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1、会计学1三液相色谱应用技术三液相色谱应用技术 液相色谱应用技术液相色谱应用技术 戴安中国有限公司戴安中国有限公司 第1页/共96页3 提纲提纲:1.HPLC的广泛应用2.色谱柱子的选择性和应用3.色谱柱的使用和维护保养4.液相色谱仪系统清洗第2页/共96页4一一.HPLC的广泛应用的广泛应用 据据2004年统计，世界上化合物总数年统计，世界上化合物总数多达多达4700多万种多万种在全部有机化合物中仅有在全部有机化合物中仅有20左右的左右的样品适用于样品适用于GC分析分析而而HPLC可对可对80左右的有机化合物左右的有机化合物进行分离和分析进行分离和分析第3页/共96页5HPLC的广泛应用的广泛
2、应用 HPLC特别适用于高沸点、大分子、强极特别适用于高沸点、大分子、强极性和热稳定性差的化合物以及生物活性物性和热稳定性差的化合物以及生物活性物质的分离和分析并且可以做制备质的分离和分析并且可以做制备 在医药、食品、农业、生命科学、化工、在医药、食品、农业、生命科学、化工、环保等领域都有着广泛的应用潜力。环保等领域都有着广泛的应用潜力。第4页/共96页6HPLC的应用领域的应用领域在食品研究中的分析应用在食品研究中的分析应用食品中的天然成分食品中的天然成分类脂化合物、甘油三酸酯、胆固醇类脂化合物、甘油三酸酯、胆固醇碳水化合物碳水化合物脂肪酸和有机酸脂肪酸和有机酸蛋白、肽、氨基酸蛋白、肽、氨基
3、酸食品添加剂食品添加剂酸味剂、甜味剂、香精、乳化剂酸味剂、甜味剂、香精、乳化剂抗氧化剂、防腐剂抗氧化剂、防腐剂色素色素维生素维生素污染物污染物霉菌（黄曲霉毒素霉菌（黄曲霉毒素农药农药残留残留和和兽药残留兽药残留多环芳烃（多环芳烃（PAHS和亚硝酸和亚硝酸第5页/共96页7HPLC的应用领域的应用领域 在医药研究中分析应用 药物分析有USP、BP、CP等标准 常用药物研究中的应用：解热镇痛药、镇静药、安定药、心常用药物研究中的应用：解热镇痛药、镇静药、安定药、心常用药物研究中的应用：解热镇痛药、镇静药、安定药、心常用药物研究中的应用：解热镇痛药、镇静药、安定药、心血管药、磺胺类消炎药等。血管药、
4、磺胺类消炎药等。血管药、磺胺类消炎药等。血管药、磺胺类消炎药等。甾体药物研究中的应用：肾上腺皮质激素、雄性激素、雌性甾体药物研究中的应用：肾上腺皮质激素、雄性激素、雌性甾体药物研究中的应用：肾上腺皮质激素、雄性激素、雌性甾体药物研究中的应用：肾上腺皮质激素、雄性激素、雌性激素和孕激素等。激素和孕激素等。激素和孕激素等。激素和孕激素等。抗菌素类药物研究中的应用：青霉素、头孢菌素、庆大毒素、抗菌素类药物研究中的应用：青霉素、头孢菌素、庆大毒素、抗菌素类药物研究中的应用：青霉素、头孢菌素、庆大毒素、抗菌素类药物研究中的应用：青霉素、头孢菌素、庆大毒素、四环素、氯霉素、诺氟沙星等。四环素、氯霉素、诺氟
5、沙星等。四环素、氯霉素、诺氟沙星等。四环素、氯霉素、诺氟沙星等。中草药研究中的应用：生物碱、甙类中草药研究中的应用：生物碱、甙类中草药研究中的应用：生物碱、甙类中草药研究中的应用：生物碱、甙类(皂甙、强心甙、黄酮皂甙、强心甙、黄酮皂甙、强心甙、黄酮皂甙、强心甙、黄酮甙等甙等甙等甙等)、萜类、萜类、萜类、萜类手性药物手性药物手性药物手性药物研究中的应用：光学异构体的拆分研究中的应用：光学异构体的拆分研究中的应用：光学异构体的拆分研究中的应用：光学异构体的拆分(如解毒剂如解毒剂如解毒剂如解毒剂D-D-青青青青霉胺毒性小，霉胺毒性小，霉胺毒性小，霉胺毒性小，L-L-异构体毒性很强异构体毒性很强异构体
6、毒性很强异构体毒性很强)医疗药物的检测、新药研究、药物代谢、药代动力学研究。医疗药物的检测、新药研究、药物代谢、药代动力学研究。医疗药物的检测、新药研究、药物代谢、药代动力学研究。医疗药物的检测、新药研究、药物代谢、药代动力学研究。vv 在兽药研究中分析应用在兽药研究中分析应用在兽药研究中分析应用在兽药研究中分析应用第6页/共96页8HPLC的应用领域的应用领域 在生物化学和生物工程中的应用在生物化学和生物工程中的应用氨基酸、多肽合成和蛋白质的分析研究氨基酸、多肽合成和蛋白质的分析研究核碱、核苷、核苷酸和核酸的分析研究核碱、核苷、核苷酸和核酸的分析研究生物胺的分析研究（儿茶酚胺类生物胺的分析研
