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1、艾滋病实验室质量管理与控制一、质量保证（QA)1、行政支持 行政部门和领导要关心艾滋病实验室的建设和发展，保证实验室负责人和主要技术人员队伍的稳定，保证实验室建筑和设备需要，给予充足的经费支持，并进行经常性监督检查。2、实验室规范化建设 艾滋病筛查中心实验室及艾滋病筛查实验室（1）、建筑条件 实验室或检测区域应分为清洁区、半污染区和污染区，应符合二级生物安全实验室（BSL-2）要求。（2）、仪器设备条件 配备艾滋病病毒抗体筛查试验所需设备，至少包括酶标读数仪、洗板机、普通冰箱、水浴箱（或温箱）、离心机、加样器（仪）、消毒与污物处理设备、实验室恒温设备、安全防护用品和生物安全柜。艾滋病检测点（1
2、）、建筑条件 需有艾滋病检测区域或专用实验台，能开展简便、快速检测。（2）、设备条件 需配备快速试验所必须的物品，包括普通冰箱、消毒与污物处理设备、一次性消耗品、安全防护用品。3、人员培训及其评价 实验室工作人员上岗前必须接受省级以上艾滋病检测技术培训并获得合格证书。在工作中要定期或不定期接受复训。实验室主管领导应定期对工作人员进行评价，包括工作的准确性、效率、执行安全条例和规章制度情况、职业道德、出勤率以及上岗资格等。4.标本采集、运送和处理 5、检测方法和试剂的选择 所用试剂必须是经国家食品药品监督管理局注册批准、批批检合格、在有效期内的试剂。推荐使用经临床质量评估敏感性和特异性高的试剂。
3、6、设备维护与校准（1）、酶标读数仪、洗板机 每天：每天：核对滤光片波长，检查洗板机管道是否通畅，是否有漏液现象。每周：每周：清洁仪器表面，保护光学零件不沾灰尘。每月：每月：检查洗涤时各孔是否与相应的冲洗头对位良好，负压是否符合规定要求每年：每年：检查、清洗滤光片，如果出现破裂或霉点则要更换。根据仪器内具有的校准程序或使用校准板，对滤光片的精密度进行校准并保留记录。实验过程中发现异常情况，应随时进行处理，可根据使用情况更换必要的部件。（2）、移液器 1年至少应该标定1次，发现异常情况应随时进行校准。标定方法包括有色溶液光谱分析法、称量校准法、同位素计数法以及使用配套校准盒等。校准多道移液器时，
4、必须保证每一个加样头都能够连续、准确地加样。移液器的精密度应在厂家说明书规定的范围内。（3）、冰箱和孵育箱 必须每天检查冰箱及孵育箱（水浴箱）的温度，并做好记录。（4）、定期检查其它仪器设备 精密仪器及出具实验结果的仪器必须定期校准，其它仪器定期检查并做好记录。7、文件和文件管理（1）、标准操作程序(SOP)艾滋病实验室要建立覆盖主要工作内容的SOP文件，应至少建立以下SOP（10个）：（a）样品的接收、登记和处理，（b）检测方法和步骤，（c）仪器的使用维护和校准，（d）实验中的质量控制，（e）结果解释与报告，（f）保密程序，（g）检测数据的记录与保存，（h）追踪和处理，（i）实验室的清理和消
5、毒，（j）实验室安全防护。SOP 的应包括的内容a.标题和编号b.编写和修改日期c.编写和修订人员姓名d.方法、目的和应用范围e.相应的职业规范f.检测设备和试剂h.安全防护相关步骤i.结果的解释和报告j.附录，包括相关的附加文件如标准表格、设备和试剂盒说明书等。SOP由各岗位工作人员起草，实验室主任审定，并应定期修订。修订应该在实验室主管人员（技术负责人）的领导下进行，每年至少1次。所有工作人员要在所从事工作的SOP文件上签名表示已经阅读并掌握了有关内容（2）实验原始记录应按实验要求，设计操作的原始记录，标明空白对照、阳性对照、阴性对照、外部对照以及待检样品的位置，便于指导实验人员加样。要注
