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1、自身免疫病与自身抗体的检测自身免疫病与自身抗体的检测免疫免疫 机体识别和排除抗原性异物的功能，机体识别和排除抗原性异物的功能，也就是机体免疫系统对抗原刺激所产生的也就是机体免疫系统对抗原刺激所产生的以排除抗原为目的的生理过程。以排除抗原为目的的生理过程。抗原性异物：抗原性异物：引起过敏反应：花粉、食物和药物引起过敏反应：花粉、食物和药物;病原微生物及其毒性产物病原微生物及其毒性产物;衰老退变的细胞及偶尔出现的癌变细胞。衰老退变的细胞及偶尔出现的癌变细胞。有利：通过对这些抗原性异物的识别和清有利：通过对这些抗原性异物的识别和清 除，机体才能保持相对的自身稳定。除，机体才能保持相对的自身稳定。不利
2、：免疫识别也可针对自身成分，引起不利：免疫识别也可针对自身成分，引起超敏反应和自身免疫病等。超敏反应和自身免疫病等。免疫保护：一般情况下，免疫应答的结免疫保护：一般情况下，免疫应答的结果是产生抗体或致敏淋巴细胞，果是产生抗体或致敏淋巴细胞，具有抗具有抗感染、抗肿瘤等对机体有利的效果。感染、抗肿瘤等对机体有利的效果。免疫耐受现象免疫耐受现象 天然耐受：天然耐受：1945年年OWEN发现异卵双生发现异卵双生的两只小牛虽然自体内的红细胞血型不的两只小牛虽然自体内的红细胞血型不同、抗原性不同，但在对方体内却不引同、抗原性不同，但在对方体内却不引起免疫反应。起免疫反应。胚胎期接受异型抗原刺激胚胎期接受异
3、型抗原刺激免疫耐受；免疫耐受；宿主淋巴细胞有识别宿主淋巴细胞有识别“自己自己”与与“非已非已”的能力。的能力。诱导免疫诱导免疫 1953年年Billingham等人企图证明是否机等人企图证明是否机体在免疫成熟前引入异物可作为体在免疫成熟前引入异物可作为“自己自己”成分加以识别；成分加以识别；用遗传不同的纯系小白鼠的淋巴细胞注用遗传不同的纯系小白鼠的淋巴细胞注入另一纯系胚胎鼠内，在出生后发育为入另一纯系胚胎鼠内，在出生后发育为成体时，可接受供体的皮肤移植，而不成体时，可接受供体的皮肤移植，而不产生移植排斥反应。产生移植排斥反应。隐蔽抗原：机体有些组织成分由于解剖隐蔽抗原：机体有些组织成分由于解剖
4、位置的特殊性，正常情况下终生不与免位置的特殊性，正常情况下终生不与免疫系统接触，称为隐蔽抗原。例如：眼疫系统接触，称为隐蔽抗原。例如：眼晶状体、葡萄膜和精子等都是隐蔽抗原。晶状体、葡萄膜和精子等都是隐蔽抗原。机体不能建立对这些组织的免疫耐受性。机体不能建立对这些组织的免疫耐受性。出生后，由于感染或外伤等原因，隐蔽出生后，由于感染或外伤等原因，隐蔽抗原被释放出来，与免疫系统接触便能抗原被释放出来，与免疫系统接触便能诱导相应的自身免疫应答，而导致自身诱导相应的自身免疫应答，而导致自身免疫病的发生。如交感性眼炎等。免疫病的发生。如交感性眼炎等。自身免疫：是指机体免疫系统对自身抗自身免疫：是指机体免疫
5、系统对自身抗原发生免疫应答，产生自身抗体和（或）原发生免疫应答，产生自身抗体和（或）致敏淋巴细胞的现象。致敏淋巴细胞的现象。自身免疫发生的原因：自身免疫发生的原因：1、机体抗原特异性淋巴细胞发生异常，、机体抗原特异性淋巴细胞发生异常，对正常组织发生免疫应答状态；对正常组织发生免疫应答状态；2、机体自身组织成分发生改变从而引起机体自身组织成分发生改变从而引起的免疫应答状态。的免疫应答状态。自身免疫病：自身免疫病：是指在各种内外因素的作用下，自是指在各种内外因素的作用下，自身免疫反应过强，超过了生理性自身免身免疫反应过强，超过了生理性自身免疫反应的强度且持续相当长时间，造成疫反应的强度且持续相当长
6、时间，造成对正常细胞、器官的功能与结构的破坏，对正常细胞、器官的功能与结构的破坏，呈现与此损伤相关的临床表现及免疫学呈现与此损伤相关的临床表现及免疫学异常。异常。微弱的自身免疫并不引起机体的病理性损微弱的自身免疫并不引起机体的病理性损伤，在许多正常人血清中可发现多种微量的自伤，在许多正常人血清中可发现多种微量的自身抗体或致敏淋巴细胞，但在严格的限制范围身抗体或致敏淋巴细胞，但在严格的限制范围内（免疫自稳），这种自身免疫现象随着年龄内（免疫自稳），这种自身免疫现象随着年龄递增而愈加明显，在递增而愈加明显，在70%以上的正常老年人血以上的正常老年人血清中可查出自身抗体，这些低滴度的自身抗体清中可查
