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1、微生物的实验室培养微生物的实验室培养制作：霍晓杰制作：霍晓杰 审核：刘平审核：刘平1 1基础知识基础知识11 培养基的种类包括_培养基和_培养基等。思考 1琼脂是从红藻中提取的_，在配制培养基中用作为_。【补充】培养基的类型及其应用：标准培养基类型固体培养基物理性质半固体培养基液体培养基化学组成目的用途合成培养基天然培养基鉴别培养基选择培养基配制特点加入琼脂较多加入琼脂较少不加入琼脂由已知成分配制而成，培养基成分明确添加某种指示剂或化学药剂添加（或缺少）某种化学成分主要应用菌种分离,鉴定,计数菌种保存工业生产，连续培养菌种分类、鉴定菌种的鉴别菌种的分离由天然成分配制而成，培养基成分不明确工业生
2、，产降低成本12 培养基的化学成分包括_四类营养成分。思考 2从细胞的化学元素组成来看，培养基中为什么都含有这些营养成分？C、H、O、N、P、S 是构成细胞原生质的基本元素，约占原生质总量的97以上。【补充】碳源：如 CO2、糖类、脂肪酸等有机物，构成微生物的结构物质和分泌物，并提供能量。氮源：如N2、氨盐、硝酸盐、牛肉膏、蛋白胨等，主要用来合成蛋白质、核酸及含氮代谢物等。含有 C、H、O、N 的化合物既可以作为碳源，又可以作为氮源，如氨基酸等。13 培养基除满足微生物生长的_、_和_等要求。【补充】生长因子：某些微生物正常生长代谢过程中必须从培养基中吸收的微量有机小分子，如某些氨基酸、碱基、
3、维生素等。思考 3牛肉膏和蛋白胨主要为微生物提供_、_和_等营养物质。思考 4培养乳酸杆菌时需要添加_，培养霉菌时需要将培养基 pH 调节为 _，培养细菌时需要将 pH 调节为 _。活动 2：阅读“无菌技术”，讨论回答下列问题：14 获得纯净培养物的关键是_。用心爱心专心-1-15 无菌技术包括：（1）对实验操作空间、操作者的衣着和手进行_；（2）将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行_；（3）为避免周围微生物污染，实验操作应在 _ 旁进行；（4）避免已灭菌处理的材料用具与 _ 相接触。16 比较消毒和灭菌（填表）比较项理化因素的作用强度消毒灭菌消灭微生物的数量芽孢和孢子能否被消灭思考 5无菌
4、技术除了防止培养物被污染外，还具有的目的是 _。17 消毒方法：（1）日常生活经常用到的是_ 消毒法；（2）对一些不耐高温的液体，则使用 _ 消毒法（作简要介绍）；（3）对接种室、接种箱或超净工作台首先喷洒 _ 等溶液以增强消毒效果，然后使用_进行物理消毒。（4）实验操作者的双手使用 _进行消毒；（5）饮水水源用_进行消毒。18 灭菌方法：（1）接种环、接种针、试管口等使用_灭菌法；（2）玻璃器皿、金属用具等使用_灭菌法，所用器械是_；（3）培养基、无菌水等使用 _，所用器械是_。（4）表面灭菌和空气灭菌等使用_灭菌法，所用器械是 _。思考 6对接种环灭菌时要用酒精灯的_层火焰灼烧。思 考7
5、利 用 干 热 灭 菌 箱 对 玻 璃 器 皿 灭 菌 时 物 品 不 能 摆 得 太 挤，目 的 是_。-2-用心爱心专心思考 8物品装入高压蒸汽灭菌锅灭菌后，要首先打开排气阀，煮沸并 _；随后关闭排气阀继续加热，气压升至 _，温度为 _，并维持_；最后切断热源，使温度自然降温，气压务必降至_时打开锅盖，其目的是防止_。【补充】培养基的配制原则：目的要明确：根据培养的微生物种类、培养的目的等确定培养基的类型和配制量。营养要协调：培养基中各种营养物质的浓度和比例要适宜。例如：碳氮比 41 时，谷氨酸棒状杆菌大量繁殖而产生谷氨酸少；碳氮比为31 时，菌体繁殖受抑制而谷氨酸合成量大增。pH 要适宜
