自动生化分析技术.ppt

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1、第五章第五章 自动生化分析技术自动生化分析技术 1.自动生化分析技术是指将生自动生化分析技术是指将生物化学分析过程中的取样、物化学分析过程中的取样、加试剂、去干扰、混合、保加试剂、去干扰、混合、保温反应、自动检测、结果计温反应、自动检测、结果计算、数据处理和打印报告，算、数据处理和打印报告，以及实验后的清洗等步骤自以及实验后的清洗等步骤自动化的分析检测技术。动化的分析检测技术。特特点点灵灵敏敏准准确确快快速速节节约约标标准准化化2.自动生化分析仪种类繁多，自动生化分析仪种类繁多，根据不同分类标准，可分成不同根据不同分类标准，可分成不同的种类。的种类。第一节第一节 自动生化分析仪自动生化分析仪3

2、.根据根据仪器仪器自动自动化程化程度度 全自动化半自动化 半自动分析仪：分析过半自动分析仪：分析过程中的部分操作需手工进行，程中的部分操作需手工进行，而其他部分操作可由仪器自而其他部分操作可由仪器自动完成。分析速度慢，适用动完成。分析速度慢，适用于样品数量少、化验项目少于样品数量少、化验项目少的小型医院。的小型医院。全自动分析仪：指从加全自动分析仪：指从加样至打印结果的全过程，均样至打印结果的全过程，均由仪器程序控制自动完成。由仪器程序控制自动完成。适用于样品数量多检测项目适用于样品数量多检测项目多而且复杂的综合性大医院多而且复杂的综合性大医院的临床生化检验室应用。的临床生化检验室应用。4.根

3、据仪器反应装置结构不同根据仪器反应装置结构不同连续流动式连续流动式 离心式离心式 分立式分立式 干片式干片式 5.连续流动式：各个样品与反应液在同一管道连续流动式：各个样品与反应液在同一管道内连续流动时完成反应、显色、比色、检测过程，内连续流动时完成反应、显色、比色、检测过程，样品间以气泡相分隔。样品间以气泡相分隔。分立式：各个样品与反应液在各自反应试管分立式：各个样品与反应液在各自反应试管内完成反应、显色、比色、检测过程。内完成反应、显色、比色、检测过程。离心式：在离心力的作用下，各待测样品几离心式：在离心力的作用下，各待测样品几乎同时与试剂混合、反应、检测，属于同步分析。乎同时与试剂混合、

4、反应、检测，属于同步分析。干片式：将测定一个项目所需的试剂固定在干片式：将测定一个项目所需的试剂固定在固相载体上，加上定量血清后，干片的背面即产固相载体上，加上定量血清后，干片的背面即产生颜色反应，用反射光度计检测便可进行定量分生颜色反应，用反射光度计检测便可进行定量分析。析。6.根据仪器的功能及复杂程度根据仪器的功能及复杂程度小型自动生化分析仪小型自动生化分析仪 中型自动生化分析仪中型自动生化分析仪 大型自动生化分析仪大型自动生化分析仪 超大型自动生化分析仪超大型自动生化分析仪 7.根据同根据同时可测时可测定项目定项目数量数量 单通道单通道多通道多通道根据根据开放开放程度程度封闭系统封闭系统

5、开放系统开放系统8.第二节第二节 半自动生化分析仪半自动生化分析仪一、结构特点与设计原理一、结构特点与设计原理 特点：特点：体积小，结构简单，灵活性大，体积小，结构简单，灵活性大，价格便宜；一般不受试剂、方法的限制。价格便宜；一般不受试剂、方法的限制。工作原理：工作原理：连续流动式分析，其流动管连续流动式分析，其流动管道中的特定位置有一微型比色杯称为流动比道中的特定位置有一微型比色杯称为流动比色杯，无不同比色杯之间的吸光度差异。色杯，无不同比色杯之间的吸光度差异。9.二、分析仪性能评价二、分析仪性能评价键盘键盘显示器显示器多功能软件多功能软件参数设置参数设置全自动方式波长选择全自动方式波长选择

6、结果存储结果存储测试方法类型测试方法类型质控质控恒温装置恒温装置微量流动比色杯微量流动比色杯比路式泵比路式泵结果打印结果打印10.三、操作程序及注意事项三、操作程序及注意事项1.1.开机前的准备工作开机前的准备工作2.2.开启仪器开启仪器3.3.冲洗流动比色池冲洗流动比色池4.4.设定仪器系统参数设定仪器系统参数5.5.设定质控参数设定质控参数6.6.设定试验参数设定试验参数7.7.进行试验操作进行试验操作8.8.打印分析结果打印分析结果11.注意事项注意事项：1.1.由于检测所加试剂及样品量都由于检测所加试剂及样品量都很少，要特别注意取样和加试剂的准很少，要特别注意取样和加试剂的准确性；确性

