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1、第第13章章 生物药物分析概论生物药物分析概论中国药科大学药物分析教研室本章主要内容本章主要内容生物药物种类生物药物种类与与特点特点生物药物质量生物药物质量检验的检验的基本程基本程序与方法序与方法生物药物理化生物药物理化测定法：测定法：HPLC法、酶法、电法、酶法、电泳法泳法中国药科大学药物分析教研室生化药物生化药物生物制品生物制品（生物技术药物）（生物技术药物）生物药物生物药物（biopharmaceuticals）：利利用生物体、生用生物体、生物组织和器官物组织和器官制得的天然活制得的天然活性物质及其类性物质及其类似物似物一、概述一、概述分类没有严分类没有严格的界限格的界限 中国药科大学药
2、物分析教研室动植物及微生物提取、分离的天然生物活性物质及半合成得到生命基本物质及其衍生物等生化药物生化药物biochemical drugs 人纤维蛋白原凝血酶、胰蛋白酶肝素、玻璃酸 中国药科大学药物分析教研室 应用普通的或以基因工程、细胞工程、蛋白质工应用普通的或以基因工程、细胞工程、蛋白质工程、发酵工程等生物技术获得的微生物、细胞及各程、发酵工程等生物技术获得的微生物、细胞及各种动物和人源的组织和液体等生物材料制备的药品种动物和人源的组织和液体等生物材料制备的药品 自动免疫制品自动免疫制品 生物制品生物制品biological products 其他（血液制品、组织制品等）其他（血液制品、
3、组织制品等）免疫血清免疫血清菌苗、疫苗、类毒素菌苗、疫苗、类毒素诊断制品诊断制品中国药科大学药物分析教研室 利用重组利用重组DNA等生等生物技术生产的药物物技术生产的药物基因工程药物 biotechnology drugs发现并确定有治疗作用的Pr分离或合成控制该Pr合成的基因将该基因导入受体细胞受体细胞表达该Pr分离纯化中国药科大学药物分析教研室胰脏胰脏(A)n胰岛素原胰岛素原mRNAcDNA重组质粒重组质粒转化细菌转化细菌mRNA反转录酶反转录酶胰岛素原基因胰岛素原基因与质与质粒连粒连接接感染感染E.coli胰岛素原胰岛素原重组胰岛素原的合成中国药科大学药物分析教研室基因工程药物主要类别基
4、因工程药物主要类别蛋白质多肽类：蛋白质多肽类：激素类及神经递质类激素类及神经递质类 细胞因子类细胞因子类 酶及凝血因子类酶及凝血因子类核酸类：核酸类：反义寡核苷酸反义寡核苷酸 等等人生长激素释放抑制因子（Human Somatotin）干扰素（Human Interferons）链激酶（Streptokinase）中国药科大学药物分析教研室5.生化药物和基因工程药物特点1 1）共同特点：）共同特点：活性强，毒副作用小活性强，毒副作用小2 2）分子量大，结构确证难）分子量大，结构确证难3 3）全过程全过程的质量控制：从原料、菌种到生产设备、的质量控制：从原料、菌种到生产设备、中间体、产品中间体、
5、产品4 4）生物活性检查）生物活性检查5 5）安全性检查：异常毒性检查、过敏物质检查、）安全性检查：异常毒性检查、过敏物质检查、外源性外源性DNA残留量、宿主菌蛋白残留量等残留量、宿主菌蛋白残留量等 6 6）效价（含量）测定）效价（含量）测定中国药科大学药物分析教研室收录于收录于中国药典中国药典中国药典中国药典和和中国生物制品规程中国生物制品规程中国生物制品规程中国生物制品规程二、检验的程序和方法二、检验的程序和方法鉴别鉴别杂质杂质检查检查安全性安全性检查检查含量（效价）含量（效价）测定测定中国药科大学药物分析教研室1.1.鉴别鉴别1 1）理化鉴别法：）理化鉴别法：UV、肽图肽图等等反应序列信
