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1、实验五激素对血糖浓度的影响一、实验目的一、实验目的1.1.掌握掌握GOD-PODGOD-POD法测定血糖的原理及方法。法测定血糖的原理及方法。2.2.观察胰岛素、肾上腺素对血糖浓度的影响。观察胰岛素、肾上腺素对血糖浓度的影响。3.3.了解家兔耳缘静脉取血的方法。了解家兔耳缘静脉取血的方法。二、实验原理二、实验原理1.1.血糖血糖是指血液中的葡萄糖是指血液中的葡萄糖。人体生理血糖水平维持在人体生理血糖水平维持在3.896.11mol/l3.896.11mol/l。2.2.血糖的来源与去路血糖的来源与去路3.3.血糖的激素调节血糖的激素调节降低血糖降低血糖：胰岛素胰岛素升高血糖升高血糖：肾上腺素、
2、胰高血糖素、糖皮质激素和生长素等。肾上腺素、胰高血糖素、糖皮质激素和生长素等。v胰岛素胰岛素胰岛素胰岛素是唯一降低血糖的激素。是唯一降低血糖的激素。是唯一降低血糖的激素。是唯一降低血糖的激素。胰岛素促进肝脏和肌肉将葡萄糖氧化合成糖原，又胰岛素促进肝脏和肌肉将葡萄糖氧化合成糖原，又加强糖的氧化作用，故可以降低血糖。加强糖的氧化作用，故可以降低血糖。v升高血糖的激素以升高血糖的激素以升高血糖的激素以升高血糖的激素以肾上腺素肾上腺素肾上腺素肾上腺素作用迅速而明显。作用迅速而明显。作用迅速而明显。作用迅速而明显。肾上腺素通过促进肝糖原分解而升高血糖。肾上腺素通过促进肝糖原分解而升高血糖。4.4.血糖测
3、定的意义血糖测定的意义临床：血糖检测是目前诊断糖代谢异常相关疾病的临床：血糖检测是目前诊断糖代谢异常相关疾病的主要依据。主要依据。科研：在代谢疾病的研究中，常测定血糖。在某些科研：在代谢疾病的研究中，常测定血糖。在某些药物的研究中，也涉及血糖的测定。药物的研究中，也涉及血糖的测定。测定测定方法方法无机化学法：无机化学法：Folin-WuFolin-Wu法法有机化学法：邻甲苯胺法有机化学法：邻甲苯胺法酶法：酶法：葡萄糖氧化酶法葡萄糖氧化酶法5.5.血糖测定的常用方法血糖测定的常用方法（1）葡萄糖）葡萄糖O2H2O（2）4-氨基安替吡啉苯酚氨基安替吡啉苯酚H2O2葡萄糖酸葡萄糖酸H2O2葡萄糖氧化
4、酶葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶（GODGOD）H2O 红色红色醌类化合物醌类化合物过氧化物酶过氧化物酶过氧化物酶过氧化物酶（PODPOD）505nm光吸收法测定光吸收法测定光吸收法测定光吸收法测定相对血糖浓度相对血糖浓度相对血糖浓度相对血糖浓度6.6.GOD-POD法原理法原理7.7.朗朗伯伯-比尔定律比尔定律 当一束平行的单色光通过均匀、无散射的溶液时，当一束平行的单色光通过均匀、无散射的溶液时，在光强度、温度等条件不变的情况下，溶液吸光度在光强度、温度等条件不变的情况下，溶液吸光度与溶液的浓度及液层厚度的乘积成正比。与溶液的浓度及液层厚度的乘积成正比。=标准管法测定未知样品含量标准
5、管法测定未知样品含量A A标标=KC=KC标标L LA A测测=KC=KC测测L L C C测测=A A测测A A标标C C标标722G722G型分光光度计的使用型分光光度计的使用1.1.接通电源接通电源，打开开关，打开开关，调整调整波长波长。2.2.比色杯中加入空白及待测样品，并放入分光光度计比色杯中加入空白及待测样品，并放入分光光度计中，中，注意注意：加入样品量不超过比色杯体积：加入样品量不超过比色杯体积的的3/43/4。3.3.调模式为调模式为“T T（透射比）（透射比）”，对空白对照进行调，对空白对照进行调“0 0”（开盖）和调（开盖）和调“100100”（闭盖）。（闭盖）。4.4.调
6、模式为调模式为“A A（吸光度）（吸光度）”，测定测定待测样品的吸光待测样品的吸光度值。度值。三、主要三、主要仪器与试剂仪器与试剂v试剂：试剂：胰岛素，肾上腺素胰岛素，肾上腺素 酒精，草酸钠，蛋白沉淀剂酒精，草酸钠，蛋白沉淀剂 酶酚混合试剂，苯甲酸溶液酶酚混合试剂，苯甲酸溶液 葡萄糖标准贮存液（葡萄糖标准贮存液（100mmol/L100mmol/L）葡萄糖标准应用液（葡萄糖标准应用液（5mmol/L5mmol/L）四、四、实验操作实验操作1.1.1.1.准备准备准备准备：正常家兔两只，实验前预先饥饿：正常家兔两只，实验前预先饥饿16h16h，称体重，称体重,并记录并记录（kgkg）。）。兔子抓