7、；2.2.使用过程中，严禁吸入强酸试使用过程中，严禁吸入强酸试剂；剂；3.3.每次使用完毕，必须用蒸馏水每次使用完毕，必须用蒸馏水冲洗比色杯和管道；冲洗比色杯和管道；4.4.应用连续检测法检测时，非线应用连续检测法检测时，非线性反应不得超过所定范围（性反应不得超过所定范围（10%10%）；）；12.5.5.做酶动力学检测时，要特别注意起做酶动力学检测时，要特别注意起始的吸光度值，应注意每次试验检测试剂始的吸光度值，应注意每次试验检测试剂空白；空白；6.6.如反复多次吸入蒸馏水后，不能调如反复多次吸入蒸馏水后，不能调整零点或吸光度不稳，应使用清洁液浸泡整零点或吸光度不稳，应使用清洁液浸泡比色池后

8、再用水清洗；比色池后再用水清洗；7.7.仪器若长时间不使用，应在一个月仪器若长时间不使用，应在一个月内至少通电一次。内至少通电一次。13.四、保养和维护四、保养和维护 1.1.日常保养：每天工作结束之前进行的仪器保日常保养：每天工作结束之前进行的仪器保养。养。（1 1）拔去电源插头后，用微湿的抹布轻抹仪器）拔去电源插头后，用微湿的抹布轻抹仪器的外壳，注意不要让水滴入仪器；的外壳，注意不要让水滴入仪器；（2 2）检查打印机的电缆线是否接上，打印纸是）检查打印机的电缆线是否接上，打印纸是否足够第二天使用；否足够第二天使用；（3 3）将废液瓶中液体倒掉并进行清洗；）将废液瓶中液体倒掉并进行清洗；（4

9、 4）按仪器规定要求用清洁剂和蒸馏水依次清）按仪器规定要求用清洁剂和蒸馏水依次清洗管道及比色杯，洗管道及比色杯，2.2.定期维护：吸光度的调零检测或仪器部件的定期维护：吸光度的调零检测或仪器部件的检查与更新。检查与更新。14.第三节第三节 全自动生化分析仪全自动生化分析仪一、分立式分析仪一、分立式分析仪 目前临床实验室目前临床实验室所用的大部分分析仪所用的大部分分析仪都属于分立式，具有都属于分立式，具有结构简单、检测速度结构简单、检测速度快等优点。快等优点。日立日立71807180型分析仪型分析仪15.分立式自动生化分析仪是分立式自动生化分析仪是按手工操按手工操作的方式编排程序，并以有序的机械

10、操作的方式编排程序，并以有序的机械操作代替手工操作，用加样探针将样品加作代替手工操作，用加样探针将样品加入各自的反应杯中，试剂探针按一定时入各自的反应杯中，试剂探针按一定时间自动定量加入试剂，经搅拌器充分混间自动定量加入试剂，经搅拌器充分混匀后，在一定条件下反应，反应后进行匀后，在一定条件下反应，反应后进行比色测定。各环节用传送带连接，按顺比色测定。各环节用传送带连接，按顺序依次操作。序依次操作。16.吸吸样样加加入入第第一一试试剂剂 搅搅拌拌 保保温温 测测试试杯杯空空白白 清清洗洗反反应应杯杯 数数据据处处理理 打打印印结结果果 比比色色分分析析加加入入第第二二试试剂剂 搅搅拌拌 保保温温

11、全自动生化分析仪工作流程图全自动生化分析仪工作流程图17.分立式自动生化分析仪的结构包括：样品盘分立式自动生化分析仪的结构包括：样品盘（架）、取样装置、试剂室（瓶）、取液装置、（架）、取样装置、试剂室（瓶）、取液装置、反应盘、混匀装置、温控装置、光学监测系统、反应盘、混匀装置、温控装置、光学监测系统、清洗系统和计算机控制系统等。清洗系统和计算机控制系统等。试剂盘试剂盘2 2试剂盘试剂盘1 1试剂针试剂针2 2试剂针试剂针1 1样品针样品针样品盘样品盘反应盘反应盘搅拌器搅拌器清洗装置清洗装置18.1.1.样品盘或样品架样品盘或样品架 样品盘：放置一定数量的样品，通过样品样品盘：放置一定数量的样品

12、，通过样品盘的转动来控制不同样品的进样。盘的转动来控制不同样品的进样。样品架：由步进马达控制移动，以样品架样品架：由步进马达控制移动，以样品架上的条形码或底部编码孔识别样品架及样品位上的条形码或底部编码孔识别样品架及样品位置号。置号。传送条带状样品架传送条带状样品架 圆盘状样品架圆盘状样品架19.2.2.取样装置：取样装置：由注射器、步进马达或传动泵、加样臂由注射器、步进马达或传动泵、加样臂和样品探针等组成，能定量吸取样品并加入到反应杯和样品探针等组成，能定量吸取样品并加入到反应杯中。中。取样容量：取样容量：一般一般2l-35l2l-35l，步进，步进0.1l0.1l不等不等交叉污染：交叉污染

