《（浙江专版）高考生物一轮复习 第29讲 微生物的利用、浅尝现代生物技术课件-人教版高三全册生物课件.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《（浙江专版）高考生物一轮复习 第29讲 微生物的利用、浅尝现代生物技术课件-人教版高三全册生物课件.ppt（49页珍藏版）》请在taowenge.com淘文阁网|工程机械CAD图纸|机械工程制图|CAD装配图下载|SolidWorks_CaTia_CAD_UG_PROE_设计图分享下载上搜索。
1、第第29讲讲微生物的利用、微生物的利用、浅浅尝现尝现代生物技代生物技术术考点一微生物的利用考点一微生物的利用一、大肠杆菌的培养和分离一、大肠杆菌的培养和分离1.大肠杆菌大肠杆菌(1)特性：革特性：革兰兰氏氏、的的肠肠道杆菌。道杆菌。(2)细细菌的繁殖：以菌的繁殖：以的方式繁殖，分裂速度很快。的方式繁殖，分裂速度很快。2.细菌的扩大培养细菌的扩大培养扩扩大培养用大培养用培养基。培养基。3.分离分离划划线线分离用分离用培养基。培养基。阴性阴性兼性厌氧兼性厌氧分裂分裂LB液体液体LB固体平面固体平面培养基培养基灭灭菌菌_划划线线分离分离培养培养观观察察菌种保存菌种保存50mLLB液液体体培培养养基基
2、和和50mLLB固固体体培培养养基基及及培培养养皿皿_灭灭菌菌将将培培养养基基分分别别倒倒入入4个个灭灭菌菌后后的的培培养养皿皿中中，水水平平放放置置，使使之形成平面之形成平面在在装装有有液液体体培培养养基基的的_中中接接种种大大肠肠杆杆菌菌，培培养养12h用用接接种种环环在在接接种种有有大大肠肠杆杆菌菌的的三三角角瓶瓶中中蘸蘸菌菌液液_，在固体培养基的平板上在固体培养基的平板上_，盖好培养皿，盖好培养皿培培养养皿皿_(盖盖在在下下面面)，放放在在37恒恒温温培培养养箱箱中中培培养养1224h，可看到划，可看到划线线的末端出的末端出现现不不连续连续的的_在在无无菌菌操操作作下下将将单单菌菌落落
3、用用_取取出出，再再用用_法法接接种种在在_上上，_培培养养24h后后，置置于于_中中保存保存倒平板倒平板接种接种高压蒸汽高压蒸汽三角瓶三角瓶一次一次连续划线连续划线倒置倒置单个菌落单个菌落接种环接种环划线划线斜面斜面374冰箱冰箱4.消毒和灭菌比较消毒和灭菌比较条件条件结结果果常用方法常用方法应应用范用范围围消消毒毒较为较为温和温和的物理或的物理或化学方法化学方法仅杀仅杀死物体表面或死物体表面或内部的部分内部的部分对对人体人体有害的微生物有害的微生物紫外紫外线线消毒法消毒法接种室、接种室、_化学化学药剂药剂消毒法消毒法用用_擦拭双手，擦拭双手，用用氯氯气消毒水源气消毒水源灭灭菌菌强强烈的理烈
4、的理化因素化因素杀杀死物体内外死物体内外_的微生物，的微生物，包括包括_灼灼烧灭烧灭菌法菌法_干干热灭热灭菌法菌法玻璃器皿、金属工具玻璃器皿、金属工具高高压压蒸汽蒸汽灭灭菌法菌法 _及容器的及容器的灭灭菌菌过滤过滤除菌除菌不能不能_的化合物，要用的化合物，要用G6_过滤过滤超净台超净台酒精酒精所有所有芽孢和孢子芽孢和孢子接种工具接种工具培养基培养基加热灭菌加热灭菌玻璃砂漏斗玻璃砂漏斗二、分离以尿素为氮源的微生物二、分离以尿素为氮源的微生物1.菌种特点菌种特点含有含有_，可以通，可以通过过降解降解_作作为为其生其生长长的氮源。的氮源。2.培养基培养基用以用以为为唯一氮源的培养基培养，以唯一氮源的
5、培养基培养，以培养基培养基为对为对照。照。3.实验原理实验原理(1)筛选筛选以尿素以尿素为为氮源的微生物，可使用以尿素氮源的微生物，可使用以尿素为为唯一氮源的唯一氮源的培养基培养基进进行培养行培养选择选择。(2)细细菌合成的菌合成的脲脲酶酶能将尿素分解成能将尿素分解成，致致使使pH升升高高，使使酚酚红红指示指示剂剂。NH3脲酶脲酶尿素尿素尿素尿素LB全营养全营养选择选择变红变红4.实验步骤实验步骤无菌水无菌水涂布分离涂布分离三个三个玻璃刮刀玻璃刮刀24485.反应的鉴定反应的鉴定在配制培养基在配制培养基时时，加入指示，加入指示剂剂，培培养养时时细细菌菌将将尿尿素素分解分解产产生碱性的氨，使培养
