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1、第二章 工业微生物菌种制备第一节 微生物菌种的选育第二节 菌种的培养第一节 微生物菌种的选育一、发酵工业菌种的要求二、常用的菌种二、常用的菌种三、菌种的选育三、菌种的选育四、菌种保藏四、菌种保藏一、发酵工业菌种的要求一、发酵工业菌种的要求(1)所需原料廉价。所需原料廉价。(2)培养条件易于控制。培养条件易于控制。(3)生长快,发酵周期短。生长快,发酵周期短。(4)满足代谢控制的要求。满足代谢控制的要求。一、发酵工业菌种的要求一、发酵工业菌种的要求(5)抗噬菌体和杂菌能力强。抗噬菌体和杂菌能力强。(6)菌种遗传稳定,不易退化。菌种遗传稳定,不易退化。(7)发酵中泡沫要少。发酵中泡沫要少。(8)菌
2、种安全。菌种安全。三、菌种的选育三、菌种的选育(一)菌种的分离(一)菌种的分离(二)(二)菌种的选育菌种的选育(一)菌种的分离(一)菌种的分离一是可以直接索取或购买。一是可以直接索取或购买。二是从大自然中分离筛选。二是从大自然中分离筛选。分离思路分离思路菌菌种种分分离离依依照照生生产产要要求求、菌菌种种的的特特性,采用各种筛选方法。性,采用各种筛选方法。快速、准确把需要菌种挑选出来。快速、准确把需要菌种挑选出来。实实验验室室或或生生产产用用菌菌种种若若不不慎慎污污染染了了杂菌,也必须进行分离纯化。杂菌,也必须进行分离纯化。新种分离与筛选的步骤新种分离与筛选的步骤定方案:查资料,菌种的特性。定方
3、案:查资料,菌种的特性。采样:针对性。采样:针对性。增殖:增殖培养,数量占优。增殖:增殖培养,数量占优。分离:利用分离技术得到纯种。分离:利用分离技术得到纯种。性能测定:菌种、发酵、提取等。性能测定:菌种、发酵、提取等。(二)(二)菌种的选育菌种的选育1、自然选育、自然选育 2、诱变育种、诱变育种3、杂交育种、杂交育种 4、原生质体融合、原生质体融合5、基因工程育种、基因工程育种1、自然选育、自然选育自然选育是最古老、最简便、应自然选育是最古老、最简便、应用广的选种方法。用广的选种方法。利用菌种自发突变选择优良菌。利用菌种自发突变选择优良菌。2、诱变育种、诱变育种目的:通过物理或化学等诱变目的
4、:通过物理或化学等诱变剂的处理,使诱变对象细胞内剂的处理,使诱变对象细胞内的遗传物质发生变化。的遗传物质发生变化。变异菌的筛选方法条件抗性突变型的筛选条件抗性突变型的筛选抗药性突变株的筛选抗药性突变株的筛选抗生素抗性变异株的筛选抗生素抗性变异株的筛选营养缺陷型的筛选营养缺陷型的筛选3、杂交育种、杂交育种原核微生物:接合、转化、转导原核微生物:接合、转化、转导真核微生物:有性生殖、准性生殖真核微生物:有性生殖、准性生殖四、菌种保藏四、菌种保藏1.菌种退化菌种退化 2.菌种复壮菌种复壮 3.菌种保藏菌种保藏1、菌种退化、菌种退化表现:发酵力或繁殖力表现:发酵力或繁殖力(如孢子如孢子的产生的产生)下
5、降,发酵产品的得率下降,发酵产品的得率降低等。降低等。退化的原因退化的原因I.菌种保藏不当。菌种保藏不当。II.菌种生长的要求没有得到满足,菌种生长的要求没有得到满足,或是遇到某些不利条件,或是或是遇到某些不利条件,或是失去某些需要的条件。失去某些需要的条件。III.经诱变得来的新菌株发生回复经诱变得来的新菌株发生回复突变,从而丧失新的特性的情突变,从而丧失新的特性的情况。况。退化的原因退化的原因基因方面:突变、连续传代等基因方面:突变、连续传代等环境方面:温度、湿度、培养环境方面:温度、湿度、培养条件等。条件等。防止退化措施防止退化措施控制传代次数控制传代次数选择合适的培养条件选择合适的培养
6、条件利用不同类型细胞进行传代利用不同类型细胞进行传代选择合适的菌种保藏方法选择合适的菌种保藏方法2、菌种复壮、菌种复壮单细胞分离纯化。单细胞分离纯化。通过诱变再筛选。通过诱变再筛选。改变培养条件等。改变培养条件等。3、菌种保藏、菌种保藏将将菌菌种种处处于于低低温温、干干燥燥、无无氧氧和和缺缺乏乏营营养养的的条条件件下下,可可以以使使菌种暂时处于休眠状态。菌种暂时处于休眠状态。3、菌种保藏方法、菌种保藏方法斜面低温保藏法液体石蜡保藏法液体石蜡保藏法砂土管保藏法砂土管保藏法冷冻干燥保藏法冷冻干燥保藏法超低温冷冻藏法超低温冷冻藏法第二节第二节 菌种的培养菌种的培养种子条件:种子条件:菌量适宜菌量适宜
7、 菌龄适宜菌龄适宜性能稳定性能稳定 无杂污染无杂污染菌种制备任务菌种制备任务第二节第二节 菌种的培养菌种的培养1种子制备过程种子制备过程2发酵工业种子培养发酵工业种子培养3影响种子的因素影响种子的因素一一 种子制备过程种子制备过程1.实验室种子培养实验室种子培养2.生产车间种子培养生产车间种子培养1 实验室种子培养实验室种子培养斜面菌种保藏斜面菌种保藏固体扩大培养:茄子瓶、培养皿等固体扩大培养:茄子瓶、培养皿等摇瓶培养摇瓶培养2 生产车间种子培养生产车间种子培养种子罐种子罐接种接种种子罐级数种子罐级数种龄和接种量种龄和接种量二二 发酵种子培养方法发酵种子培养方法1.表面培养表面培养2.固体培养固体培养3.载体培养载体培养4.液体深层培养液体深层培养3影响种子的因素影响种子的因素(1)培养基培养基 (2)种龄与接种种龄与接种量量(3)温度温度 (4)pH值值(5)通风搅拌通风搅拌 (6)泡沫泡沫(7)染菌控制染菌控制 (8)种子罐级数种子罐级数第二章第二章 工业微生物菌种制备工业微生物菌种制备A第一节第一节 微生物菌种的选育微生物菌种的选育A第二节第二节 菌种的培养菌种的培养l第三节第三节 种子培养基及制备种子培养基及制备 (自学)(自学)