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1、会计学 1维生素C注射剂的含量分析 实验目的n n 根据含量分析，从自主设计的处方中，选出最佳处 根据含量分析，从自主设计的处方中，选出最佳处方。方。第1页/共20页 维生素C注射液检查n n PH PH值 值:应为 应为5.0-7.0 5.0-7.0 n n 颜色 颜色:取本品 取本品,加水稀释成每 加水稀释成每1ml 1ml中含维生素 中含维生素C50mg C50mg的 的溶液 溶液,照紫外可见分光光度法 照紫外可见分光光度法,在 在420nm 420nm的波 的波 长初测 长初测定吸光度 定吸光度,不得过 不得过0.06.0.06.n n 细菌内毒素 细菌内毒素:取本品 取本品,依法检查
2、 依法检查,每 每1mL 1mL中含内毒素应 中含内毒素应小于 小于2.5EU.2.5EU.n n 装量 装量 n n 装量差异 装量差异 n n 可见异物 可见异物 n n 不溶性微粒 不溶性微粒 n n 无菌 无菌 第2页/共20页 含量分析方法简介n n 碘量法 碘量法n n 2 2，6-6-二氯靛酚滴定法 二氯靛酚滴定法n n 菲林 菲林B B近红外分光光度法 近红外分光光度法n n 紫外分光光度法 紫外分光光度法n n 旋光法 旋光法n n 双波长薄层扫描法 双波长薄层扫描法n n*HPLC*HPLC法 法*实验采用方法第3页/共20页 碘量法n n 实验方法 实验方法 精密称取注射
3、剂适量，加水 精密称取注射剂适量，加水50ml 50ml稀释至 稀释至4mg/mL 4mg/mL与丙 与丙酮 酮2ml,2ml,摇匀 摇匀,放置 放置5min,5min,加稀醋酸 加稀醋酸4ml 4ml与 与 淀粉指示液 淀粉指示液1ml,1ml,用碘滴定液 用碘滴定液(0.05mol/L)(0.05mol/L)滴定 滴定,至溶液显蓝色并 至溶液显蓝色并持续 持续30 30秒不褪色 秒不褪色.每 每1ml 1ml碘滴定 碘滴定(0.05mol/L)(0.05mol/L)相当于 相当于8.806mg 8.806mg的维生素 的维生素C C。第4页/共20页 2，6-二氯靛酚滴定法n n 实验方法
4、 实验方法 精密量取注射液适量（约相当于维生素 精密量取注射液适量（约相当于维生素C50mg C50mg），置），置于 于100mL 100mL容量瓶中，加偏磷酸 容量瓶中，加偏磷酸-醋酸试液 醋酸试液20mL 20mL，用水，用水稀释至刻度，摇匀；精密量取稀释液适量（约相当 稀释至刻度，摇匀；精密量取稀释液适量（约相当于维生素 于维生素C2mg C2mg）置）置50mL 50mL锥形瓶中，加加偏磷酸 锥形瓶中，加加偏磷酸-醋酸 醋酸试液 试液5mL 5mL，用，用2 2，6-6-二氯靛酚滴定液滴定，至溶液现 二氯靛酚滴定液滴定，至溶液现玫瑰红色，并持续 玫瑰红色，并持续5S 5S不褪；另取偏
5、磷酸 不褪；另取偏磷酸-醋酸试液 醋酸试液5.5mL 5.5mL，加水，加水15mL 15mL，用，用2 2，6-6-二氯靛酚滴定液滴定，二氯靛酚滴定液滴定，作空白试验校正。以 作空白试验校正。以2 2，6-6-二氯靛酚滴定液浓度体积 二氯靛酚滴定液浓度体积以及相应维生素 以及相应维生素C C滴定度计算。滴定度计算。第5页/共20页n n 实验方法 实验方法 取两支 取两支10 mL 10 mL具塞比色管，其中一支加入适量的维生 具塞比色管，其中一支加入适量的维生素 素C C注射剂 注射剂(在稀释后浓度小于 在稀释后浓度小于50 mg 50 mg L)L)，另一支不，另一支不加；然后分别依次加
6、入 加；然后分别依次加入2 mL 2 mL的 的Folin B Folin B试剂，用 试剂，用pH3 pH3三氯乙酸溶液稀释至刻度，摇匀，反应 三氯乙酸溶液稀释至刻度，摇匀，反应5 min 5 min后，以 后，以试剂空白为参比，使用 试剂空白为参比，使用l cm l cm玻璃吸收池在 玻璃吸收池在920 nm 920 nm波 波长处测定吸光度 长处测定吸光度A A值。平行测量 值。平行测量3 3次，取平均值。次，取平均值。菲林B近红外分光光度法第6页/共20页 菲林B近红外分光光度法n n 标准曲线制备 标准曲线制备 分别准确配制浓度为 分别准确配制浓度为0-50.0 mg/L 0-50.