6、基上菌落周生碱性的氨，使培养基上菌落周围围出出现现。酚红酚红红色的环带红色的环带6.微生物接种的两种常用方法比较微生物接种的两种常用方法比较比比较较划划线线分离法分离法涂布分离法涂布分离法工具工具接种接种环环玻璃刮刀玻璃刮刀原理原理通通过过_在在固固体体培培养养基基表表面面连连续续划划线线的的操操作作，将将聚聚集集的的菌菌种种逐逐步步_到到培培养养基基表表面面。在在数数次次划划线线后后培培养养，可可以以分分离离到到由由一一个个细细菌菌细细胞胞繁繁殖殖而而来来的的肉肉眼眼可可见见的的细细胞胞群群体体，即即_将将菌菌液液用用_进进行行梯梯度度稀稀释释，然然后后将将不不同同稀稀释释度度的的菌菌液液分
7、分别别用用_涂涂布布到到固固体体培培养养基基的的表表面面，进进行行培培养养。在在稀稀释释度度足足够够高高的的菌菌液液里里，聚聚集集在在一一起起的的微微生生物物将将被被分分散散成成单单个个细细菌菌细细胞胞，从从而而能能在在培养基表面形成培养基表面形成_特点特点方法方法简单简单，但，但_计计数数单单菌落菌落_，但操作复，但操作复杂杂些些目的目的使培养基上形成使培养基上形成单单个个细细菌菌细细胞繁殖而来的子胞繁殖而来的子细细胞群体胞群体菌落菌落接种环接种环稀释分散稀释分散菌落菌落无菌水无菌水涂布器涂布器单个的菌落单个的菌落不适宜不适宜更易分开更易分开1.(201510月月浙浙江江选选考考节节选选)科
8、科研研人人员员拟拟将将已已知知的的花花色色基基因因(目目的的基基因因)转转入入矮矮牵牵牛牛的的核核基基因因组组中中，培培育育新新花花色色的的矮矮牵牵牛牛。请请回回答：答：用用_的的玻玻璃璃刮刮刀刀将将稀稀释释后后的的大大肠肠杆杆菌菌液液_接接种种到到含含有有抗抗生生素素的的固固体体培培养养基基上上，经经培培养养形形成成_，再再进进行行鉴鉴定和定和扩扩大培养。大培养。解解析析在在细细菌菌涂涂布布分分离离时时，采采用用灭灭菌菌的的玻玻璃璃刮刮刀刀将将稀稀释释后后的的菌菌液液均均匀匀涂涂布布在在固固体体培培养养基基上上，经经培培养养形形成成单单菌菌落落，再再进进行行鉴鉴定定和扩大培养。和扩大培养。答
9、案答案灭灭菌涂布菌落菌涂布菌落2.(201610月月浙浙江江选选考考节节选选)请请回回答答从从土土壤壤中中分分离离产产脲脲酶酶细细菌菌和和脲脲酶酶固定化固定化实验实验的有关的有关问题问题：(1)LB固固体体培培养养基基：取取适适量量的的蛋蛋白白胨胨、酵酵母母提提取取物物、NaCl，加加入一定量的蒸入一定量的蒸馏馏水溶解，再加水溶解，再加_，灭灭菌菌备备用。用。(2)尿尿素素固固体体培培养养基基：先先将将适适宜宜浓浓度度的的尿尿素素溶溶液液用用_灭灭菌菌过过 的的 G6玻玻 璃璃 砂砂 漏漏 斗斗 过过 滤滤，因因 为为 G6玻玻 璃璃 砂砂 漏漏 斗斗_，故故用用于于过过滤滤除除菌菌。然然后后
10、将将尿尿素素溶溶液液加加到到已已经灭经灭菌的含有酚菌的含有酚红红的培养基中，的培养基中，备备用。用。(3)取取适适量量含含产产脲脲酶酶细细菌菌的的104、105两两种种土土壤壤稀稀释释液液，分分别别涂涂布布接接种种到到LB固固体体培培养养基基和和尿尿素素固固体体培培养养基基上上，培培养养48h，推推测测固体培养基上生固体培养基上生长长的菌落数量最少的是的菌落数量最少的是_。A.105稀稀释释液尿素固体培养基液尿素固体培养基B.105稀稀释释液液LB固体培养基固体培养基C.104稀稀释释液尿素固体培养基液尿素固体培养基D.104稀稀释释液液LB固体培养基固体培养基在在尿尿素素固固体体培培养养基基
11、上上产产脲脲酶酶细细菌菌菌菌落落周周围围出出现现_，其其原原因是因是细细菌菌产产生的生的脲脲酶酶催化尿素分解催化尿素分解产产生生_所致。所致。解解析析(1)本本实实验验中中的的LB培培养养基基是是要要与与尿尿素素培培养养基基作作对对比比的的，所所以以要要用用琼琼脂脂糖糖替替换换琼琼脂脂。(2)尿尿素素培培养养基基的的灭灭菌菌要要分分开开进进行行，除除尿尿素素外外的的其其他他成成分分仍仍用用高高压压蒸蒸汽汽灭灭菌菌，尿尿素素溶溶液液用用G6玻玻璃璃砂砂漏漏斗斗过过滤滤除除菌菌，再再将将除除菌菌的的尿尿素素加加到到已已灭灭菌菌的的其其他他成成分分中中。G6玻玻璃璃砂砂漏漏斗斗由由于于孔孔径径小小，
