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1、遗 传 学省 级 精 品 课 程实验六实验六 果蝇的三点测交果蝇的三点测交湖州师范学院湖州师范学院生命科学学院生物系生命科学学院生物系雌雌雄雄遗 传 学省 级 精 品 课 程一、实验目的一、实验目的一、实验目的一、实验目的1 1、掌握三点测交的原理及方法；、掌握三点测交的原理及方法；2 2、学习三点测交的数据统计处理及分析方法；、学习三点测交的数据统计处理及分析方法；3 3、了解绘制遗传学图的原理和方法、了解绘制遗传学图的原理和方法 遗 传 学省 级 精 品 课 程二、实验材料二、实验材料二、实验材料二、实验材料黑腹果蝇黑腹果蝇(DrosophilaDrosophila melanogaste
2、rmelanogaster)品系：品系：野生野生型果蝇（型果蝇（+）：）：红眼、长翅、直刚毛红眼、长翅、直刚毛三隐性三隐性果蝇（果蝇（wmsnwmsn3 3）：白眼、小翅、焦刚毛）：白眼、小翅、焦刚毛 三隐性个体三隐性个体：白眼（白眼（w w）、小翅（）、小翅（m m）、焦刚毛（）、焦刚毛（snsn3 3），），这三个基因都位于这三个基因都位于X X染色体染色体上。上。遗 传 学省 级 精 品 课 程三、实验仪器设备、药品三、实验仪器设备、药品三、实验仪器设备、药品三、实验仪器设备、药品 体视显微镜、恒温培养箱、培养瓶、麻体视显微镜、恒温培养箱、培养瓶、麻醉瓶、毛笔、滤纸、培养皿等。醉瓶、毛笔
3、、滤纸、培养皿等。乙醚、玉米粉、琼脂、红塘、酵母粉、乙醚、玉米粉、琼脂、红塘、酵母粉、丙酸等。丙酸等。遗 传 学省 级 精 品 课 程n 位于同一条染色体上的基因是连锁的，而同源染色体上位于同一条染色体上的基因是连锁的，而同源染色体上的基因之间会发生一定频率的交换，使子代中出现一定数的基因之间会发生一定频率的交换，使子代中出现一定数量的重组型。量的重组型。n重组型出现的多少反映出基因间发生交换的频率的高低。重组型出现的多少反映出基因间发生交换的频率的高低。n而根据基因在染色体上直线排列的原理，基因交换频率的而根据基因在染色体上直线排列的原理，基因交换频率的高低与基因间的距离有一定的对应关系。高
4、低与基因间的距离有一定的对应关系。n基因图距就是通过基因间重组值的测定而得到的。基因图距就是通过基因间重组值的测定而得到的。n如果基因座位相距很近，重组率与交换率的值相等，直接如果基因座位相距很近，重组率与交换率的值相等，直接将重组值作为基因图距；如果基因间相距较远，两个基因将重组值作为基因图距；如果基因间相距较远，两个基因间往往发生两次以上的交换，必须进行校正，来求出基因间往往发生两次以上的交换，必须进行校正，来求出基因图距。图距。四、实验原理四、实验原理遗 传 学省 级 精 品 课 程三点测交：三点测交：用野生型纯合体与三隐性个体杂交，用野生型纯合体与三隐性个体杂交，获得三因子杂种（获得三
5、因子杂种（F1F1），再使），再使F1F1与三隐性基因与三隐性基因纯合体测交，通过对测交后（纯合体测交，通过对测交后（FtFt）代表现型及）代表现型及其数目的分析，分别计算三个连锁基因之间的其数目的分析，分别计算三个连锁基因之间的交换值，从而确定这三个基因在同一染色体上交换值，从而确定这三个基因在同一染色体上的的顺序和距离顺序和距离。通过一次三点测验可以同时确定三个连锁基通过一次三点测验可以同时确定三个连锁基因的位置，即相当于进行三次两点测验，而且因的位置，即相当于进行三次两点测验，而且能在试验中检测到所发生的双交换。能在试验中检测到所发生的双交换。四、实验原理四、实验原理遗 传 学省 级 精
