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1、 脂质体制备脂质体制备(zhbi)(zhbi)技术技术 药剂药剂(yoj)(yoj)教研室教研室 吴琳华吴琳华第一页，共八十四页。内容提要(ni rn t yo)n脂质体的概念脂质体的概念n脂质体的组成、结构、理化性质脂质体的组成、结构、理化性质与分类与分类n脂质体的制备方法脂质体的制备方法 n脂质体的质量研究脂质体的质量研究(ynji)(ynji)n特殊性能脂质体特殊性能脂质体n脂质体的作用机理脂质体的作用机理n脂质体的特点脂质体的特点第二页，共八十四页。第一第一(dy)节节概概述述 脂脂脂脂质质质质体体体体(liposomes)(liposomes)(liposomes)(liposome
2、s)将将药药物物包包封封(bo(bo fn)fn)于于类类脂脂质质双双分分子子层层内而形成的内而形成的微型囊泡微型囊泡。第三页，共八十四页。脂质体的研究进展脂质体的研究进展n19651965年，英国年，英国(yn u)(yn u)BanghanBanghan作为研究作为研究生物膜的模生物膜的模型型提出的。提出的。n2020世纪世纪7070年代初期，年代初期，GregoriadisGregoriadis首先提出用脂质首先提出用脂质体作为体作为-半乳糖苷酶半乳糖苷酶载体治疗糖原积累疾病。载体治疗糖原积累疾病。第四页，共八十四页。脂质体的研究进展脂质体的研究进展n第一个第一个药用脂质体药用脂质体制剂
3、制剂(1988(1988年年,瑞士瑞士)益康唑脂质体凝胶益康唑脂质体凝胶n第一个第一个脂质体注射剂脂质体注射剂(19901990年美国年美国(mi u)(mi u)两性霉素两性霉素B B脂质体脂质体n第一个第一个抗癌药物脂质体抗癌药物脂质体(19951995年，美国年，美国)阿柔比星脂质体阿柔比星脂质体第五页，共八十四页。一、脂质体的组成一、脂质体的组成(z chn)(z chn)磷脂磷脂(ln zh)亲水的头部亲水的头部磷酸磷酸(ln sun)骨架骨架水溶性分子胆碱、丝氨酸等水溶性分子胆碱、丝氨酸等疏水的尾部疏水的尾部胆固醇胆固醇脂质体脂质体第二节第二节 脂质体的组成、结构、理化性质与分类脂
4、质体的组成、结构、理化性质与分类两条脂肪酸链，两条脂肪酸链，10-24个个C原子，原子，0-6个双键个双键第六页，共八十四页。磷脂磷脂(ln zh)示意图示意图脂质体的组成脂质体的组成(z chn)(z chn)胆固醇的结构图胆固醇的结构图第七页，共八十四页。脂质体材料脂质体材料(cilio)中性中性(zhngxng)磷磷脂脂 负电荷磷脂负电荷磷脂(ln zh)酸性磷脂酸性磷脂正电荷脂质正电荷脂质 胆固醇胆固醇Ch)Ch)大豆甾醇及其葡萄糖苷大豆甾醇及其葡萄糖苷磷脂酰胆碱磷脂酰胆碱PCPC磷脂酰乙醇胺磷脂酰乙醇胺PEPE鞘磷脂鞘磷脂SMSM磷脂酸磷脂酸PAPA磷脂酰甘油磷脂酰甘油PGPG磷脂酰
5、肌醇磷脂酰肌醇(PI)(PI)磷脂酰丝氨酸磷脂酰丝氨酸(PS)(PS)硬脂酰胺硬脂酰胺SASA胆固醇衍生物胆固醇衍生物大豆甾醇葡萄糖苷大豆甾醇葡萄糖苷(SG(SG大豆甾醇大豆甾醇SSSS脂质体的组成脂质体的组成第八页，共八十四页。1 1、中性磷脂、中性磷脂磷脂酰胆碱磷脂酰胆碱(phosphatidyl choline,PC(phosphatidyl choline,PC，)天然的天然的PC PC a.a.脂质体的主要组成局部脂质体的主要组成局部(z chn b fn)(z chn b fn)b.b.从蛋黄、大豆、牛心脏和脊髓提取从蛋黄、大豆、牛心脏和脊髓提取c.c.是一种混合物，每一种是一种混
6、合物，每一种PCPC具有不同长度、不同饱和度的脂肪链。具有不同长度、不同饱和度的脂肪链。植物性植物性PCPC的脂肪链具有高度不饱和性的脂肪链具有高度不饱和性 动物性动物性PCPC的脂肪链大局部是饱和的的脂肪链大局部是饱和的合成的合成的PC PC 二棕榈酰胆碱二棕榈酰胆碱DPPC)DPPC)、二硬脂酰胆碱、二硬脂酰胆碱(DSPC)(DSPC)二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱DMPC)DMPC)脂质体的组成脂质体的组成(z chn)(z chn)中性磷脂中性磷脂第九页，共八十四页。脂质体的组成中性脂质体的组成中性(zhngxng)(zhngxng)磷脂磷脂磷脂磷脂(ln zh)(ln zh