7、出自身抗体，这些低滴度的自身抗体能促进体内衰老蜕变的自身成分（自身抗原）能促进体内衰老蜕变的自身成分（自身抗原）的消除，以执行免疫稳定与免疫监视的任务，的消除，以执行免疫稳定与免疫监视的任务，所以说：自身免疫反应是免疫系统正常生理功所以说：自身免疫反应是免疫系统正常生理功能的重要组成部分能的重要组成部分。自身免疫病的基本特征自身免疫病的基本特征自身免疫病的病因不祥，有些自身免疫自身免疫病的病因不祥，有些自身免疫病的发生和复发似与某些外因有关，但病的发生和复发似与某些外因有关，但大多数自身免疫病似乎是大多数自身免疫病似乎是“自发自发”地发地发生的，致少目前未找到肯定的有关外因。生的，致少目前未找
8、到肯定的有关外因。自身抗体和血液中可检出高滴度的（或）自身抗体和血液中可检出高滴度的（或）与自身组织成分起反应的致敏淋巴细胞。与自身组织成分起反应的致敏淋巴细胞。患者组织器官的病理特征为免疫炎症，并且损患者组织器官的病理特征为免疫炎症，并且损伤的范围与自身抗体或致敏淋巴细胞所针对的伤的范围与自身抗体或致敏淋巴细胞所针对的抗原分布相对应。抗原分布相对应。1、器官特异性自身免疫病：如桥本氏甲状腺炎，、器官特异性自身免疫病：如桥本氏甲状腺炎，血液中可检出高滴度的抗甲状腺球蛋白抗体血液中可检出高滴度的抗甲状腺球蛋白抗体-只损伤患者甲状腺。只损伤患者甲状腺。2、非器官特异性自身免疫病：如系统性红斑狼、非
9、器官特异性自身免疫病：如系统性红斑狼疮疮（SLE），），血液中可检出多种自身抗体，损血液中可检出多种自身抗体，损伤并非局限于某一器官系统，病理损伤广泛。伤并非局限于某一器官系统，病理损伤广泛。自身免疫病的发生与多因素相关，包括自身免疫病的发生与多因素相关，包括遗传因素、性别差异、年龄大小、气候遗传因素、性别差异、年龄大小、气候环境及地理位置等。环境及地理位置等。遗传因素：遗传因素：强直性脊柱炎强直性脊柱炎（AS）患者患者90%为为HLA-B27阳性，然而阳性，然而在在HLA-B27阳性阳性的人群中发生强直性脊柱炎的可能仅为的人群中发生强直性脊柱炎的可能仅为2%，而第一级，而第一级HLA-B27
10、阳性的亲属中，阳性的亲属中，发生强直性脊柱炎的危险性达发生强直性脊柱炎的危险性达20%。系统性红斑狼疮（系统性红斑狼疮（SLE）的家族发病的家族发病率也较高，在率也较高，在SLE第一代亲属中发病率第一代亲属中发病率达达3%-5%，同胞姐妹发病率更高，特别，同胞姐妹发病率更高，特别是单卵双胎更为常见是单卵双胎更为常见。在。在1980年的调查年的调查中中35组单卵双胎的患者中，有组单卵双胎的患者中，有22组患组患SLE，共患病率达共患病率达62.9%，而双卵双胎，而双卵双胎8组中仅组中仅1组患病，为组患病，为12.5%。性别差异和年龄大小：性别差异和年龄大小：强直性脊柱强直性脊柱炎（炎（AS）多见
11、于年轻男多见于年轻男性，其发病年龄从性，其发病年龄从4-90岁不等，但以岁不等，但以15-20岁多见，男女比列为岁多见，男女比列为9-10:1，但最近，但最近有人调查发现男女比列约为有人调查发现男女比列约为1.5-3:1，只，只不过女性不过女性 强直性脊柱炎患者起病缓慢，强直性脊柱炎患者起病缓慢，病情较轻，易被误诊。病情较轻，易被误诊。系统性红斑狼疮（系统性红斑狼疮（SLE）是最常见的自是最常见的自身免疫性疾病之一，发病的男女比列为身免疫性疾病之一，发病的男女比列为1:9，在生肓年龄甚至可高达，在生肓年龄甚至可高达1:30，而且，而且多发生于多发生于20-40岁的孕龄妇女。岁的孕龄妇女。许多患
12、者因妊娠或分娩发病、加重许多患者因妊娠或分娩发病、加重,这就这就提示了内分泌对病情影响至关重要，妊提示了内分泌对病情影响至关重要，妊娠期妇女由于内分泌发生变化，雌激素娠期妇女由于内分泌发生变化，雌激素水平升高，导致水平升高，导致CD4细胞（细胞（T辅助细胞）辅助细胞）功能增强，功能增强，CD8细胞（细胞（T抑制细胞）功能抑制细胞）功能减弱，有利于引起免疫应答，产生抗体。减弱，有利于引起免疫应答，产生抗体。气候环境及地理位置：气候环境及地理位置：自身免疫性疾病与气候环境、地理位自身免疫性疾病与气候环境、地理位置及种族等有关，以系统性红斑狼疮置及种族等有关，以系统性红斑狼疮（SLE）为例，其在美国