6、 品 课 程四、实验原理四、实验原理如果两个基因间的单交换并不影响邻近两如果两个基因间的单交换并不影响邻近两个基因的单交换，那么预期的双交换频率应个基因的单交换，那么预期的双交换频率应当等于两个单交换频率的乘积，但当等于两个单交换频率的乘积，但实际实际上观上观察到的双交换值往往察到的双交换值往往低于预期低于预期值，因为每一值，因为每一次发生单交换，它邻近也发生一次交换的机次发生单交换，它邻近也发生一次交换的机会就减少，这叫会就减少，这叫干涉干涉。一般用。一般用并发率并发率表示干表示干涉的大小。涉的大小。并发率并发率 观察到的观察到的双交换频率双交换频率 两个单交换两个单交换频率的频率的乘积乘积
7、遗 传 学省 级 精 品 课 程+m snm sn3 3 w w m sn m sn3 3 w w m snm sn3 3 w wm snm sn3 3 w wm snm sn3 3 w w +（）（）m snm sn3 3 w w+m sn m sn3 3 w w+m sn m sn3 3 w w+m sn m sn3 3 w w m m +sn sn3 3 w w+m sn m sn3 3 w w m sn m sn3 3 +w w+sn sn3 3 +m sn m sn3 3 w w m m +w w+P P：F1F1：（测交）（测交）四、实验原理四、实验原理雄蝇产生两种配子雄蝇产生两种
8、配子 雌蝇雌蝇X X染色体上三对基因之间染色体上三对基因之间发生交换重组，产生发生交换重组，产生8 8种雌配子种雌配子遗 传 学省 级 精 品 课 程因为因为F1F1代雄蝇为三隐性个体，所以代雄蝇为三隐性个体，所以F1F1代雌代雌雄蝇自交时，即测交，雄蝇自交时，即测交，F2F2（FtFt）代可以得到）代可以得到8 8种表型。种表型。F2F2（FtFt）中亲组合最多，而发生双交换）中亲组合最多，而发生双交换的表现型个体数应最少。的表现型个体数应最少。四、实验原理四、实验原理遗 传 学省 级 精 品 课 程五、实验步骤五、实验步骤1 1、选处女蝇、选处女蝇：每组正、反交各：每组正、反交各1 1瓶，
9、在瓶，在8-12h8-12h内收集内收集处女蝇处女蝇5-65-6只，可提前只，可提前2-32-3天收集。天收集。2 2、杂交、杂交：将处女蝇、雄蝇各：将处女蝇、雄蝇各5-65-6只，麻醉、转移到新只，麻醉、转移到新的杂交瓶中，确保杂交瓶中各只果蝇完全苏醒，的杂交瓶中，确保杂交瓶中各只果蝇完全苏醒，没有死蝇。贴好标签，注明杂交组合、日期、姓没有死蝇。贴好标签，注明杂交组合、日期、姓名，于名，于2525培养；培养；3 3、释放亲本、释放亲本：7d7d后，处死杂交亲本（一定要干净）后，处死杂交亲本（一定要干净）。4 4、观察、观察F1F1：再过再过4-54-5天，天，F1F1成蝇出现，连续观察成蝇出
10、现，连续观察2323天，或在处死亲本天，或在处死亲本7 7天后，集中观察记录天后，集中观察记录F1F1表型。表型。要求每组至少统计要求每组至少统计250250只果蝇。只果蝇。遗 传 学省 级 精 品 课 程4 4、F1F1互交互交：选取：选取5-105-10对对F1F1果蝇，转入一新培养瓶果蝇，转入一新培养瓶（不需处女蝇，正交和反交（不需处女蝇，正交和反交F1F1不能混），贴好标签，不能混），贴好标签，于于2525培养。培养。5 5、释放亲本：、释放亲本：7d7d后，杀死后，杀死F1F1代亲本果蝇。代亲本果蝇。6 6、观察、观察F2F2：再过再过4-5d4-5d，F2F2成蝇出现，开始观察眼成
11、蝇出现，开始观察眼色，翅形及刚毛形态，同时记录色，翅形及刚毛形态，同时记录F2F2各种性状果蝇的各种性状果蝇的数目数目，连续统计，连续统计7-8d7-8d。注意：注意：（1 1）要求每组至少统计要求每组至少统计250250只果蝇。只果蝇。（2 2）如果做正交只需统计雄性个体。）如果做正交只需统计雄性个体。（3 3）统计过的果蝇放入酒精瓶中，杀死）统计过的果蝇放入酒精瓶中，杀死。五、实验步骤五、实验步骤遗 传 学省 级 精 品 课 程六、实验报告六、实验报告n1 1、将观察到的、将观察到的F2F2代（包括正交和反交）各表代（包括正交和反交）各表型个体数填入书本型个体数填入书本P17P17表表5-