7、)酰胆碱酰胆碱(PC)(PC)(a)(a)全饱和磷脂全饱和磷脂(ln(ln zh)zh)紧密排列紧密排列(b)(b)非饱和磷脂非饱和磷脂不能紧密列不能紧密列磷脂脂肪链的饱和度对磷脂膜排列的影响磷脂脂肪链的饱和度对磷脂膜排列的影响第十页，共八十四页。脂质体的组成脂质体的组成(z chn)(z chn)中性磷中性磷脂脂 磷脂酰乙醇胺磷脂酰乙醇胺(phosphatid ethanolamine,PE)(phosphatid ethanolamine,PE)特性特性;头部基团小；头部基团小；非饱和的非饱和的PEPE容易容易(rngy)(rngy)形成非双层结构形成非双层结构型型 形成六角相制备特殊脂质
8、体形成六角相制备特殊脂质体六角六角(li(li jio)jio)相相 磷脂酰乙醇胺磷脂酰乙醇胺PEPE第十一页，共八十四页。鞘磷脂鞘磷脂sphingomyelin,SMsphingomyelin,SM 特性：酰胺键和羟基基团特性：酰胺键和羟基基团(j tun)(j tun)之间形成氢键相互作用，因此，比之间形成氢键相互作用，因此，比PCPC具有更高秩序的胶相。具有更高秩序的胶相。脂质体的组成中性脂质体的组成中性(zhngxng)(zhngxng)磷脂磷脂SMSM第十二页，共八十四页。脂质体的组成脂质体的组成(z chn)(z chn)磷脂酸磷脂酸(phosphatidic acid,PA)磷脂
9、磷脂(ln zh)酰肌醇酰肌醇(phosphatidyl inositol,PI)磷脂磷脂(ln zh)酰丝酰丝氨酸氨酸(phosphatidyl serine,PS)2 2、负电荷磷脂酸性磷脂、负电荷磷脂酸性磷脂第十三页，共八十四页。3 3、胆固醇、胆固醇(cholesterol,Ch)(cholesterol,Ch)膜的另一类重要组成成分。膜的另一类重要组成成分。存在：动物细胞的质膜中含量较高，植物中含量较少。存在：动物细胞的质膜中含量较高，植物中含量较少。性质：为中性脂质，亦属于双亲性分子，但亲油性大于亲水性。性质：为中性脂质，亦属于双亲性分子，但亲油性大于亲水性。在脂质体中的状态：作为
10、两性分子，能嵌镶入膜，羟基团朝向亲水面，脂肪族的链朝向在脂质体中的状态：作为两性分子，能嵌镶入膜，羟基团朝向亲水面，脂肪族的链朝向并平行于磷脂并平行于磷脂(ln zh)(ln zh)双层中心的烃链。胆固醇本身不形成脂质双层结构，但它能双层中心的烃链。胆固醇本身不形成脂质双层结构，但它能以高浓度方式掺入磷脂以高浓度方式掺入磷脂(ln zh)(ln zh)膜。膜。在脂质体中的作用：主要与磷脂相结合，阻止磷脂凝集成晶体结构。减弱膜中类脂与蛋在脂质体中的作用：主要与磷脂相结合，阻止磷脂凝集成晶体结构。减弱膜中类脂与蛋白质复合体之间的连接，像白质复合体之间的连接，像“缓冲剂一样起着调节膜结构缓冲剂一样起
11、着调节膜结构“流动性的作用。流动性的作用。脂质体的组成脂质体的组成(z chn)(z chn)第十四页，共八十四页。脂质体的组成脂质体的组成(z chn)(z chn)胆固醇与磷脂胆固醇与磷脂(ln zh)的排列示意图的排列示意图第十五页，共八十四页。4 4、正电荷脂质、正电荷脂质硬脂酰胺硬脂酰胺(sterylamine,SA)(sterylamine,SA)、胆固醇衍生物。、胆固醇衍生物。普遍应用于基因的传递系统普遍应用于基因的传递系统 5 5、大豆、大豆(ddu)(ddu)甾醇及其葡萄糖苷甾醇及其葡萄糖苷 为纯天然品，较平安，价格廉价。为纯天然品，较平安，价格廉价。大豆甾醇葡萄糖苷大豆甾醇
12、葡萄糖苷(SG)(SG)是从提炼豆油残渣中别离出来的甾醇葡萄糖苷的混合物。是从提炼豆油残渣中别离出来的甾醇葡萄糖苷的混合物。能提高脂质体的肝靶向性。能提高脂质体的肝靶向性。大豆甾醇大豆甾醇soybean sterol,SSsoybean sterol,SS 是是SGSG去葡萄糖残基的水解产物。与去葡萄糖残基的水解产物。与ChCh结构相似，能提高脂质体稳定性，结构相似，能提高脂质体稳定性，其膜稳定作用大于其膜稳定作用大于ChCh。脂质体的组成脂质体的组成(z chn)(z chn)第十六页，共八十四页。二、脂质体的结构二、脂质体的结构双分子结构：磷脂分子的亲水端呈双分子结构：磷脂分子的亲水端呈弯