13、黑人的发病率为例，其在美国黑人的发病率是白人的是白人的3倍，但非洲黑人倍，但非洲黑人SLE的患病率的患病率并不高，中国人患病率也明显高于其它并不高，中国人患病率也明显高于其它东方国家与西方人，这就提示了东方国家与西方人，这就提示了SLE的的发病有种族遗传性。发病有种族遗传性。SLE在不同种族中的发病率在不同种族中的发病率国国 籍籍 发发 病病 率（率（/10万人）万人）瑞瑞 典典 39.0 芬芬 兰兰 28.0 中国中国 24.1 菲律宾菲律宾 19.9 日本日本 18.2 印第安印第安 16.0 美国黑美国黑 人人 10.54 夏威夷夏威夷 5.8自身免疫病在血清学检查时呈现交叉重自身免疫病
14、在血清学检查时呈现交叉重叠现象：叠现象：如：桥本氏甲状腺炎患者血清中不仅如：桥本氏甲状腺炎患者血清中不仅有高滴度的抗甲状球蛋白抗体，同时常有高滴度的抗甲状球蛋白抗体，同时常可检出抗胃壁细胞抗体，且甲状腺炎的可检出抗胃壁细胞抗体，且甲状腺炎的患者患自身免疫性恶性贫血症的机会也患者患自身免疫性恶性贫血症的机会也较正常人高得多。反之，患胃的自身免较正常人高得多。反之，患胃的自身免疫病（自身免疫性萎缩性胃炎）而致恶疫病（自身免疫性萎缩性胃炎）而致恶性贫血症的患者中，部分人有抗甲状腺性贫血症的患者中，部分人有抗甲状腺球蛋白抗体，而且他们患自身免疫性甲球蛋白抗体，而且他们患自身免疫性甲状腺炎的机会也确实比
15、正常人高得多。状腺炎的机会也确实比正常人高得多。大多数自身免疫病呈现出发作大多数自身免疫病呈现出发作缓解缓解复发复发缓解缓解迁延的临床特征，迁延的临床特征，以致成为终身痼疾。以致成为终身痼疾。如：如：SLE是一种慢性、全身性疾病，病变是一种慢性、全身性疾病，病变往往是症状加重与缓解交替出现，缓解往往是症状加重与缓解交替出现，缓解可持续多年，但常因感染、感冒、阳光可持续多年，但常因感染、感冒、阳光暴晒、酗洒、过度劳累、妊娠等因素导暴晒、酗洒、过度劳累、妊娠等因素导致疾病发作。少数病人因激素使用不当，致疾病发作。少数病人因激素使用不当，撒药过快或突然停药引起复发，疾病每撒药过快或突然停药引起复发，
16、疾病每发作一次，受累的器官，特别是肾脏的发作一次，受累的器官，特别是肾脏的损伤就加重一次，最后可导致肾功能不损伤就加重一次，最后可导致肾功能不全、肾衰而死亡。全、肾衰而死亡。免疫抑制剂（肾上腺皮质激素、环磷酰免疫抑制剂（肾上腺皮质激素、环磷酰胺）治疗有一定疗效，但副作用与不良胺）治疗有一定疗效，但副作用与不良反应严重，停药后常易复发。反应严重，停药后常易复发。SLE的预后以下列因素有关：的预后以下列因素有关：发病经过、内脏损伤的类型与程度、发病经过、内脏损伤的类型与程度、诊断与治疗的早晚、治疗措施是否正确、诊断与治疗的早晚、治疗措施是否正确、有无合并症、发病的年龄、性别、妊娠有无合并症、发病的
17、年龄、性别、妊娠及患者的自我保护意识、配合治疗等密及患者的自我保护意识、配合治疗等密切相关。切相关。在在60年代以前，年代以前，SLE患者患者2年死亡率为年死亡率为50%以上，以上，5年死亡率达年死亡率达90%以上。主要以上。主要死亡原因依次为肾功能衰竭、继发感染、死亡原因依次为肾功能衰竭、继发感染、心肺病变、血液系统和中枢神经系统病心肺病变、血液系统和中枢神经系统病变。变。随着科学技术的进展，检测技术的不断随着科学技术的进展，检测技术的不断完善，早期诊断率得到了很大的提高，完善，早期诊断率得到了很大的提高，治疗有力、得当，治疗有力、得当，SLE的预后有了很大的预后有了很大的改观，的改观，10
18、年存活率达年存活率达85%以上，病程以上，病程最长的已达最长的已达50多年。多年。自身免疫病的分类自身免疫病的分类按疾病累及的系统区分按疾病累及的系统区分：结缔组织疾病：如：结缔组织疾病：如：SLE、RA等。等。消化系统疾病：如：自身免疫性慢性活消化系统疾病：如：自身免疫性慢性活动性肝炎（动性肝炎（AIH）、）、PBC等。等。生殖系统疾病：如：习惯性流产、子宫生殖系统疾病：如：习惯性流产、子宫内膜异位症等。内膜异位症等。神经肌肉疾病：如：全植物神经功能不神经肌肉疾病：如：全植物神经功能不全、重症肌无力等。全、重症肌无力等。泌尿系统疾病：如：肾小球基底膜肾炎、泌尿系统疾病：如：肾小球基底膜肾炎、
19、原发原发性性IgG肾病等。肾病等。内分泌系统疾病：如：内分泌系统疾病：如：1型糖尿病、桥本型糖尿病、桥本氏甲状腺炎等。氏甲状腺炎等。血液系统疾病：如：自身免疫性溶血性血液系统疾病：如：自身免疫性溶血性贫血、原发性血小板贫血、原发性血小板 减少性紫癜等。减少性紫癜等。心血管系统疾病：如：风湿热、病毒性心血管系统疾病：如：风湿热、病毒性心肌炎与心肌病等。心肌炎与心肌病等。呼吸系统疾病：如：特发性肺间质纤维呼吸系统疾病：如：特发性肺间质纤维化等。化等。五官科相关疾病：如：交感性眼炎、晶五官科相关疾病：如：交感性眼炎、晶体过敏性葡萄膜炎等。体过敏性葡萄膜炎等。皮肤组织疾病：如：寻常天疱疮、类天皮肤组织