7、0 mg/L的维生素 的维生素C C系列标准工 系列标准工作液，按上述实验方法测定吸光度 作液，按上述实验方法测定吸光度。n n 线性回归做标准曲线。线性回归做标准曲线。n n 根据标准曲线求出维生素 根据标准曲线求出维生素C C含量。含量。第7页/共20页 紫外分光光度法n n 实验方法 实验方法 在 在10mL 10mL比色管中依次加入 比色管中依次加入pH=pH=9 9.5.5醋酸一醋酸钠缓冲溶 醋酸一醋酸钠缓冲溶液 液2mL 2mL，1 1 06 06 g/g/mL mL甲基紫 甲基紫2mL 2mL；在其中一个比色管；在其中一个比色管中加人一定量的维生素 中加人一定量的维生素C C注射
8、液 注射液(在稀释后浓度小于 在稀释后浓度小于50 mg 50 mg L)L)，在另一个比色管中不加维生素，在另一个比色管中不加维生素C C注射液 注射液；用二次蒸馏水定容，摇匀。用水作 用二次蒸馏水定容，摇匀。用水作空白 空白，1cm 1cm 比色 比色皿于 皿于265nm 265nm 处，测定吸光度 处，测定吸光度。第8页/共20页 紫外分光光度法n n 标准曲线制备 标准曲线制备 分别准确配制浓度为 分别准确配制浓度为0-50.0 mg/L 0-50.0 mg/L的维生素 的维生素C C系列标准 系列标准工作液，按上述实验方法测定吸光度 工作液，按上述实验方法测定吸光度。n n 线性回归
9、做标准曲线。线性回归做标准曲线。n n 根据标准曲线求出维生素 根据标准曲线求出维生素C C含量。含量。第9页/共20页 旋光法n n 旋光度与浓度的关系 旋光度与浓度的关系 精密称取 精密称取105 105 干燥恒重的维生素 干燥恒重的维生素C C对照品 对照品0.4931g 0.4931g，0.7995g 0.7995g，1.0184g 1.0184g，1.2503g 1.2503g，1.5551g 1.5551g，2.0261 g 2.0261 g，分别置，分别置50mL 50mL容量瓶中，用 容量瓶中，用5 5碳酸氢钠溶液稀释至 碳酸氢钠溶液稀释至刻度，刻度，以 以5 5 碳酸氢钠溶液
10、为空白，依法测定它们 碳酸氢钠溶液为空白，依法测定它们的旋光度，的旋光度，以旋光度对浓度作线性回归。以旋光度对浓度作线性回归。第10页/共20页 旋光法n n 实验方法 实验方法 量取维生素 量取维生素C C注射液适量，用 注射液适量，用5 5碳酸氢钠溶液将样品 碳酸氢钠溶液将样品稀释成浓度为 稀释成浓度为25 mg/mL 25 mg/mL，按上述方法进行测定，按上述方法进行测定，每 每个样品测定 个样品测定3 3次，代入直线回归方程。计算出含量。次，代入直线回归方程。计算出含量。第1 1页/共20页 双波长薄层扫描法n n 实验方法 实验方法n n 对照品溶液的制备：取维生素 对照品溶液的制
11、备：取维生素C C对照品 对照品30mg 30mg置 置10mL 10mL容 容量瓶中，加入 量瓶中，加入95 95 乙醇溶液适量，溶解后用 乙醇溶液适量，溶解后用95 95乙 乙醇稀释至刻度。醇稀释至刻度。n n 扫描条件的确定：双波长反射法锯齿扫描：扫描条件的确定：双波长反射法锯齿扫描：s s254nm 254nm，R R320nm 320nm，SX=3 SX=3。n n 线性关系考察 线性关系考察:用微量进样器吸取对照品溶液 用微量进样器吸取对照品溶液2.0 2.0，3.0 3.0，4.0 4.0，5.0 5.0，6.0 L 6.0 L点样，展开缸中暗处饱和 点样，展开缸中暗处饱和15
12、15分钟，再将点样品的一端浸入展开剂 分钟，再将点样品的一端浸入展开剂(氯仿一乙醇 氯仿一乙醇一冰醋酸一水 一冰醋酸一水=54=54：27 27：10 10：5)5)中展开，展开约 中展开，展开约10cm 10cm，取出薄层板，扫描。以对照品质量为横坐标，峰，取出薄层板，扫描。以对照品质量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，进行直线回归。面积积分值为纵坐标，进行直线回归。第12页/共20页 双波长薄层扫描法n n 样品的含量测定 样品的含量测定 量取维生素 量取维生素C C注射液加入 注射液加入95 95乙醇稀释至 乙醇稀释至3mg/mL 3mg/mL至刻度，至刻度，振摇，取续滤液作为供试品溶液。
