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1、 2).硫化物共沉淀法操作步骤废液中重金属的浓度要用水稀释至 1以下。加入 Na2S 或 NaHS 溶液，并充分搅拌。加入 NaOH 溶液，调整 pH 值至 9.09.5。加入 FeCl3 溶液，调节 pH 值至 8.0 以上，然后放置一夜。用倾析法过滤沉淀，检查滤液确实不含重金属。再检查滤液有无 S2-离子。如果含有 S2-离子时，用 H2O2 将其氧化，中和后即可排放。分析方法定性分析用检测箱进行，或用二苯基硫巴腙（即双硫腙）溶液，检查有无产生颜色。定量分析则用二苯基硫巴腙吸光光度法或原子吸收光谱分析法（见 JIS K 0102)。备注除上述的处理方法外，还有碳酸盐法（可用含碳酸钠的碱灰浆
2、）、离子交换树脂法及吸附法（用活性炭）等。4.8含重金属的有机类废液处理方法先将妨碍处理重金属的有机物质，用氧化、吸附等适当的处理方法把它除去。然后才把它作无机类废液处理。1).焚烧法将含大量有机溶剂废液及有机物的溶液，进行焚烧处理，保管好残渣。2).氧化分解法参照含有机汞废液的处理方法。 3).活性炭吸附法调整 pH 值至 5 左右，加入活性炭粉末，经常加以搅拌，经 23 小时后进行过滤（此法适用于处理稀溶液）。4.9处理方法在废液中加入 Na2SO4 溶液，过滤生成的沉淀后，即可排放。4.10 含硼废液处理方法含钡废液把废液浓缩，或者用阴离子交换树脂吸附。对含有重金属的废液，按含重金属废液
3、的处理方法进行处理。4.11含氟废液处理方法于废液中加入消化石灰乳，至废液充分呈碱性为止，并加以充分搅拌，放置一夜后进行过滤。滤液作含碱废液处理。此法不能把氟含量降到8ppm 以下。要进一步降低氟的浓度时，需用阴离子交换树脂进行处理。4.12含氧化剂、还原剂的废液注意事项1).原则上将含氧化剂、还原剂的废液分别收集。但当把它们混合没有危险性时，也可以把它们收集在一起。2).含铬酸盐时可作为含 Cr（）的废液处理。3).含重金属物质时，可作为含重金属的废液处理。4).不含有害物质而其浓度在 1以下的废液，把它中和后即可排放。 处理方法操作步骤1).查明各氧化剂和还原剂，如果将其混合也没有危险性时
4、，即可一面搅拌，一面将其中一种废液分次少量加入另一种废液中，使之反应。2).取出少量反应液，调成酸性，用碘化钾淀粉试纸进行检验。3).试纸变蓝时（氧化剂过量）：调整pH 值至 3，加入 Na2SO3（用 Na2S2O3、FeSO4 也可以）溶液，至试纸不变颜色为止。充分搅拌，然后把它放置一夜。4).试纸不变色时（还原剂过量）：调整 pH 值至 3，加入 H2O2 使试纸刚刚变色为止。然后加入少量 Na2SO3，把它放置一夜。5).不管哪一种情况，都要用碱将其中和至 pH 为 7，并使其含盐浓度在 5以下，才可排放。4.13含酸、碱、盐类物质的废液注意事项1).原则上将酸、碱、盐类废液分别收集。