6、：细菌培养基pH 中性或偏碱性，霉菌培养基呈酸性。2 2实验操作实验操作21 _：根据配方比例，计算100mL 培养基各成分用量。22 _：准确称取各成分。称取牛肉膏和蛋白胨时动作要迅速，目的是防止牛肉膏吸收空气中水分。23 _：加水加热熔化牛肉膏；加入蛋白胨和氯化钠继续加热；加入琼脂；用蒸馏水定容到100mL。整个过程不断用玻棒搅拌，目的是防止琼脂糊底而导致烧杯破裂。24_：将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加塞包扎后用高压蒸汽灭菌锅灭菌；所用培养皿用报纸包扎后用干热灭菌箱灭菌。25 _：待培养基冷却至 50左右时在酒精灯火焰附近操作进行。思考：对培养基进行调 pH 应该在哪一步进行：_.倒平
7、板的过程是：在火焰旁右手拿锥形瓶，左手拔出棉塞；右手拿锥形瓶，使锥形瓶的瓶口迅速通过火焰；左手将培养皿打开一条缝隙，右手将培养基倒入培养皿，立刻盖上皿盖。待平板冷却凝固后，将平板倒过来放置。思考 1锥形瓶的瓶口通过火焰的目的是_。思考 2平板倒置的目的是_。思考 3若皿盖和皿底之间粘有培养基，则该平板能否培养微生物？为什么？用心爱心专心-3-_思考 4配制斜面培养基中，试管要加塞棉塞的目的是_。思考 5试管培养基形成斜面的作用是增_。26 接种261 微生物接种的最常用方法是_和_，另外还有_和_等。262 平板划线法：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培
8、养基表面。其操作步骤是：将接种环在酒精灯火焰上灼烧直至烧红。在酒精灯火焰旁冷却接种环，并打开大肠杆菌的菌种试管的棉塞。将菌种试管口通过火焰达到_的目的。将冷却的接种环伸入到菌液中取出一环菌种。将菌种试管口再次通过火焰后塞上棉塞。将皿盖打开一条缝隙，把接种环伸入平板内划35 条_线，盖上皿盖，不要划破培养基。灼烧接种环，冷却后从第一区划线末端开始向第二区域内划线。重复上述过程，完成三、四、五区域内划线。注意不要将第五区的划线与第一区划线相连。将平板_放在培养箱中培养。思考 6取菌种前灼烧接种环的目的_；除第一次划线外，其余划线前都要灼烧接种环的目的是_；取菌种和划线前都要求接种环_后进行，其目的
9、是_；最后灼烧接种环的目的是_。思考7在第1次划线后都从上次划线末端开始的目的是_。273稀释涂布平板法：将菌液进行一系列_，并将不同稀释度菌液分别涂布到琼脂固体培养基上进行培养。当稀释倍数足够高时，即可获得单个细菌形成的_。274系列稀释操作：取盛有 9mL 水的无菌试管 6 支，编号 10、10、10、10、10、10。-4-123456用心爱心专心用灼烧冷却的移液管吸取1mL 菌液注入编号为 10 试管中，并吹打 3 次，使之混匀。从 10 倍液中吸取 1mL 菌液注入到编号为 10 试管内吹打均匀，获得10 倍液。依此类推。思考 8操作中试管口和移液管应在_处。3 3结果分析与评价结果分析与评价31培养未接种培养基的作用是_，若有菌落形成，说明培养基灭菌不彻底。32在肉汤培养基上，大肠杆菌菌落呈白色，为圆形，光滑有光泽，边缘整齐。33培养 12h 和 24h 后的菌落大小不同（相同、不同）；菌落分布位置相同（相同、不同）。原因是时间越长，菌落中细菌繁殖越多，菌落体积越大；菌落的位置不动，但菌落数增多。思考9在某培养基上出现了3种特征不同的菌落，原因1221_。思考 10频繁使用的菌种利用_法保存，长期保存菌种的方法是_法。前者利用固体斜面培养基培养后，保存在_冰箱中，每36 个月转种培养一次，缺点是_；后者将菌种与无菌体积等量_混合后保存在_冷冻箱中。用心爱心专心-5-