7、究（儿茶酚胺类)在精细化工分析中的应用在精细化工分析中的应用醇、醛和酮、醚的分离分析醇、醛和酮、醚的分离分析酸和酯的分离分析酸和酯的分离分析表面活性剂的分析表面活性剂的分析聚合物的分析研究聚合物的分析研究药物、农药、染料、炸药等工业产品药物、农药、染料、炸药等工业产品第7页/共96页9HPLC的应用领域的应用领域化妆品行业要控制和分析：化妆品行业要控制和分析：防腐剂、防晒剂、性激素以及维生素等；防腐剂、防晒剂、性激素以及维生素等；在公安、刑警破案工作需要在公安、刑警破案工作需要 投毒药物、毒品分析等投毒药物、毒品分析等在环境污染分析中的应用在环境污染分析中的应用废气、废水、废渣中多环芳烃、多氯
8、联苯、农药残留废气、废水、废渣中多环芳烃、多氯联苯、农药残留、酚类、胺类和二恶瑛的检测酚类、胺类和二恶瑛的检测 在无机离子分析中应用在无机离子分析中应用饮用水、酸雨、土壤中阴离子和阳离子分析饮用水、酸雨、土壤中阴离子和阳离子分析 第8页/共96页10二二.色谱柱的选择和应用色谱柱的选择和应用非极性或极性较小的样品可用一般的非极性或极性较小的样品可用一般的C18C18柱柱酸碱性的化合物建议选用填料经封尾钝化过的酸碱性的化合物建议选用填料经封尾钝化过的C18C18柱，柱，PHPH范围范围2-92-9（1212）强极性化合物一般采用离子交换柱强极性化合物一般采用离子交换柱糖类，氨基酸，有机酸，多环芳
9、烃，糖类，氨基酸，有机酸，多环芳烃，GPCGPC有专用柱有专用柱正相柱正相柱-硅胶柱硅胶柱,-CN,-CN氰基柱氰基柱,-NH2,-NH2氨基柱氨基柱戴安新型柱：戴安新型柱：PA,PAPA,PA II II,WAX,WCX,LILIC_1,Trinity,WAX,WCX,LILIC_1,Trinity第9页/共96页12键合相色谱柱键合相色谱柱以硅胶为基质，通过化学键合方式把碳十八、碳八、胺基等基团联在基质上以硅胶为基质，通过化学键合方式把碳十八、碳八、胺基等基团联在基质上作为固定相。这种固定相要占所有柱填料的作为固定相。这种固定相要占所有柱填料的70-80%70-80%优点优点固定相稳定，不
10、易流失固定相稳定，不易流失应用广泛，可使用多种溶剂应用广泛，可使用多种溶剂消除硅羟基的不良影响消除硅羟基的不良影响缺点缺点pHpH值不能小于值不能小于2 2或大于或大于8 8同样填料，各种牌号色谱柱不尽相同同样填料，各种牌号色谱柱不尽相同第11页/共96页130.02.55.07.510.012.515.017.520.0-10.00.010.020.030.040.050.0RI_1RIUmin2112354678HPLC测定糖测定糖正相氨基柱正相氨基柱,示差检测示差检测Analytical column:Ultimate XB-NH2,4.6*250 mm*5 m at 30 oC Mob
11、ile Phase:ACN/H2O(V/V，65/35)Flow:1.0 mL/min Detection:RI at 30 oC Peaks:Conc.(mg/mL)1:木糖 2.0 2:果糖 2.0 3:葡萄糖 2.0 4:蔗糖 2.0 5:麦芽糖 2.0 6:乳糖 2.0 7:麦芽三糖 2.0 8:麦芽四糖 2.0 Re-mix the mobile phases can ensure the flat baseline!第12页/共96页14HILICHILIC柱与柱与柱与柱与CADCAD检测器分析糖类化合物检测器分析糖类化合物检测器分析糖类化合物检测器分析糖类化合物14LC：Ulti