5、但如果没有妨碍，可将其互相中和，或用其处理其它的废液。2).对含重金属及含氟的废液，要另外收集处理。3).对黄磷、磷化氢、卤氧化磷、卤化磷、硫化磷等的废液，在碱性情况下，用 H2O2 将其氧化后，作为磷酸盐废液处理。对缩聚磷酸盐的废液，用硫酸酸化，然后将其煮沸23 小时进行水解处理。4).对其稀溶液，用大量水把它稀释到 1以下的浓度后，即可排放。处理方法操作步骤 1)查明即使将酸、碱废液互相混合也没有危险时，可分次少量将其中一种废液，加入另一种废液中。2).用 pH 试纸（或 pH 计）检验，使加入的酸或碱的废液至溶液的 pH 约等于 7。3).用水稀释，使溶液浓度降到 5以下，然后把它排放。
6、葛所长 2014-3-24 21:48:075.6含有机磷的废液此类废液包括：含磷酸、亚磷酸、硫代磷酸及膦酸酯类，磷化氢类以及磷系农药等物质的废液。对其浓度高的废液进行焚烧处理（因含难于燃烧的物质多，故可与可燃性物质混合进行焚烧）。对浓度低的废液，经水解或溶剂萃取后，用吸附法进行处理。5.7含有天然及合成高分子化合物的废液此类废液包括：含有聚乙烯、聚乙烯醇、聚苯乙烯、聚二醇等合成高分子化合物，以及蛋白质、木质素、纤维素、淀粉、橡胶等天然高分子化合物的废液。对其含有可燃性物质的废液，用焚烧法处理。而对难以焚烧的物质及含水的低浓度废液，经浓缩后，将其焚烧。但对蛋白质、淀粉等易被微生物分解的物质，其
7、稀溶液可不经处理即可排放。葛所长 2014-3-24 21:46:48注意事项含烷基汞之类废液，毒性特别大，处理时必须十分注意。处理方法（氧化分解法）用下述处理方法，先将有机汞转变成无机汞，然后再进行处理。 操作步骤在 500 毫升废液（含汞 0.025 毫克以下）中，加入浓硝酸 60 毫升及 6的 KMnO4 水溶液 20 毫升，加热回流二小时。待KMnO4 溶液的颜色消失时，把温度降到 60以下，然后加入 2 毫升 KMnO4 溶液，再加热溶液。分析方法备注除上述的处理方法外，还有用NaOCl 和 NaOH 或 KMnO4 和 H2SO4 进行氧化，以及用活性炭吸附等方法。4.7含重金属的
8、废液注意事项1).对含有机物、络离子及螯合物量大的废液，要先把它们分解除去（参照含重金属的有机类废液的处理方法）。2).含 Cr（）、CN 等物质时，也要预先进行上述处理。3).废液中含有两种以上的重金属时，因其处理的最适宜的 pH 值各不相同，必须加以注意。处理方法原理把重金属离子转变成难溶于水的氢氧化物或硫化物等的盐类，然后进行共沉淀而除去。1).氢氧化物共沉淀法操作步骤 在废液中加入 FeCl3 或 Fe2（SO4）3，并加以充分搅拌。将 Ca（OH）2 制成石灰乳，然后加入上述废液中，调整 pH 至 911（如果 pH 值过高，沉淀会再溶解）。溶液经放置后，过滤沉淀物。检查滤液确实不含
9、重金属离子后，才把它中和排放。备注如果含有螯合物时，往往不产生沉淀。但是，本法可以除去少量的螯合物。按照本法处理，可使 Ca、Zn、Fe、Mn、Ni、Cr（）、As、Sb、Al、Co、Ag、Sn、Bi、及其它很多重金属生成氢氧化物沉淀而除去。共沉剂也可以用 Al2（SO4）3 或 ZnCl2 等物质。因在强碱性下，两性金属的沉淀会发生溶解。故要注意其最适宜的pH 值（两性金属沉淀溶解的 pH 值为：Al3+：8.5；Cr3+：9.2；Sn2+：10.6；Zn2+：11；Pb2+：11。但是，用共沉淀法处理时，由于产生沉淀的 pH 值范围相当宽，因而，在 pH 值为 911的条件下，全都能完全沉