12、细细菌菌不不能能滤滤过过，可可用用于于过过滤滤除除菌菌，但但需需要要在在使使用用前前进进行行高高压压蒸蒸汽汽灭灭菌菌。(3)由由于于在在土土壤壤中中产产脲脲酶酶的的细细菌菌远远小小于于普普通通细细菌菌，所所以以在在尿尿素素培培养养基基上上的的菌菌落落数数相相对对少少得得多多，另另外外稀稀释释倍倍数数高高的的土土壤壤稀稀释释液液中中细细菌菌数数量量少少，在在培培养养基基上上菌菌落落数数也也相相对对少少。在在尿尿素素固固体体培培养养基基上上产产脲脲酶酶细细菌菌菌菌落落周周围围出出现现红红色色环环带带，这这是是因因为为脲脲酶酶催催化化尿尿素素分分解解产产生生氨氨，使使培培养养基基呈呈碱碱性性，酚红指
13、示剂在碱性下呈红色。酚红指示剂在碱性下呈红色。答答案案(1)琼琼脂脂糖糖(2)高高压压蒸蒸汽汽孔孔径径小小，细细菌菌不不能能滤滤过过(3)A红红色色环带环带氨氨(或或NH3)3.(20174月月浙浙江江选选考考节节选选)回回答答与与泡泡菜菜腌腌制制和和亚亚硝硝酸酸盐盐测测定定有有关的关的问题问题：制制作作泡泡菜菜时时，为为缩缩短短发发酵酵周周期期，腌腌制制前前可可加加入入乳乳酸酸菌菌。取取少少量量酸酸奶奶，用用无无菌菌蒸蒸馏馏水水稀稀释释后后，再再用用_蘸蘸取取少少量量的的稀稀释释液液，在在MRS乳乳酸酸菌菌专专用用培培养养基基的的平平板板上上划划线线，以以获获得得乳乳酸酸菌菌单单菌菌落落。下
14、下图图所示的划所示的划线线分离操作，正确的是分离操作，正确的是_。解解析析从从酸酸奶奶中中分分离离乳乳酸酸菌菌时时，可可采采用用划划线线分分离离，方方法法是是用用接接种种环环蘸蘸取取少少量量的的稀稀释释液液，在在MRS乳乳酸酸菌菌专专用用培培养养基基的的平平板板上上划划线线，以以获获得得乳乳酸酸菌菌单单菌菌落落。图图示示的的划划线线分分离离中中B图图方方法法是是正正确确的的，A图图不不分分区区划划线线，但但划划线线太太稀稀疏疏了了，分分离离效效果果很很差差，B、C、D都都采采用用了了分分区区划划线线，但但C、D都都没没有有注注意意除除第第一一区区外外，之之后后每每区划线的第一条线都需要从上一区
15、划线的末端开始。区划线的第一条线都需要从上一区划线的末端开始。答案答案接种接种环环B本题组对应选修一本题组对应选修一P19P28，微生物的利用，微生物的利用1.大大肠肠杆菌是革杆菌是革兰兰氏阴性、氏阴性、的的肠肠道道杆杆菌菌，是是技技术术中被广泛采用的工具。中被广泛采用的工具。2.培养基是指微生物生存的培养基是指微生物生存的和和，一一般般都都含含有有五五大大营营养要素：即：养要素：即：、。一一般般来来讲讲，“细细菌菌喜喜荤荤、霉霉菌菌喜喜素素”，大大肠肠杆菌一般采用杆菌一般采用培养基，其主要成分培养基，其主要成分为为、氯氯化化钠钠、水等，若要、水等，若要扩扩大培养，大培养，则则采用采用培养基，
16、若要分离培养基，若要分离获获得得纯纯种，种，则则采用采用培培养基，养基，这这两者的主要区两者的主要区别别在于后者加入了在于后者加入了。霉霉菌菌培培养养基基一一般用般用配制成或添加配制成或添加的豆芽汁。的豆芽汁。兼性厌氧兼性厌氧基因工程基因工程环境环境营养物质营养物质水水无机盐无机盐碳源碳源氮源氮源生长因子生长因子LB蛋白胨蛋白胨酵母提取物酵母提取物LB液体液体LB固体固体琼脂琼脂无机物无机物蔗糖蔗糖3.单单菌落的分离是菌落的分离是的的通通用用方方法法，也也是是用用于于筛筛选选菌菌株株的的最最简简便便方方法法之之一一。常常用用的的分分离离方方式式有有分离法、分离法、分分离离法法两两种种。它它们们
17、都都采用采用培培养养基基。其其中中涂涂布布分分离离法法单单菌落菌落，并且可用来，并且可用来菌菌体体数数目目，但但操作操作，且往往要先将培养的菌液，且往往要先将培养的菌液；而；而分离操作分离操作简单简单，但不能用于，但不能用于计计数。数。消除污染杂菌消除污染杂菌高表达量高表达量划线划线涂布涂布固体平面固体平面更易分开更易分开计数计数复杂些复杂些稀释稀释划线划线4.菌种保存往往菌种保存往往选选用用培养基，于培养基，于中中保保存存。用用灼灼烧烧后后的的接接种种环环从从斜斜面面取取菌菌种种时时，往往往往要要先先使使接接种种环环接触接触以达到以达到的的目目的的，然然后后再取菌体。再取菌体。5.接种完成后