6、明试剂盒生产厂家、测定方法、试剂批号和效期、实验操作步骤、操作人员和复核人员姓名及检测日期。（3）、标本的登记 收到标本后，及时登记有关参数，包括受检者姓名或代号、检测编号、性别、年龄、职业、送检单位、人群类别、检验结果、送检日期、报告日期、备注(必要时记录通信地址)等。（4）、HIV标本的保存记录 包括HIV标本的类型、贮存量、贮存温度、贮存起始时间以及标本保管人、复核人姓名。（5）、文件存档 实验原始记录、酶标打印数据、免疫印迹试验的膜反应条带或其照片、标本登记、标本保存记录以及仪器设备维修和校准记录等都应该妥善存档保存15年以上。最好同时使用计算机保存各种文件和记录。二、质量控制（QC)
7、实验室内为达到质量要求的操作技术和活动，适用于得出检验结果所有的步骤和活动。有些实验室工作人员仅注重画质控图，这是一种“狭义的”质控;检验的全过程质控(简称：全程质控)是一种“广义的”质控。（室内质量控制和室间质量评价）1、统计质量控制方法 Levey-Jennings控制图方法Westgard多规则控制方法累计和方法平均数和极差方法趋势分析方法利用病人数据分析方法“即刻法”质控方法（Grubbs）2、开展质量控制（1）在试验质量要求的基础上进行质）在试验质量要求的基础上进行质量控制的计划量控制的计划（2）选择适当的质控规则和质控物个）选择适当的质控规则和质控物个数数（3）选择适当的质控物）选
8、择适当的质控物（4）应用统计质量控制）应用统计质量控制（5）失控情况的处理）失控情况的处理3、质量控制方法的确定 应考虑使用何种质控物，分析多少个质控物，质控物放在何位置，应用何种质控规则，何时评价质控规则，以达到尽可能地降低假失控、假警告概率。控制规则的使用(用功效函数图评价)1.单个规则:例如12S或1S.联合控制规则：例如12S与1S联合；12S与S与R4S联合；.Westgard多规则质控：1S与S与R4S 与S与X平均数和极差控制方法 1S与累积和联合规则质控规则与误差检出率假失控概率单个控制规则不能提供对随机误差和系统误差都好的灵敏度联合规则中一些规则对随机误差敏感，一些规则对系统
9、误差敏感发展联合规则的方法如下：从考虑的控制规则中排除那些具有较高假失控概率的规则从余下的规则中选择至少一个规则对随机误差敏感，至少一个规则对系统误差敏感使用功效函数图评价这种联合规则的性能选择控制测定值个数(N)，其将给出检出感兴趣误差的适当概率（可耐受的假失控概率：工业选择低至0.002的概率；临床检验中一般0.01-0.05的假失控概率是合理的）HIV抗体ELISA检验 质量控制的实践（一）质控物的制备和保存（一）质控物的制备和保存 质质控控物物的的成成分分应应与与检检测测样样本本的的基基质质相相似似或或相相同同，为为减减少少基基质质效效应应，应应尽尽可可能的模拟。能的模拟。1、内对照和
10、外对照、内对照和外对照 2、制备、制备 3、保存、保存 4、外部对照质控物的使用 每一次实验必须使用外部对照质控血清，以便监控实验的精密度和稳定性，同时可以了解试剂盒的批间或板间差异，并可用于统计质量控制。5、外部对照质控物的质量要求 质控物的管间或瓶间变异必须小，并且质控物的成分应在稳定状态中。质控物应无菌，并不含有影响ELISA反应的防腐剂。（二）、质控图的建立及应用 最常用的质控图是Levey-Jennings质控图，Westgard质控图。1、质控图参数 平均值、标准差、控制限质控物的平均值和标准差应建立在实验室常规质控物的平均值和标准差应建立在实验室常规使用方法对质控物重复测定的基础
11、上。一般采使用方法对质控物重复测定的基础上。一般采用在不同批次检测取得至少用在不同批次检测取得至少2020个数据；如果仅个数据；如果仅做少量批次的检测，也至少做做少量批次的检测，也至少做5 5个批次的检测，个批次的检测，每个批次中不少于每个批次中不少于4 4个质控物测定结果，以建立个质控物测定结果，以建立一个临时性的平均值和标准差，当达到一个临时性的平均值和标准差，当达到2020批次批次数据后，替代临时性的平均值和标准差。数据后，替代临时性的平均值和标准差。(NCCLS)(NCCLS)2、质控规则及使用 实验室在报告实验结果之前必须评价质控数据，可通过图形记录的检查或由计算机审核结果来决定。目