10、淀）。中和剂与其用 HaOH，不如用 Ca（OH）2 为好。因 Ca（OH）2 可防止两性金属的沉淀再溶解，且其沉降性能也较好。如果用碳酸钠作中和剂，还可使 Ca2+、Sr2+、Ba2+等离子生成难溶性的碳酸盐而除去（pH1011)。葛所长 2014-3-24 21:45:45【注】：如果有 Cu+、Ni+等离子存在，必须加入过量的氧化剂。4.3含镉及铅的废液 注意事项1).含重金属两种以上时，由于其处理的最适宜 pH 值各不相同，因而，对处理后的废液必须加以注意。2).含大量有机物或氰化物的废液，以及含有络离子的时候，必须预先把它分解除去（参照含有重金属的有机类废液的处理方法）。镉的处理方法
11、（氢氧化物沉淀法）原理用 Ca（OH）2 将 Cd2+转化成难溶于水的 Cd（OH）2 而分离。当 pH 值在 11 附近时，Cd（OH）2 的溶解度最小，因此调节 pH 值很重要。但是，若有金属离子共沉淀时，那么，即使 pH 值较低也会产生沉淀。操作步骤1).在废液中加入 Ca（OH）2，调节 pH 至 10.611.2，充分搅拌后即放置。2).先过滤上层澄清液，然后才过滤沉淀。保管好沉淀物。3).检查滤液中确实不存在 Cd2+离子时，把它中和后即可排放。分析方法定性分析用镉试剂试纸法或检测箱进行检测；定量分析则用二苯基硫巴腙（即双硫腙）吸光光度法（见 JIS K 0102 40.1)或原子
12、吸收光谱分析法进行测定。铅的处理方法（氢氧化物共沉淀法）原理用 Ca（OH）2 把 Pb2+转变成难溶性的 Pb（OH）2，然后使其与凝聚剂共沉淀而分离。 为此，首先把废液的 pH 值调整到 11 以上，使之生成 Pb（OH）2。然后加入凝聚剂，继而将 pH 值降到 78，即产生 Pb（OH）2 共沉淀。但如果 pH 值在 11 以上，则生成HPbO2-而沉淀会再溶解。操作步骤1).在废液中加入 Ca（OH）2，调整 pH 值至 11。2).加入 Al2（SO4）3（凝聚剂），用 H2SO4 慢慢调节 pH 值，使其降到 78。3).把溶液放置，待其充分澄清后即过滤。检查滤液不含 Pb2+后，
13、即可排放。分析方法定性分析用检测箱进行（注意干扰离子）。定量分析用二苯基硫巴腙（即双硫腙）吸光光度法（见 JIS K 0102 39.1)或原子吸收光谱分析法。备注1).除上述处理方法外，还有硫化物沉淀法（其生成的硫化物溶解度较小，但因形成胶体微粒而难于分离）；碳酸盐沉淀法（生成的沉淀微粒细小，分离困难）；吸附法（使用强酸性阳离子交换树脂，几乎能把它们完全除去）。2).碱性药剂也可以用 NaOH，但是由于生成微粒状沉淀而难于过滤，故用 Ca（OH）2 较好。4.4含砷废液注意事项1).As2O3 是剧毒物质，其致命剂量为 0.1 克。因此，处理时必须十分谨慎。 2).含有机砷化合物时，先将其氧
14、化分解，然后才进行处理（参照含重金属有机类废液的处理方法）。处理方法（氢氧化物共沉淀法）原理用中和法处理不能把 As 沉淀。通常使它与 Ca、Mg、Ba、Fe、Al 等的氢氧化物共沉淀而分离除去。用 Fe（OH）3 时，其最适宜的操作条件是：铁砷比（Fe/As）为 3050；pH为 710。操作步骤1).废液中含砷量大时，加入 Ca（OH）2 溶液，调节 pH 至 9.5 附近，充分搅拌，先沉淀分离一部份砷。2).在上述滤液中，加入 FeCl3，使其铁砷比达到 50，然后用碱调整 pH 至 710 之间，并进行搅拌。3).把上述溶液放置一夜，然后过滤，保管好沉淀物。检查滤液不含 As 后，加以