13、曲的弧形，形似弯曲的弧形，形似“手杖，与手杖，与胆固醇分子的亲水基团相结合，形胆固醇分子的亲水基团相结合，形成成“U“U形结构。两个形结构。两个(lin)“U(lin)“U形结构相形结构相对对排列，那么形成双分子结构。排列，那么形成双分子结构。第二节第二节 脂质体的组成、结构、理化性质脂质体的组成、结构、理化性质(xngzh)(xngzh)与分与分类类卵磷脂与胆固醇在脂质体中的排列卵磷脂与胆固醇在脂质体中的排列(pili)形式形式第十七页，共八十四页。脂质体的结构脂质体的结构类似生物膜类似生物膜，在脂质体的水相和脂质双分子层，在脂质体的水相和脂质双分子层组成的膜内可以组成的膜内可以包裹包裹(b
14、ogu)多种物质多种物质。包包裹物质裹物质(wzh)脂溶性药物脂溶性药物(yow)定位于双分子层脂质膜间定位于双分子层脂质膜间两性化合物两性化合物 定位在水相与膜内部交界磷脂上定位在水相与膜内部交界磷脂上水溶性药物水溶性药物 包裹在水相包裹在水相不能不能包包裹物质裹物质在水相和有机溶剂中都不溶的物质在水相和有机溶剂中都不溶的物质 在两种介质中溶解性都非常好的物质在两种介质中溶解性都非常好的物质 脂质体的结构脂质体的结构第十八页，共八十四页。单室脂质体单室脂质体多室脂质体多室脂质体第十九页，共八十四页。三、脂质体的理化三、脂质体的理化(lhu)性质性质第二节第二节 脂质体的组成脂质体的组成(z
15、chn)(z chn)、结构、理化性质与分、结构、理化性质与分类类理化理化(lhu)性质性质相变温度相变温度膜的通透性膜的通透性膜的流动性膜的流动性 脂质体荷电性脂质体荷电性第二十页，共八十四页。1 1、相变温度相变温度(wnd)(phase transition temperature,Tc)脂质体脂质体升高升高(shn o)温度温度至至一定一定(ydng)温温度度膜的物理性质改变膜的物理性质改变膜的横切面增加、双分子层厚膜的横切面增加、双分子层厚度减少、膜流动性加度减少、膜流动性加 脂质双分子层中酰基侧链排列改变脂质双分子层中酰基侧链排列改变 有序排列变为无序排列有序排列变为无序排列 相变
16、温度相变温度TcTc脂质体的理化性质相变温度脂质体的理化性质相变温度第二十一页，共八十四页。决定决定TcTc的因素的因素(yn s)(yn s)1 1磷脂的种类。磷脂都具有特定的磷脂的种类。磷脂都具有特定的TcTc值。值。2 2极性基团的性质。极性基团的性质。3 3酰基侧链的长度和不饱和度。酰基侧链的长度和不饱和度。酰基侧链长酰基侧链长 Tc Tc高高 链的饱和度高链的饱和度高 Tc Tc高高 脂质体的理化性质脂质体的理化性质(xngzh)(xngzh)相变温度相变温度第二十二页，共八十四页。TcTc以下时，为以下时，为“胶晶态脂肪链全反式，排列紧密，刚性和厚度增胶晶态脂肪链全反式，排列紧密，
17、刚性和厚度增加加TcTc以上时，为以上时，为“液晶态液晶态 脂肪链伸缩、弯曲、外扭脂肪链伸缩、弯曲、外扭磷脂发生相变时，磷脂发生相变时，“胶晶态胶晶态“液晶态液晶态“液态共存，液态共存，出现相别离，使膜的流动性增加，易导致出现相别离，使膜的流动性增加，易导致(dozh)(dozh)内容物泄漏。内容物泄漏。脂质体的理化性质脂质体的理化性质(xngzh)(xngzh)相变温度相变温度第二十三页，共八十四页。相变温度相变温度(wnd)与脂质体膜稳定性与脂质体膜稳定性脂质体的理化性质脂质体的理化性质(xngzh)(xngzh)相变温度相变温度第二十四页，共八十四页。2 2、膜的通透性、膜的通透性(1)
18、(1)半通透性脂质体膜半通透性脂质体膜：不同离子穿膜和分子扩散过膜速率不同。不同离子穿膜和分子扩散过膜速率不同。(2)(2)膜两侧的渗透压膜两侧的渗透压：导致分子量较小的物质导致分子量较小的物质(wzh)(wzh)渗漏或磷脂膜破裂渗漏或磷脂膜破裂(3)(3)对于在水中和有机溶剂中溶解度都非常高的分子，对于在水中和有机溶剂中溶解度都非常高的分子，磷脂膜是一种非常弱的屏障。磷脂膜是一种非常弱的屏障。脂质体的理化脂质体的理化(lhu)(lhu)性质性质第二十五页，共八十四页。3.3.膜的流动性膜的流动性 Tc Tc时膜的流动性时膜的流动性增加增加：包裹在脂质体内的药物具有最大释放速率包裹在脂质体内的
19、药物具有最大释放速率(sl)(sl)。胆固醇胆固醇可调节膜的流动性：可调节膜的流动性：a.a.高于高于TcTc时，减少膜的流动性时，减少膜的流动性 b.b.低于低于TcTc时，增加膜的流动性时，增加膜的流动性4 4、荷电性荷电性n含酸性脂质的脂质体荷负电含酸性脂质的脂质体荷负电n含碱基的脂质体荷正电含碱基的脂质体荷正电n不含离子的脂质体显电中性不含离子的脂质体显电中性 脂质体的理化脂质体的理化(lhu)(lhu)性质性质第二十六页，共八十四页。脂质体分类脂质体分类(fn li)(fn li)按按结构结构(jigu)(jigu)类型类型分类分类单室层脂质体单室层脂质体多室层脂质体多室层脂质体ML