13、：在吸取不同样品时可产生携带交叉污染在吸取不同样品时可产生携带交叉污染防止措施：防止措施：对样品针内外壁进行水冲洗对样品针内外壁进行水冲洗特殊功能：特殊功能：液面感应：液面感应：取样针尖上设有电子感应器取样针尖上设有电子感应器防碰撞装置：防碰撞装置：遇到阻碍时取样针立即停止运动并报警遇到阻碍时取样针立即停止运动并报警阻塞报警：阻塞报警：某些取样针有某些取样针有20.21.3.3.试剂室：试剂室：存储试剂，大多数试剂室具有冷藏存储试剂，大多数试剂室具有冷藏装置，条形码检测系统。装置，条形码检测系统。（1 1）试剂转盘式：）试剂转盘式：放置一定形状试剂瓶，数量放置一定形状试剂瓶，数量不等，试剂盘转

14、动可使某个试剂瓶到达特定的不等，试剂盘转动可使某个试剂瓶到达特定的试剂吸取位置。试剂吸取位置。（2 2）试剂架形式：）试剂架形式：放置大容量任意形状的试剂放置大容量任意形状的试剂瓶，由每个试剂瓶内引出一条试剂管路及其喷瓶，由每个试剂瓶内引出一条试剂管路及其喷嘴，不同试剂间无交叉污染嘴，不同试剂间无交叉污染22.试剂试剂条码阅读器条码阅读器试剂室试剂室23.4.4.取液装置：取液装置：用于定量吸取试剂加入反应杯。用于定量吸取试剂加入反应杯。取试剂量取试剂量：一般为：一般为20-380l20-380l，步进，步进1-5l1-5l不不等等交叉污染：交叉污染：吸取不同样品时可产生携带交叉污吸取不同样品

15、时可产生携带交叉污染染防止措施：防止措施：对样品针内外壁进行水冲洗对样品针内外壁进行水冲洗特殊功能：特殊功能：液面感应液面感应防碰撞装置防碰撞装置预热试剂预热试剂24.5.5.反应盘：反应盘：由由100100只或更多的反应杯围成一只或更多的反应杯围成一圈组成，有的分析仪具有两圈反应杯圈组成，有的分析仪具有两圈反应杯 反应盘作恒速圆周运动，转动到某些特反应盘作恒速圆周运动，转动到某些特定位置时短暂停止，在反应杯中加入样品、定位置时短暂停止，在反应杯中加入样品、试剂或进行搅拌混匀试剂或进行搅拌混匀 反应杯：是样品与试剂进行化学反应的反应杯：是样品与试剂进行化学反应的场所场所 由透光性好的硬质玻璃或

16、石英玻璃制成由透光性好的硬质玻璃或石英玻璃制成25.26.6.6.混匀装置：混匀装置：反应杯里的样品与试剂需要混匀反应杯里的样品与试剂需要混匀（1 1）混匀方式：）混匀方式：搅拌混匀：搅拌混匀：用搅拌棒，多数用搅拌棒，多数超声混匀：超声混匀：可杜绝携带污染，极大程度较少泡可杜绝携带污染，极大程度较少泡沫产生沫产生（2 2）搅拌棒）搅拌棒搅拌棒形状：搅拌棒形状：扁平棒状或扁平螺旋状，表面疏扁平棒状或扁平螺旋状，表面疏水材料水材料工作方式：工作方式：旋转式搅拌旋转式搅拌 震动搅拌震动搅拌防交叉污染：水洗防交叉污染：水洗27.28.7.7.恒温装置：恒温装置：反应杯需浸浴在恒温环境中，一般反应杯需浸

17、浴在恒温环境中，一般固定在固定在3737，温度波动不能大于，温度波动不能大于0.10.1。温浴方式：温浴方式：（1 1）空气浴恒温：）空气浴恒温：升温速度快，不稳定，受环境升温速度快，不稳定，受环境温度影响大。温度影响大。（2 2）水浴循环恒温式：）水浴循环恒温式：温度稳定，需加防腐剂保温度稳定，需加防腐剂保持水洁净，并要定期更换循环水。持水洁净，并要定期更换循环水。（3 3）恒温液循环间接加热式：）恒温液循环间接加热式：兼具空气和水浴的兼具空气和水浴的优点，用一种无污染、惰性的不蒸发液体，用很优点，用一种无污染、惰性的不蒸发液体，用很小的缝隙的空气把比色杯与恒温液隔开。小的缝隙的空气把比色杯

18、与恒温液隔开。29.30.8.8.清洗系统清洗系统（1 1）样品针、试剂针和搅拌棒的随时清洗）样品针、试剂针和搅拌棒的随时清洗 在用于下一个样品、试剂或反应杯前需清洗一在用于下一个样品、试剂或反应杯前需清洗一次，多数为去离子水冲洗次，多数为去离子水冲洗（2 2）反应杯的随时清洗）反应杯的随时清洗 多数全自动生化分析仪具有反应杯清洗装置多数全自动生化分析仪具有反应杯清洗装置 一个反应杯内的化学反应和吸光度检测结束后一个反应杯内的化学反应和吸光度检测结束后该反应杯就被冲洗系统及时冲洗该反应杯就被冲洗系统及时冲洗冲洗过程：冲洗过程：吸液针吸去废液吸液针吸去废液排液针注入清洗液排液针注入清洗液1 1（