15、中和即可排放。此法可使砷的浓度降到 0.05ppm 以下。分析方法定量分析有铁共沉淀、浓缩溶剂萃取钼蓝法（见 JIS K 0102 48.1)；或铁共沉淀、浓缩分离砷化氢二乙基氨荒酸银法进行测定（见 JIS K 0102 48.2)。备注除上述处理方法外，还有硫化物沉淀法（用盐酸酸化，然后用H2S 或 NaHS 等试剂使之沉淀）及吸附法（用活性炭、活性矾土作吸附剂）。4.5含汞废液注意事项 1).废液毒性大，经微生物等的作用后，会变成毒性更大的有机汞。因此，处理时必须做到充分安全。2).含烷基汞之类的有机汞废液，要先把它分解转变为无机汞，然后才进行处理（参照有机汞的处理方法）。3).不能含有金
16、属汞。处理方法之一（硫化物共沉淀法）原理用 Na2S 或 NaHS 把 Hg2+转变为难溶于水的 HgS，然后使其与 Fe（OH）3 共沉淀而分离除去。如果使其 pH 值在 10 以上进行反应，HgS 即变成胶体状态。此时，即使用滤纸过滤，也难于把它彻底清除。如果添加的 Na2S 过量时，则生成HgS22-而沉淀容易发生溶解。腘 a2S 过量时，则生成HgS22-而沉淀容易发生溶解。操作步骤1).于废液中加入对于 FeSO4（10ppm）及 Hg2+之浓度的 11 当量的 Na2S9H2O，充分搅拌，并使废液之 pH 值保持在 68 范围内。2).上述溶液经放置后，过滤沉淀并妥善保管好滤渣（用
17、此法处理，可使 Hg 浓度降到0.05ppm 以下）。3).再用活性炭吸附法或离子交换树脂等方法，进一步处理滤液。4).在处理后的废液中，确证检不出 Hg 后，才可排放。处理方法之二（活性炭吸附法）先稀释废液，使 Hg 浓度在 1ppm 以下。然后加入 NaCl，再调整 pH 值至 6 附近，加入过量的活性炭，搅拌约 2 小时，然后过滤，保管好滤渣。此法也可以直接除去有机汞。 处理方法之三（离子交换树脂法）于含汞废液中加入 NaCl，使之生成HgCl42-络离子而被阴离子交换树脂所吸附。但随着汞的形态不同，有时此法效果不够理想。并且，当有有机溶剂存在时，此法也不适用。分析方法备注1).因为汞容
18、易形成络离子，故处理时必须考虑汞的存在形态。2).若用 NaHS 和 ZnCl2 代替 Na2S+FeSO4，可以把汞清除到极微量的程度。例如，对含Hg 10ppm 的废液 1 升，pH 值在 10.3，加入 32 毫克 NaHS 及 80 毫克 ZnCl2 进行处理。处理后，Hg 的浓度降至 0.003ppm。4.6葛所长 2014-3-24 21:47:434.14 含无机卤化物的废液处理方法含有机汞的废液操作步骤1).将含 AlBr3、AlCl3、ClSO3H、SnCl4 及 TiCl4 等无机类卤化物的废液，放入大号蒸发皿中，撒上高岭土碳酸钠（11)的干燥混合物。2).把它充分混合后，