20、疾病：如：寻常天疱疮、类天疱疮等。疱疮等。按抗原成分的分布范围分：按抗原成分的分布范围分：器官特异性自身免疫病（局限性自身免器官特异性自身免疫病（局限性自身免疫病）疫病）其自身抗原常为某一器官的特定成其自身抗原常为某一器官的特定成分，所产生的自身抗体或分，所产生的自身抗体或/和致敏淋巴细和致敏淋巴细胞也主要是针对此特定的自身组织，病胞也主要是针对此特定的自身组织，病变范围严格限制在该器官及所及的范围。变范围严格限制在该器官及所及的范围。如：如：1型糖尿病、桥本氏甲状腺炎等。型糖尿病、桥本氏甲状腺炎等。器官非特异性自身免疫病（系统性自身器官非特异性自身免疫病（系统性自身免疫病）免疫病）其自身抗原
21、则为细胞核或细胞浆成其自身抗原则为细胞核或细胞浆成分，如组蛋白或线粒体等，病变可侵犯分，如组蛋白或线粒体等，病变可侵犯全身各器官系统，损伤并非局限于某一全身各器官系统，损伤并非局限于某一器官系统，病理损伤广泛，体内有多种器官系统，病理损伤广泛，体内有多种自身抗体，其中有些自身抗体可与所有自身抗体，其中有些自身抗体可与所有细胞核成分（如细胞核成分（如DNA）起反应。如：起反应。如：SLE。中间型的自身免疫病中间型的自身免疫病 实际上，在器官特异性自身免疫病实际上，在器官特异性自身免疫病与器官非特异性自身免疫病之间，还存与器官非特异性自身免疫病之间，还存在一些中间型的自身免疫病，如原发性在一些中间
22、型的自身免疫病，如原发性胆汁性肝硬化（胆汁性肝硬化（PBC）就极为典型。本就极为典型。本病的小胆管是免疫损伤的主要靶器官，病的小胆管是免疫损伤的主要靶器官，但血液中的自身抗体但血液中的自身抗体(AMA)却不只对肝脏却不只对肝脏具有特异性，而是能攻击所有细胞的线具有特异性，而是能攻击所有细胞的线粒体粒体自身免疫病按其发病时有无诱因可分：自身免疫病按其发病时有无诱因可分：原发性自身免疫病（特发性自身免疫病）原发性自身免疫病（特发性自身免疫病）这类疾病的发生很难找到明确具体的环这类疾病的发生很难找到明确具体的环境因素，是自身免疫病的主体。境因素，是自身免疫病的主体。继发性自身免疫病继发性自身免疫病
23、这类疾病的发生常有比较明确具体这类疾病的发生常有比较明确具体的原因，如外伤后交感性眼炎，外伤后的原因，如外伤后交感性眼炎，外伤后睾丸炎所致的男性不肓症等。睾丸炎所致的男性不肓症等。自身抗体的检测自身抗体的检测 自身抗体：是指抗自身细胞内，细胞表自身抗体：是指抗自身细胞内，细胞表面和细胞外抗原的免疫球蛋白。面和细胞外抗原的免疫球蛋白。自身抗体是自身免疫病的重要标记，自身抗体是自身免疫病的重要标记，每种自身免疫病都伴有特征性的自身抗每种自身免疫病都伴有特征性的自身抗体谱，某些自身抗体因对疾病的诊断具体谱，某些自身抗体因对疾病的诊断具有高度的特异性，已成为诊断某些疾病有高度的特异性，已成为诊断某些疾
24、病的血清标记抗体或特异性抗体，某些自的血清标记抗体或特异性抗体，某些自身抗体与疾病的活动性有相关性，个别身抗体与疾病的活动性有相关性，个别的自身抗体被证实参与了组织的免疫病的自身抗体被证实参与了组织的免疫病理损伤。理损伤。自身抗体检测的临床意义自身抗体检测的临床意义有助于自身免疫病的早期诊断；有助于自身免疫病的早期诊断；有助于判断疾病的活动性和预后，观察有助于判断疾病的活动性和预后，观察治疗反应，指导临床用药；治疗反应，指导临床用药；有助于进一步研究和阐明自身免疫性疾有助于进一步研究和阐明自身免疫性疾病的发病机制。病的发病机制。自身抗体的检测方法自身抗体的检测方法免疫荧光标记法：免疫荧光标记法
25、：原理原理：将抗体（免疫球蛋白）或抗原与：将抗体（免疫球蛋白）或抗原与荧光素结合，而不失其抗体（或抗原）荧光素结合，而不失其抗体（或抗原）活性，成为具有特异性的荧光抗体（或活性，成为具有特异性的荧光抗体（或抗原）试剂。当浸染标本中含有特异性抗原）试剂。当浸染标本中含有特异性的抗原（或抗体）时，就会在抗原和抗的抗原（或抗体）时，就会在抗原和抗体结合部位发出亮绿色荧光。依其荧光体结合部位发出亮绿色荧光。依其荧光强度制定加号，阴性则无特异荧光。强度制定加号，阴性则无特异荧光。直接荧光染色技术直接荧光染色技术（DIF）原理原理：荧光标记抗原或抗体，直接与相：荧光标记抗原或抗体，直接与相应抗体或抗原结合