7、取方法：一手抓取颈背部皮肤，另一只手托臀部。兔子抓取方法：一手抓取颈背部皮肤，另一只手托臀部。2.2.2.2.制备抗凝管制备抗凝管制备抗凝管制备抗凝管：在：在洁净、干燥洁净、干燥的试管中放入一小勺抗凝剂（草的试管中放入一小勺抗凝剂（草酸钠）。酸钠）。3.3.3.3.注射前取血注射前取血注射前取血注射前取血：一般以：一般以耳缘静脉耳缘静脉取血，拔毛，用乙醇擦洗，使取血，拔毛，用乙醇擦洗，使血管充血（弹动几下），在耳缘静脉外侧血管充血（弹动几下），在耳缘静脉外侧远心端远心端用三棱针扎用三棱针扎破放血，将血液滴入抗凝管中，约取破放血，将血液滴入抗凝管中，约取1 1 2ml2ml，边收集边混匀边收集边
8、混匀，以防血液凝固。取血后用干棉球压迫血管止血。以防血液凝固。取血后用干棉球压迫血管止血。4.4.4.4.注射激素注射激素注射激素注射激素：取血后，：取血后，一只注射胰岛素，一只注射胰岛素，0.75U/kg0.75U/kg，60min60min。另一只注射肾上腺素，另一只注射肾上腺素，0.5mg/kg0.5mg/kg，30min30min。注射方法：皮下注射。肚皮朝上，掂起皮肤，刺入皮下有落空感，回抽注射方法：皮下注射。肚皮朝上，掂起皮肤，刺入皮下有落空感，回抽无血，缓慢注入激素。无血，缓慢注入激素。5.5.5.5.制去蛋白血滤液制去蛋白血滤液制去蛋白血滤液制去蛋白血滤液：这是注射前的血液。：
9、这是注射前的血液。制备方法：制备方法：蛋白沉淀剂蛋白沉淀剂4ml4ml全血全血0.2ml0.2ml，混匀，室温放置，混匀，室温放置7 7分钟后，在漏斗上过滤，取滤液，标记为注射前的去蛋白血分钟后，在漏斗上过滤，取滤液，标记为注射前的去蛋白血滤液。滤液。6.6.6.6.注射后取血并制备血滤液注射后取血并制备血滤液注射后取血并制备血滤液注射后取血并制备血滤液：方法同前，选择另一只耳朵，注：方法同前，选择另一只耳朵，注意做好标记。注射胰岛素的家兔，取血后立即腹腔或皮下注意做好标记。注射胰岛素的家兔，取血后立即腹腔或皮下注射射25%25%葡萄糖注射液葡萄糖注射液10ml10ml，以免家兔发生胰岛素性休
10、克。，以免家兔发生胰岛素性休克。7.GOD-POD7.GOD-POD7.GOD-POD7.GOD-POD法测血糖法测血糖法测血糖法测血糖：按下表操作：按下表操作 混匀，置混匀，置3737水浴水浴1515minmin，调节波长，调节波长505nm505nm，以空白管调零，分别读取，以空白管调零，分别读取 A A测、测、A A标标。读取读取6 6个个A A值并记录：值并记录：A A肾前、肾前、A A肾后、肾后、A A标标 A A胰前、胰前、A A胰后、胰后、A A标标加入物加入物(ml)(ml)测定管测定管 (注射前注射前)测定管测定管(注射后注射后)标准管标准管空白管空白管去蛋白血滤液去蛋白血滤
11、液0.50.50.50.5葡萄糖标准应用液葡萄糖标准应用液0.50.5蛋白沉淀剂蛋白沉淀剂0.50.5酶酚混合试剂酶酚混合试剂3.03.03.03.03.03.03.03.0五、结果与分析五、结果与分析按下式分别计算注射胰岛素或肾上腺素前、后血糖浓度：按下式分别计算注射胰岛素或肾上腺素前、后血糖浓度：A A测测 C C测测 C C标标（5 mmol5 mmolL L）A A标标 5 mmol5 mmolL L为葡萄糖标准应用液的浓度值。为葡萄糖标准应用液的浓度值。通过计算比较一下家兔注射前后血糖浓度的变化情况。通过计算比较一下家兔注射前后血糖浓度的变化情况。正常人空腹血糖值：正常人空腹血糖值：
12、正常人空腹血糖值：正常人空腹血糖值：3.893.893.893.896.116.116.116.11 mmol mmolL L六六、注意事项、注意事项1.1.采血时用耳缘静脉取血，注意安全，防止动物抓伤。采血时用耳缘静脉取血，注意安全，防止动物抓伤。采集时要边采集边混匀。采集时要边采集边混匀。2.2.准确吸取准确吸取0.2ml0.2ml的全血。的全血。3.3.采血后要立即制备去蛋白血滤液。采血后要立即制备去蛋白血滤液。4.4.测定管分胰岛素组和肾上腺素组，应测定管分胰岛素组和肾上腺素组，应同时测定同时测定，比，比较血糖的变化时才有可比性。比色测定应同时进行。较血糖的变化时才有可比性。比色测定应同时进行。