19、碱性）（碱性）吸去废液吸去废液水洗并吸干水洗并吸干注入清洗液注入清洗液2 2（酸性）（酸性）吸去废液吸去废液水洗并吸干水洗并吸干擦干擦干吸光度吸光度检查检查31.32.反应杯清洗装置反应杯清洗装置33.9.9.光学监测系统：光学监测系统：由光源、单色器和信号检测器组成由光源、单色器和信号检测器组成（1 1）光源：）光源：一般采用卤素灯或疝灯，当灯的发光强度不一般采用卤素灯或疝灯，当灯的发光强度不够时，仪器会自动报警，应及时更换。够时，仪器会自动报警，应及时更换。（2 2）单色器：）单色器：多采用光栅分光，常在多采用光栅分光，常在340-800nm340-800nm范围内范围内设设10-1210

20、-12种固定的单色光种固定的单色光分光方式：分光方式：前分光：前分光：光源光源分光元件分光元件单色光单色光反应液反应液检测器检测器后分光：后分光：光源光源反应液反应液分光元件分光元件单色光单色光检测器检测器 分光后取多个固定单色光同时通过各自的信号分光后取多个固定单色光同时通过各自的信号传送通路传输到对应的信号检测器传送通路传输到对应的信号检测器优点：单色器中没有转动部分提高了检测精确到和速度优点：单色器中没有转动部分提高了检测精确到和速度后分光的特点：（1）不需移动仪器光学系统中的任何部件。（2）可同时选用双波长或多波长进行测定，这样可降低比色的噪声。（3）提高分析的精确度和减少故障率34.

21、35.（3 3）信号检测系统）信号检测系统光信号光信号光敏二极管光敏二极管电信号电信号放大电路放大电路模数转换电路模数转换电路数字信号数字信号微处理器微处理器按各测定项目的分析参数选择其波长的吸光按各测定项目的分析参数选择其波长的吸光度值度值可选择可选择1 1或或2 2个波长个波长36.数据管理数据管理结果打印结果打印和计算和计算恒温调控恒温调控冲洗控制冲洗控制仪器故障仪器故障的报警的报警样品和试样品和试剂识别剂识别10.计算机计算机系统系统37.二、干片式分析仪二、干片式分析仪 应用干化学技术将测定一个项目所需要的试应用干化学技术将测定一个项目所需要的试剂固定在待定载体上，成为干片试剂。剂固

22、定在待定载体上，成为干片试剂。测定方式：测定方式：在干片试剂上滴加液态样品，载体上试剂溶解并在干片试剂上滴加液态样品，载体上试剂溶解并与样品中待测成分发生反应，测定检测信号的反与样品中待测成分发生反应，测定检测信号的反射光强度射光强度 “干化学干化学”技术是相对于经典的技术是相对于经典的“湿化学湿化学”而言，实际上干化学也是在一定潮湿状态下的化而言，实际上干化学也是在一定潮湿状态下的化学反应学反应38.干片式分析仪与配套试剂组成一个检测系统干片式分析仪与配套试剂组成一个检测系统包括：包括：血糖仪血糖仪血氨测定仪血氨测定仪尿液化学分析仪尿液化学分析仪全自动干化学分析仪：急诊化验室常用全自动干化学

23、分析仪：急诊化验室常用 优点：优点：体积小、操作简便。标本用量少、体积小、操作简便。标本用量少、检测结果快速、准确检测结果快速、准确 缺点：缺点：成本偏高成本偏高39.根据试剂载体的复杂程度可将干化学分析技根据试剂载体的复杂程度可将干化学分析技术分为术分为双层膜法和多层膜法双层膜法和多层膜法，专用小型生化分析，专用小型生化分析仪使用的试纸条为双层膜法，大型全自动生化分仪使用的试纸条为双层膜法，大型全自动生化分析仪的干片为多层膜法。多层膜法是目前生化检析仪的干片为多层膜法。多层膜法是目前生化检验中最具代表性的干化学法。验中最具代表性的干化学法。多层膜法干片试剂的结构从上到下共有四个多层膜法干片试

24、剂的结构从上到下共有四个功能层，依次为功能层，依次为扩散层、试剂层、显色剂层、和扩散层、试剂层、显色剂层、和支持层。支持层。扩散层扩散层指示剂层指示剂层反射光反射光入射光入射光试剂层试剂层支持层支持层40.1.1.扩散层：扩散层：快速吸附液体样品并使之迅速。均匀地快速吸附液体样品并使之迅速。均匀地渗透，阻挡固体物质和大分子物质进入试剂层，同渗透，阻挡固体物质和大分子物质进入试剂层，同时为反射光检测提供反射背景。时为反射光检测提供反射背景。2.2.试剂层：试剂层：根据实际测定的需要，由数个至数十个根据实际测定的需要，由数个至数十个功能试剂层组成。实现试剂与待测物质进行化学反功能试剂层组成。实现试

