机制尚未被阐明，可能为与肠上皮细胞的赖氨酸共价结合，从而改变表面
13、蛋白质，形成自身抗原，导致以为主的免疫反应，引发结肠炎 ：。本研究中的实验组所采用的造模方法是，按 标准，一次性以体积比为：的、无水乙醇混合液灌肠。按该方法复制的大鼠模型，个体问差异小，炎症持续时问较长，病理上与人类类似。造模第天时出现黏膜糜烂、出血、溃疡，并伴大量中性粒细胞浸润；第天时出现黏膜铺路石样改变，结缔组织增生伴腺体杯状细胞减少；第天时出现好转趋势，黏膜表现为慢性炎症，结缔组织增生明显，部分大鼠伴有肠道狭窄。这些均与以往的报道相似。实验组病理变化在第天和第天时与实验组相似，但组间差异较大，在第天时已无明显溃疡，仅表现为黏膜轻、中度炎症。实验组造模后第天仅出现中度黏膜下炎症，而未见明显
14、溃疡，第天时即见炎症好转。实验组死亡率过高，组织损伤严重，且病理表现与差异较大。综上，笔者认为采用体积比为：的和无水乙醇混合液一次性灌肠诱导的模型人类表现近似，病理表现典型，炎症持续时间较长，是一种研究发病机制和评价治疗效果的较好模型制备方法。尽管对动物模型的研究已日渐成熟，但仍未得到与人类病因、发病机制、病理改变、临床表现及病程发展完全相似的理想模型，该领域的研究还需要不断深入。利益冲突本文作者声明不存在任何与本稿件相关的利益冲突。，；（）：卜 ；（）：虞玲华，姒健敏实验性炎症性肠病模型的制作现状与展望全科医学临床与教育；（）：，；（）：，；（）：，：（）：郑礼，高振强，王淑仙大鼠溃疡性结肠
15、炎模型的实验研究中国药理学通报；（）：，；（）：王皓，欧阳钦，胡仁伟三硝基苯磺酸结肠炎动物模型的建立胃肠病学；（）：，：；（）：，；（）：梅俏，许建明，项立乙酸体外损伤大鼠结肠模型的建立及褪黑素的影响中国药理学通报；（）：中西医结合学报年月第卷第期 ，磺酸和恶唑酮诱导肠炎小鼠脾脏中类细胞因子基因表达的动态研究中国老年学杂志；（）：，；（）：；，；（）：张永锋，陈如山，吴正治，杨敏葡聚糖硫酸钠致小鼠结肠炎模型的建立与评价深圳中西医结合杂志；（）：，；（）：，；（）：张艳丽，王承党葡聚糖硫酸钠结肠炎模型的制作方法、特点和影响因素胃肠病学；（）：陈英群，董福轮，马贵同三硝基苯磺酸诱导大鼠溃疡性结肠炎的实验研究同济大学学报（医学版）；（）：，；（）：；（）：龙友明，陈垦，兰雷，王晖大鼠病模型制备的改进广东医学院学报；（）：赵颖，杨世忠，谭岩，姜酷，王岚，方艳秋三硝基苯，：，一 （）：（）：（），：（）：（），（，）：，。川 ：，：，：；，；