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1、选修3 现代生物科技专题专题一 基因工程知识点1、DNA重组技术的基本工具 1、 限制性核酸内切酶“分子手术刀” （必考）（1） 特点：能够识别双链DNA分子特定的核苷酸序列，在特点部位切开两个核苷酸之间的磷酸二酯键（2） DNA末端：限制性核酸酶切割DNA产生的DNA末端有两种形式：黏性末端、平末端。2、 DNA连接酶“分子缝合针”（1） 作用：将双链DNA片段“缝合”起来，恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键，不需要模板。（2） 种类： E.coliDNA连接酶：只能“缝合”双链DNA互补的黏性末端。T4DNA连接酶：既可“缝合”双链DNA互补的黏性末端，又可“缝合”双链DNA的平
2、末端。3、 基因进入受体细胞的载体“分子运输车”（1） 载体种类质粒：一种裸露的结构简单、独立于细菌拟核DNA之外，并具有自我复制的能力的环状DNA分子。入噬菌体的衍生物动植物病毒（2） 载体的特点能够在细胞内自我复制，或整合到染色体DNA上，随染色体DNA进行自我复制。具有一个或多个限制酶切点，便于供外源DNA插入。具有特殊的遗传标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。【注意】（1） 获取目的基因和切割载体时使用同一种限制酶，目的是产生相同的末端。（2） 获取一个目的基因需要限制酶切割两次，产生4个黏性末端或平末端。（3） 限制酶切位点的选择必须保证标记基因的完整性，以便于检测。4、与DNA有关
3、的4种酶的比较比较项目限制酶DNA连接酶DNA聚合酶解旋酶作用底物DNA分子DNA片段脱氧核苷酸DNA分子作用部位磷酸二酯键磷酸二酯键磷酸二酯键氢键形成产物黏性末端或平末端形成重组的DNA分子新的DNA分子形成单链DNA知识点2、基因工程的基本操作步骤 1、 目的基因的获取（1） 从基因文库中获取目的基因含义：将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导入受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。种类：基因组文库：含有一种生物的所有基因 部分基因文库：含有一种生物的部分基因目的基因获取的依据基因的核苷酸序列、基因的功能、基因在染色体上位置、基因的转录产物mRNA、基
4、因的翻译产物蛋白质等。（2） 利用PCR技术扩增目的基因PCR技术是利用DNA双链复制的原理，将基因的核苷酸序列不断地加以复制，使其数量呈指数方式增加。（3） 人工合成如果基因比较小，核苷酸序列又已知，也可以通过DNA的合成仪用化学方法直接人工合成。2、 基因载体的构建（核心）（1） 表达载体的组成：目的基因、启动子、终止子、标记基因等。（2） 表达载体得功能： 使目的基因在受体细胞中存在，并且遗传给下一代 使目的基因表达和发挥作用（3） 启动子：位于基因的首端，它是RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动基因转录产生mRNA（4） 终止子：位于基因的尾端，终止mRNA的转录（5） 标记基因：鉴别受
5、体细胞是否含有目的基因（6） 构建步骤用一定的限制酶切割质粒，使其出现一个有黏性末端的切口。用同种限制酶切断目的基因，产生相同的黏性末端。 将切下来的目的基因片段，插入到质粒的切口处，在加入适量的DNA连接酶，使质粒与目的基因结合重组质粒。3、 将目的基因导入受体细胞（必考）细胞类型方法操作步骤植物细胞农杆菌转化法（最常用）将目的基因插入到Ti质粒的TDNA上通过农杆菌的转化作用进入植物细胞并插入到植物细胞中的染色体DNA上目的基因表达基因枪法目的基因包裹在微小的金粒或者钨粒表面用基因枪高速射入到受体细胞或组织中目的基因表达花粉管通道法含目的基因的溶液滴加在柱头上花粉粒吸入目的基因授粉目的基因
6、表达动物细胞显微注射法目的基因片段受精卵的核内受精卵经胚胎早起培养一段时间后移植到雌性动物的输卵管或子宫内使其使其发育成转基因生物微生物细胞感受态细胞法钙离子处理的生物细胞感受态细胞将基因表达载体在缓冲溶液中与感受态细胞混合一定温度下促使感受态细胞吸收DNA分子4、 目的基因的检测与表达（1） 分子水平的检测导入检测：DNA分子杂交技术，用放射性同位素标记的含目的基因的DNA片段作为探针。转录检测：分子杂交法，用标记的目的基因作为探针与mRNA杂交翻译检测：抗原抗体杂交（2） 个体生物学水平鉴定：对转基因生物进行抗虫或抗病的实验，以确定是否具有抗性以及抗性的程度。知识点3、基因工程的应用 知识点4、蛋白质工程和基因工程的比较项目蛋白质工程基因工程过程预测蛋白质功能设计预测蛋白质的结构推测应有的蛋白质的氨基酸序列找到相对应的脱氧核苷酸序列合成DNA表达出蛋白质获取目的基因构建基因表达载体将目的基因导入到受体细胞目的基因的检测和鉴定实质定向改造或生产人类需要的蛋白质定向的改造生物的遗传特性，以获得人类所需的生物类型或生物产品结果产生自然界中没有的蛋白质产生自然界中已有的蛋白质联系蛋白质工程是在基因工程的基础上，延伸出来的第二代基因工程。因为对现有的蛋白质的改造或制造出新的蛋白质，必须通基因修饰或基因合成来实现。4学科网（北京）股份有限公司