19、喷洒 11 的氨水，至没有 NH4Cl 白烟放出为止。3).把它中和后放置，过滤沉淀物。检查滤液有无重金属离子。若无，则用大量水稀释后，即可排放。5.有机类实验废液的处理方法 注意事项1).尽量回收溶剂，在对实验没有妨碍的情况下，把它反复使用。2).为了方便处理，其收集分类往往分为：a)可燃性物质；b)难燃性物质；c)含水废液；d)固体物质等。3).可溶于水的物质，容易成为水溶液流失。因此，回收时要加以注意。但是，对甲醇、乙醇及醋酸之类溶剂，能被细菌作用而易于分解。故对这类溶剂的稀溶液，经用大量水稀释后，即可排放。4).含重金属等的废液，将其有机质分解后，作无机类废液进行处理。处理方法1).焚
20、烧法将可燃性物质的废液，置于燃烧炉中燃烧。如果数量很少，可把它装入铁制或瓷制容器，选择室外安全的地方把它燃烧。点火时，取一长棒，在其一端扎上沾有油类的破布，或用木片等东西，站在上风方向进行点火燃烧。并且，必须监视至烧完为止。对难于燃烧的物质，可把它与可燃性物质混合燃烧，或者把它喷入配备有助燃器的焚烧炉中燃烧。对多氯联苯之类难于燃烧的物质，往往会排出一部份还未焚烧的物质，要加以注意。对含水的高浓度有机类废液，此法亦能进行焚烧。对由于燃烧而产生 NO2、SO2 或 HCl 之类有害气体的废液，必须用配备有洗涤器的焚烧炉燃烧。此时，必须用碱液洗涤燃烧废气，除去其中的有害气体。对固体物质，亦可将其溶解
21、于可燃性溶剂中，然后使之燃烧。2).溶剂萃取法 对含水的低浓度废液，用与水不相混合的正己烷之类挥发性溶剂进行萃取，分离出溶剂层后，把它进行焚烧。再用吹入空气的方法，将水层中的溶剂吹出。对形成乳浊液之类的废液，不能用此法处理。要用焚烧法处理。3).吸附法用活性炭、硅藻土、矾土、层片状织物、聚丙烯、聚酯片、氨基甲酸乙酯泡沫塑料、稻草屑及锯末之类能良好吸附溶剂的物质，使其充分吸附后，与吸附剂一起焚烧。4).氧化分解法（参照含重金属有机类废液的处理方法）在含水的低浓度有机类废液中，对其易氧化分解的废液，用 H2O2、KMnO4、NaOCl、H2SO4+HNO3、HNO3+HClO4、H2SO4+HCl
22、O4 及废铬酸混合液等物质，将其氧化分解。然后，按上述无机类实验废液的处理方法加以处理。5).水解法对有机酸或无机酸的酯类，以及一部份有机磷化合物等容易发生水解的物质，可加入NaOH 或 Ca（OH）2，在室温或加热下进行水解。水解后，若废液无毒害时，把它中和、稀释后，即可排放。如果含有有害物质时，用吸附等适当的方法加以处理。6).生物化学处理法用活性污泥之类东西并吹入空气进行处理。例如，对含有乙醇、乙酸、动植物性油脂、蛋白质及淀粉等的稀溶液，可用此法进行处理。5.1含一般有机溶剂的废液一般有机溶剂是指醇类、酯类、有机酸、酮及醚等由 C、H、O 元素构成的物质。对此类物质的废液中的可燃性物质，
23、用焚烧法处理。对难于燃烧的物质及可燃性物质的低浓度废液，则用溶剂萃取法、吸附法及氧化分解法处理。再者，废液中含有重金属 时，要保管好焚烧残渣。但是，对其易被生物分解的物质（即通过微生物的作用而容易分解的物质），其稀溶液经用水稀释后，即可排放。5.2含石油、动植物性油脂的废液此类废液包括：苯、已烷、二甲苯、甲苯、煤油、轻油、重油、润滑油、切削油、机器油、动植物性油脂及液体和固体脂肪酸等物质的废液。对其可燃性物质，用焚烧法处理。对其难于燃烧的物质及低浓度的废液，则用溶剂萃取法或吸附法处理。对含机油之类的废液，含有重金属时，要保管好焚烧残渣。5.3含 N、S 及卤素类的有机废液此类废液包含的物质：吡
