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1、生物化学实验33 肌糖原的酵解作用电子课件 生物化学实验技术生物化学实验技术肌糖原的酵解作用实验类型：综合性实验类型：综合性实验类型：综合性实验类型：综合性教学时数教学时数教学时数教学时数：3 3生物化学实验技术一、实验目的一、实验目的1、学习鉴定糖酵解作用的原理和方法。、学习鉴定糖酵解作用的原理和方法。2、了解酵解作用在糖代谢过程中的地位及生、了解酵解作用在糖代谢过程中的地位及生理意义。理意义。生物化学实验技术二、实验二、实验原理原理 糖原糖原或淀粉的酵解作用，可由乳酸的生成或淀粉的酵解作用，可由乳酸的生成来观察。在除去蛋白质与糖后，乳酸可以与硫来观察。在除去蛋白质与糖后，乳酸可以与硫酸共热
2、便成乙醛，后者再与对羟基联苯反应生酸共热便成乙醛，后者再与对羟基联苯反应生成紫罗兰色物质，根据颜色的显现加以鉴定。成紫罗兰色物质，根据颜色的显现加以鉴定。该法比较灵敏，每毫升溶液含该法比较灵敏，每毫升溶液含15g乳酸即产乳酸即产生明显的颜色反应生明显的颜色反应。生物化学实验技术三、仪器与试剂三、仪器与试剂1、材料：家兔或大白鼠的肌肉糜、材料：家兔或大白鼠的肌肉糜2、仪器：电子天平、恒温水浴锅、试管及试、仪器：电子天平、恒温水浴锅、试管及试管架、剪刀、镊子、移液管、滴管、玻璃棒、管架、剪刀、镊子、移液管、滴管、玻璃棒、漏斗、滤纸、量筒。漏斗、滤纸、量筒。3、试剂：、试剂：1/15mol/L pH
3、7.4磷酸缓冲液，磷酸缓冲液，0.5%淀粉溶液，液体石蜡，淀粉溶液，液体石蜡，CuSO4饱和溶液，饱和溶液，Ca(OH)2粉末，粉末，20%三氯乙酸溶液，浓硫酸，三氯乙酸溶液，浓硫酸，对羟基联苯试剂。对羟基联苯试剂。生物化学实验技术四、实验内容四、实验内容1、肌肉糜的制备：将家兔或大白鼠杀死后，、肌肉糜的制备：将家兔或大白鼠杀死后，立即剥皮，割取背部和腿部肌肉，在低温条件立即剥皮，割取背部和腿部肌肉，在低温条件下用剪刀尽量把肌肉剪碎即成肌肉糜，低温保下用剪刀尽量把肌肉剪碎即成肌肉糜，低温保存备用（临用前制备）。存备用（临用前制备）。生物化学实验技术2、肌肉糜的糖酵解、肌肉糜的糖酵解 取取4支试
4、管，编号后各加入新鲜肌肉糜支试管，编号后各加入新鲜肌肉糜0.5g。1、2号管为样品管，号管为样品管，3、4号管为空白管。向号管为空白管。向3、4号空白管内加入号空白管内加入3mL 20%三氯乙酸，用玻璃三氯乙酸，用玻璃棒将肌肉糜充分打散，搅匀，以沉淀蛋白质和棒将肌肉糜充分打散，搅匀，以沉淀蛋白质和终止酶的反应。然后分别向终止酶的反应。然后分别向4支试管内加入支试管内加入3mL磷酸缓冲液和磷酸缓冲液和1mL 0.5%淀粉溶液。用玻淀粉溶液。用玻璃棒充分搅匀，再分别加入少许液体石蜡以隔璃棒充分搅匀，再分别加入少许液体石蜡以隔绝空气（试管的绝空气（试管的35mm高度），并将高度），并将4支试管支试管
5、同时放入同时放入37恒温水浴中保温。恒温水浴中保温。生物化学实验技术 1h后，取出试管，吸出石蜡，立即向后，取出试管，吸出石蜡，立即向1、2号试管内各加入号试管内各加入4mL 20%三氯乙酸，充分混匀。三氯乙酸，充分混匀。然后向每管内加入然后向每管内加入1mL饱和饱和CuSO4溶液，混匀，溶液，混匀，再加入再加入0.4g Ca(OH)2粉末，充分搅匀粉末，充分搅匀2min，放，放置置10min，使糖沉淀完全后，过滤，保留滤液。，使糖沉淀完全后，过滤，保留滤液。生物化学实验技术3、乳酸的测定、乳酸的测定 取取4支洁净、干燥试管，编号，各加入支洁净、干燥试管，编号，各加入2mL浓硫酸，将试管置于冰
6、浴中冷却。分别取浓硫酸，将试管置于冰浴中冷却。分别取每个样品的滤液每个样品的滤液2滴，逐滴加入到已冷却的上滴，逐滴加入到已冷却的上述浓硫酸溶液中，边加边摇动冰浴中的述浓硫酸溶液中，边加边摇动冰浴中的试管。试管。将将每个试管混合均匀后，放入沸水浴中煮每个试管混合均匀后，放入沸水浴中煮沸沸5min。冷却后，再加入对羟联苯试剂。冷却后，再加入对羟联苯试剂2滴，滴，混匀，比较和记录各管溶液的颜色深浅，并加混匀，比较和记录各管溶液的颜色深浅，并加以解释。以解释。生物化学实验技术试剂试剂样品样品空白空白1234肌肉靡（肌肉靡（g）0.520%三氯乙酸（三氯乙酸（mL）-33磷酸缓冲液（磷酸缓冲液（mL）30.5%淀粉溶液（淀粉溶液（mL）1液体石蜡（液体石蜡（mL）充分搅拌，加液体石蜡封口，充分搅拌，加液体石蜡封口，37水浴水浴1h，后吸出石蜡。，后吸出石蜡。20%三氯乙酸（三氯乙酸（mL）44-饱和饱和CuSO4溶液溶液（mL）1Ca(OH)2粉末（粉末（g）分别加分别加0.4g，充分搅拌，分别过滤。，充分搅拌，分别过滤。