25、剂与待测物质进行化学反应应。3.3.指示剂层：指示剂层：包含染料或相似的指示剂，使反应产包含染料或相似的指示剂，使反应产物到达指示剂成后生成了有色化合物，其颜色变化物到达指示剂成后生成了有色化合物，其颜色变化与分析物浓度成比例。与分析物浓度成比例。4.4.支持层：支持层：由透明塑料制成，起支持其他层的作用，由透明塑料制成，起支持其他层的作用，且允许光线百分之百透过。且允许光线百分之百透过。41.三、离心式分析仪三、离心式分析仪运行特点：运行特点：样品和试剂分别置于转盘中各自相应的凹槽内，样品和试剂分别置于转盘中各自相应的凹槽内，样品在外侧，试剂在内侧，离心使内侧试剂受离心力样品在外侧，试剂在内

26、侧，离心使内侧试剂受离心力甩向外侧凹槽内，与样品相互混合发生反应，最后流甩向外侧凹槽内，与样品相互混合发生反应，最后流入转盘外圈的比色凹槽内由比色计检测。入转盘外圈的比色凹槽内由比色计检测。分析过程中，样品与试剂的混合、反应和检测等分析过程中，样品与试剂的混合、反应和检测等每一步骤几乎都是同时完成，故又称每一步骤几乎都是同时完成，故又称“同步分析同步分析”。缺点：缺点：同一个离心盘一般只能同时分析一个项目同一个离心盘一般只能同时分析一个项目 反应盘无自动清洗功能反应盘无自动清洗功能 分析速度慢分析速度慢42.离心式生化分析仪工作原理示意图离心式生化分析仪工作原理示意图43.四、连续流动式分析仪

27、四、连续流动式分析仪 测定项目相同的各待测样品与试剂混合后的测定项目相同的各待测样品与试剂混合后的化学反应，均在同一管道中经流动过程完成，又化学反应，均在同一管道中经流动过程完成，又称管道式分析仪称管道式分析仪 。单通道管道式自动分析仪结构示意图单通道管道式自动分析仪结构示意图 44.第四节第四节 自动生化分析方法和校准自动生化分析方法和校准一、自动生化分析的方法一、自动生化分析的方法用自动生化分析仪进行的生物化学物质检测的方用自动生化分析仪进行的生物化学物质检测的方法称自动生化分析方法。法称自动生化分析方法。1.终点法：终点法：被测物质经过一定反应时间后，当反被测物质经过一定反应时间后，当反

28、应达到平衡时测定吸光度，根据终点吸光度大小应达到平衡时测定吸光度，根据终点吸光度大小求出被测物浓度，称为终点法。包括一点终点法求出被测物浓度，称为终点法。包括一点终点法和两点终点法。和两点终点法。45.（1 1）一点终点法：）一点终点法：指加入标本和试剂后，当反指加入标本和试剂后，当反应达到一定阶段时（或终点）测定吸光度值计应达到一定阶段时（或终点）测定吸光度值计算待测物质浓度的方法。主要用于总蛋白、白算待测物质浓度的方法。主要用于总蛋白、白蛋白、血糖、甘油三酯和胆固醇等项目测定。蛋白、血糖、甘油三酯和胆固醇等项目测定。计算公式：计算公式：C CU U=（待测吸光度（待测吸光度A AU U-试

29、剂空白吸光度试剂空白吸光度A AB B）K K,K,K为校正系数。为校正系数。吸吸光光度度时间时间吸吸光光度度时间时间一点终点法反应曲线一点终点法反应曲线46.（2 2）两点终点法：）两点终点法：主要用于双试剂分析中，在第二试主要用于双试剂分析中，在第二试剂加入以前，选择某一点读取吸光度剂加入以前，选择某一点读取吸光度A A1 1，相当于样品空，相当于样品空白。追加第二试剂，反应到达终点后选择第二个点，读白。追加第二试剂，反应到达终点后选择第二个点，读取吸光度取吸光度A A2 2，两点吸光度之差用于计算结果，称两点终，两点吸光度之差用于计算结果，称两点终点法。二点法又称为二点终点法，使用双试剂

30、进行分析点法。二点法又称为二点终点法，使用双试剂进行分析时多采用二点法主要用于总胆红素、直接胆红素、甘油时多采用二点法主要用于总胆红素、直接胆红素、甘油三酯和胆固醇等项目测定。三酯和胆固醇等项目测定。计算公式：计算公式：C CU U=（待测吸光度（待测吸光度A A1 1-待测吸光度待测吸光度A A2 2）KK两点终点法反应曲线两点终点法反应曲线能有效地消除溶血、黄能有效地消除溶血、黄疸和脂浊等样品本身光疸和脂浊等样品本身光吸收造成的干扰。吸收造成的干扰。47.两点终点法的意义：两点终点法的意义：一定条件下可降低样品对反应或反应本身的特异性于扰一定条件下可降低样品对反应或反应本身的特异性于扰(主

31、要指色度干扰溶主要指色度干扰溶血（血（hemolysishemolysis）、黄疸（）、黄疸（icterusicterus）和脂浊（）和脂浊（lipo-turbidlipo-turbid）)。常采用双试。常采用双试剂，多以加剂，多以加R2R2前某一点作测定始点；某些情况下，也可以加前某一点作测定始点；某些情况下，也可以加R2R2后一点作测定后一点作测定始点。始点。48.2.2.固定时间法：固定时间法：指在时间-吸光度曲线上选择两个测光点，此两点既非反应初始吸光度亦非终点吸光度，这两点的吸光度差值用于结果计算，称为固定时间法（fixed-time essay），其计算公式与两点终点法相同，为CU

