维生素B测定精.pptx

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1、会计学 1维生素B 测定精维生素B6 测定n n 3 3、试剂和溶液 试剂和溶液n n 3.1 pH7 3.1 pH7 缓冲液称取 缓冲液称取29.3023g 29.3023g 磷酸氢二钠（磷酸氢二钠（GB 1263 GB 1263）和 和3.8115g 3.8115g 柠檬酸，于 柠檬酸，于100mL 100mL 容量瓶中，用煮沸后冷却 容量瓶中，用煮沸后冷却的水，溶解并定容至刻度。混匀备用。的水，溶解并定容至刻度。混匀备用。n n 3.2 3.2 维生素 维生素B6 B6 标准贮备溶液称取 标准贮备溶液称取40mg 40mg（中国药典参照（中国药典参照标准）维生素 标准）维生素B6 B6，

2、或复合维生素（中国药典参照标准），或复合维生素（中国药典参照标准）B640mg B640mg，B1100mg B1100mg，B250mg B250mg（精确至（精确至0.0001g 0.0001g）于）于100mL 100mL 容量瓶中，加水溶解定容至刻度，此液 容量瓶中，加水溶解定容至刻度，此液1mL 1mL 含 含400g 400g 的维生素 的维生素B6 B6。n n 3.3 3.3 维生素 维生素B6 B6 标准工作溶液 标准工作溶液n n 吸取（吸取（3.2 3.2）贮备液）贮备液1mL 1mL 于 于100mL 100mL 容量瓶中加水稀释 容量瓶中加水稀释至刻度，混匀，此液 至

3、刻度，混匀，此液1mL 1mL 含 含4g 4g 的维生素 的维生素B6 B6。第1 页/共23 页维生素B6 测定n n 4 仪器设备n n 4.1 荧光分光光度计；n n 4.2 分析天平：感量0.0001g。n n 4.3 实验室用器皿n n 容量瓶 1000mL，100mL，50mL，25mL。n n 刻度移液管 10mL，5mL，1mL。第2 页/共23 页维生素维生素B6B6测定测定n n 5、分析步骤n n 5.1 试样的选取和制备n n 选取有代表性的试样，粉碎通过0.28mm 孔筛，用四分法缩减至100g，密封保存，以防试样维生素B6 变化或变质。n n 5.2 测定步骤n

4、n 5.2.1 维生素B6 的提取n n 称取试样0.5 2g，（精确至0.0001g）于100mL 容量瓶中，加水溶解后，定容至刻度，振荡1 2min，静置待沉清，或离心（400r/min）10min。第3 页/共23 页维生素维生素B6B6测定测定n n 5.2.2 试样的测定n n 移取试样的上清液1mL（40gVB6）于25mL 容量瓶中，加入（3.1）pH7 缓冲液至刻度，混匀，用1cm 石英比色杯，置入荧光分光光度计内，于激发波长326nm、发射波长395nm 测定其荧光强度。n n 同时做空白试验。第4 页/共23 页维生素维生素B6B6测定测定n n 5.2.3 工作曲线的绘制

5、n n 取0.00，0.50，1.00，1.50，2.00，2.50mL 维生素B6 标准工作液（3.3）分别于25mL 容量瓶中，加入pH7 缓冲液（3.1）至刻度，混匀，用1cm石英比色杯，置入荧光分光光度计内，于激发波长326nm、发射波长395nm 测定其荧光强度，以荧光强度为纵坐标，维生素B6 量为横坐标，绘制工作曲线。第5 页/共23 页维生素B6 测定n n 6 分析结果计算和表述n n 维生素B6 的含量（mg/kg）按下式计算：n n VB6（mg/kg）MD/W（1000/1000）MD/W n n 式中：M 工作曲线上查得维生素B6 含量，g/mL；n n W 试样的质量

6、，g；n n D 试样的总体积，mL。第6 页/共23 页维生素B6 测定n n 7、允许差n n 7.1 每个试样称取两份平行测定，取算术平均值为测定结果并保留两位小数。n n 7.2 维生素B6 含量少于40mg/kg 以下，平行测定结果相对差值不大于10，维生素B6 含量大于40mg/kg 的平行测定结果相对差值不大于5。/P第7 页/共23 页维生素B2 测定 n n 1、适用范围n n 本标准规定了饲料中维生素B2 测定方法。n n 本标准适用于维生素B2 的测定。待测液中维生素n n B2 检测浓度为0.05 0.2g/mL。第8 页/共23 页维生素B2 测定n n 2、方法原理

7、n n 维生素B2（即核黄素C17H20N1O6）在440nm 紫外光激发下产生绿色荧光，在一定浓度范围内n n 其荧光强度与核黄素浓度成正比。用连二亚硫酸钠还原核黄素成无荧光物质，由还原前后荧光n n 强度之差与内标荧光强度的比值，计算样品核黄素的含量。第9 页/共23 页维生素B2 测定n n 3、试剂和溶液n n 3.1 盐酸溶液，0.1mol/L：将8.5mL盐酸（GB 622）用水稀释至1000mL。n n 3.2 盐酸溶液，1mol/L。n n 3.3 氢氧化钠（GB 629）溶液，1mol/L。n n 3.4 冰乙酸（GB 676）。n n 3.5 冰乙酸溶液，0.02mol/L