18、接种完成后应应将培养皿将培养皿培培养养，目目的的是是：防防止止水水蒸蒸气气凝凝结结成的水滴落入成的水滴落入冲散菌落，影响冲散菌落，影响单单菌落的菌落的。固体斜面固体斜面4冰箱冰箱培养基培养基冷却冷却倒置倒置培养基表面培养基表面形成和分离形成和分离6.灭灭菌菌操操作作：培培养养基基、培培养养皿皿、试试管管、三三角角瓶瓶、枪枪头头、接接种种环环、镊镊子等用具通常用子等用具通常用灭灭菌菌，这这些些用用具具通通常常需需要要用用_或或报报纸纸包包好好，其其中中容容器器先先要要用用_封封口口再再包包好好，放放入入灭灭菌菌锅锅中中，在在_(_压压力力)下下灭灭菌菌_min。实实验验用用的的棉棉花花不不能能用
19、用_，因因_易易吸吸水水，吸吸水水后后容容易易引引起起污污染染。如如果果培培养养基基中中有有葡葡萄萄糖糖，为为防防止止葡葡萄萄糖糖分分解解碳碳化化，要要用用_g/cm2压压力力(_以以上上)灭灭菌菌_min。由由于于尿尿素素加加热热会会分分解解，只只能能用用_过过滤滤除除菌菌，但但玻玻璃璃砂砂漏漏斗斗使使用用前前也也要要在在_下下用用纸纸包包好好灭灭菌菌，用用后后还还需需用用1 mol/L的的_浸浸泡泡，并并_，再再用用_洗洗至至洗洗出出液液呈呈中中性性，_后后保保存存。将将培培养养基基转转移移到到三三角角瓶瓶和和试试管管中中时时必必须须用用_，以以免免培培养养基基沾沾到到和和，发发生生污污染
20、。染。高压蒸汽高压蒸汽牛皮纸牛皮纸棉塞或封口膜棉塞或封口膜1211kg/cm215脱脂棉脱脂棉脱脂棉脱脂棉5009030G6玻璃砂漏斗玻璃砂漏斗121HCl抽滤去酸抽滤去酸蒸馏水蒸馏水干燥干燥三角漏斗三角漏斗三角瓶口三角瓶口试管口试管口7.无菌操作通常在无菌操作通常在中中进进行，超行，超净净台使用前台使用前min，打开打开和和，注注意意打打开开紫紫外外灯灯后后，使用，使用时时必必须须关关闭闭。超净台超净台30紫外灯紫外灯过滤风过滤风人必须离开人必须离开紫外灯紫外灯角度微生物的利用角度微生物的利用1.(2017嘉兴期末节选嘉兴期末节选)下列有关大下列有关大肠肠杆菌的培养杆菌的培养实验实验，请请回
21、答：回答：(1)配配制制培培养养大大肠肠杆杆菌菌的的培培养养基基时时，根根据据“细细菌菌喜喜荤荤，霉霉菌菌喜喜素素”的的规规律律，通通常常在在培培养养基基中中加加入入蛋蛋白白胨胨和和_作作为为营营养养物物质质，为维为维持一定的渗透持一定的渗透压压，常需加入一定量的，常需加入一定量的_。(2)大大肠肠杆杆菌菌培培养养和和分分离离的的实实验验中中，在在_中中进进行行扩扩大大培培养养，培培养养液液经经_后后，在在LB固固体体培培养养基基上上进进行行_，并并将将培培养养皿皿_放放在在恒恒温温培培养养箱箱中中培培养养，可可以以获获得得如如图图效效果果。为为了了检检测测接接种种、培培养养过过程程是是否否受
22、受杂杂菌菌污污染染以以及及_，应应同同时时将未接种的培养基放入恒温培养箱培养。将未接种的培养基放入恒温培养箱培养。(3)通通常常对对获获得得的的纯纯菌菌种种可可以以依依据据_的的形形状状、大大小小等等特特征征进进行初步的行初步的鉴鉴定。定。(4)关关于于“大大肠肠杆杆菌菌培培养养和和分分离离”的的操操作作中中，下下列列叙叙述述正正确确的的是是_。A.高高压压灭灭菌菌加加热热结结束束时时，打打开开放放气气阀阀使使压压力力表表指指针针回回到到零零后后，开启开启锅锅盖盖B.倒倒平平板板时时，应应将将打打开开的的皿皿盖盖放放到到一一边边，以以免免培培养养基基溅溅到到皿皿盖盖上上C.为为了防止了防止污污
23、染，接种工具染，接种工具经经火焰火焰灭灭菌后菌后应应趁趁热热快速挑取菌落快速挑取菌落D.用用记记号笔号笔标记标记培养皿中菌落培养皿中菌落时时，应标记应标记在皿底上在皿底上解解析析(1)配配制制培培养养细细菌菌的的培培养养基基通通常常用用LB培培养养基基，其其成成分分有有蛋蛋白白胨胨、酵酵母母提提取取物物、NaCl、水水等等，固固体体培培养养基基还还有有琼琼脂脂。其其中中蛋蛋白白胨胨、酵酵母母提提取取物物提提供供营营养养，NaCl提提供供无无机机盐盐并并调调节节渗渗透透压压，琼琼脂脂是是凝凝固固剂剂。(2)细细菌菌培培养养通通常常用用LB液液体体培培养养基基进进行行扩扩大大培培养养和和生生产产，