26、，则抗原和抗体结合应抗体或抗原结合，则抗原和抗体结合部位发出亮绿色荧光，为特异性结合。部位发出亮绿色荧光，为特异性结合。方法特点方法特点：免疫荧光直接法，特异性强；免疫荧光直接法，特异性强；只能检测一种抗原或抗体；只能检测一种抗原或抗体；适用于细菌抗原和病毒抗原检查；适用于细菌抗原和病毒抗原检查；间接荧光染色技术间接荧光染色技术（IIF）原理原理：病人血清中的抗体与基质片中的：病人血清中的抗体与基质片中的抗原结合，形成抗原抗体复合物，再加抗原结合，形成抗原抗体复合物，再加荧光标记的抗体，则荧光标记抗体与抗荧光标记的抗体，则荧光标记抗体与抗原抗体复合物结合发出亮绿色荧光。原抗体复合物结合发出亮绿
27、色荧光。基质片基质片+病人血清病人血清-抗原抗体复合物抗原抗体复合物+荧荧(抗原）抗原）（抗体）（抗体）光标记的抗体光标记的抗体-抗原抗体复合物抗原抗体复合物-荧光荧光标记的抗体标记的抗体方法特点方法特点：既可定位和鉴定抗原，还可测未知既可定位和鉴定抗原，还可测未知抗体，这就扩大了免疫荧光技术的应用抗体，这就扩大了免疫荧光技术的应用范围。范围。荧光标记抗体可以示踪抗原和抗体荧光标记抗体可以示踪抗原和抗体结合位置，显示了方法的敏感性，因为结合位置，显示了方法的敏感性，因为一个抗原单位可以结合很多抗体单位，一个抗原单位可以结合很多抗体单位，如果每个抗原单位可结合如果每个抗原单位可结合5个抗体单位，
28、个抗体单位，而每个抗体单位又可结合而每个抗体单位又可结合5个荧光抗体单个荧光抗体单位的话，则细胞内的抗原是以位的话，则细胞内的抗原是以25倍的荧倍的荧光物质显示出来。光物质显示出来。酶联免疫吸附试验酶联免疫吸附试验(ELISA）间接法测间接法测抗体抗体原理原理：用纯化的抗原包被微孔板，检测：用纯化的抗原包被微孔板，检测相应的抗体。相应的抗体。放射免疫法放射免疫法(RIA）原理原理：病人血清中的抗体（或抗原）与：病人血清中的抗体（或抗原）与同位素标记的抗原（或抗体）结合形成同位素标记的抗原（或抗体）结合形成抗原抗体复合物，测量结合或游离的同抗原抗体复合物，测量结合或游离的同位素的放射性，即标志血
29、清中抗体或抗位素的放射性，即标志血清中抗体或抗原的浓度。原的浓度。金标免疫斑点法金标免疫斑点法原理原理：斑点反应板上固相纯化抗原与血：斑点反应板上固相纯化抗原与血清中抗体形成复合物，胶体金标记清中抗体形成复合物，胶体金标记抗人抗人IgG单抗与复合物结合，形成肉眼可见的单抗与复合物结合，形成肉眼可见的红色圆斑点。本法用于快速检测血清中红色圆斑点。本法用于快速检测血清中抗体。抗体。免疫印迹法免疫印迹法(IB）原理原理：以：以ENA分型为例分型为例，用，用SOS-聚丙烯聚丙烯酰胺凝胶电泳，酰胺凝胶电泳，将将ENA按分子量大小予按分子量大小予以分离，再将其转移至硝酸纤维薄膜，以分离，再将其转移至硝酸纤
30、维薄膜，如果受检血清含有相应抗原的自身抗体，如果受检血清含有相应抗原的自身抗体，则在相应位置会发生免疫反应，再加酶则在相应位置会发生免疫反应，再加酶标抗体，底物，显色液和终止液，在抗标抗体，底物，显色液和终止液，在抗原抗体反应的位置出现显色带，与标准原抗体反应的位置出现显色带，与标准带相比较带相比较。颗粒凝集法颗粒凝集法(PA）原理原理：以检测抗脱氧核糖核蛋白体（抗：以检测抗脱氧核糖核蛋白体（抗DNP抗体）为例。从小牛胸腺中提取脱抗体）为例。从小牛胸腺中提取脱氧核糖核蛋白氧核糖核蛋白(DNP）抗原，致敏聚苯乙抗原，致敏聚苯乙烯乳胶，制成烯乳胶，制成抗抗DNP抗体乳胶凝集试剂，抗体乳胶凝集试剂，
31、当血清中存在抗当血清中存在抗DNP抗体时，便与乳胶抗体时，便与乳胶颗粒颗粒上的上的DNP抗原结合，使乳胶颗粒相抗原结合，使乳胶颗粒相互凝集出现肉眼可见的凝集颗粒互凝集出现肉眼可见的凝集颗粒。对流免疫电泳法对流免疫电泳法(CIE）原理原理：对流免疫电泳又名免疫电渗电泳，：对流免疫电泳又名免疫电渗电泳，实际上是加速免疫扩散技术。因抗原大实际上是加速免疫扩散技术。因抗原大多数是属蛋白质，而蛋白质是一种两性多数是属蛋白质，而蛋白质是一种两性电解质，在碱性溶液中带负电荷，因此电解质，在碱性溶液中带负电荷，因此在电泳时从负极向正极移动。而抗体大在电泳时从负极向正极移动。而抗体大部分部分属属IgG，分子量大