8、：将1.8mL 冰乙酸用水稀释至1000mL。n n 3.6 高锰酸钾（GB 643）溶液，40g/L。n n 3.7 过氧化氢（HG 31082）溶液，100mL/L。现用现配。第10 页/共23 页维生素B2 测定n n 3.8 3.8 核酸素标准溶液 核酸素标准溶液n n 3.8.1 3.8.1 核黄素贮备液 核黄素贮备液：核黄素（中国药典参照标准），：核黄素（中国药典参照标准），于五氧化二磷干燥器中干燥 于五氧化二磷干燥器中干燥24h 24h，称取，称取0.0500g 0.0500g，溶解于，溶解于0.02mol/L 0.02mol/L 乙酸溶液（乙酸溶液（4.5 4.5）中，在蒸汽浴

9、上恒速搅动直）中，在蒸汽浴上恒速搅动直至溶解，冷却后稀释至 至溶解，冷却后稀释至500mL 500mL。盛入棕色瓶滴加甲苯。盛入棕色瓶滴加甲苯覆盖，低温（覆盖，低温（4 4）保存。）保存。n n 该溶液每毫升含 该溶液每毫升含0.1mg 0.1mg 核黄素。核黄素。n n 3.8.2 3.8.2 核黄素贮备液 核黄素贮备液：取核黄素贮备液：取核黄素贮备液（4.8.1 4.8.1）10mL 10mL 用 用0.02mol/L 0.02mol/L 乙酸溶液稀释至 乙酸溶液稀释至100mL 100mL，盛于棕色瓶中滴加甲苯覆盖，低温（盛于棕色瓶中滴加甲苯覆盖，低温（4 4）保存。）保存。n n 该溶

10、液每毫升中含 该溶液每毫升中含10g 10g 核黄素。核黄素。n n 3.8.3 3.8.3 核黄素标准工作液：取核黄素贮备液 核黄素标准工作液：取核黄素贮备液（4.8.2 4.8.2）10mL 10mL，用水稀释至，用水稀释至 100mL 100mL。现用现配。现用现配。n n 该溶液每毫升中含 该溶液每毫升中含1g 1g 核黄素。核黄素。第1 1 页/共23 页维生素B2 测定n n 3.9 3.9 荧光素标准溶液 荧光素标准溶液n n 3.9.1 3.9.1 荧光素贮备液：称取荧光素（荧光素贮备液：称取荧光素（Q/HG Q/HG 22786 22786）0.0500g 0.0500g，用

11、水稀释至，用水稀释至1000mL 1000mL，盛于棕色瓶中，盛于棕色瓶中，低温（低温（4 4）保存。）保存。n n 该溶液每毫升中含 该溶液每毫升中含50g 50g 荧光素。荧光素。n n 3.9.2 3.9.2 荧光素标准工作液：取荧光素贮备液 荧光素标准工作液：取荧光素贮备液（4.9.1 4.9.1）1mL 1mL，用水定容至，用水定容至1000mL 1000mL，盛入棕色瓶中，盛入棕色瓶中，低温保存。低温保存。n n 该溶液每毫升中含 该溶液每毫升中含0.05g 0.05g 荧光素。荧光素。n n 3.10 3.10 溴钾酚绿 溴钾酚绿pH pH 指示剂：取溴钾酚绿（指示剂：取溴钾酚绿

12、（HGB HGB 3386 3386）0.1g 0.1g，加氢氧化钠溶液（，加氢氧化钠溶液（0.05mol/L 0.05mol/L）2.8mL 2.8mL 使之 使之溶解，再加水稀释至 溶解，再加水稀释至200mL 200mL。变色范围。变色范围ph4.6 ph4.6 5.2 5.2。n n 3.11 3.11 连二亚硫酸钠（连二亚硫酸钠（Na2S2O4 Na2S2O4）（）（Q/HG 2001 Q/HG 2001），防），防止吸潮。止吸潮。第12 页/共23 页维生素B2 测定n n 4、仪器、设备n n 4.1 荧光分光光度计。n n 4.2 分析天平：感量0.0001g。n n 4.3

13、电热恒温水浴。n n 4.4 具塞玻璃刻度试管，15mL。n n 5、试样的制备n n 采集具有代表性的样品至少500g，四分法缩减至100g，磨碎，通过0.28mm 孔筛，混匀，装入密闭容器中，避光低温保存备用。第13 页/共23 页维生素B2 测定n n 6、分析步骤n n 6.1 称样：称取1 2g，精确至0.001g。精确至0.0001g，将试样置于100mL容量瓶中。第14 页/共23 页维生素B2 测定n n 6.2 6.2 样液的制备：向盛样品的容量瓶中加 样液的制备：向盛样品的容量瓶中加65mL 65mL 盐酸溶液 盐酸溶液（3.1 3.1），于沸水浴中加热），于沸水浴中加热3