20、Vs)多囊脂质体多囊脂质体MVLs)小单室层脂质体小单室层脂质体(SUVs 大单室层脂质体大单室层脂质体(LUVs(LUVs第二十七页，共八十四页。1 1、按结构类型分类、按结构类型分类单室层脂质体，是由一层双分子膜形成的囊泡。单室层脂质体，是由一层双分子膜形成的囊泡。小单室层脂质体小单室层脂质体SUVsSUVs最小粒径最小粒径 20 nm 20 nm 80nm-80nm-纳米脂质体纳米脂质体包封容积低包封容积低 体内体内(t ni)(t ni)循环时间长循环时间长大单室层脂质体大单室层脂质体(LUVs)(LUVs)一般粒径一般粒径100nm 100nm 1000nm1000nm对水溶性药物的
21、包封率高，包封容积大。对水溶性药物的包封率高，包封容积大。如果粒径较大如果粒径较大(500nm)500nm)，膜不稳定。，膜不稳定。脂质体的分类按结构脂质体的分类按结构(jigu)(jigu)类型分类类型分类第二十八页，共八十四页。2 2多室层脂质体多室层脂质体(MLVs),(MLVs),双分子脂质膜与水交替形成的多层结构的囊泡。双分子脂质膜与水交替形成的多层结构的囊泡。一般由五层、或更多层的同心板组成。一般由五层、或更多层的同心板组成。较少层数较少层数(两到四层两到四层)的又称为的又称为(chn wi)(chn wi)寡层脂质体。寡层脂质体。粒径一般为粒径一般为100nm100nm5m5m。
22、包封容积相对较低。包封容积相对较低。脂质体的分类脂质体的分类(fn li)(fn li)按结构分类按结构分类第二十九页，共八十四页。3 3多囊脂质体多囊脂质体 (multivescular liposomes,MVLs)n由许多非同心囊泡构成，每个囊泡中包裹着被装载药物的水溶液。由许多非同心囊泡构成，每个囊泡中包裹着被装载药物的水溶液。u粒径为粒径为5 550m50m。u适用于包裹适用于包裹水溶性水溶性物质物质。u载药量比单层脂质体载药量比单层脂质体 和多层脂质体高得多和多层脂质体高得多u具有具有(jyu)(jyu)缓释作用。缓释作用。脂质体的分类脂质体的分类(fn li)(fn li)按结构
23、分类按结构分类多囊脂质体的结构多囊脂质体的结构(jigu)第三十页，共八十四页。脂质体的分类脂质体的分类(fn li)(fn li)按按结构结构(jigu)性能性能分类分类特殊性能特殊性能(xngnng)脂质体脂质体特殊的脂质材料制成特殊的脂质材料制成普通脂质体普通脂质体(一般脂质材料制成一般脂质材料制成)热敏感性脂质体热敏感性脂质体pHpH敏感脂质体敏感脂质体多糖被复的脂质体多糖被复的脂质体免疫脂质体免疫脂质体长循环脂质体长循环脂质体光敏脂质体光敏脂质体 磁性脂质体磁性脂质体第三十一页，共八十四页。脂质体的分类脂质体的分类(fn li)(fn li)按按荷电性荷电性分类分类(fn li)正电
24、荷脂质体正电荷脂质体 负电荷脂质体负电荷脂质体 中性中性(zhngxng)脂质体脂质体 第三十二页，共八十四页。脂质体的分类脂质体的分类(fn li)(fn li)按按给药途径给药途径(tjng)分类分类静脉给药脂质体静脉给药脂质体口服口服(kuf)给药脂质体给药脂质体肺部吸入给药脂质体肺部吸入给药脂质体眼部用药脂质体眼部用药脂质体黏膜给药脂质体黏膜给药脂质体外用脂质体和经皮给药脂质体外用脂质体和经皮给药脂质体局部注射用脂质体肌注、关节腔、脊髓腔、肿瘤内等局部注射用脂质体肌注、关节腔、脊髓腔、肿瘤内等免疫诊断用脂质体免疫诊断用脂质体基因工程和生物工程用脂质体基因工程和生物工程用脂质体第三十三页
25、，共八十四页。第三节第三节 脂质体的制备脂质体的制备(zhbi)(zhbi)方法方法薄膜分散薄膜分散(fnsn)(fnsn)法法 制备制备(zhbi)方法方法逆相蒸发法逆相蒸发法 溶剂注入法溶剂注入法冷冻枯燥法冷冻枯燥法 pHpH梯度法梯度法 前体脂质体法前体脂质体法 干膜超声法干膜超声法 薄膜薄膜-振荡分散法振荡分散法 薄膜薄膜-匀化法匀化法 薄膜薄膜-挤压法挤压法乙醇注入法乙醇注入法乙醚注入法乙醚注入法 第三十四页，共八十四页。一一.薄膜分散薄膜分散(fnsn)法法膜材膜材 有机溶剂氯仿有机溶剂氯仿(l fn)等等 脂溶性药物脂溶性药物 膜材溶液膜材溶液(rngy)减压旋转蒸发除去溶剂减压