13、精密吸取供试品溶 振摇，取续滤液作为供试品溶液。精密吸取供试品溶液 液4.0 L 4.0 L，维生素，维生素C C对照品溶液 对照品溶液3.0 L 3.0 L，5.0 L 5.0 L，分别点于同一薄层板上，依法展开，扫描，用外标，分别点于同一薄层板上，依法展开，扫描，用外标二点法测定样品中维生素 二点法测定样品中维生素C C的含量。的含量。第13页/共20页 HPLC法n n 色谱条件 色谱条件n n 色谱柱 色谱柱：6-mm 150-mm 6-mm 150-mm；n n 流动相：流动相：溶解 溶解15.6g 15.6g磷酸氢二钠和 磷酸氢二钠和12.2 g 12.2 g 磷酸氢二 磷酸氢二钾
14、于 钾于 2000 mL 2000 mL 水中 水中,用磷酸调 用磷酸调 到 到 2.5 0.05 2.5 0.05；n n 检测波长 检测波长：245-nm 245-nm；n n 流速 流速：1 m 1 mL L min min-1 1;n n 进样量：进样量：20L;20L;第14页/共20页 HPLC法n n 保留时间确定：用流动相配制维生素 保留时间确定：用流动相配制维生素C C标准品浓度为 标准品浓度为0.5mg/mL 0.5mg/mL定位；定位；n n 有关物质检测：用流动相配制空白辅料溶液，检测 有关物质检测：用流动相配制空白辅料溶液，检测辅料是否有干扰；辅料是否有干扰；n n
15、处方样品测定：用流动相稀释处方注射液到 处方样品测定：用流动相稀释处方注射液到0.5mg/mL 0.5mg/mL，每次进样，每次进样20L 20L，每个处方取样，每个处方取样3 3份，每 份，每份进 份进6 6针。针。n n 根据回归方程计算含量 根据回归方程计算含量第15页/共20页 HPLC法n n 标准曲线制备 标准曲线制备n n 取维生素 取维生素C C标准品约 标准品约221mg 221mg，精密称定，置，精密称定，置50mL 50mL量瓶 量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为储备 中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为储备液。分别精密量取储备液适量，用流动相稀释成每 液。
16、分别精密量取储备液适量，用流动相稀释成每1mL 1mL含 含0.26 0.26 0.70 m g 0.70 m g的递度标准液，用上述的色谱 的递度标准液，用上述的色谱条件测定。以浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，条件测定。以浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，得回归方程。得回归方程。(n=6)(n=6)第16页/共20页参考文献n n 李 艳等，旋光法测定维生素c注射液的含量，辽 宁 药 物 与临 床，1999，2(2);11n n 杨婷等.菲林B近红外分光光度法测定维生素C.分析化学研究简报.2005.11(33).1593-1595n n 陆 茜 等，紫外分光光度法测定维生素C含量，江汉大学学
17、报(自然科学版)，2005，33(2),n n 仉玲等，紫外分光光度法测定维生素C注射剂的含量，安徽医药，2001,S(4)n n 肖本富等,高效液相色谱法测定血浆中维生素C的含量苏州大学学报(医学版)2004；24(6)n n 杨辉等,双波长薄层扫描法测定维生素C的含量锦州l矗学院学报，2006，27(3)n n 胡晓艳.HPLC测定力度申泡腾片中维生素C的含量.广东药学.2005.15(1);8-10n n 谭甜有,钟世顺,李丽明.HPLC测定健元片中维生素C含量的方法研究.国际医药卫生导报.2006.12(12):107-109第17页/共20页n n 贾湘曼等.分光光度法测定抗坏血酸中
18、草酸盐含量.河北医药.2005.27(9):703-704n n 张元广.维生素C片剂的紫外分光光度法测定.2002.8(3):26-27n n 徐黔江等.间接分光光度法测定抗坏血酸含量.贵阳医学院学报.2001.26(2).129-130n n 国家药典委员会.中华人民共和国药典.北京:化学工业出版社,2005 年,二部:670n n 王迎春等.薄层扫描法测定维生素C片剂中维生素C的含量.数理医药学杂志.2001.14(5).166n n 黄胜堂等.片剂中维生素C含量的差示旋光法测定.咸宁医学院学报.1998.12(3).180-182n n 刘文英.药物分析.人民卫生出版社.1980.226-229n n USP29 NF24 Page 194 第18页/共20页谢谢。第19页/共20页