6、息反应序列信息RP-HPLC法分析重组人胰高血糖素类多肽1（736）肽图谱药物分析杂志2005，25(1)24-26标准品样品胰蛋白酶酶解 V8蛋白酶酶解rhGLP-1(7-36)由30个氨基酸组成，结构中含2Lys、1Arg、1Asp、3Glu中国药科大学药物分析教研室2 2）生化鉴别法：）生化鉴别法：免疫法免疫法、酶法、电泳法等、酶法、电泳法等3 3）生物鉴别法：动物试验等）生物鉴别法：动物试验等专属性强，应用广泛专属性强，应用广泛免疫双扩散法SDS-PAGEMarker Sample116.0k66.2k45.0k35.0k25.0k18.4k14.4k中国药科大学药物分析教研室2.杂质
7、检查1 1）一般杂质：氯化物、重金属、水分等）一般杂质：氯化物、重金属、水分等2 2）特殊杂质：有关物质等）特殊杂质：有关物质等 高效凝胶过滤色谱法(High Performance Gel Filter，HPGFC）、RP-HPLC 萄聚糖凝胶立体网状结构图中国药科大学药物分析教研室标准蛋白色谱图标准蛋白色谱图时间(min)04812165432 1.右旋糖酐蓝右旋糖酐蓝 2.醛缩酶醛缩酶 3.血清白蛋白血清白蛋白 4.碳酸酐酶碳酸酐酶 5.抑蛋白抑蛋白酶肽酶肽 6.酪氨酸酪氨酸中国药科大学药物分析教研室 重组人肿瘤坏死因子相关调亡诱导配体重组人肿瘤坏死因子相关调亡诱导配体（rhTRAILr
8、hTRAIL）质控方法和质量标准的研究质控方法和质量标准的研究 药物分析杂志药物分析杂志20052005，2525（3 3）253-257253-257 SynmetrySynmetry 300 C18 300 C18柱（柱（3.93.9150mm150mm）中国药科大学药物分析教研室3.安全性检查安全性检查1 1）热原检查）热原检查 家兔法、鲎试剂法家兔法、鲎试剂法2 2）降压物质检查）降压物质检查3 3）过敏试验）过敏试验4 4）异常毒性试验）异常毒性试验 豚鼠、大鼠存活试验豚鼠、大鼠存活试验5 5）无菌试验）无菌试验6 6）宿主细胞蛋白残留、）宿主细胞蛋白残留、DNADNA残留残留 EL
9、ISA法法中国药科大学药物分析教研室1 1）理化分析法：）理化分析法：重量法、滴定法、重量法、滴定法、电化学法、光谱法电化学法、光谱法 色谱法（色谱法（HPLC法）法）4.4.含量（效价）测定含量（效价）测定例：蛋白质含量测定（ChP2005三部）凯氏定氮法 Lowry法 双缩脲法中国药科大学药物分析教研室2 2）生化分析法）生化分析法v 酶法：酶法：v免疫分析法免疫分析法酶活力测定法 以酶为分析对象进行分析酶分析法 以酶为分析工具或分析试剂 的分析方法 中国药科大学药物分析教研室3 3）生物检定法）生物检定法 药物对生物体或离体器官所起的生物活性药物对生物体或离体器官所起的生物活性 测定效价
10、时采用参考品，体内、体外方法测定活性，计算效价IU 同时测定蛋白含量，计算特异比（比活性，IU/mg）中国药科大学药物分析教研室例：冻干基因工程例：冻干基因工程1b干扰素制造及检定规程干扰素制造及检定规程 本品系用从健康人白细胞中获得的本品系用从健康人白细胞中获得的1b干扰素基因重组质粒，传染干扰素基因重组质粒，传染大肠杆菌，使之高效表达人大肠杆菌，使之高效表达人1b干扰素，经高度纯化后冻干制成。用于干扰素，经高度纯化后冻干制成。用于治疗慢性乙型肝炎、丙型肝炎和毛细胞白血病等疾病。治疗慢性乙型肝炎、丙型肝炎和毛细胞白血病等疾病。主要包括以下内容：1 菌种 2 发酵 3 收菌 4 菌体裂解与粗制干扰素制备5 浓缩与纯化 6 稀释、除菌过滤 7 半成品检定8 除菌半成品检定 9 成品检定 10规格 11保存与效期12 冻干基因工程1b干扰素使用说明书中国药科大学药物分析教研室检查：检查：纯度：1电泳纯度 2高效液相色谱纯度pH值水分鉴别：鉴别：分子量测定肽图测定等电聚集紫外光谱扫描外观半成品和成品的检验项目包括：中国药科大学药物分析教研室安全性检查：安全性检查：残余外源性DNA含量残余IgG含量残余工程菌蛋白含量抗生素活性无菌试验热原质试验异常毒性含量：含量：效价测定：细胞病变抑制法蛋白含量比活性中国药科大学药物分析教研室