26、旋转蒸发除去溶剂 器壁上形成器壁上形成薄膜薄膜 参加缓冲液水溶性药物参加缓冲液水溶性药物 振摇振摇 大大多层脂质体多层脂质体 多层脂质体多层脂质体 各种机械方法分散各种机械方法分散脂质体的制备方法脂质体的制备方法第三十五页，共八十四页。1 1干膜超声法干膜超声法 超声波仪探针型和水浴型超声处理超声波仪探针型和水浴型超声处理 脂质体混悬液脂质体混悬液 葡聚糖凝胶柱层析别离葡聚糖凝胶柱层析别离(fnl)(fnl)除去未包入的药物除去未包入的药物 脂质体混悬液脂质体混悬液 2 2薄膜薄膜-振荡分散法振荡分散法 干膜干膜 参加缓冲溶液参加缓冲溶液 液体快速混合器振荡液体快速混合器振荡252min252
27、min 脂质体脂质体3 3薄膜薄膜-匀化法匀化法 将薄膜将薄膜-振荡分散法制备的较大粒径脂质体振荡分散法制备的较大粒径脂质体 组织捣机或高压乳匀机匀化组织捣机或高压乳匀机匀化 较小粒径的脂质体。较小粒径的脂质体。此法较适合工业生产。此法较适合工业生产。脂质体的制备脂质体的制备(zhbi)(zhbi)方法薄膜法方法薄膜法第三十六页，共八十四页。脂质体的制备脂质体的制备(zhbi)(zhbi)方法方法膜材膜材 W/OW/O型乳剂型乳剂(rj)(rj)溶于有机溶剂氯仿溶于有机溶剂氯仿(l fn)、乙醚、乙醚 参加待包封药物的水溶液参加待包封药物的水溶液*胶态胶态 短时超声短时超声 减压蒸发有机溶剂减
28、压蒸发有机溶剂 脱落凝胶液脱落凝胶液滴加缓冲液滴加缓冲液继续减压蒸发继续减压蒸发 旋转旋转充氮气至气味消失充氮气至气味消失 水性混悬液水性混悬液 超速离心超速离心或凝胶色谱法或凝胶色谱法 除去未包入的药物除去未包入的药物 大单层脂质体大单层脂质体 工艺流程工艺流程二、二、逆相蒸发法逆相蒸发法第三十七页，共八十四页。三、溶剂注入法三、溶剂注入法1 1、乙醇、乙醇(y chn)(y chn)注入法注入法 脂质乙醇液脂质乙醇液 细针头快速注入到缓冲液中细针头快速注入到缓冲液中 SUVs SUVs。残存的乙醇用透析法除去残存的乙醇用透析法除去优点：简单快速优点：简单快速,脂质浓度受限。缺点脂质浓度受限
29、。缺点:水相包封率极低，乙醇难除。水相包封率极低，乙醇难除。2 2、乙醚注入法、乙醚注入法 脂质乙醚液脂质乙醚液 细孔针头慢慢注入细孔针头慢慢注入55556060的缓冲液中的缓冲液中 乙醚蒸发乙醚蒸发 单层脂质体单层脂质体(直径直径5050200nm)200nm)。优点：脂质浓度不受限，水相包封率高；优点：脂质浓度不受限，水相包封率高；缺点：制备时间长。缺点：制备时间长。脂质体的制备脂质体的制备(zhbi)(zhbi)方法方法第三十八页，共八十四页。四、冷冻枯燥法四、冷冻枯燥法 磷脂磷脂 高度分散在缓冲盐溶液中高度分散在缓冲盐溶液中 超声波处理超声波处理(chl)(chl)冷冻枯燥枯燥物冷冻枯
30、燥枯燥物 分散到含药物的水性介质中分散到含药物的水性介质中 脂质体脂质体 冷冻温度、速度及时间等因素影响脂质体的包封率和稳定性。冷冻温度、速度及时间等因素影响脂质体的包封率和稳定性。参加冻结保护剂，能降低冻融过程对脂质体的损害。参加冻结保护剂，能降低冻融过程对脂质体的损害。甘露醇甘露醇 、D-D-葡萄糖葡萄糖此外还有：此外还有：pHpH梯度法和前体脂质体法等。梯度法和前体脂质体法等。脂质体的制备脂质体的制备(zhbi)(zhbi)方法方法第三十九页，共八十四页。一、脂质体的粒径和分布一、脂质体的粒径和分布脂质体的粒径大小和分布均匀脂质体的粒径大小和分布均匀(jnyn)(jnyn)程度，直接影响
31、脂质体在机体程度，直接影响脂质体在机体组织的行为和处置。组织的行为和处置。粒径粒径100nm100nm，在血液循环时间长；，在血液循环时间长；粒径粒径200nm200nm，在血液循环时间短易被巨嗜细胞作为外来异物吞噬。，在血液循环时间短易被巨嗜细胞作为外来异物吞噬。第四节第四节 脂质体的质量脂质体的质量(zhling)(zhling)研究研究 检测检测(jin c)方法方法1、光学显微镜法、光学显微镜法2、电子显微镜法、电子显微镜法3、激光散射法尘粒计数法、激光散射法尘粒计数法4、电感应法库尔特计数器、电感应法库尔特计数器5、光感应法如粒度测定仪、光感应法如粒度测定仪负染法负染法冰冻蚀刻法冰冻