24、用用固固体体培培养养基基进进行行分分离离、鉴鉴定定、保保存存菌菌种种。菌菌种种分分离离有有划划线线法法和和涂涂布布法法，进进行行涂涂布布分分离离时时，选选稀稀释释菌菌液液，再再进进行行涂涂布布，完完成成后后将将培培养养皿皿倒倒置置放放在在恒恒温温培培养养箱箱中中培培养养，可可获获得得分分布布均均匀匀的的单单菌菌落落。为为了了检检测测接接种种、培培养养过过程程是是否否受受杂杂菌菌污污染染以以及及培培养养基基灭灭菌菌是是否否彻彻底底，应应同同时时将将未未接接种种的的培培养养基基放放入入恒恒温培养箱培养。温培养箱培养。(3)菌落的形状、大小等特征可以作为鉴定的依菌落的形状、大小等特征可以作为鉴定的依
25、据据。(4)高高压压灭灭菌菌加加热热结结束束后后，自自然然冷冷却却待待压压力力表表指指针针回回到到零零后后，开开启启锅锅盖盖，A错错误误；倒倒平平板板时时，应应将将打打开开上上盖盖的的一一边边，将将培培养养基基倒倒入入培培养养皿皿，再再盖盖上上培培养养皿皿上上盖盖，将将培培养养皿皿置置于于水水平平位位置置，轻轻轻轻晃晃动动，使使培培养养基基铺铺满满底底部部，待待其其凝凝固固，B错错误误；接接种种时时接接种种工工具具经经灼灼烧烧灭灭菌菌后后，需需先先接接触触培培养养基基使使其其冷冷却却后后，再再挑挑取取菌菌落落，C错错误误；由由于于培培养养皿皿是是倒倒置置放放在在恒恒温温培培养养箱箱中中培培养养
26、的的，所所以用记号笔标记培养皿中菌落时，应标记在皿底上，以用记号笔标记培养皿中菌落时，应标记在皿底上，D正确。正确。答答案案(1)酵酵母母提提取取物物NaCl(2)LB液液体体培培养养基基稀稀释释涂涂布布分离倒置培养基分离倒置培养基灭灭菌是否菌是否彻彻底底(3)菌落菌落(4)D2.(2017金金丽丽衢衢十十二二校校节节选选)普普通通酵酵母母菌菌直直接接利利用用淀淀粉粉的的能能力力很很弱弱，有有人人将将地地衣衣芽芽孢孢杆杆菌菌的的淀淀粉粉酶酶基基因因转转入入酵酵母母菌菌中中，经经筛筛选选得得到到了了可可高高效效利利用用淀淀粉粉的的工工程程酵酵母母菌菌菌菌种种(过过程程如如图图1所示所示)(1)图
27、图1中中，为为达达到到筛筛选选目目的的，平平板板内内的的固固体体培培养养基基应应以以_作作为为唯一碳源。唯一碳源。过过程需重复几次，目的是程需重复几次，目的是_。(2)某某同同学学尝尝试试过过程程的的操操作作，其其中中一一个个平平板板经经培培养养后后的的菌菌落落分分布布如如图图2所所示示。该该同同学学的的接接种种方方法法是是_；推推测测该该同同学学接接种种时时可能的操作失可能的操作失误误是是_。(3)上述工程酵母菌培养上述工程酵母菌培养过过程中，有关操作正确的是程中，有关操作正确的是_。A.玻璃刮刀用火焰灼玻璃刮刀用火焰灼烧进烧进行行灭灭菌菌B.培养基分装到培养皿后培养基分装到培养皿后进进行行
28、灭灭菌菌C.倒平板和取菌液都必倒平板和取菌液都必须须在酒精灯火焰旁在酒精灯火焰旁进进行行D.获获得的菌种如果需要保存，可置于得的菌种如果需要保存，可置于37恒温保存恒温保存解解析析(1)为为筛筛选选得得到到高高效效利利用用淀淀粉粉的的工工程程酵酵母母菌菌菌菌种种，固固体体培培养养基基应应以以淀淀粉粉作作为为唯唯一一碳碳源源。多多次次重重复复筛筛选选是是为为获获得得高高效效利利用用淀淀粉粉的的工工程程酵酵母母菌菌的的纯纯化化菌菌种种。(2)由由图图2的的结结果果表表明明，该该同同学学采采用用的的是是涂涂布布分分离离法法，其其操操作作的的失失误误是是涂涂布布不不均均匀匀，造造成成平平板板上上菌菌落