32、，泳动较慢，在碱分子量大，泳动较慢，在碱性溶液中不带电荷或带少量负电荷。同性溶液中不带电荷或带少量负电荷。同时由于琼脂的电渗作用，在电泳中使抗时由于琼脂的电渗作用，在电泳中使抗体由正极向负极移动。这样使抗原和抗体由正极向负极移动。这样使抗原和抗体定向对流，两者相遇后，在比例合适体定向对流，两者相遇后，在比例合适处形成可见沉淀线。处形成可见沉淀线。免疫双扩散免疫双扩散(DID or ID）原理原理：在琼脂内抗原和抗体各自向对：在琼脂内抗原和抗体各自向对方扩散，在最恰当的比例处形成抗原抗方扩散，在最恰当的比例处形成抗原抗体沉淀线，观察这种沉淀线的位置、形体沉淀线，观察这种沉淀线的位置、形状以及对比
33、关系，可以作出抗体的检测。状以及对比关系，可以作出抗体的检测。免疫沉淀法免疫沉淀法(RIP）斑点酶免疫渗透试验斑点酶免疫渗透试验(DIEFA）斑点酶免疫结合试验斑点酶免疫结合试验(DIGFA)风湿免疫病常规实验室检查风湿免疫病常规实验室检查一般临床检验常规检查一般临床检验常规检查血常规血常规RA：80%贫血，活动期贫血，活动期PLT升高。升高。SLE：WBC，PLT，Hb均可能降底。均可能降底。免疫血管炎：免疫血管炎：WBC增高。增高。对药物骨髓抑制的监测。对药物骨髓抑制的监测。尿常规尿常规SLE：尿蛋白及尿蛋白及RBC表明肾损伤。表明肾损伤。生化常规检查生化常规检查肝功能：如有异常，应鉴别是
34、何种性质肝功能：如有异常，应鉴别是何种性质（自身免疫肝病？）（自身免疫肝病？）肾功能：免疫肾病（肾功能：免疫肾病（SLE？血管炎？）血管炎？）肌酶：多发性肌炎肌酶：多发性肌炎/皮肌炎（皮肌炎（PM/DM）尿酸：痛风？尿酸：痛风？免疫血清学检查免疫血清学检查免疫球蛋白、血清蛋白电泳（高球蛋的免疫球蛋白、血清蛋白电泳（高球蛋的血症）。血症）。ESR、CRP（急性期蛋白）：对病情活急性期蛋白）：对病情活动性的判断。动性的判断。CH50、C3、C4：SLE活动期均降底。活动期均降底。ASO：链球菌感染，风湿热。链球菌感染，风湿热。自身抗体的常规检查自身抗体的常规检查病原感染常规检查病原感染常规检查肝炎
35、病毒：肝炎病毒：HAV、HBV、HCV、HDV、HEV、HGVEBV,TB抗核抗体谱抗核抗体谱(ANAS）的检测的检测 抗核抗体抗核抗体(ANA）是自身抗体中的一是自身抗体中的一组抗体。组抗体。ANA的研究，从发现狼疮的研究，从发现狼疮(LE）细胞算起，迄今细胞算起，迄今40多年来，人们多年来，人们对对ANA的认识不断加深，已衍生出具有不同临的认识不断加深，已衍生出具有不同临床意义的二十余种床意义的二十余种ANA，形成了抗核抗形成了抗核抗体谱体谱(ANAS）。）。这些抗体对风湿性疾病，这些抗体对风湿性疾病，尤其是结缔组织病的诊断，鉴别诊断和尤其是结缔组织病的诊断，鉴别诊断和临床治疗有重要帮助临
36、床治疗有重要帮助。抗核抗体：抗核抗体：传统定义：顾名思义是指抗细胞核抗原成传统定义：顾名思义是指抗细胞核抗原成分的自身抗体的总称。分的自身抗体的总称。现代主义：是指抗细胞内所有抗原成分的现代主义：是指抗细胞内所有抗原成分的自身抗体的总称。自身抗体的总称。对对ANA的理解已不再局限于核成分，的理解已不再局限于核成分，而是指抗核酸和核蛋白而是指抗核酸和核蛋白。靶抗原分布：靶抗原分布：细胞核细胞核 细胞核、细胞浆、细胞骨架、细胞分裂周期细胞核、细胞浆、细胞骨架、细胞分裂周期抗核抗体的分类：抗核抗体的分类：根据细胞内靶抗原分子的理化特性核分布部位，将根据细胞内靶抗原分子的理化特性核分布部位，将ANA分
37、为：分为：抗抗DNA 抗体抗体(anti-ds-DNA,anti-ss-DNA 抗组蛋白抗体抗组蛋白抗体（ihistons：,H1,H2A,H2B,H3,H4,H2A-H2B复合物复合物）抗抗ENA抗体（抗体：抗体（抗体：Sm、NrNP、SSA/RO、SSB/La 抗非组蛋白抗体抗非组蛋白抗体 rRNP、SCL-70、PCNA、RA33）抗着丝点抗体（抗着丝点抗体（ACA）抗核仁抗体抗核仁抗体(抗体：抗体：RNA-Polymerase-1,PM-SCL/PM-1.)抗其他细胞成分抗体（高尔基体、中心体、纺锤体、线粒体、溶酶抗其他细胞成分抗体（高尔基体、中心体、纺锤体、线粒体、溶酶 体、肌动蛋白