12、前许多质控规则已被采用，常用的是12S和13S规则。（1）告警（12S）：当质控物的测定值超出 +2s范围时，系统处于告警状态，应予注意，是否可以继续检测需要进一步观察。若将12S做失控标准，有较高的假失控概率，所以一般不采用。（2）失控（13S）：当质控物的测定值超出 +3s范围时，系统处于失控状态，本次实验结果不能被接受，可能是系统误差或外部对照滴度下降造成。(随机误差引起的可能性小于.)（3）位移：连续几次（7-10次）外部对照S/CO值都落在均值的一侧则称为位移，提示实验条件发生了较大的变化。（4）趋势：连续几次（5-7次）外部对照S/CO值几乎按一个方向分布时称为趋势，通常由参数的缓
13、慢改变引起。质控规则的使用应检出随机误差和系统误差，即具有高的检出分析误差的能力，同时应具有较低的假失控概率。考察试验系统的可靠性应采用多标准质控方案，多规则质控方法能提高误差检出，并具有低的假失控概率。3、质控图的分析及失控处理 实验室应建立质控图分析及失控情况处理程序。当质控已计划并恰当地执行时，要求可靠的平均值和标准差用于计算质控限，将假失控概率降到最低。当出现失控时进行如重复质控测定或重新分析新的质控物不是最有效的方法，必须找出问题原因，找出解决故障的方法，并消除原因，防止将来出现同样的问题。检验误差类型1）随机误差：严密监测和控制，使其限制在临床允许的范围之内，并逐步使之缩小。2）系
14、统误差：要求尽快发现，及时校正。3）过失误差：尽量消灭。质量控制的核心问题：在于努力分清误差类型。图形分析及发现问题1）曲线漂移：2）趋势性变化：3）周期性变化：失控后处理 失控原因的查找过程并无固定模式，一般原理是由易到难，由近到远地查找1）分析原始数据及初步估计失控原因：2）对检测过程进行回顾分析：3）选择性复查分析判断失控原因：4）决定处理方法：失控后处理失控原因初步查找初步分析 防止检测失败的最有效的手段是开始实验前仔细核对程序，预先估计程序各步骤。如试剂使用前要平衡至室温，保证合适的孵育温度和时间，严格按试剂说明书操作等。如果以上都注意到了，但实验仍失败，以下建议可帮助发现问题。a.
15、与技术人员一起复习操作指导书，仔细检查操作步骤中是否有遗漏或改变；b.核查试剂及各组分的失效期；c.核对孵育的温度和时间；d.加样器、洗扳机、酶标仪等是否正常，酶标仪的波长是否准确，加样器和酶标仪是否校准；e.检查蒸馏水的质量；f.检查试剂是否被污染，贮存是否合适。原始数据分析空白对照阴性对照阳性对照标准一致：无明显系统误差，失控原因在质控血清或该管操作造成的可能性较大分析同一瓶质控血清的其他项目测定是否也有结果异常有异常：质控血清本身问题无异常：该管操作有问题 不一致：该批检测中可能有系统误差，失控原因来自试剂仪器或操作等的可能性较大观察仪器检测其他项目的结果有无异常有异常：仪器原因无异常：
16、试剂或操作等原因从质控图观察失控是否发生在渐变的基础上是渐变：由渐变的误差因素造成不是渐变：由突然发生的误差因素造成原因分析引起位移的原因有：a.使用一批新批号的试剂；b.更换了新的试剂；c.孵育温度改变；d.新的技术人员（其加样技术也许不同）；e.仪器改变（如加样器等）。引起趋势的原因有：a.试剂失效；b.仪器有问题。发生位移和趋势的最常见原因是试剂或质控品的失效，试剂盒中酶结合物最容易失效。另外，试剂在运输和贮存条件不当时，也容易失效。以下是HIV抗体检测中常见错误：稀释错误；在加样时刮擦已包被抗原的微孔；不适当的使用滴管，用滴管加试剂时滴管应处于垂直位置且液滴要自由落下；使用不适当的加样器枪头，加样器与枪头一定要匹配，否则会使取样加样不准；不连贯的操作技术，每份样本及质控品要同样对待，同时要同一个技术人员加所有的样本及质控；使用不适当的设备，设备使用前要保证经过了校准；不适当的温度，试剂使用前要平衡至室温及孵育温度要准确，否则会改变反应的动力学，产生错误结果；不同批号试剂中的组分混合使用。