14、0min 30min，开始加热，开始加热5 5 10min 10min 时 时常摇动容量瓶，以防样品结块。或于 常摇动容量瓶，以防样品结块。或于121 121 123 123 15 15 磅 磅高压釜中加热 高压釜中加热30min 30min。冷却至室温后，用氢氧化钠溶液。冷却至室温后，用氢氧化钠溶液（3.3 3.3）调节）调节pH pH 至 至6.0 6.0 6.5 6.5，然后立即加稀盐酸溶液，然后立即加稀盐酸溶液（3.2 3.2）使）使pH pH 值约为 值约为4.5 4.5（溴甲酚绿指示剂变为草绿色）。（溴甲酚绿指示剂变为草绿色）。用水稀释至刻度。用水稀释至刻度。n n 通过中速无灰滤

15、纸过滤，弃去最初 通过中速无灰滤纸过滤，弃去最初5 5 10mL 10mL 溶液，溶液，收集滤液于 收集滤液于100mL 100mL 锥形瓶中。取整份清液，滴加稀盐 锥形瓶中。取整份清液，滴加稀盐酸检查蛋白质如有沉淀生成，继续加氢氧化钠溶液，酸检查蛋白质如有沉淀生成，继续加氢氧化钠溶液，剧烈振摇，使之沉淀完全稀释到测量体积。对高含量 剧烈振摇，使之沉淀完全稀释到测量体积。对高含量样品，取整分的澄清液，用水稀释至一定体积使含核 样品，取整分的澄清液，用水稀释至一定体积使含核黄素约为 黄素约为0.1g/mL 0.1g/mL（以下操作避免紫外光照射）。（以下操作避免紫外光照射）。第15 页/共23

16、页维生素B2 测定n n 6.3 杂质氧化：于a、b、c 三支15mL刻度试管（4.4）中各吸入样液（6.2）10mL，同时做平行，向试管a、b、c 中各加入1mL 蒸馏水，向试管b 中加入1mL 核黄素工作液（3.8.3）。然后各加入冰乙酸（3.4）1mL，旋摇混匀后逐个加高锰酸钾溶液（3.6）0.5mL，旋摇混匀，静置2min，再逐个加入过氧化氢溶液（3.7）0.5mL 旋摇，使高锰酸钾颜色在10s 内消退。加盖摇动，使试管中的气体逸尽。第16 页/共23 页维生素B2 测定n n 6.4 测定：用荧光素溶液（3.9.2）调整荧光仪，使其稳定于一定数值，作为仪器工作的固定条件。调整激发波长

17、440nm，发射波长525nm，测定试管a、b 的荥光强度，样液在仪器中受激发光照射不超过10s。在试管c 中加入20mg 连二亚硫酸钠，摇动溶解，并使试管中的气体逸出，迅速测定卒荧光强度作为空白。若溶液出现浑浊，不能读数。第17 页/共23 页维生素B2 测定n n 7 7、计算方法和公式 计算方法和公式n n 核黄素（维生素 核黄素（维生素B2 B2）含量以）含量以mg/kg mg/kg（或（或g/kg g/kg）表示，按下式计算：）表示，按下式计算：n n 核黄素（核黄素（VB2mg/kg VB2mg/kg）（A A C C）/（B B A A）（M/m M/m）（V/V1 V/V1）R

18、 R n n 式中：式中：n n A A 试管 试管a a（样液加水）的荧光强度；（样液加水）的荧光强度；n n B B 试管 试管b b（样液加标样）的荧光强度；（样液加标样）的荧光强度；n n z z 试管 试管c c（样液加连二亚硫酸钠）的荧光强度；（样液加连二亚硫酸钠）的荧光强度；n n m m 加入核黄素标样的量，加入核黄素标样的量，g g；n n V V 样液的初始体积，样液的初始体积，mL mL；n n V1 V1 测定时分取样液的体积，测定时分取样液的体积，mL mL；n n m m 试样质量，试样质量，g g。n n R R 稀释倍数。稀释倍数。n n A-C/B-A A-C

19、/B-A 值应在 值应在0.66 0.66 1.5 1.5，否则需调整样液的浓度。，否则需调整样液的浓度。n n 平行测定结果用算术平均值表示，保留有效数 平行测定结果用算术平均值表示，保留有效数3 3 位。位。第18 页/共23 页维生素B2 测定n n 8、重复性n n 同一分析者对同一试样同时或快速连续进行两次测定，所得结果之间的差值：n n 在核黄素含量小于或等于5.0mg/kg时，不得超过平均值的15。n n 在核黄素含量大于5.0mg/kg 时，不得超过平均值的10。n n 在核黄素含量大于50mg/kg 时不得超过平均值的5。/P第19 页/共23 页第20 页/共23 页第21 页/共23 页第22 页/共23 页