32、蚀刻法第四十页，共八十四页。1 1、光学显微镜法、光学显微镜法 将脂质体混悬液稀释约将脂质体混悬液稀释约5 5倍，取倍，取1 1滴放入载玻片上或滴入细胞计数板内，放滴放入载玻片上或滴入细胞计数板内，放上盖玻片，观察脂质体粒径大小和数目，然后上盖玻片，观察脂质体粒径大小和数目，然后(rnhu)(rnhu)按其大小分档计数，以视野按其大小分档计数，以视野见到的粒子总数，求出各档次百分数。见到的粒子总数，求出各档次百分数。仅适用于大的脂质体。仅适用于大的脂质体。2 2、电子显微镜法、电子显微镜法 用负染法和冰冻蚀刻法，用于分析小脂质体。用负染法和冰冻蚀刻法，用于分析小脂质体。负染法：用溶液悬浮脂质体
33、，样品滴在有支持膜的铜网上，滤纸吸去负染法：用溶液悬浮脂质体，样品滴在有支持膜的铜网上，滤纸吸去多余的液体，再滴重金属染料，滤纸吸去多余液体，自然枯燥多余的液体，再滴重金属染料，滤纸吸去多余液体，自然枯燥30min30min，用电镜观察脂质体的结构和粒径分布。用电镜观察脂质体的结构和粒径分布。脂质体的质量脂质体的质量(zhling)(zhling)研究粒径和分布研究粒径和分布第四十一页，共八十四页。3 3、激光散射法尘粒计数法、激光散射法尘粒计数法 将脂质体混悬液稀释后雾化，定量喷到计数仪散射腔，将脂质体混悬液稀释后雾化，定量喷到计数仪散射腔，自动自动(zdng)(zdng)计数仪记录各档次粒
34、子的粒径、数目，计算分布概率计数仪记录各档次粒子的粒径、数目，计算分布概率或或绘制粒径分布图。绘制粒径分布图。此外，还有电感应法库尔特计数器、光感应法粒此外，还有电感应法库尔特计数器、光感应法粒度测定仪等度测定仪等 脂质体的质量脂质体的质量(zhling)(zhling)研究粒径和分布研究粒径和分布第四十二页，共八十四页。二、脂质体的包封率重量二、脂质体的包封率重量(zhngling)(zhngling)包封率包封率 1 1、包封率：是指包入脂质体内的药物量与投料量的重量百分比。、包封率：是指包入脂质体内的药物量与投料量的重量百分比。方法：测定脂质体中的药量，经色谱柱或离心别离测定介质中未包入
35、的药量，计算。方法：测定脂质体中的药量，经色谱柱或离心别离测定介质中未包入的药量，计算。脂质体的质量研究脂质体的质量研究(ynji)(ynji)包封率包封率包封包封(bo fn)率率脂质体中包封的药量脂质体中包封的药量脂质体中包封与未包封的总药量脂质体中包封与未包封的总药量=100%100%第四十三页，共八十四页。2 2、影响脂质体包封率的因素、影响脂质体包封率的因素 脂质体的结构类型脂质体的结构类型 脂质体的结构类型不同，其包封率也不同。脂质体的结构类型不同，其包封率也不同。顺序：顺序：LUVs(LUVs(大单大单MLVMLV多层多层SUVsSUVs小单小单 脂质体制备方法脂质体制备方法(f
36、ngf)(fngf)处方拟订后，制备方法就可决定结构类型。故制备方法也与包封率有关，顺处方拟订后，制备方法就可决定结构类型。故制备方法也与包封率有关，顺序为：序为：乙醚注入法乙醚注入法逆相蒸发法逆相蒸发法干膜法干膜法乙醇注入法乙醇注入法超声法超声法 冷冻枯燥法的冷冻过程使包封率下降。冷冻枯燥法的冷冻过程使包封率下降。脂质体的质量脂质体的质量(zhling)(zhling)研究包封率研究包封率第四十四页，共八十四页。类脂膜的组成与电性类脂膜的组成与电性膜的组成膜的组成 与脂质体的结构密切相关，因此，对与脂质体的结构密切相关，因此，对包封率有影响。包封率有影响。如如 PC PC中参加中参加ChCh
37、可提高包封率；可提高包封率；脂质材料与脂质体外表的电性对离子型脂质材料与脂质体外表的电性对离子型药物药物(yow)(yow)的包封率影响很大的包封率影响很大 如：如水相离子型药物的电性与脂质如：如水相离子型药物的电性与脂质体外表的电性相反时，体外表的电性相反时，可能由于静电结合的原因，包封可能由于静电结合的原因，包封率高。率高。脂质体的质量研究影响脂质体的质量研究影响(yngxing)(yngxing)包封率的包封率的因素因素第四十五页，共八十四页。药物的性质和浓度药物的性质和浓度 膜材固定、制备方法固定的脂质体，其包封率那么由膜材固定、制备方法固定的脂质体，其包封率那么由被包封的药物的性质决
38、定。被包封的药物的性质决定。溶解性：脂溶性的药物包封率高；溶解性：脂溶性的药物包封率高；电性：药物的电性与脂质体膜的电性相反电性：药物的电性与脂质体膜的电性相反(xingfn)(xingfn)时，药物包封时，药物包封率高；率高；分子量：分子量大的比分子量小的药物包封率高；分子量：分子量大的比分子量小的药物包封率高；一般情况下，药物浓度增加，包封率下降。一般情况下，药物浓度增加，包封率下降。脂质体的质量研究脂质体的质量研究(ynji)(ynji)影响包封率的因素影响包封率的因素第四十六页，共八十四页。三、脂质体的包封容积三、脂质体的包封容积 包封容积为每摩尔脂质形成脂质体后所包裹包封容积为每摩尔