12、mate 3000 column:HILIC 5um 4.6x250mmFlow:1.0 mL/minDetection:CAD ultra 30CMP:ACN :H2O=70:30核糖半乳糖第13页/共96页15样品：1.门东氨酸(Asp)2.丝氨酸(Ser)3.谷氨酸(Glu)4.甘氨酸(Gly)5.组氨酸(His)6.氨(NH3)7.精氨酸(Arg)8.苏氨酸(Thr)9.丙氨酸(Ala)10.脯氨酸(Pro)11.光氨酸(Cys)12.酪氨酸(Tyr)13.缬氨酸(Val)14.蛋氨酸(Met)15.赖氨酸(Lys)16.异亮氨酸(ILeu)17亮氨酸(Leu)18.苯丙氨酸(Phe)
13、分析条件：DIONEX-U-3000 HPLC样品：:20ul 戴安戴安C18柱应用柱应用-17种氨基酸分析种氨基酸分析样品：1.门东氨酸(Asp)2.丝氨酸(Ser)3.谷氨酸(Glu)4.甘氨酸(Gly)5.组氨酸(His)6.氨(NH3)7.精氨酸(Arg)8.苏氨酸(Thr)9.丙氨酸(Ala)10.脯氨酸(Pro)11.光氨酸(Cys)12.酪氨酸(Tyr)13.缬氨酸(Val)14.蛋氨酸(Met)15.赖氨酸(Lys)16.异亮氨酸(ILeu)17亮氨酸(Leu)18.苯丙氨酸(Phe)第14页/共96页17戴安戴安戴安戴安C18C18柱应用柱应用柱应用柱应用9 9种防腐剂同时分
14、析种防腐剂同时分析种防腐剂同时分析种防腐剂同时分析 Peaks:1.溴硝醇2.苯甲醇3.对羟基苯甲酸甲酯4.苯甲酸5.对羟基苯甲酸乙酯6.对羟基苯甲酸异丙酯7.对羟基苯甲酸丙酯8.对羟基苯甲酸异丁酯9.对羟基苯甲酸丁酯 Column:Acclaim C18,5 m,4.6 x 250 mmMPA:MeOHMPB:ACNMPC:50 mM KH2PO4,pH 3.5Temperature:30 CFlow Rate:1.1 mL/minInj.Volume:10 LDetection:UV,254nmMethod:A:B:C=40:15:45mAU0.05.010.015.020.025.0-5
15、.020.040.0min213456789第16页/共96页18饮料中防腐剂分析饮料中防腐剂分析饮料中防腐剂分析饮料中防腐剂分析戴安戴安戴安戴安Acclaim C18Acclaim C18柱柱柱柱-250*4.6*5u 1ml/min(90/10-250*4.6*5u 1ml/min(90/10缓冲盐和甲醇缓冲盐和甲醇缓冲盐和甲醇缓冲盐和甲醇)第17页/共96页19饮料中防腐剂分析饮料中防腐剂分析饮料中防腐剂分析饮料中防腐剂分析ZorbaxC18-150*3.0*5u,0,5ml/min ZorbaxC18-150*3.0*5u,0,5ml/min(93/7(93/7缓冲盐和甲醇缓冲盐和甲醇
16、缓冲盐和甲醇缓冲盐和甲醇)第18页/共96页2013种防晒剂的测定种防晒剂的测定200.05.010.015.020.025.030.035.040.0-20100200300400500mAUmin123456789101112131.苯基苯丙咪唑磺酸2.二苯酮-4/二苯酮-53.二苯酮-34.p-甲氧基肉桂酸异戊酯5.甲基苄亚基樟脑6.PABA*乙基己酯（*对氨基苯甲酸）7.奥克立林8.p-甲氧基肉桂酸乙基己酯9.水杨酸乙基己酯10.胡莫柳酯11.乙基己基三嗪酮12.亚甲基双-苯并三唑基四甲基丁基13.双-乙基己氧苯酚甲氧苯基三嗪Column:Acclaim C18,5 m,4.6 x 2
17、50 mmMPA:MeOHMPB:THFMPC:Water(每300ml水中含0.2ml 高氯酸)Temperature:30 CFlow Rate:1.0 mL/minInj.Volume:10 LDetection:UV,311nmTime(min)B%C%0 45 30 13.0 45 30 20.0 53 15 27.0 50 10 40.0 50 10第19页/共96页21色谱条件:戴安公司Summit HPLC,荧光检测器+Pickering Labs公司的柱后衍生仪荧光检测:EX330nm,EM465nm流动相:水/乙腈梯度洗脱,0.8ml/min柱子:C18柱衍生试剂流速:0.
