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1、香菇多糖的复合酶法提取香菇多糖的复合酶法提取香菇多糖是香菇中分离出的一种重要的具有生理活性的物质。第1页/共19页香菇多糖的作用：香菇多糖的作用：香菇多糖具有香菇多糖具有抗病毒、抗病毒、抗肿瘤，调节免疫力、抗肿瘤，调节免疫力、降血糖、抗氧化降血糖、抗氧化等功等功能。有关香菇多糖的能。有关香菇多糖的研究，特别是结构方研究，特别是结构方面的研究已引起国内面的研究已引起国内外学者的高度关注，外学者的高度关注，并有望成为多糖领域并有望成为多糖领域的研究热点。的研究热点。第2页/共19页与其他抗肿瘤药物相比，香菇多糖几乎无任何副作用，对胃癌、鼻咽癌、直肠癌、乳腺癌和慢性粒细胞白血病等有抑制和防止术后微转
2、移的作用，是目前已知最强的免疫增强剂之一。第3页/共19页香菇多糖的提取方法：香菇多糖的提取方法：香菇多糖的提取方法：香菇多糖的提取方法：热水浸提法热水浸提法 超声波提取法超声波提取法 稀酸稀酸(碱碱)浸提浸提法法 微波法提取香菇多糖微波法提取香菇多糖 深层发酵培养提取法深层发酵培养提取法 酶解法酶解法第4页/共19页 酶解法：酶解法：酶解法就是指在浸提的过程中加入相应的酶来水解纤维素、果胶、蛋白质分子等，以使多糖从细胞中分离出来。第5页/共19页u酶法提取较其他方法的优点酶法提取较其他方法的优点1.1.其作用条件温和。其作用条件温和。2.2.通过酶法破壁去除杂质可以明显提高通过酶法破壁去除杂
3、质可以明显提高 提取率，缩短提取时间。提取率，缩短提取时间。3.3.可减少能源消耗。可减少能源消耗。4.4.有效的保存多糖的生物活性。有效的保存多糖的生物活性。第6页/共19页复合酶提取香菇多糖：复合酶提取香菇多糖：复合酶提取香菇多糖：复合酶提取香菇多糖：复合酶复合酶纤维素酶纤维素酶+木木瓜蛋白酶瓜蛋白酶纤维素酶纤维素酶+中中性蛋白酶性蛋白酶木瓜蛋白酶木瓜蛋白酶+纤维素酶纤维素酶中性蛋白酶中性蛋白酶+纤维素酶纤维素酶多糖得率（%）12.907.029.466.34第7页/共19页香菇多糖的制备工艺 一.原料准备 二.提取 三.分离纯化第8页/共19页香菇的复合酶法提取uu原料的准备和处理原料的
4、准备和处理香菇烘干(50)粉碎过筛多糖提取原材料。第9页/共19页香菇的复合酶法提取uu主要实验试剂及仪器主要实验试剂及仪器 真空干燥箱，离心机，恒温振荡器，紫外可见分光光度计，傅里叶变换红外光谱仪，纤维素酶，木瓜蛋白酶第10页/共19页实实实实验验验验方方方方法法法法与与与与步步步步骤骤骤骤反应结束，将三角瓶放到沸水锅中，反应结束，将三角瓶放到沸水锅中，10min10min沸水浴灭酶。沸水浴灭酶。称取木瓜蛋白酶和纤维素酶按一定比例混称取木瓜蛋白酶和纤维素酶按一定比例混合，加入合，加入5mL5mL蒸馏水溶解。蒸馏水溶解。香菇溶液放在水浴中预热至酶解温度，将酶液加入香菇溶液放在水浴中预热至酶解温
5、度，将酶液加入到香菇溶液中，在恒温振荡器上提取。到香菇溶液中，在恒温振荡器上提取。称取称取8080目的香菇粉目的香菇粉2g2g，放入到，放入到250mL250mL的三角瓶中，的三角瓶中，加蒸馏水加蒸馏水35mL35mL混合均匀后置于混合均匀后置于4040水浴锅中，水浴水浴锅中，水浴30min30min，调节，调节pHpH值。值。345灭酶结束，冷却至室温，将酶提取液放入到离心灭酶结束，冷却至室温，将酶提取液放入到离心管中，调至管中，调至4000 r/min4000 r/min离心，取上清液，即得到离心，取上清液，即得到酶提取多糖清液。酶提取多糖清液。21香菇的复合酶法提取第11页/共19页香菇
6、的复合酶法提取uu分离纯化分离纯化1.1.分离提取分离提取 用用0.5%NaOH0.5%NaOH初步提取，之后取清液，用透析袋透去初步提取，之后取清液，用透析袋透去除杂离子，透析后去除杂蛋白，用活性炭脱色除杂离子，透析后去除杂蛋白，用活性炭脱色1 h1 h，加，加入入95%95%乙醇，使溶液中乙醇的浓度达到乙醇，使溶液中乙醇的浓度达到75%75%进行醇沉进行醇沉醇沉过程中要将其保存在醇沉过程中要将其保存在44冰箱中，保持冰箱中，保持24 h24 h，离心，离心15 min15 min，取沉淀，置于真空干燥箱中干燥，即可得到，取沉淀，置于真空干燥箱中干燥，即可得到香菇粗多糖。香菇粗多糖。第12页
7、/共19页2.2.纯化纯化 将香菇粗多糖水溶解后用色谱仪分离，干燥获得纯香菇多糖。第13页/共19页 影响香菇多糖得率的因素：随着复合酶浓度的增加，多糖提取率也逐渐增加，酶浓随着复合酶浓度的增加，多糖提取率也逐渐增加，酶浓度大于度大于0.4%0.4%后提取增加率趋于平缓，因此，最佳复合酶后提取增加率趋于平缓，因此，最佳复合酶的浓度为的浓度为0.4%0.4%。1.复合酶的浓度对多糖得率的影响复合酶的浓度对多糖得率的影响第14页/共19页2.2.料液比料液比对多糖得率的影响对多糖得率的影响当料液比在当料液比在1 11515l25l25之间多糖提取率增长较快，之间多糖提取率增长较快，继续提高料液比多
8、糖提取率仍有升高，但提高速率继续提高料液比多糖提取率仍有升高，但提高速率减小因此最佳料液比为减小因此最佳料液比为1 12020第15页/共19页3.3.酶解时间酶解时间对多糖得率的影响对多糖得率的影响由图可知由图可知,香菇多糖的提取率随酶促反应时香菇多糖的提取率随酶促反应时间的延长增加。间的延长增加。第16页/共19页u酶法提取的应用前景：酶法提取的应用前景：酶法提取由于反应特异性强、条件温和易获得、提取时间短、提取率高、绿色节能等已引起广泛的关注，具有较大的应用潜力，且随着对酶法技术的不断研究，酶法与其他技术如超声波、超高压、微波等技术的联用也将成为另一个热点研究方向。第17页/共19页Thanks第18页/共19页