24、啶、喹啉、甲基吡啶、氨基酸、酰胺、二甲基甲酰胺、二硫化碳、硫醇、烷基硫、硫脲、硫酰胺、噻吩、二甲亚砜、氯仿、四氯化碳、氯乙烯类、氯苯类、酰卤化物和含 N、S、卤素的染料、农药、颜料及其中间体等等。对其可燃性物质，用焚烧法处理。但必须采取措施除去由燃烧而产生的有害气体（如SO2、HCl、NO2 等）。对多氯联苯之类物质，因难以燃烧而有一部分直接被排出，要加以注意。对难于燃烧的物质及低浓度的废液，用溶剂萃取法、吸附法及水解法进行处理。但对氨基酸等易被微生物分解的物质，经用水稀释后，即可排放。5.4含酚类物质的废液此类废液包含的物质：苯酚、甲酚、萘酚等。对其浓度大的可燃性物质，可用焚烧法处理。而浓度
25、低的废液，则用吸附法、溶剂萃取法或氧化分解法处理。5.5含有酸、碱、氧化剂、还原剂及无机盐类的有机类废液 此类废液包括：含有硫酸、盐酸、硝酸等酸类和氢氧化钠、碳酸钠、氨等碱类，以及过氧化氢、过氧化物等氧化剂与硫化物、联氨等还原剂的有机类废液。首先，按无机类废液的处理方法，把它分别加以中和。然后，若有机类物质浓度大时，用焚烧法处理（保管好残渣）。能分离出有机层和水层时，将有机层焚烧，对水层或其浓度低的废液，则用吸附法、溶剂萃取法或氧化分解法进行处理。但是，对其易被微生物分解的物质，用水稀释后，即可排放。葛所长 2014-3-24 21:57:57菌株的保藏方法1、传代保存法：有些微生物当遇到冷冻
26、或干燥等处理时，会很快死亡，因此在这种情况下，只能求助于传代培养保存法。传代培养就是要定期地进行菌种转接、培养后再保存，它是最基本的微生物保存法，例如酸奶等常用生产菌种的保存。传代保存时，培养基的浓度不宜过高，营养成分不宜过于丰富，尤其是碳水化合物的浓度应在可能的范围内尽量降低。培养温度通常以稍低于最适生长温度为好。若为产酸菌种，则应在培养基中添加少量碳酸钙。一般地，大多数菌种的保藏温度以 5为好，像厌氧菌、霍乱弧菌及部分病原真菌等微生物菌种则可以使用 37进行保存，而蕈类等大型食用菌的菌种则可以室温直接保存。 传代培养保存法虽然简便，但其缺点也很明显，如：菌种管棉塞经常容易发霉；菌株的遗传性
27、状容易发生变异；反复传代时，菌株的病原性、形成生理活性物质的能力以及形成孢子的能力等均有降低；需要定期转种，工作量大；杂菌的污染机会较多。通派（上海）生物科技有限公司是供应国内/外各类细胞（人/大鼠/小鼠细胞 等），菌种，ELISA 试剂盒（人/大鼠/猪），PCR 试剂盒，免疫组化试剂盒，单克隆抗体，多克隆抗体，移液器，培养皿，BD 培养基，实验室耗材，实验室小型耗材等产品的国内一流服务商。公司集生物科技产品生产、销售于一体，公司实验室热门提供：传代细胞，原代细胞，耐药株，细胞染色，免疫组化，ELISA 试剂盒 等。2、液体石蜡覆盖保存法：该法较前一种方法保存菌种的时间更长，适用于霉菌、酵母菌