18、3ml/min反应器1:温度100 CC,0.5ml/min反应器2:环境温度,0.1ml/min氨基甲酸酯杀虫剂柱后衍生荧光检测氨基甲酸酯杀虫剂柱后衍生荧光检测第20页/共96页22Peak No.Name 1 VB1 2 VC 3 VB3 4 VB6 5 泛酸钙泛酸钙 6 VB12 7 叶酸叶酸 8 VB2 9 生物素生物素 10 VK3 11 VA 12 VE 13 VD2 14 VD3u 超高柱性能超高柱性能:14种水溶性和脂溶性维生素同时分离，可完全兼容种水溶性和脂溶性维生素同时分离，可完全兼容100%水相和水相和 100%有机相有机相u 超高仪器性能超高仪器性能:一次分析过程中可同
19、时改变流动相比例，流速和检测波长一次分析过程中可同时改变流动相比例，流速和检测波长0.05.010.015.020.025.030.0-20255075100125160VB1,2,3,5,6,12,bio,fol,VC,VA,VD2,VD3,VE,VK3UV_VIS_1mAUmin1234567891011121314WVL:250 nmWvl=280,AzWvl=210,AzWvl=360,AzWvl=270,AzWvl=210,AzWvl=325,AzWvl=295,AzWvl=264,AzFlow:1.000 ml/min2.000ACN:0.0%46.0100.00.025%TFA
20、in H2O:100.0%54.00.0MeOH:0.0%戴安戴安PA2（C18）柱应用）柱应用第21页/共96页23230.05.010.015.020.025.030.035.0-2050100150200250300mAUmin12344种雌性激素的测定种雌性激素的测定1.雌三醇2.雌酮3.雌二醇4.己烯雌酚Column:Acclaim PA II,3 m,2.1 x 150 mmMPA:MeOHMPB:WaterTemperature:30 CFlow Rate:0.3 mL/minInj.Volume:1 LDetection:UV,204nmIsocratic:A:B =60:40
21、第22页/共96页24戴安戴安PA柱应用柱应用第23页/共96页2525戴安公司戴安公司戴安公司戴安公司 Acclaim Acclaim 系列色谱柱及其研发历史系列色谱柱及其研发历史系列色谱柱及其研发历史系列色谱柱及其研发历史除了完善常规反相色谱柱外；近年的除了完善常规反相色谱柱外；近年的主要的研发精力放在了混合基质主要的研发精力放在了混合基质的色谱柱上的色谱柱上使用混合基质色谱柱益处使用混合基质色谱柱益处不同类型物质同时分离不同类型物质同时分离不同类型物质同时分离不同类型物质同时分离可调整选择性可调整选择性可调整选择性可调整选择性简化流动相简化流动相简化流动相简化流动相Acclaim Pol
22、arAdvantage(PA)Acclaim 300 C18 Acclaim 120 C18Acclaim 120 C82000 Acclaim SurfactantAcclaim PolarAdvantage II(PA2)Acclaim Organic Acid(OA)Acclaim Explosives E1Acclaim Explosives E2Acclaim Mixed-Mode HILIC (HPLC2007)Acclaim Mixed-Mode WAX (PittCon2007)(HPLC2003)(HPLC2002)(PittCon2001)(PittCon2005)(Pit
23、tCon2004)(PittCon2006)20012002200320042005200620072008Acclaim 2.2 m RSLC (HPLC2008)Acclaim Mixed-Mode WCX (PittCon2008)20092010We started here Acclaim Trinity P1 (PittCon2009)More Acclaim 2.2 m RSLC第24页/共96页26小分子分析面临的挑战小分子分析面临的挑战RP RP 柱柱 (如如C18)C18)用途最广泛用途最广泛,但：但：存在二级作用。在中性淋洗液条件下，碱性化合物存在二级作用。在中性淋洗液条
24、件下，碱性化合物存在二级作用。在中性淋洗液条件下，碱性化合物存在二级作用。在中性淋洗液条件下，碱性化合物拖尾拖尾拖尾拖尾对高极性（亲水性）化合物保留很弱对高极性（亲水性）化合物保留很弱对高极性（亲水性）化合物保留很弱对高极性（亲水性）化合物保留很弱选择性有限选择性有限选择性有限选择性有限RPRP柱柱+离子对试剂离子对试剂 分离亲水性带电化合物分离亲水性带电化合物平衡时间长平衡时间长平衡时间长平衡时间长使用专用柱使用专用柱使用专用柱使用专用柱流动相复杂流动相复杂流动相复杂流动相复杂 (MS(MS 不兼容不兼容不兼容不兼容)IEX IEX 柱柱-分离带电化合物分离带电化合物疏水性差，限制了使用疏水