39、脂质形成脂质体后所包裹(bogu)(bogu)溶液的体积。溶液的体积。测定方法：用脂质体包封水溶性的荧光标记物，直接测定水测定方法：用脂质体包封水溶性的荧光标记物，直接测定水相的体积。相的体积。四、脂质体的药脂包封比率四、脂质体的药脂包封比率 指一定重量的脂质所包封药物重量百分比。指一定重量的脂质所包封药物重量百分比。脂质体的质量脂质体的质量(zhling)(zhling)研究研究药脂包封药脂包封(bo fn)比率比率=100%100%脂质体中包封的药量脂质体中包封的药量处方中类脂的总量处方中类脂的总量第四十七页，共八十四页。五、脂质体的渗漏率五、脂质体的渗漏率 渗漏率表示脂质体在贮存渗漏率表
40、示脂质体在贮存(zhcn)(zhcn)期间包封率的变化情况，是期间包封率的变化情况，是脂质体不稳定性的重要指标。脂质体不稳定性的重要指标。在膜材中参加一定量的胆固醇，能够加固脂质双层膜，在膜材中参加一定量的胆固醇，能够加固脂质双层膜，减少膜的流动性，可降低渗漏率。减少膜的流动性，可降低渗漏率。脂质体的质量脂质体的质量(zhling)(zhling)研究研究渗漏渗漏(shn lu)率率=贮存后渗漏到介质中的药量贮存后渗漏到介质中的药量贮存前包封的药量贮存前包封的药量100%100%第四十八页，共八十四页。六、磷脂的氧化程度六、磷脂的氧化程度 采用氧化指数为指标。采用氧化指数为指标。氧化指数氧化指
41、数=A233nm/A215nm =A233nm/A215nm 氧化指数氧化指数0.20.2防止脂质氧化的措施：防止脂质氧化的措施：用纯化的脂质和新鲜蒸馏的有机溶剂。用纯化的脂质和新鲜蒸馏的有机溶剂。制备过程中防止高温。制备过程中防止高温。在无氧条件下制备。在无氧条件下制备。用氮气使水溶液脱氧。用氮气使水溶液脱氧。脂质体在惰性气体中保存。脂质体在惰性气体中保存。参加抗氧化剂，减少膜氧化脂质水平。参加抗氧化剂，减少膜氧化脂质水平。尽量使用饱和尽量使用饱和(boh)(boh)脂质。脂质。去除剩余有机溶剂。去除剩余有机溶剂。脂质体的质量脂质体的质量(zhling)(zhling)研究研究第四十九页，共
42、八十四页。-榄香烯脂质体的质量榄香烯脂质体的质量(zhling)(zhling)研研究究-榄香烯脂质体透射电镜榄香烯脂质体透射电镜照片照片(zhopin)(zhopin)-榄香烯脂质体榄香烯脂质体粒度粒度(l d)(l d)分布图分布图 -榄香烯脂质体榄香烯脂质体电电位位(92.960.15)%(92.960.15)%三批样品平均包三批样品平均包封率封率(158.536.6)nm(158.536.6)nm -67.33.9-67.33.9mV mV 第五十页，共八十四页。室温（室温（2525）4 4周后渗漏周后渗漏100%100%稳定性稳定性考察考察(koch)冰箱冰箱(bngxing)(bn
43、gxing)444 4周后渗漏约周后渗漏约5%5%第五十一页，共八十四页。第五节第五节 特殊特殊(tsh)(tsh)性能脂质体性能脂质体热敏感性脂质体温度热敏感性脂质体温度(wnd)敏感脂质体敏感脂质体 pHpH敏感敏感(mngn)(mngn)脂质体酸敏感脂质体酸敏感(mngn)(mngn)脂质体脂质体 多糖被复的脂质体糖基脂质体多糖被复的脂质体糖基脂质体 免疫脂质体免疫脂质体 长循环脂质体长效脂质长循环脂质体长效脂质 光敏脂质体光敏脂质体 磁性脂质体磁性脂质体 特殊性能脂质体特殊性能脂质体第五十二页，共八十四页。一、热敏感性脂质体温度敏感脂质体。一、热敏感性脂质体温度敏感脂质体。设计原理：当
44、温度提高到某特定温度相变温度设计原理：当温度提高到某特定温度相变温度TcTc时，脂质体膜由时，脂质体膜由“胶晶态转变到胶晶态转变到“液晶态液晶态 ，磷脂的，磷脂的酰基链的紊乱度和活动度增加，膜的流动性增加，脂质酰基链的紊乱度和活动度增加，膜的流动性增加，脂质体所包封的药物释放率增大，低于体所包封的药物释放率增大，低于TcTc时，药物的释放相时，药物的释放相对缓慢。对缓慢。选用不同长度碳链的脂质，如二棕榈酰磷脂酰胆碱选用不同长度碳链的脂质，如二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)(DPPC)和二硬脂酰磷脂酰胆碱和二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)(DSPC)，按一定比例混合，按一定比例混合,通过适当方法制成