29、落未未均均匀匀分分布布。(3)涂涂布布操操作作用用的的玻玻璃璃刮刮刀刀通通常常保保存存在在70%酒酒精精中中，使使用用前前引引燃燃酒酒精精，火火焰焰熄熄灭灭后后待待其其冷冷却却后后使使用用；培培养养基基通通常常先先灭灭菌菌，后后趁趁热热倒倒平平板板；保保存存菌菌种种通通常常使使用用斜斜面面培培养养基基，在在4冰冰箱箱中中保保存存；倒倒平平板板和和取取菌菌液液都都必必须须在在酒酒精精灯灯火火焰焰旁旁进进行，这是无菌操作要求。行，这是无菌操作要求。答答案案(1)淀淀粉粉筛筛选选出出真真正正高高效效利利用用淀淀粉粉的的工工程程酵酵母母菌菌菌菌种种(2)涂布分离法涂布不均匀涂布分离法涂布不均匀(3)C
30、1.培养基的种类培养基的种类划分划分标标准准培养基种培养基种类类特点特点用途用途物理性物理性质质液体培养基液体培养基不加凝固不加凝固剂剂工工业业生生产产、扩扩大培养大培养半固体培养基半固体培养基加凝固加凝固剂剂，如，如琼琼脂脂观观察察微微生生物物的的运运动动、分分类类、鉴鉴定定固体培养基固体培养基微微生生物物分分离离、鉴鉴定定、活菌活菌计计数、保藏菌种数、保藏菌种化学成分化学成分天然培养基天然培养基含含化化学学成成分分不不明明确确的的天天然然物物质质工工业业生生产产合成培养基合成培养基培培养养基基成成分分明明确确(用用化化学学成成分已知的化学物分已知的化学物质质配成配成)分分类类、鉴鉴定定用途
31、用途选择选择培养基培养基培培养养基基中中加加入入某某种种化化学学物物质质，以以抑抑制制不不需需要要的的微微生生物物的的生生长长，促促进进所所需需要要的的微生物的生微生物的生长长培培养养、分分离离出出特定微生物特定微生物鉴别鉴别培养基培养基根根据据微微生生物物的的代代谢谢特特点点，在在培培养养基基中中加加入入某某种种指指示示剂剂或化学或化学药药品品鉴鉴别别不不同同种种类类的微生物的微生物2.培养基营养要素培养基营养要素基基本本营营养养要要素素：各各种种培培养养基基一一般般都都含含有有水水、碳碳源源、氮氮源源、无无机机盐盐。此此外外还还要要满满足足不不同同微微生生物物生生长长对对pH、特特殊殊营营
32、养养物物质质以以及及氧氧气的需求。气的需求。营营养要素养要素来源来源功能功能碳源碳源无机碳源无机碳源CO2、NaHCO3、CaCO3等含碳无机物等含碳无机物构构成成细细胞胞中中的的物物质质和和一一些些代代谢产谢产物；物；既是碳源又是能源既是碳源又是能源有机碳源有机碳源糖糖类类、脂脂质质、蛋蛋白白质质、有有机酸、石油、花生粉机酸、石油、花生粉饼饼等等氮源氮源无机氮源无机氮源无无机机氮氮：NH3、铵铵盐盐、硝硝酸酸盐盐、N2等等将无机氮合成含氮的代将无机氮合成含氮的代谢产谢产物物有机氮源有机氮源牛牛肉肉膏膏、蛋蛋白白胨胨、核核酸酸、尿素、氨基酸尿素、氨基酸合合成成蛋蛋白白质质、核核酸酸及及含含氮氮
33、的的代代谢产谢产物物生生长长因子因子维维生素、氨基酸、碱基生素、氨基酸、碱基酶酶和和核核酸酸的的组组成成成成分分；参参与代与代谢过谢过程中的程中的酶酶促反促反应应考点二浅尝现代生物技术考点二浅尝现代生物技术1.植物组织培养的原理植物组织培养的原理(1)理理论论基基础础：植物：植物细细胞具有胞具有。(2)植物植物组织组织培养的基本培养的基本过过程程全能性全能性脱分化脱分化再分化再分化(3)植物植物组织组织培养影响因素培养影响因素选选材材：不不同同植植物物组组织织或或同同一一植植物物组组织织的的不不同同部部分分，培培养养的的难难易程度差易程度差别别很大，菊花的很大，菊花的组织组织培养，一般培养，一
34、般选择选择的茎上部的茎上部的的侧侧枝。枝。培培养养基基：植植物物组组织织培培养养需需要要适适宜宜的的培培养养基基，常常用用的的是是MS培培养养基基，在在配配制制好好的的培培养养基基中中，常常常常需需要要添添加加生生长长素素和和细细胞胞分分裂裂素素两种植物激素。两种植物激素。实验实验中使用的生中使用的生长长素素类类似物是似物是，细细胞分裂素胞分裂素类类似物是似物是。其他条件：其他条件：pH、温度和光照等条件、温度和光照等条件对对植物植物组织组织培养也很重要。培养也很重要。未开花植株未开花植株新萌生新萌生萘乙酸（萘乙酸（NAA）苄基腺嘌呤（苄基腺嘌呤（BA）2.菊花组织培养过程菊花组织培养过程乙醇