25、性差，限制了使用疏水性差，限制了使用疏水性差，限制了使用HILIC/NPHILIC/NP柱柱-分离高度亲水的化合物分离高度亲水的化合物疏水性差，限制了使用疏水性差，限制了使用疏水性差，限制了使用疏水性差，限制了使用第25页/共96页27混合模式固定相混合模式固定相定义定义疏水性相互作用疏水性相互作用疏水性相互作用疏水性相互作用 +离子交换作用离子交换作用离子交换作用离子交换作用类型类型WAX/RP,SAX/RPWAX/RP,SAX/RPWCX/RP,SCX/RPWCX/RP,SCX/RP两性离子两性离子两性离子两性离子/RP,/RP,两性两性两性两性/RP/RP优势优势选择性可调节选择性可调节
26、选择性可调节选择性可调节流动相组成简单流动相组成简单流动相组成简单流动相组成简单可同时分离不同类型的化合物可同时分离不同类型的化合物可同时分离不同类型的化合物可同时分离不同类型的化合物第26页/共96页28各种不同的混合基质制作方式各种不同的混合基质制作方式第27页/共96页29戴安特色混合基质色谱柱戴安特色混合基质色谱柱WAX-1WCX-1HILIC-1Trinity P1硅胶颗粒涂布硅胶颗粒涂布 Nano-polymer 微球微球孔内部：孔内部：RP/WAX外表面：外表面：SCX第28页/共96页30特征:选择性可调节选择性可调节分离阴离子化合物具有理想的分离阴离子化合物具有理想的选择性选
27、择性选择性是选择性是RPRP柱的补充柱的补充多种模式分离机理：反相、阴多种模式分离机理：反相、阴离子交换、阳离子排斥和离子交换、阳离子排斥和HILICHILIC硅胶：高纯、多孔、球形硅胶：高纯、多孔、球形颗粒大小：颗粒大小：5 m表面积：表面积：300 m2/g孔径大小：孔径大小：120 WAX/RP 混合模式色谱柱混合模式色谱柱第29页/共96页31Column:Acclaim Mixed-Mode WAX-1,5 mDimension:150 x4.6 mmMobile Phase:50/50 v/v acetonitrile/phosphate bufferTemperature:30
28、CFlow Rate:1 mL/minInj.Volume:2 LDetection:UV(210 nm)Peaks:1.Butylbenzene(0.1 mg/mL)2.4-Hydroxybenzoic acid(0.5 mg/mL)Butylbenzene4-Hydroxybenzoic acid通过离子强度调节选通过离子强度调节选择性择性07.515MinutesAU1212100 mM Phosphate buffer,pH 620 mM Phosphate buffer,pH 623773CO2HOH第30页/共96页32Column:Acclaim Mixed-Mode WAX-1
29、,5 mDimension:150 x4.6 mmMobile Phase:50/50 v/v acetonitrile/20 mM phosphate bufferTemperature:30 CFlow Rate:1 mL/minInj.Volume:2 LDetection:UV(210 nm)Peaks:1.Butylbenzene(0.1 mg/mL)2.4-Hydroxybenzoic acid(0.5 mg/mL)2121pH 2.6pH 6.0通过通过pH调节选择性调节选择性07.515MinutesAUButylbenzene4-Hydroxybenzoic acid2377
30、4CO2HOH第31页/共96页3350%Acetonitrile1212通过通过有机溶剂含量有机溶剂含量调节调节选择性选择性Column:Acclaim Mixed-Mode WAX-1,5 mDimension:150 x4.6 mmMobile Phase:Acetonitrile/20 mM phosphate buffer,pH6Temperature:30 CFlow Rate:1 mL/minInj.Volume:2 LDetection:UV(210 nm)Peaks:1.Butylbenzene(0.1 mg/mL)2.4-Hydroxybenzoic acid(0.5 mg