45、相变温度稍高于体温的脂质体。应用通过适当方法制成相变温度稍高于体温的脂质体。应用时，通过适当的技术使靶部位时，通过适当的技术使靶部位(bwi)(bwi)温度与热敏感脂质体的相温度与热敏感脂质体的相 变温度相同，导致脂质体迅速释放内含药物。变温度相同，导致脂质体迅速释放内含药物。特殊特殊(tsh)(tsh)性能脂质体性能脂质体第五十三页，共八十四页。热敏感脂质体释放热敏感脂质体释放(shfng)药物示药物示意图意图特殊特殊(tsh)(tsh)性能脂质体性能脂质体第五十四页，共八十四页。二、二、pHpH敏感脂质体酸敏感脂质体。敏感脂质体酸敏感脂质体。组成：不饱和的磷脂酰乙醇胺组成：不饱和的磷脂酰乙
46、醇胺PEPE和脂肪酸。和脂肪酸。特性：特性：pH7.4pH7.4时稳定，在低时稳定，在低pHpH时不稳定，时不稳定，pH6.5pH6.5的酸性的酸性条件下，与相应的膜发生融合，释放包裹的药物到胞浆。条件下，与相应的膜发生融合，释放包裹的药物到胞浆。原理原理(yunl)(yunl)：脂质体中含有不饱和的：脂质体中含有不饱和的PEPE，在生理环境下可形成，在生理环境下可形成六角相，需参加某些脂肪酸制成稳定的脂质体。当六角相，需参加某些脂肪酸制成稳定的脂质体。当pHpH6.56.5时，脂肪酸的羟基质子化，脂质形成六角相，引起膜的融合。时，脂肪酸的羟基质子化，脂质形成六角相，引起膜的融合。特殊特殊(t
47、sh)(tsh)性能脂质体性能脂质体第五十五页，共八十四页。pHpH敏感敏感(mngn)(mngn)脂质体示意图脂质体示意图 病理组织的pH比正常组织低如感染部位、原发肿瘤和转移肿瘤组织，炎症反响后60h的pH降低至6.5。细胞内吞空泡的pH范围为5.06.5。脂质体主要通过内吞被细胞摄取，脂质体到达的细胞内位点是溶酶体，在溶酶体，脂质体逐渐被破坏，多数情况下药物不能直接(zhji)到达细胞浆.而pH-敏感脂质体在内吞体酸性环境下不稳定，脂质体膜即与内吞体膜融合，将内容物释放至胞浆。特殊性能特殊性能(xngnng)(xngnng)脂质体脂质体pHpH敏感脂质体敏感脂质体第五十六页，共八十四页。
48、三、多糖被复的脂质体掺入糖基脂质体。三、多糖被复的脂质体掺入糖基脂质体。在脂质体双分子层中掺入多糖或糖脂的脂质体。在脂质体双分子层中掺入多糖或糖脂的脂质体。特点：特点：1 1、糖基不同可改变脂质体的组织分布：、糖基不同可改变脂质体的组织分布：如半乳糖如半乳糖为肝实质细胞所摄取；为肝实质细胞所摄取；甘露糖甘露糖为为NKNK细胞所摄取；细胞所摄取；胆固醇氨基甘露糖衍生物胆固醇氨基甘露糖衍生物具有高度的向肺性。具有高度的向肺性。2 2、能抑制给药后在血流中某些崩解过程、能抑制给药后在血流中某些崩解过程(guchng)(guchng)，使脂质体稳定。，使脂质体稳定。特殊特殊(tsh)(tsh)性能脂质
49、体性能脂质体第五十七页，共八十四页。四、长循环脂质体长效脂质。四、长循环脂质体长效脂质。1.1.含有神经节苷脂含有神经节苷脂GM1GM1的脂质体隐蔽脂质体的脂质体隐蔽脂质体 在脂质体膜上掺入神经节苷脂在脂质体膜上掺入神经节苷脂GM1GM1，引入了唾液酸残基。，引入了唾液酸残基。特点：特点：增强了膜的稳定性增强了膜的稳定性;降低了血浆成分诱发的脂质体溶解的敏感度降低了血浆成分诱发的脂质体溶解的敏感度;降低了脂质体内容降低了脂质体内容(nirng)(nirng)物的泄漏率物的泄漏率;减少了网状内皮细胞对脂质体的摄取减少了网状内皮细胞对脂质体的摄取;延长了脂质体的体内循环时间。延长了脂质体的体内循环
50、时间。缺点：缺点：GM1GM1的价格昂贵，而且难以大量提取或合成。的价格昂贵，而且难以大量提取或合成。特殊特殊(tsh)(tsh)性能脂质体性能脂质体第五十八页，共八十四页。2 2、PEGPEG衍生物脂质体衍生物脂质体 脂质体被脂质体被PEGPEG衍生物衍生物PEG-DSPEPEG-DSPE二硬脂酸磷脂酰乙醇二硬脂酸磷脂酰乙醇胺胺,PEG-PE,PEG-PE修饰修饰(xish)(xish)。极性的极性的PEGPEG基：增强了脂质体膜的亲水性，基：增强了脂质体膜的亲水性，减少了血浆蛋白与脂质体膜的相互作用，减少了血浆蛋白与脂质体膜的相互作用，阻止了脂质体的凝聚和融合，阻止了脂质体的凝聚和融合，防