32、=(A2-A1)K。主要用于主要用于JaffeJaffe法测定肌酐。法测定肌酐。A A1 1A A2 2吸吸光光度度时间时间A A1 1A A2 2吸吸光光度度时间时间固定时间法反应曲线固定时间法反应曲线49.固定时间法与两点终点法的区别只是在：测定读数的末点不在反应平衡区段，而是根据方法学选择。如血清肌酐(苦味酸法)测定。苦味酸法测定肌酐，反应的最初苦味酸法测定肌酐，反应的最初30s30s内，血清中快反应干扰物（如微生物、丙内，血清中快反应干扰物（如微生物、丙酮酸、乙酰乙酸等）能与碱性苦味酸反应；在第二个酮酸、乙酰乙酸等）能与碱性苦味酸反应；在第二个30s30s时碱性苦味酸主要与时碱性苦味酸

33、主要与肌酐反应，且此段时间吸光度曲线的线性较好（故也可用连续监测法测定肌酐反应，且此段时间吸光度曲线的线性较好（故也可用连续监测法测定肌酐）；在肌酐）；在8080120s120s及其以后，碱性苦味可与蛋白质以及其它慢反应干扰物及其以后，碱性苦味可与蛋白质以及其它慢反应干扰物反应。反应。50.3.3.连续监测法：连续监测法：根据酶促反应的特点，当底物浓度根据酶促反应的特点，当底物浓度足够大时，当酶促反应达到最大时，单位时间内底足够大时，当酶促反应达到最大时，单位时间内底物的消耗量和产物的生成量维特不变，即单位时间物的消耗量和产物的生成量维特不变，即单位时间内吸光度变化值不变，在酶促反应的零级反应

34、区内内吸光度变化值不变，在酶促反应的零级反应区内选取两个时间点，计算出出每分钟吸光度变化，吸选取两个时间点，计算出出每分钟吸光度变化，吸光度变化值同酶活性大小成正比。速率光度变化值同酶活性大小成正比。速率A A法常应用于法常应用于酶活性的测定。酶活性的测定。计算公式：计算公式：C CU U=A/minK=A/minKR R吸吸光光度度时间时间单试剂连续监测法单试剂连续监测法双试剂连续监测法双试剂连续监测法51.连续监测法反应曲线连续监测法反应曲线52.二、自动生化分析仪的校准二、自动生化分析仪的校准 生化分析仪应定期进行校准（定标），使仪器性生化分析仪应定期进行校准（定标），使仪器性能状态符合

35、仪器的质量标准。能状态符合仪器的质量标准。1.用校准品进行校准用校准品进行校准 用仪器厂商配套的试剂及校准品进行相应测定项用仪器厂商配套的试剂及校准品进行相应测定项目的校准，参考操作手册，执行校准程序，当已知浓目的校准，参考操作手册，执行校准程序，当已知浓度的校准品吸光度测出后，仪器会自动计算出校准常度的校准品吸光度测出后，仪器会自动计算出校准常数数K，存储于计算机中，供样品测定时计算用。，存储于计算机中，供样品测定时计算用。53.用校准品进行校准应注意：用校准品进行校准应注意：选择合适的校准品，以保证检测结果的可溯源性；选择合适的校准品，以保证检测结果的可溯源性；根据试验项目确定校准的频度，

36、但每根据试验项目确定校准的频度，但每6个月至少个月至少进行一次校准；进行一次校准；室内质控出现异常的趋势或者偏移时的项目应重室内质控出现异常的趋势或者偏移时的项目应重新校准；新校准；注意区别定值质控血清和校准品，绝不可用定值注意区别定值质控血清和校准品，绝不可用定值质控血清代替校准品进行校准质控血清代替校准品进行校准校准方法可采用两点或多点校准。校准方法可采用两点或多点校准。54.2.2.用实际用实际K K值进行校准值进行校准 多用于酶活性测定中，因酶活性尚无公认的多用于酶活性测定中，因酶活性尚无公认的校准品可用，因而根据酶活性的国际单位定义得校准品可用，因而根据酶活性的国际单位定义得出酶活性

37、的计算公式为：出酶活性的计算公式为：U/L=A/minKU/L=A/minKK=K=10106 6TTV VLSLSV V为理论摩尔吸光系数，由此计算的为理论摩尔吸光系数，由此计算的K K值称为理论值称为理论K K值。值。55.采用理论采用理论K K值得前提应当是样品和试剂的加量准值得前提应当是样品和试剂的加量准确、比色杯的光径准确，温度控制精确以及波长准确确、比色杯的光径准确，温度控制精确以及波长准确等。等。事实上由于各型分析仪的性能不一，特别是仪器事实上由于各型分析仪的性能不一，特别是仪器的加样系统、分光系统等方面的差异，以及温度的影的加样系统、分光系统等方面的差异，以及温度的影响，使仪器

