《非那西丁药代动力学研究实验报告.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《非那西丁药代动力学研究实验报告.docx（8页珍藏版）》请在taowenge.com淘文阁网|工程机械CAD图纸|机械工程制图|CAD装配图下载|SolidWorks_CaTia_CAD_UG_PROE_设计图分享下载上搜索。
1、非那西丁的药代动力学争论试验报告一.概述：非那西丁(Phenacetin)为一种解热镇痛药，由于潜在副作用在临床已根本不使用。但由于其是 CYP1A2 酶的特异性底物，被广泛选择作为底物用于酶活性测定试验以及影响酶活性作用药物的争论。本学期临床药代动学试验课以非那西丁在大鼠体内的代谢试验、大鼠肝微粒体温孵试验两局部为例，通过试验设计，试验操作，结果评价等一系列过程，系统地学习了药代动力学中药物体内外的简洁争论方法、试验数据的处理、以及相关药动学参数的计算与评价。二.正文1. 非那西丁在大鼠体内的药代动力学争论1.1 试验目的争论非那西丁在大鼠体内代谢的药代动力学，学习大鼠眼底静脉丛取血等操作。
2、1.2 试验材料与方法仪器：HPLC-UV 色谱仪，高速冷冻离心机，涡旋振荡器；HPLC 色谱条件：检测波长：254nm色谱柱：inertsil-ODS-SP,5um,4.6*150mm 流速：1.0ml/min柱温：40流淌相：40(乙腈)：6050mM 磷酸盐缓冲液注：50mM 磷酸盐缓冲液配制：6.8g 磷酸二氢钾，参加 150ml 氢氧化钠溶液0.1M，配制成 1L 的磷酸盐缓冲液试剂：非那西丁注射剂，对乙酰氨基酚标准品，肝素钠，10%高氯酸； 试验动物：雄性大鼠，180g220g1.3 试验步骤1.3.1 标准曲线的制备：取空白血浆，参加对乙酰氨基酚标准品，使其浓度分别为 0.156
3、,0.313,0.625,1.25,2.50,5.00,10.00ug/ml。在给定的色谱条件下进展 HPLC 分析，以样品的峰面积对样品浓度进展线性回归。1.3.2 给药及血浆采集处理：取大鼠一只，尾静脉注射非那西丁10mg/kg后，分别于 0，5,10,15,30,45,60,90,120min 于尾静脉取血10.5ml，肝素抗凝。离心取 200ul 血浆。向血浆中参加 100ul 10%高氯酸，涡旋振荡 1min转速为 15000 转/分钟，离心 10min，取上清供 HPLC 分析。1.4 试验结果处理表 1体内试验中对乙酰氨基酚标准曲线浓度ug/ml)10.1561435919283
4、(0.2554)20.3125439030.6253321936462(0.0889)41.2565033593550.095752.501067991051420.015865.002023671967140.0170710.00377336379859(0.0066)组别峰面积理论峰面积准确度舍去第 2 组数据做图得对乙酰氨基酚的标准曲线图 1，用标准曲线的回归方程带入浓度计算标准曲线准确度表 1，可见除第 1、2 组数据外其他点根本符合 准确度20% , 但舍去第2组数据后，得到的标准曲线虽然R 2 稍有提高(R 2 =0.998)，但再次代入计算准确度时另几组值准确度均有偏大倾向，且考
5、虑到数据组数削减时误差变大，故保存第2组数据。图3 温孵试验中对乙酰氨基酚标准曲线A120230y = 2179x + 932.94100000R2 = 0.99788000060000400002023000102030C(umol/L)405060用此标准曲线计算通过标准曲线计算出产物中对乙酰氨基酚浓度表4，以非那西丁浓度和对乙酰氨基酚的生成速率，用双倒数作图法作图图4，求得相关药代动力学参数。表 4 温孵试验中相关数值计算umol/l)PHE(umol/L)PHE(umol/h/g.protein)125911.17436.250.1611.74260.0852293404.232912
6、.50.0842.32950.0236360352.7351250.0427.35100.03664162257.3533500.0273.53270.013652747412.45141000.01124.51390.008063446215.61842000.005156.18400.006474374719.82644000.0025198.26420.0050组别峰面积c-PARAc-1/c-v-1/v第 1 组数据不在标准曲线定量范围内，第 3 组数据偏差过大，故舍去第1、3 组数据，剩下 5 组数据以双倒数法作图。图4 双倒数法作图1/v-PAPA0.03000.02500.020
7、00.01500.01000.00500.00000y = 0.2289x + 0.006R2 = 0.94570.010.020.030.040.050.060.070.080.091/c-PHEv 250.0000200.0000150.0000100.000050.00000.0000图5 底物浓度与反响物生成速率作图0100200c-PHE300400500由图 4：km/vmax=0.22891/vmax =0.006进而， vmax=166.67umol/h/g km=38.15umol/L求得的 vmax 为 166.67 umol/h/g，但明显测得的实测数据中的 v 最大值大
8、于此值，以底物浓度对反响速率作图图 5，也可看出曲线在最终一个点时仍呈上升趋势，也就是说在曲线范围内并未达 vmax,结果存在偏差。连续舍去表 4 中第 2 组数据进展双倒数回归，1/v图6 双倒数法作图 20.01600.01400.01200.01000.00800.00600.00400.00200.0000y = 0.4832x + 0.0037 R2 = 0.990500.0050.010.0151/c-PHE0.020.025由图 6：km/vmax=0.48321/vmax进而， vmax=270.27umol/h/g km=130.59umol/L=0.0037该条件下求得的
9、vmax 虽然不在标准曲线定量范围内，但比较符合图 5 中的反响趋势，更接近反响的真实状态。2.5 争论：1） 终止试剂的选择：酶反响试验中，终止试剂的选择格外重要，该类型试验中一般可选的终止试剂有乙腈和冰甲醇等，有试验说明乙腈终止时易产生干扰，故本试验选择了冰甲醇作为终止剂。2） 数据分析：依据温孵试验结果的结果分析，试验中反响并未到达最大反响速率。一般在酶促反响中，反响的速率取决于底物浓度、反响时间、酶活性等因素，本次试验中在试验条件下未到达 vmax,可能是由于此次所用的肝微粒体酶活性活性较高，在所设定的底物浓度范围内酶仍未到达饱和，可以通过削减肝微粒体酶的使用量，或者扩大底物浓度的设定
10、范围来进展改善试验，使试验结果更具有科学性。三.个人总结相较于寻常的依据既定试验步骤操作的试验，本学期的试验需要试验者更加留意细节与思考，探究试验中每一项设定的缘由、合理性、以及不同的条件设定对试验结果的影响，在此根底下，进展试验、处理结果时又更简洁促发对试验原理和过程的反思，从而对整个试验以及药代动试验的设计有了一个比较深的生疏。另外得到的一点教训是，试验过程中数据及相关信息的记录至关重要，尤其是试验时间跨度较大时，应当认真记录、妥当保存。四.参考文献：1. 王敏，彭蕴茹.HPLC 法测定大鼠血浆、微粒体中非那西丁与其代谢物含量及其应用.中国药理学通报J,2023,29(4):591-5922. 张艳辉.高效液相色谱法测定鼠肝微粒体中CYP1A2 酶的活性及动力学考察. 药物分析杂志 , 2023，32( 2):191-1933. 缪海均, 佘佳红, 蔡飞.非那西丁及其代谢物对乙酰氨基酚的高效液相色谱测定J.中国现代应用药学杂志，2023，221：10-12