12、15-1中，确定基因间重中，确定基因间重组发生的情况；组发生的情况；n2 2、计算基因间的重组值及双交换值；、计算基因间的重组值及双交换值；n3 3、根据计算结果画出遗传学图。注意用双交、根据计算结果画出遗传学图。注意用双交换值对位于两端的基因间距离进行校正；换值对位于两端的基因间距离进行校正；n4 4、计算并发系数和干涉值。、计算并发系数和干涉值。七、思考题七、思考题n正交组合正交组合F2F2统计为什么只需统计雄性个体？其统计为什么只需统计雄性个体？其雌性个体雌性个体F2F2代个体的表型如何？代个体的表型如何？遗 传 学省 级 精 品 课 程内容内容单因子单因子杂交杂交双因子双因子杂交杂交伴
13、性伴性遗传遗传三点三点测交测交杂交蝇杂交蝇处女蝇处女蝇雄蝇雄蝇处女蝇处女蝇雄蝇雄蝇处女蝇处女蝇雄蝇雄蝇处女蝇处女蝇雄蝇雄蝇正交（正交（2人）人）野生型（长翅）突变型（残翅）灰体残翅黑檀体长翅野生型(红眼)突变型(白小焦白小焦)突变型白小焦野生型反交（反交（2人）人）突变型（残翅）野生型（长翅）黑檀体长翅灰体残翅突变型(白小焦白小焦)野生型（红眼）野生型白小焦4个果蝇杂交实验选择的处女蝇（个果蝇杂交实验选择的处女蝇（4人人/组组110921/22班）班）收集处女蝇的种类收集处女蝇的种类：每个杂交至少：每个杂交至少5 5只雌蝇。只雌蝇。1.1.野生型野生型1515只，放只，放1 1个培养瓶；个培养
14、瓶；2.2.残翅残翅1010只，放入只，放入1 1个培养瓶；个培养瓶；3.3.黑檀体黑檀体5 5只，放只，放1 1个培养瓶；个培养瓶；4.4.白小焦白小焦5 5只，放只，放1 1个培养瓶。个培养瓶。5.5.白眼白眼5 5只，放只，放1 1个培养瓶。个培养瓶。收集雄蝇的种类收集雄蝇的种类：每个杂交至少：每个杂交至少5 5只雄蝇。只雄蝇。1.1.野生型野生型1515只，放只，放1 1个培养瓶；个培养瓶；2.2.残翅残翅1010只，放入只，放入1 1个培养瓶；个培养瓶；3.3.黑檀体黑檀体5 5只，放只，放1 1个培养瓶；个培养瓶；4.4.白小焦白小焦5 5只，放只，放1 1个培养瓶。个培养瓶。5.
15、5.白眼白眼5 5只，放只，放1 1个培养瓶。个培养瓶。遗 传 学省 级 精 品 课 程内容内容单因子单因子杂交杂交双因子双因子杂交杂交伴性伴性遗传遗传三点三点测交测交杂交蝇杂交蝇处女蝇处女蝇雄蝇雄蝇处女蝇处女蝇雄蝇雄蝇处女蝇处女蝇雄蝇雄蝇处女蝇处女蝇雄蝇雄蝇正交正交（2人）人）野生型（长翅）突变型（残翅）灰体残翅黑檀体长翅野生型（红眼）突变型（白眼）白小焦野生型反交反交（2人）人）突变型（残翅）野生型（长翅）黑檀体长翅灰体残翅突变型（白眼）野生型（红眼）野生型白小焦4个果蝇杂交实验选择的处女蝇（个果蝇杂交实验选择的处女蝇（4人人/组）组）收集处女蝇的种类收集处女蝇的种类：每个杂交至少：每个杂
16、交至少5 5只雌蝇。只雌蝇。1.1.野生型野生型1515只，放只，放1 1个培养瓶；个培养瓶；2.2.残翅残翅1010只，放入只，放入1 1个培养瓶；个培养瓶；3.3.黑檀体黑檀体5 5只，放只，放1 1个培养瓶；个培养瓶；4.4.白小焦白小焦5 5只，放只，放1 1个培养瓶。个培养瓶。5.5.白眼白眼5 5只，放只，放1 1个培养瓶。个培养瓶。收集雄蝇的种类收集雄蝇的种类：每个杂交至少：每个杂交至少5 5只雄蝇。只雄蝇。1.1.野生型野生型1515只，放只，放1 1个培养瓶；个培养瓶；2.2.残翅残翅1010只，放入只，放入1 1个培养瓶；个培养瓶；3.3.黑檀体黑檀体5 5只，放只，放1 1个培养瓶；个培养瓶；4.4.白小焦白小焦5 5只，放只，放1 1个培养瓶。个培养瓶。5.5.白眼白眼5 5只，放只，放1 1个培养瓶。个培养瓶。