35、乙醇次氯酸钠次氯酸钠无菌水无菌水酒精灯火焰酒精灯火焰灼烧灭菌灼烧灭菌发芽发芽BANAA1825丛状苗丛状苗生根生根NAA蛭石蛭石80%自然湿度自然湿度(201510月月浙浙江江选选考考节节选选)科科研研人人员员拟拟将将已已知知的的花花色色基基因因(目目的的基因基因)转转入矮入矮牵牵牛的核基因牛的核基因组组中，培育新花色的矮中，培育新花色的矮牵牵牛。牛。请请回答：回答：(1)取取 田田 间间 矮矮 牵牵 牛牛 的的 幼幼 嫩嫩 叶叶 片片，经经 自自 来来 水水 冲冲 洗洗，先先 用用70%_浸浸泡泡，再再用用5%次次氯氯酸酸钠钠浸浸泡泡，最最后后用用_清洗，作清洗，作为转为转基因的受体材料。基
36、因的受体材料。(2)取取出出试试管管苗苗，在在适适宜宜的的光光照照、温温度度和和80%以以上上的的_等等条件下条件下进进行行炼炼苗。苗。解解析析(1)用用作作组组培培的的外外植植体体若若取取自自自自然然环环境境则则需需要要消消毒毒，方方法法是是外外植植体体经经自自来来水水冲冲洗洗，先先用用70%酒酒精精浸浸泡泡，再再用用5%次次氯氯酸酸钠钠浸浸泡泡，最最后后用用无无菌菌水水清清洗洗，才才能能用用于于接接种种。(2)组组培培时时，试试管管苗苗需需经经炼炼苗苗才才能能定定植植，炼炼苗苗时时需需将将试试管管苗苗从从培培养养瓶瓶中中取取出出，移移栽至栽至具具适宜的光照、温度和较低湿度的环境中。适宜的光
37、照、温度和较低湿度的环境中。答案答案(1)酒精无菌水酒精无菌水(2)湿度湿度本题组对应选修一本题组对应选修一P59P61，植物的组织培养，植物的组织培养1.组组织织培培养养就就是是取取一一部部分分_，如如根根、茎茎、花花瓣瓣、叶叶或或花花粉等，在粉等，在的的条条件件下下接接种种在在三三角角瓶瓶中中的的_上，上，给给予一定的光照和温度，使之予一定的光照和温度，使之产产生生，或或进进而而。组织组织培养必培养必须须在培养基中加入在培养基中加入和和。两者的。两者的决决定定组组织织是是生生根根还还是生芽。当是生芽。当细细胞分裂素与生胞分裂素与生长长素的比例素的比例时时，诱导诱导的的生生成成，两两者者比比
38、例例大大致致_时时，愈愈伤伤组组织织继继续续_；当；当细细胞分裂素与生胞分裂素与生长长素的比例素的比例较较时时，会会趋趋于于生生。植物组织植物组织无菌无菌琼脂培养基琼脂培养基愈伤组织愈伤组织生根发芽生根发芽生长素生长素细胞分裂素细胞分裂素摩尔浓度比摩尔浓度比高高芽芽相等相等生长而不分化生长而不分化低低根根2.本本实验实验首先用首先用细细胞分裂素相胞分裂素相对较对较和生和生长长素相素相对较对较的的培养基培养基进进行培养，行培养，获获得得；然然后后将将丛丛状苗状苗培养。分株后，再移入含培养。分株后，再移入含较较多多的的培培养养基基中中，使使其其生生根根；将将生生根根的的苗苗从从三三角角瓶中移至瓶中
39、移至或或中中继继续续生生长长；苗苗健健壮壮后后再再移移至至。多多少少发芽发芽丛状苗丛状苗分株分株生长素生长素生根生根草炭土草炭土蛭石蛭石土中土中角度植物组织培养角度植物组织培养1.某某愈愈伤伤组组织织在在如如下下图图甲甲所所示示的的培培养养基基中中培培养养一一段段时时间间后后得得到到如如图图乙所示的乙所示的结结构，构，经经分析可知分析可知该该培养基中培养基中()A.细细胞分裂素多，生胞分裂素多，生长长素少素少B.细细胞分裂素少，生胞分裂素少，生长长素多素多C.细细胞分裂素和生胞分裂素和生长长素用量相等素用量相等D.只有生只有生长长素素解解析析从从图图乙乙中中可可以以看看出出该该培培养养基基有有
40、利利于于生生根根且且抑抑制制芽芽的的形形成成，所以可推断该培养基中生长素多，细胞分裂素少，所以可推断该培养基中生长素多，细胞分裂素少，B正确。正确。答案答案B2.(2016温温州州选选考考模模拟拟节节选选)卡卡那那霉霉素素和和头头孢孢霉霉素素都都有有抗抗菌菌作作用用，此此外外，卡卡那那霉霉素素还还对对葡葡萄萄细细胞胞有有抑抑制制作作用用。研研究究人人员员将将Barnase基基因因(雄雄性性不不育育基基因因)转转入入葡葡萄萄细细胞胞，利利用用卡卡那那霉霉素素和和头头孢孢霉霉素素，通通过过植植物物克克隆隆方方法法成成功功培培育育出出大大粒粒、无无核核的的葡葡萄萄新新品品种。种。请请回答：回答：(1
