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1、第五节 植物组织培养一、植物组织培养的阶段划分：通常将组织培养过程划分为四个阶段1、起始培养阶段2、增殖培养阶段3、生根培养阶段4、驯化移栽。次氯酸钠二、外植体起始培养起始培养阶段：无菌体系的诱导和建立过程。（一）外植体的起始培养过程1、 起始培养的一般过程：A、选取适宜的基因型（品种）；B、选取适宜的外植体；茎尖、叶片、叶柄等。C、流水冲洗外植体；D、外植体切割、分离及灭菌处理；E、外植体接种于诱导培养基。F、环境条件控制促进外植体的生长。2、接种外植体的生长过程：（1）茎尖培养：A 细胞分裂的启动；B 细胞增殖；C 组织和器官的形成。脱毒苗的培养：通过茎尖培养获得无病毒种苗，对退化品种进行
2、提纯复壮。茎尖培养脱毒主要是由于病毒在植物体内的分布不均匀，在茎尖部位带病毒少或不带病毒，因此可以通过茎尖培养脱毒。如草莓、马铃薯、甘薯、苹果、香蕉、甘蔗等。 （2）愈伤组织培养过程：A 愈伤组织的诱导：诱导期（启动期）、分裂期B愈伤组织的增殖：C 愈伤组织的分化：海带幼叶1幼叶选择2 外植体固体培养基培养 3 外植体生长 4 液体培养基培养 5 6愈伤组织形成 7-8 新植株形成愈伤组织培养1）在无菌条件下用镊子或小刀将选择的愈伤组织块分割成若干小块，剔除附着的原有培养基，用无菌水清洗几次，然后在无菌条件下将处理好的愈伤组织小块转移到含有新鲜分化培养基的培养器皿中；2）在一定条件下培养48周
3、，愈伤组织就可以分化，长出幼芽和小叶片；3）当幼苗长到3 cm左右时，在无菌条件下将幼苗转移到含有生根培养基的培养器皿中，在一定条件下培养2周左右，幼苗即可生根。Callushigh cytokininlowauxinshootslowcytokininhighauxinroots（二）影响外植体起始培养的因素：1.影响外植体起始培养的因素A 外植体的遗传基础及生理影响B 培养基组成成分：矿物盐类、微量有机成分、碳源、琼脂、活性炭、酚类化合物、多胺等。C 植物生长调节物质D 培养条件：光照、温度、湿度外植体种类及基因型2、 愈伤组织培养的影响因素：ABC外植体培养基培养条件三、 无菌苗的增殖1
4、、增殖培养过程：增殖培养过程是促进无菌苗数量增加的过程。主要通过芽增殖的过程进行。2、影响增殖的因素：（1）细胞分裂素浓度直接影响增殖的效果，通常使用浓度低于起始培养阶段。（2）添加少量的生长素，如NAA或IAA有利于维持无菌苗适宜的激素平衡，促进增殖。（3）增殖阶段要给予外植体适宜的温度和光照条件，才能保证其旺盛的增殖过程。（4）增殖培养阶段要注意及时转接，否则生长变弱。3、增殖培养中的常见问题：（1）小型化和无效苗：激素浓度过高导致无效苗增加。可以通过降低细胞分裂素浓度克服。（2）玻璃化现象：琼脂用量低，相对湿度大，激素浓度高，温度高等导致玻璃化（植物苗透明、扭曲、水积状）。（3）变异问题
5、：继代次数过多，或由愈伤组织途径形成的无菌苗，激素条件不适宜等。（4）污染问题：转接前未将污染材料分出造成交叉污染。培养环境无菌程度低。四、不定根的发生 Root formation - Theshoots aretransferred to agrowth medium withrelatively higherauxin: cytokininratiosThe pottles on these racksare young banana plants andaregrowing roots(一)生根培养基对不定根形成的影响1、矿质营养：76%的植物可以在MS, 1/2MS, 1/3MS培养
6、基上正常生根。低盐有利于生根，提高Ca浓度有促进作用。2、碳源的影响多数植物在2030gL-1蔗糖有利于生根。无蔗糖生根减少，浓度影响根重。4.维生素B210 umol VB2可以促进木瓜生根，是由于促进了IBA的光下氧化作用。5、酚类物质：1976 发现根皮苷(PZphlorlzin)及其水解产生根皮酚（PG；Phlorglucin01)对苹果无根苗的生长和根形成有促进的作用。在樱桃和李的组织培养中PG可提高其苗的生根率和根的数量。（二）培养条件及其他因素的影响1. 温度： 21-30 oC 对多数植物有利。2.光照因素:黑暗条件利于生根。五、生根苗的驯化移栽1、透气锻炼：逐渐打开瓶口，增加适应性。37天。2、洗去培养基：放置生根苗由于带有蔗糖而滋生细菌和真菌。3、选择适宜的驯化基质：透气保水性要好。4、无菌苗移栽：驯化锻炼的无菌苗栽植于基质中。水分要浇足，注意保湿，也要注意透气。5、移栽后的环境条件控制：温度：低温季节提高根部温度。促进新根形成；高温季节注意降温。湿度：成活前均要注意保湿，防治水分蒸腾。可以采取喷雾加湿。光照：前期适当遮荫，保持弱光条件，成活后逐渐加强。水分：移栽时浇足水，以后适当控制，不干不浇。营养：组培苗新根形成前不施肥，成活后补充营养，采用营养液或复合肥等。