28、、放线菌及需氧细菌等的保存。此法可防止干燥，并通过限制氧的供给而达到削弱微生物代谢作用的目的。其具有方法简便的优点，同时也适用于不宜冷冻干燥的微生物（如产孢能力低的丝状菌）的保存，而某些细菌如固氮菌、乳酸杆菌、明串珠菌、分枝杆菌、红螺菌及沙门氏菌等和一些真菌如卷霉菌、小克银汉霉、毛霉、根霉等不宜采用此法进行保存。3、悬液保存法：即使微生物混悬于适当溶液中进行保存的方法。常用的有， 蒸馏水保存法：适用于霉菌、酵母菌及绝大部分放线菌，将其菌体悬浮于蒸馏水中即可在室温下保存数年。本法应注意避免水分的蒸发。 糖液保存法：适用于酵母菌，如将其菌体悬浮于 10%的蔗糖溶液中，然后于冷暗处保存，可长达 10
29、 年。除此之外，也可使用缓冲液或食盐水等进行保存。4、载体保存法：即将微生物吸附在适当载体上进行干燥保存的方法。常用的有方法包括以下几种，如 土壤保存法：主要用于能形成孢子或孢囊的微生物菌种的保藏。方法是在灭菌的土壤中加入菌液，立即在室温下进行干燥或使菌体繁殖后再干燥，然后冷藏或在室温下密封保存。保存用的土壤原则上以肥沃的耕土为宜，土壤需风干、粉碎、过筛和灭菌。使微生物在土壤中繁殖后进行干燥保存的方法是：取适量土壤（5 克）置于塞有棉塞的试管中，加水或加入充分稀释的液体培养基（以含水量为土壤最大持水量的60%为宜），然后高压灭菌。再将需保存的微生物进行大量接种，培养至菌丝能用肉眼确认的程度为止
30、，移入干燥器中经短时间干燥或风干后密封，冷藏或室温保存。 砂土保存法：取清洁的砂，过 60 目筛去掉大砂粒，并用磁铁吸去砂中铁屑，再用 NaOH溶液、10% HCl 溶液和水交替清洗数次，干燥后，置于试管或安瓶管中保持 23cm 深，再经干热灭菌后，加入 1ml 菌种培养液，经充分混匀后，放入真空干燥器中，完全干燥后熔封保存。也可用二份洗净的砂（经 HCl 预处理）和一份贫瘠、过筛的黄土搀和后灭菌，再进行菌种保藏。 硅胶保存法：以 616 目的无色硅胶代替砂子，干热灭菌后，加入菌液。加菌液时，由于硅胶的吸附热常使温度升高，因而需设法加以冷却。 磁珠保存法：将菌液浸入素烧磁珠（或多孔玻璃珠）后再
31、进行干燥保存的一种方法。在螺旋口试管中装入 1/2 管高的硅胶（或无水 CaSO4），上铺玻璃棉，再放上 1020 粒 磁珠，经干热灭菌后，接入菌悬液，最后冷藏、室温保藏或减压干燥后密封保藏。本法对酵母菌很有效，特别适用于根瘤菌，可保存长达两年半时间。 麸皮保存法：在麸皮内加入 60%的水，经灭菌后接种培养，最后干燥保藏。 纸片（滤纸）保存法：将灭菌纸片浸入培养液或菌悬液中，常压或减压干燥后，置于装有干燥剂的容器内进行保存。5、寄主保存法：即令微生物侵入其寄主后加以保存的方法。6、冷冻保存法：适用于抗冻力强的微生物。这些微生物可在其菌体细胞外遭受冻结的情况下而不受损伤，而对其它大多数微生物而言
32、，无论在细胞外冻结还是在细胞内冻结，都会对菌体造成损伤，因此当采用这种保藏方法时，应注意以下几点， 要选择适于冷冻干燥的菌龄细胞； 要选择适宜的培养基，因为某些微生物对冷冻的抵抗力，常随培养基成分的变化而显示出巨大差异； 要选择合适的菌液浓度，通常菌液浓度越高，生存率越高，保存期也越长； 最好在菌液内不添加电解质（如食盐等）； 可在菌液内添加甘油等保护剂，以防止在冷冻过程中出现菌体大量死亡的现象。同样，也可添加各种糖类、去纤维血液和脱脂牛乳等具有良好保护效果的溶剂，但对有些微生物而言，不加保护剂时更有效。 原则上应尽快进行冷冻处理，但当加入保护剂时，可静置一段时间后再进行处理。 就动物细胞而言