31、/mL)01020MinutesAUButylbenzene4-Hydroxybenzoic acidCO2HOH2377545%Acetonitrile第32页/共96页36WAX-1WAX-1同时分离酸性、碱性和中性同时分离酸性、碱性和中性同时分离酸性、碱性和中性同时分离酸性、碱性和中性化合物化合物化合物化合物第35页/共96页37Mobile Phase:50/50 v/v acetonitrile/50 mM phosphate buffer,pH 2.8 for Acclaim Mixed-Mode WAX-120/80 v/v acetonitrile/50 mM phosphat
32、e buffer,pH 2.8 for Acclaim 120 C18 columnTemperature:30 CFlow Rate:1 mL/minInj.Volume:2 LDetection:UV(220 nm)01020MinutesAUAcclaim Mixed-Mode WAX-1(5 m,150 x4.6 mm)C18 RP Column(5 m,150 x4.6 mm)213213CO2HCO2HCO2HCO2HCO2HCO2H选择性与选择性与RP柱呈正交关系柱呈正交关系WAX弱阴离子交换色谱柱选择性与弱阴离子交换色谱柱选择性与RP柱呈正交关系柱呈正交关系 WAX-1第36页
33、/共96页38戴安戴安WCX-1柱应用柱应用与与WAX柱出峰顺序相反，柱出峰顺序相反，阴离子先出峰，再出中性化阴离子先出峰，再出中性化合物，阳离子最后出峰合物，阳离子最后出峰第37页/共96页3939Column:Acclaim Mixed-Mode HILIC-1,5 mDimensions:150 x4.6 mmMobile Phase:CH3CN/0.1 NH4OAc,pH5.2Temperature:30 CFlow Rate:1 mL/minInj.Volume:10 LDetection:UV 254 nmPeaks:(100 ppm each)1.Cytosine（胞嘧啶）2.N
34、aphthalene（萘）0486210MinutesAUCH3CN/0.1 M NH4OAc,pH5.2 v/v 92/8CH3CN/0.1 M NH4OAc,pH5.2 v/v 52/48Reversed-Phase ModeHILIC Mode2112戴安混合模式戴安混合模式戴安混合模式戴安混合模式 HILICHILIC1 1柱的应用柱的应用柱的应用柱的应用RP 模式及模式及 HILIC 模式模式 Silica GelOHOHOHOHOHOHOHOHOHOH第38页/共96页4141Acclaim Trinity P1 Acclaim Trinity P1 色谱柱化学色谱柱化学色谱柱化学
35、色谱柱化学 高纯、球型、多孔硅胶结构Nano-polymer Silica Hybrid(NSH)技术硅胶颗粒涂布硅胶颗粒涂布 Nano-polymer 微球微球孔内部：孔内部：RP/WAX外表面：外表面：SCX第40页/共96页4242Column:Acclaim Trinity P1,3 mDimensions:3.0 x 50 mmMobile Phase:75/25 v/v CH3CN/30 mM(total)NH4OAc,pH 5.2Temperature:30 CFlow Rate:0.5 mL/minInj.Volume:2.5 LDetection:UV,254 nm,and
36、ELS detector in seriesSample:Na,Naproxen(0.5 mg/mL in mobile phase)ONa全新混合基质色谱柱全新混合基质色谱柱全新混合基质色谱柱全新混合基质色谱柱 AcclaimAcclaim Trinity P1 Trinity P1UV,254 nmCADNaNaproxenNaproxen；萘普生；萘普生；萘普生；萘普生Naproxent01001100 pA101234510010002Absorbance mAURetention Time min2第41页/共96页4343Acclaim Trinity P1 Acclaim Tri
37、nity P1 柱柱柱柱1616种药物反离子的同时分析种药物反离子的同时分析种药物反离子的同时分析种药物反离子的同时分析43Column:Acclaim Trinity P1,3 mDimensions:3.0 x 50 mmMobile Phase:A-CH3CN,B-D.I.H2O,C 0.2 M NH4OAc,pH4Gradient:Time(min)-100 2715A6060601010B35353500C5559090Temperature:30 CFlow Rate:0.5 mL/minInj.Volume:2 LDetection:Corona ultra(Gain=100 p