38、达不到理论上的最佳状态，从而导致该仪响，使仪器达不到理论上的最佳状态，从而导致该仪器的实际器的实际K K值与理论值与理论K K值不一致，因而有必要获得实际值不一致，因而有必要获得实际的摩尔吸光系数，然后用来计算的的摩尔吸光系数，然后用来计算的K K值称为实际值称为实际K K值。值。使用实际使用实际K K值应注意：值应注意：不同的仪器，实际不同的仪器，实际K K值不同值不同同一仪器的不同时期，特别是仪器进行了维修甚至同一仪器的不同时期，特别是仪器进行了维修甚至更换了重要部件，实际更换了重要部件，实际K K值不同值不同不同的检测系统不同的检测系统K K值不同值不同56.第五节第五节 自动生化分析仪

39、的参数设置自动生化分析仪的参数设置 仪器的参数就是仪器工作的指令，参数的正仪器的参数就是仪器工作的指令，参数的正确设置和合理使用是仪器正常工作的前提条件。确设置和合理使用是仪器正常工作的前提条件。封闭式生化分析仪的参数及开放式生化分析封闭式生化分析仪的参数及开放式生化分析仪的有些参数由厂家提供无需设定。开放式生化仪的有些参数由厂家提供无需设定。开放式生化分析仪的部分参数，应在使用前根据各自实验室分析仪的部分参数，应在使用前根据各自实验室及各自使用仪器不同，正确设置。及各自使用仪器不同，正确设置。57.（一）基本参数设置（一）基本参数设置 1.试验名称：试验名称：指测定项目的标示符，指测定项目的

40、标示符，常以项目的英文缩写来表示。常以项目的英文缩写来表示。2.方法类型：方法类型：自动生化分析仪分析方自动生化分析仪分析方法是在常规检测方法的基础上，借助仪器法是在常规检测方法的基础上，借助仪器的机械和电子装置做进一步扩展。的机械和电子装置做进一步扩展。常用的方法一点终点法、两点终点法、常用的方法一点终点法、两点终点法、固定时间法、连续监测法等。固定时间法、连续监测法等。根据被测物质的检测方法原理选择其根据被测物质的检测方法原理选择其中相应的分析方法。中相应的分析方法。58.3.反应温度：反应温度：自动生化分析仪通常设有自动生化分析仪通常设有25、30、37三种温度，为了使反应的温度与体内温

41、三种温度，为了使反应的温度与体内温度一致，一般选用度一致，一般选用37。4.测定波长：测定波长：单波长：当测定体系中只有一单波长：当测定体系中只有一种组分或混合溶液中待测组分的吸收峰与其他共存种组分或混合溶液中待测组分的吸收峰与其他共存物质的吸收峰无重叠时，可用单波长检测。物质的吸收峰无重叠时，可用单波长检测。自动生化分析仪常用双波长或多波长自动生化分析仪常用双波长或多波长。根据根据光吸收曲线选择被测物质反应产物最大吸收峰作为光吸收曲线选择被测物质反应产物最大吸收峰作为主波长，尽量避开或减少来自试剂空白和样品空白主波长，尽量避开或减少来自试剂空白和样品空白的干扰；的干扰；次次波长的选择原则是干

42、扰物主波长的吸收波长的选择原则是干扰物主波长的吸收与次波长吸光度越接近越好，测定时主波长的吸光与次波长吸光度越接近越好，测定时主波长的吸光度减去次波长的吸光度可消除溶血、浊度等干扰物度减去次波长的吸光度可消除溶血、浊度等干扰物的影响。的影响。59.5.反应方向：反应方向：正向反应和负向反应，吸光度增加正向反应和负向反应，吸光度增加为正向反应，吸光度下降为负向反应。为正向反应，吸光度下降为负向反应。6.样品量和试剂量：样品量和试剂量：样品量与试剂量一般按照试样品量与试剂量一般按照试剂说明书上的比例，并结合仪器的特性，即样品和试剂说明书上的比例，并结合仪器的特性，即样品和试剂最小加样量及加样范围、

43、最小反应体积等，进行设剂最小加样量及加样范围、最小反应体积等，进行设置。置。亦可按比例缩减或重新设计，但需考虑仪器的亦可按比例缩减或重新设计，但需考虑仪器的检测灵敏度及线性范围，尽可能使稀释倍数大些，以检测灵敏度及线性范围，尽可能使稀释倍数大些，以降低样品中其他成分的影响。降低样品中其他成分的影响。7.总反应容量：总反应容量：一般是一般是180-350l，总反应容量，总反应容量太小，无法进行吸光度测定。太小，无法进行吸光度测定。60.8.样品空白：样品空白：终点法用，即依据是否需要扣除空终点法用，即依据是否需要扣除空白，选择白，选择YES或或NO。9.孵育时间：孵育时间：终点法是样品与试剂混匀

44、开始至反终点法是样品与试剂混匀开始至反应终点为止的时间；固定时间法是第一吸光度选择点应终点为止的时间；固定时间法是第一吸光度选择点开始至第二吸光度选择点为止。开始至第二吸光度选择点为止。10.延迟时间：延迟时间：连续监测法用，是样品与反应试剂连续监测法用，是样品与反应试剂（第二试剂）混匀至连续监测期第一吸光度选择点之（第二试剂）混匀至连续监测期第一吸光度选择点之间的时间。间的时间。11.连续监测时间：连续监测时间：在延迟时间之后即开始，一般在延迟时间之后即开始，一般为为60-120s，不少于，不少于4个吸光度监测点。个吸光度监测点。61.12.标准液浓度：标准液浓度：已知线性较好者只需一个浓度