33、，应在20范围内以 1/min 左右的速度缓慢降温，此后必须尽快降到贮藏温度；而对绝大多数微生物而言，则不必如此，如结构较为复杂的原虫则可在35范围内进行缓慢降温，而噬菌体则必需采用上述的二阶段法进行冷冻； 若进行长期保存，则贮藏温度越低越好； 取用冷冻保存的菌种时，应采取速融措施，即在 3540温水中轻轻振荡使之迅速融解。而就厌氧菌来说，则应选择静置融化的措施。当冷冻菌融化后，应尽量避免再次冷冻，否则菌体的存活率将显著下降。常用的冷冻保存法包括： 低温冰箱保存法（20、50或85）：低温冷冻保存时使用螺旋口试管较为方便，也可在棉塞试管外包裹塑料薄膜。保存时菌液加量不宜过多，有些可添加保护剂。
34、此外，也可用 5mm 的玻璃珠来吸附菌液，然后把玻璃珠置于塑料容器内，再放入低温冰箱内进行保存的。 干冰保存法（70左右）：即将菌种管插入干冰内，再置于冰箱内进行冷冻保存。 液氮保存法（196）：是适用范围最广的微生物保存法。其操作步骤如下，a、装安瓶管：使用尽量浓厚的菌体悬浮于含有适当防冻剂（保存霉菌不用防冻剂）的灭菌溶液中，将 0.21ml 的这种溶液分装于安瓶中，或在装有分散剂的安瓶中直接接种，或将菌丝体琼脂块直接悬浮于分散剂中。b、熔封安瓶管：若直接贮存于气相液氮中（150170）时，则不需熔封。c、检查安瓶管是否熔封良好：即在 4下，将熔封安瓶管在适当的色素溶液中浸泡 230 分钟后
35、，观察有无色素进入安瓶。d、缓慢冷却：将熔封安瓶管置于小罐中，然后用液氮气以约 1/min 的速度冷却至25左右，也可在2025的冰箱内缓慢冷却 3060min。 e、速冷：最后浸入液氮中快速冷却至196。7、冷冻干燥保存法：其原理是首先将微生物冷冻，然后在减压下利用升华现象除去水分。事实上，从菌体中除去大部分水分后，细胞的生理活动就会停止，因此可以达到长期维持生命状态的目的。该方法适用于绝大多数微生物菌种（包括噬菌体和立克次氏体等）的保存，其过程如图 6-1 所示。在进行冷冻干燥时，需注意以下几个问题：a、冷冻干燥前的培养条件：首先检验菌种纯度。一般地说，将待保存的微生物在营养丰富且容易增菌
36、的培养基上进行培养为宜；菌龄以达到对数生长期为好；若为有芽孢或孢子的微生物，则以芽孢和孢子形成以后进行保存为好；菌液浓度以高为好，如细菌应达到 1091010/ml。b、菌株号码等的标记：可在安瓶外侧标记或在安瓶内封入标签。c、安瓶的准备：将安瓶在 2%HCl 中浸泡过夜，自来水冲洗 3 次后，蒸馏水刷净，干燥，塞棉塞，贴标签，干热灭菌或温热灭菌后，60恒温干燥。d、添加保护剂：常用的保护剂有脱脂乳、12%蔗糖、加 7.5%葡萄糖的普通肉汤以及加 7.5%葡萄糖的血清等等。8、Bordelli 氏法：取干净的小试管（860mm）塞上棉塞，灭菌。用灭菌的脱脂牛乳洗脱试管斜面上的菌苔，制成浓厚菌悬液。然后用无菌吸管将菌悬液滴入小试管底部。每管一滴，然后转动小试管使菌液分散在试管底部的壁上。标记菌名。将小试管装在15150mm 的试管中，在大试管底部事先装上1.5cm 高的（P2O5 或 KOH），管口用带玻璃 管的橡皮塞塞紧，蜡封。将大试管与真空泵连通，抽真空至0.10.2mm 汞柱时，将玻璃管熔封，置室温暗处或冰箱保存。