38、A;Filter=med;Neb Temp=30 C)Peaks:(50 to 100 ppm)1.普鲁卡因普鲁卡因2.胆碱胆碱3.氨丁三醇氨丁三醇4.Na5.K6.葡甲胺葡甲胺7.甲磺酸甲磺酸8.马来酸马来酸 9.Cl10.Br11.Iodide12.PO313.苹果酸苹果酸14.酒石酸酒石酸15.柠檬酸柠檬酸16.SO406129315Minutes12345678910111213141516mV0400-大致出峰顺序为阳离子先出峰，再出中性化合物，阴离子最后出峰大致出峰顺序为阳离子先出峰，再出中性化合物，阴离子最后出峰第42页/共96页44戴安专用色谱柱戴安专用色谱柱有机酸分析专用柱
39、Acclaim OA爆炸物分析专用柱 Acclaim E1&E2表面活性剂专用柱 Acclaim Surfactant第43页/共96页45有机酸分析有机酸分析OOHOHO1.Oxalic acid草酸HOOOHOOHOH2.Tartaric acid酒石酸OHOH3.Formic acid甲酸HOOOHOOH4.Malic acid苹果酸OHOOHOHOHOO5.iso-Citric acid异柠檬酸OHOHH3CO6.Lactic acid乳酸H3COHO7.Acetic acid乙酸HOHOOOHOOOH8.Citric acid柠檬酸HOOOOH9.Succinic acid琥珀酸HO
40、OOOH10.Fumaric acid富马酸HOOOOOH OH11.cis-Aconitic acid顺乌头酸OOOOHOH OH12.trans-Aconitic acid反乌头酸第44页/共96页46Column:Acclaim Organic Acid(OA),5 mDimensions:4.0 x 250 mmMobile Phase:100 mM Na2SO4,pH 2.65(adjusted with methanesulfonic acid)Temperature:30 CFlow Rate:0.6 mL/minInj.Volume:5 LDetection:UV,210 nm
41、Peaks:1.草酸 15 ppm2.酒石酸1203.甲酸1804 苹果酸 1205.异柠檬酸1206.乳酸1807.乙酸1208.柠檬酸1209.琥珀酸12010.富马酸711.顺乌头酸 12.反乌头酸 *7 ppm total for cis and trans isomers0.025051015123 456789101112AUMinutes020011Acclaim OA柱分离柱分离12种有机酸种有机酸第45页/共96页0.0250.0250 05 5101015151 12 23 3 4 45 56 67 78 89 9101011111212AUAUMinutesMinutes
42、0 01234697 8Peaks:1.Oxalic acid2.Tartaric acid3.Formic acid4.Malic acid5.iso-Citric acid6.Lactic acid7.Acetic acid8.Citric acid9.Succinic acid10.Fumaric acid 11.cis-Aconitic acid*12.trans-Aconitic acid*13.Propionic acid10111213t0t0C18柱柱OA柱柱Acclaim C18 and OA柱分离柱分离13种有机酸种有机酸 比较比较第46页/共96页49Peaks:1.HM
43、X2.RDX3.1,3,5-Trinitrobenzene4.1,3-Dinitrobenzene5.Nitrobenzene6.Tetryl7.2,4,6-Trinitrotoluene8.4-Amino-2,6-Dinitrotoluene9.2-Amino-4,6-Dinitrotoluene10.2,6-Dinitrotoluene11.2,4-Dinitrotoluene12.2-Nitrotoluene13.4-Nitrotoluene14.3-NitrotolueneColumn:5 m,4.6 x 250 mmMobile Phase:MeOH/H2OTemperature:3