45、，非已知线性较好者只需一个浓度，非线性方法学可线性方法学可5-6个浓度。个浓度。13.校准校准K值或理论值或理论K值：值：通过校准得到的通过校准得到的K值为校准值为校准K值，由计算得到的值，由计算得到的K值为理论值为理论K值。值。14.计量单位计量单位15.小数点位数：小数点位数：按有效数字设定按有效数字设定。16.线性范围：线性范围：用于设定吸光度的最大值和最小值。用于设定吸光度的最大值和最小值。当吸光度在线性范围时，认为吸光度和物质浓度成当吸光度在线性范围时，认为吸光度和物质浓度成正比。超过线性范围应增加样品量或减少样品量重正比。超过线性范围应增加样品量或减少样品量重测。测。62.17.底

46、物耗尽：底物耗尽：在负反应的酶活性测定中可设置在负反应的酶活性测定中可设置此参数，以规定一个吸光度下限。若低于此限时底物此参数，以规定一个吸光度下限。若低于此限时底物已太少，不足以维持零级反应而导致检测结果不准确。已太少，不足以维持零级反应而导致检测结果不准确。18.参考值范围：参考值范围：对超出此范围的检测结果，仪对超出此范围的检测结果，仪器会打印出提示。器会打印出提示。质控参数质控参数 l通常每个项目要求至少两个水平的质控品。通常每个项目要求至少两个水平的质控品。l每个质控品的名称、批号、每个检测项目的靶值和每个质控品的名称、批号、每个检测项目的靶值和标准差均需设置于自动生化分析仪中。标准

47、差均需设置于自动生化分析仪中。（二）特殊分析参数设置（二）特殊分析参数设置63.（二）特殊分析参数（二）特殊分析参数试剂空白吸光度范围试剂空白吸光度范围 试剂空白速率试剂空白速率 样品预稀释样品预稀释 前区检查前区检查 方法学补偿系数方法学补偿系数 底物耗尽限值底物耗尽限值 64.第六节第六节 自动生化分析仪的性能指标自动生化分析仪的性能指标 性能指标是评价仪器的主要依据，正确评价仪器性能指标是评价仪器的主要依据，正确评价仪器的性能，合理选用适合自己实验室的仪器，对每个实的性能，合理选用适合自己实验室的仪器，对每个实验室来说，都非常重要。验室来说，都非常重要。在自动生化分析仪的发展过程中，仪器

48、的结构和在自动生化分析仪的发展过程中，仪器的结构和性能不断完善，功能和技术指标不断更新，自动程度性能不断完善，功能和技术指标不断更新，自动程度越来越高，检测速度越来越快，检测结果的精密度和越来越高，检测速度越来越快，检测结果的精密度和准确度也越来越高。准确度也越来越高。65.（一）自动化程度（一）自动化程度 自动化程度指仪器能够独立完成生化检验操作程自动化程度指仪器能够独立完成生化检验操作程序的能力。序的能力。一般而言，自动化程度越高的仪器使用越一般而言，自动化程度越高的仪器使用越简单，但维护要求很高。简单，但维护要求很高。生化分析仪自化程度的高低，取决于仪器的计算生化分析仪自化程度的高低，取

49、决于仪器的计算机处理功能和软件的智能化程度机处理功能和软件的智能化程度，表现为：，表现为：1.能否自动处理样品、自动加样、自动清洗、自能否自动处理样品、自动加样、自动清洗、自动开关机等。动开关机等。2.单位时间处理样品的能力、可同步分析的项目单位时间处理样品的能力、可同步分析的项目数量等。数量等。3.软件支持功能是否强大，例如，是否有样品针软件支持功能是否强大，例如，是否有样品针和试剂针的自动报警功能、试剂剩余量的预示功能、和试剂针的自动报警功能、试剂剩余量的预示功能、数据分析和处理能力、故障自我诊断功能等。数据分析和处理能力、故障自我诊断功能等。66.（二）分析效率（二）分析效率 分析效率是

50、指在分析方法相同的情况下分分析效率是指在分析方法相同的情况下分析速度的快慢，反应单位时间内仪器可处理标析速度的快慢，反应单位时间内仪器可处理标本的能力。本的能力。效率的高低效率的高低取决于一次测定中可测样品的取决于一次测定中可测样品的多少和可测项目的多少。多少和可测项目的多少。不同类型的自动生化分析仪，由于其结果不同类型的自动生化分析仪，由于其结果和设计原理以及微机应用程度不同，分析效率和设计原理以及微机应用程度不同，分析效率差别很大。差别很大。67.1.单通道自动生化分析仪一次只能检测一个项单通道自动生化分析仪一次只能检测一个项目，分析效率低；多通道自动生化分析仪可同时检测目，分析效率低；多