38、、体、肌动蛋白、Vimrntin、细胞角蛋白细胞角蛋白、Lamin）ANA抗核抗体抗核抗体(ANA)的检测的检测 在实际工作中，不管用何种方法来检测在实际工作中，不管用何种方法来检测ANA，实际上都是指总抗核抗体检测。实际上都是指总抗核抗体检测。ANA阳性的疾病很多，最常见于弥漫性阳性的疾病很多，最常见于弥漫性结缔组织病，某些非结缔组织病也可阳结缔组织病，某些非结缔组织病也可阳性（如慢性活动性肝炎、重症肌无力、性（如慢性活动性肝炎、重症肌无力、慢性淋巴性甲状腺炎等），正常老年人慢性淋巴性甲状腺炎等），正常老年人也可出现低滴度的也可出现低滴度的ANA阳性（见表）阳性（见表）。ANA阳性标志了自身
39、免疫性疾病的可能阳性标志了自身免疫性疾病的可能性，性，ANA检测在临床上是一个极重要的检测在临床上是一个极重要的筛选试验。筛选试验。抗核抗体抗核抗体(ANA)的阳性率的阳性率SLE 95%PSS 70-80%MCTD 95%SS 60-70%PM/DM 50-60%RA 20-30%自身免疫性肝炎自身免疫性肝炎 80-90%正常人正常人 5-20%间接免疫荧光法（间接免疫荧光法（IIF）：）：ANA无器官特异性和种属特异性，大部无器官特异性和种属特异性，大部分属分属IgG类，仅少数为类，仅少数为IgM、IgA。目前目前常用间接免疫荧光法（常用间接免疫荧光法（IIF）作为总的作为总的ANA的筛选
40、试验。的筛选试验。IIF检测检测ANA时，所用时，所用抗原底物片的种类甚多（见表抗原底物片的种类甚多（见表)，目前广，目前广泛应用的是核质丰富的培养细胞片或动泛应用的是核质丰富的培养细胞片或动物器官组织冰冻切片物器官组织冰冻切片。ANA检测常用底物细胞片检测常用底物细胞片 培养细胞片培养细胞片人喉人喉Ca上皮细胞上皮细胞 人喉人喉Ca上皮细胞上皮细胞人子宫颈人子宫颈Ca细胞细胞埃利锲埃利锲（Ehrlich）细胞细胞小鼠腹水小鼠腹水Ca细胞细胞 动物器官组织动物器官组织冰冻切片冰冻切片 鼠肝、鼠肝、鼠肾鼠肾 猴肝、猴肝、猴肾猴肾 兔肝、兔肝、兔肾兔肾 对底物片的要求对底物片的要求 ：对底物片的选
41、择要便于对底物片的选择要便于ANA检测结检测结果观察（免疫染色模型），果观察（免疫染色模型），底物片所含抗原应种类丰富、特异底物片所含抗原应种类丰富、特异性强、含量高，否则就失去了性强、含量高，否则就失去了ANA筛选筛选检测作用。检测作用。两种不同底物检测两种不同底物检测ANA的阳性率比较的阳性率比较疾病疾病 Hep-2细胞细胞 冰冻切片冰冻切片SLE 99%96%SS 85%72%PSS 88%40%RA 55%24%JRA 40%22%由于不同底物因其含抗原的不完全相由于不同底物因其含抗原的不完全相同，所以可能出现同一份标本在不同的同，所以可能出现同一份标本在不同的底物片上测定底物片上测定
42、ANA时产生不同的结果，时产生不同的结果，如鼠肝上如鼠肝上SSA的含量只有的含量只有Hep-2细胞的细胞的1/10，造成含，造成含SSA抗体阳性血清在抗体阳性血清在 鼠肝鼠肝底物上呈阴性反应，而于底物上呈阴性反应，而于Hep-2细胞为底细胞为底物则呈阳性；物则呈阳性；抗着丝点抗体（抗着丝点抗体（ACA）、抗）、抗PCNA抗体只与细胞活跃增殖的细胞核抗原反抗体只与细胞活跃增殖的细胞核抗原反应，用应，用Hep-2等组织培养细胞可以检出，等组织培养细胞可以检出，而而 鼠肝细胞增殖分裂不活跃，则不能检鼠肝细胞增殖分裂不活跃，则不能检出。这就说明检测出。这就说明检测ANA其底选择尤为重其底选择尤为重要。
43、现已证明人细胞培养底物检测要。现已证明人细胞培养底物检测ANA敏感性优于动物组织底物片。目前国际、敏感性优于动物组织底物片。目前国际、国内都通常采用国内都通常采用Hep-2细胞作为细胞作为ANA检测检测底物。底物。文献报道，应用文献报道，应用Hep-2细胞来检测细胞来检测ANA较鼠肝（肾）冰冻切片检测较鼠肝（肾）冰冻切片检测ANA，阳性率可提高阳性率可提高10-20%左右。左右。ANA检测检测IIF法法 90%以上实验室使用以上实验室使用Hep-2细胞为底物细胞为底物;为人来源培养细胞（人喉癌细胞），据为人来源培养细胞（人喉癌细胞），据有核大、细胞结构清晰特点；有核大、细胞结构清晰特点；便于结
44、构观察及荧光染色核型分析；便于结构观察及荧光染色核型分析；核抗原丰富、特异性强、有完整的核抗原丰富、特异性强、有完整的ANAs；抗原谱抗原谱(细胞核、浆、骨架、周期）；细胞核、浆、骨架、周期）；可预测分析可预测分析ANA靶抗原范围；靶抗原范围；经验性强。经验性强。IIF法检测法检测ANA阳性常见荧光染色模型阳性常见荧光染色模型细胞核细胞核 细胞浆细胞浆 细胞骨架细胞骨架 细胞周期细胞周期均质型均质型 核糖体型核糖体型 肌动蛋白型肌动蛋白型 中心体型中心体型核膜型核膜型 线粒体型线粒体型 波形蛋白型波形蛋白型 纺锤体型纺锤体型斑点型斑点型 高尔基体高尔基体 中间体型中间体型核仁型核仁型 溶酶体型