44、0 CFlow Rate:1 mL/minInj.Volume:5 LDetection:UV,254 nm22787MinutesAU01836279451214341011912135786Acclaim Explosives E11214341011912135786Acclaim Explosives E2Peaks:1.HMX2.RDX3.1,3,5-Trinitrobenzene4.1,3-Dinitrobenzene5.Nitrobenzene6.Tetryl7.2,4,6-Trinitrotoluene8.4-Amino-2,6-Dinitrotoluene9.2-Amino-
45、4,6-Dinitrotoluene10.2,6-Dinitrotoluene11.2,4-Dinitrotoluene12.2-Nitrotoluene13.4-Nitrotoluene14.3-NitrotolueneColumn:5 m,4.6 x 250 mmMobile Phase:MeOH/H2OTemperature:30 CFlow Rate:1 mL/minInj.Volume:5 LDetection:UV,254 nm美国美国 EPA 8330规定的规定的14种种爆炸物检测爆炸物检测第48页/共96页50Triton X-100n 10C8H17(OCH2CH2)nOH
46、Sodium Xylene SulfonateCH3SO3NaCH3C(CH2)mHCH3SO3Na(CH2)nCH3Sodium Dodecylbenzene Sulfonate(LAS)m+n=10Lauryldimethylbenzyl Ammonium ChlorideLaurylpyridinium ChlorideO-S-O NaOOSodium Dodecyl Sulfate(SDS)Sodium Decyl SulfateO-S-O NaOOCH3CH3CH2N+-ClNOOMeMe+-NCl-+Cetyl Betaine22792各种类型表面活性剂分析各种类型表面活性剂分析第
47、49页/共96页51Column:Acclaim Surfactant,5 mDimensions:4.6 x 150 mmMobile Phase:(A)ACN,(B)0.1 M NH4OAc,pH 5.4Gradient:25%to 85%A in 25 min,then hold 85%A for 10 minTemperature:30 CFlow Rate:1 mL/minInj.Volume:25 LDetection:ELS detectorPeaks:1.Chloride2.Bromide3.Nitrate4.Xylene sulfonate5.Laurylpyridinium
48、 chloride6.Lauryldimethylbenzyl-ammonium chloride7.Triton X-1008.Cetyl betaine9.Decyl sulfate10.Dodecyl sulfate11.C10-LAS12.C11-LAS13.C12-LAS14.C13-LASmV05101520253035Minutes123456710981112131422793各种类型表面活性剂分析各种类型表面活性剂分析第50页/共96页52三三.色谱柱的使用及维护保养色谱柱的使用及维护保养流动相的转换特别是特别是特别是特别是GPCGPCGPCGPC柱柱柱柱流速(压力)的变化幅
49、度温度的变化幅度专用色谱柱样品及溶剂的要求第51页/共96页53良好的色谱实验习惯良好的色谱实验习惯拿到一根新色谱柱时，先测柱效保留在新色谱柱上测得的色谱图，并记录条件定期检测柱效第52页/共96页54色谱柱的保养（一）色谱柱的保养（一）样品方面样品过滤样品过滤样品过滤样品过滤-除去微粒及杂质除去微粒及杂质除去微粒及杂质除去微粒及杂质了解样品在流动相中的溶解度了解样品在流动相中的溶解度了解样品在流动相中的溶解度了解样品在流动相中的溶解度如样品的溶剂不是流动相，一定要用流动相试溶解如样品的溶剂不是流动相，一定要用流动相试溶解如样品的溶剂不是流动相，一定要用流动相试溶解如样品的溶剂不是流动相，一定
50、要用流动相试溶解度，防止其在流动相中析出度，防止其在流动相中析出度，防止其在流动相中析出度，防止其在流动相中析出 了解样品基质与色谱柱的填料是否相互作用了解样品基质与色谱柱的填料是否相互作用了解样品基质与色谱柱的填料是否相互作用了解样品基质与色谱柱的填料是否相互作用第53页/共96页55样品准备样品准备第54页/共96页56色谱柱的保养（二）色谱柱的保养（二）流动相方面流动相过滤流动相过滤流动相过滤流动相过滤-除去微粒除去微粒除去微粒除去微粒纯度的要求纯度的要求纯度的要求纯度的要求超纯水，梯度实验时水中有机杂质含超纯水，梯度实验时水中有机杂质含超纯水，梯度实验时水中有机杂质含超纯水，梯度实验时