41、)构构建建含含Barnase基基因因、葡葡糖糖苷苷酸酸酶酶基基因因和和卡卡那那霉霉素素抗抗性性基基因因的的重重组组质质粒粒，导导入入农农杆杆菌菌，在在固固体体培培养养基基中中培培养养形形成成_以以便便鉴鉴定定是是否否混混有有杂杂菌菌，再再用用_将将农农杆杆菌菌转转移移至至LB_培养基中培养基中进进行行扩扩大培养。大培养。(2)将将经经过过_的的幼幼嫩嫩葡葡萄萄叶叶片片切切成成小小块块，浸浸入入农农杆杆菌菌悬悬浮浮液液中中，4分分钟钟后后取取出出(此此时时已已有有较较多多农农杆杆菌菌附附着着在在叶叶片片小小块块上上)并并接接种种到到固固体体培培养养基基中中。培培养养至至第第3天天时时，可可以以看
42、看到到在在叶叶片片小小块块周周围围出出现现_和和大大量量菌菌落落。这这时时再再用用头头孢孢霉霉素素处处理理叶叶片片小小块块，其其目目的的是是_(A.抑抑制制葡葡萄萄细细胞胞脱脱分分化化B.促促进进葡葡萄萄细细胞再分化胞再分化C.杀灭农杀灭农杆菌杆菌D.促促进农进农杆菌生杆菌生长长)。(3)将将叶叶片片切切成成小小块块放放入入卡卡那那霉霉素素培培养养基基中中培培养养一一段段时时间间后后，转转移移至至生生芽芽培培养养基基中中，待待其其长长出出_后后，再再转转移移至至生生根根培培养养基基中中继继续续培培养养形形成成试试管管苗苗。卡卡那那霉霉素素培培养养基基起起着着_作作用用，植物克隆的技植物克隆的技
43、术术基基础础是是_。(4)在在卡卡那那霉霉素素培培养养基基中中，由由于于转转化化细细胞胞对对周周围围的的非非转转化化细细胞胞有有保保护护作作用用，获获得得的的试试管管苗苗中中可可能能存存在在假假的的转转基基因因试试管管苗苗，因因此此还还需需对对试试管管苗苗的的_基基因因的的表表达达产产物物进进行行生生化化检检测测，才才能能鉴别鉴别出真正的出真正的转转基因基因试试管苗。管苗。(5)最最后后，对对转转基基因因试试管管苗苗还还需需进进行行逐逐渐渐_湿湿度度的的锻锻炼炼，使之适使之适应应自然自然环环境。境。解解析析(1)构构建建含含Barnase基基因因、葡葡糖糖苷苷酸酸酶酶基基因因和和卡卡那那霉霉素
44、素抗抗性性基基因因的的重重组组质质粒粒，导导入入农农杆杆菌菌，在在固固体体培培养养基基中中培培养养形形成成单单菌菌落落以以便便鉴鉴定定是是否否混混有有杂杂菌菌，再再用用接接种种环环将将农农杆杆菌菌转转移移至至LB液液体体培培养养基基中中进进行行扩扩大大培培养养。(2)将将经经过过消消毒毒的的幼幼嫩嫩葡葡萄萄叶叶片片切切成成小小块块，浸浸入入农农杆杆菌菌悬悬浮浮液液中中，然然后后取取出出并并接接种种到到固固体体培培养养基基中中。培培养养至至第第3天天时时，可可以以看看到到在在叶叶片片小小块块周周围围出出现现愈愈伤伤组组织织和和大大量量菌菌落落。这这时时再再用用头头孢孢霉霉素素处处理理叶叶片片小小
45、块块，其其目目的的是是杀杀灭灭农农杆杆菌菌，从从而而获获得得处处理理的的葡葡萄萄叶叶片片细细胞胞。(3)将将叶叶片片小小块块放放入入卡卡那那霉霉素素培培养养基基中中培培养养获获得得导导入入目目的的基基因因的的葡葡萄萄叶叶片片细细胞胞，转转移移至生芽培养基中，待其长出丛状苗后，再转移至生根培养至生芽培养基中，待其长出丛状苗后，再转移至生根培养基基中中继继续续培培养养形形成成试试管管苗苗。卡卡那那霉霉素素培培养养基基起起着着筛筛选选导导入入目目的的基基因因的的葡葡萄萄叶叶片片细细胞胞作作用用，植植物物克克隆隆的的技技术术基基础础是是植植物物组组织织培培养养。(5)最最后后，对对转转基基因因试试管管苗苗还还需需进进行行逐逐渐渐降降低低湿湿度度的的锻锻炼炼，使之适应自然环境。使之适应自然环境。答案答案(1)单单菌落接种菌落接种环环液体液体(2)消毒愈消毒愈伤组织伤组织C(3)丛丛状苗状苗筛选筛选植物植物组织组织培养培养(4)葡糖苷酸葡糖苷酸酶酶(5)降低降低生长素和细胞分裂素用量比例与根、芽的分化生长素和细胞分裂素用量比例与根、芽的分化生生长长素和素和细细胞分裂素比胞分裂素比值值结结果果比比值值高高时时促促进进根的分化，抑制芽的形成根的分化，抑制芽的形成比比值值低低时时促促进进芽的分化，抑制根的形成芽的分化，抑制根的形成比比值值适中适中促促进进愈愈伤组织伤组织的生的生长长