45、溶酶体型着丝点着丝点 颗粒型（粗、细）颗粒型（粗、细）PCNA型型核（多、少）点型核（多、少）点型IIF法检测法检测ANA阳性常见荧光染色模型阳性常见荧光染色模型 周边型或核膜型（周边型或核膜型（M）：）：荧光染色在核荧光染色在核膜周围，此型与抗膜周围，此型与抗ds-DNA抗体有关。抗体有关。均质型（均质型（H）：）：核质染色均匀一致，此型核质染色均匀一致，此型与抗组蛋白抗体，抗与抗组蛋白抗体，抗DNA抗体有关。抗体有关。斑点型（斑点型（S）：）：核质染色呈斑点状，抗可核质染色呈斑点状，抗可溶性核抗原（溶性核抗原（ENA）抗体常呈此种染色抗体常呈此种染色模型。模型。核仁型（核仁型（N）：）：核
46、仁着染荧光，此型针对核仁着染荧光，此型针对核糖体、核糖体、U3-RNP、RNA聚合酶等抗体多聚合酶等抗体多为此型。为此型。着丝点型（着丝点型（ACA）：）：此型核内均匀散布此型核内均匀散布大小一致的着染荧光斑点，相关抗体为大小一致的着染荧光斑点，相关抗体为抗着丝点抗体，在鼠肝冰冻片为底物时抗着丝点抗体，在鼠肝冰冻片为底物时不易检出，须以培养细胞为底物方可检不易检出，须以培养细胞为底物方可检出。出。PCNA型：在与型：在与Hep-2细胞为底物时，荧细胞为底物时，荧光染色只在生活周期的幼稚细胞核呈显光染色只在生活周期的幼稚细胞核呈显著的斑纹染色而邻近细胞核为阴性反应。著的斑纹染色而邻近细胞核为阴性
47、反应。此型由抗增殖期细胞抗体引起。此型由抗增殖期细胞抗体引起。关于关于IIF法检测法检测ANA荧光染色模型应注意荧光染色模型应注意 1、一种抗体可出现不同的染色图型，不一种抗体可出现不同的染色图型，不同的抗体亦可出现同样的染色图型。同的抗体亦可出现同样的染色图型。2、有些染色图型、有些染色图型对对ANA的判断有特异性，的判断有特异性，如如：ACA、PCNA、抗高尔基体等。抗高尔基体等。3、有些染色图型有一定的提示作用，但、有些染色图型有一定的提示作用，但仅根据染色图型特点来推断抗体的特异仅根据染色图型特点来推断抗体的特异性是危险的。性是危险的。4、有时一份血清内因含有多种抗体可出、有时一份血清
48、内因含有多种抗体可出现不同的染色图型，用不同稀释度的血现不同的染色图型，用不同稀释度的血清检测，可分清各种荧光染色图型。清检测，可分清各种荧光染色图型。ELISA法检测法检测ANA原理原理：利用：利用ELISA法，搜集细胞核和细法，搜集细胞核和细胞浆抗原，如胞浆抗原，如ds-DNA、Histones、Sm、RNP、SSA、SSB、Scl-70、centromere、Jo-1等混合液包被微孔板，检测抗核抗体。等混合液包被微孔板，检测抗核抗体。方法学评价方法学评价 自自1957年年Friou等首先用等首先用IIF法检测抗法检测抗核抗体以来，许多研究者对核抗体以来，许多研究者对ANA检测进检测进行了
49、大量研究，但事实证明，只是在行了大量研究，但事实证明，只是在IIF法改良上有些进展，如底物选择及其制法改良上有些进展，如底物选择及其制备方法改良等。备方法改良等。ELISA法与法与IIF法比较，有操作简便，结法比较，有操作简便，结果判断较客观，无需荧光显微镜等优点，果判断较客观，无需荧光显微镜等优点，现在一些医院用现在一些医院用ELISA法来作检测法来作检测ANA的筛选方法。由于的筛选方法。由于ELISA法检测法检测ANA时，时，要复制细胞抗原的全部成分，这些抗原要复制细胞抗原的全部成分，这些抗原在细胞内存在时相互间的浓度及自然抗在细胞内存在时相互间的浓度及自然抗原决定簇的二级结构及高级结构是
50、极其原决定簇的二级结构及高级结构是极其困难的，所以从目前来看，应用组织培困难的，所以从目前来看，应用组织培养细胞底物养细胞底物的的IIF法仍然是检测抗细胞内法仍然是检测抗细胞内抗原自身抗体的抗原自身抗体的“金标准金标准”。红斑狼疮细胞（红斑狼疮细胞（LE-cell）的检查的检查LE细胞细胞SLE诊断标准中实验指标之一诊断标准中实验指标之一（ARA，1982）方法：方法：3ml血液血液-放置放置30分钟分钟-用竹竿捣用竹竿捣碎碎-置置37度水浴箱度水浴箱1小时小时-离心离心-取取WBC层涂片染色层涂片染色-镜检。镜检。原理原理 LE因子是因子是DNA组蛋白抗体（抗组蛋白抗体（抗DNP抗体），当病