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1、微生物基本(jbn)检验技术华中科技大学同济(tn j)医院检验科 第一页，共二十三页。致病菌的检验(jinyn)程序直接涂片镜检 涂片镜检标本分离培养可疑菌落 生化反应 血清学鉴定分子生物学技术(jsh)药敏试验 动物试验第二页，共二十三页。细菌(xjn)形态学检查n1、不染色标本(biobn)检查n2、染色标本检查第三页，共二十三页。显微镜显微镜n n普通光学显微镜普通光学显微镜n n暗视野显微镜暗视野显微镜n n相差相差(xin ch)(xin ch)显微镜显微镜n n荧光显微镜荧光显微镜n n电子显微镜电子显微镜第四页，共二十三页。普普通通(ptn(ptng)g)光光学学显显微微镜镜
2、最为常用的一种显微镜，普通显微镜用油镜可放大1000倍，可将0.25m的微粒放大到肉眼可见(kjin)的0.25mm,一般细菌大于0.25m，故用普通光学显微镜可见(kjin)。第五页，共二十三页。暗暗视视野野显显微微镜镜n多用于检查不染色的活细菌(xjn)和螺旋体的形态及运动观察。第六页，共二十三页。相相差差(xin(xin ch)ch)显显微微镜镜n主要用于检查不染色活细菌(xjn)的形态及内部结构。第七页，共二十三页。荧荧光光(yngg(ynggung)ung)显显微微镜镜第八页，共二十三页。扫扫描描(somi(somio)o)电电子子显显微微镜镜n放大(fngd)倍数可达数万至数十万倍
3、，能分辨1nm的物体，可观察细菌表面和内部超微结构。第九页，共二十三页。不染色标本(biobn)检查n应用：主要用于检查生活状态下细菌的动力及运动(yndng)状况n常用方法：压滴法、悬滴法、暗视野显微镜检查第十页，共二十三页。不染色标本(biobn)检查-压滴法载玻片载玻片细菌悬液细菌悬液盖玻片盖玻片第十一页，共二十三页。不染色标本检查-动力(dngl)观察n动力(dngl)+：可看到细菌自一处移至另一处，有明显的方向性位移n动力-：受水分子撞击细菌呈现布朗运动，只在原地颤动而无位置的改变。第十二页，共二十三页。染色(rns)标本的检查-常用染料n碱性染料碱性染料 电离后显色离子带正电荷，易
4、与带负电荷的被染物结合。细菌(xjn)的等电点在pI25之间，易与带正电荷的染料结合而着色。常用的染料有碱性复红、结晶紫、亚甲蓝等。n酸性染料酸性染料:电离后显色离子带正电荷，易与带负电荷的被染物结合。通常用来染细胞质，而很少用于细菌的染色。常用的染料有伊红、刚果红等。n复合染料（中性染料）及荧光染料复合染料（中性染料）及荧光染料 复合染料是碱性染料和酸性染料的复合物，如瑞氏染料（伊红亚甲蓝）、姬姆萨染料（伊红天青）等；荧光染料如荧光标记的抗体，荧光素常用异硫氢基荧光素。用于某些特殊的染色技术。n脂溶性染料脂溶性染料 如Sudan black。第十三页，共二十三页。染色(rns)标本的检查染色
5、方法(fngf)的种类n单染法:采用一种染料染色n复染法（鉴别染色）:采用两种或两种以上的不同染料进行先后染色，使不同种类的细菌、同种细菌的不同结构，分别染上不同的颜色，以便鉴别细菌。第十四页，共二十三页。步骤(bzhu)：结果(ji gu):阳性菌阳性菌紫色紫色 阴性菌阴性菌红色红色结晶紫初染结晶紫初染碘液媒染碘液媒染乙醇脱色乙醇脱色复红复染复红复染涂片固定涂片固定由丹麦由丹麦(dn mi)(dn mi)医生医生Hans Christian GramHans Christian Gram于于18841884年创立年创立。革兰染色法（革兰染色法（Gram Stain）第十五页，共二十三页。Fi
6、gure 1-A Gram stain of Gram+Staphylococcus cells.Figure 2-Gram stain of Gram-E.coli cellsFigure第十六页，共二十三页。步骤：步骤：涂片涂片涂片涂片(t pin)(t pin)固定固定固定固定 酸性复酸性复酸性复酸性复红红初染初染初染初染 3%3%盐盐盐盐酸酒精脱色酸酒精脱色酸酒精脱色酸酒精脱色 美美美美蓝蓝复染复染复染复染 镜检镜检抗酸染色法抗酸染色法结果结果(ji gu)(ji gu)(ji gu)(ji gu):抗酸菌抗酸菌抗酸菌抗酸菌红红色色色色；非抗酸菌非抗酸菌非抗酸菌非抗酸菌蓝蓝色色色色。第
7、十七页，共二十三页。步骤：步骤：涂片涂片涂片涂片(t pin)(t pin)固定固定固定固定 金胺金胺金胺金胺OO染色染色染色染色 盐盐盐盐酸酒精脱色酸酒精脱色酸酒精脱色酸酒精脱色 复染复染复染复染 镜检镜检荧光荧光(ynggung)(ynggung)染染色色结果结果(ji gu)(ji gu)(ji gu)(ji gu):抗酸菌抗酸菌抗酸菌抗酸菌明亮橘黄色明亮橘黄色明亮橘黄色明亮橘黄色；非抗酸菌非抗酸菌非抗酸菌非抗酸菌-无无无无荧荧光光光光 第十八页，共二十三页。特殊(tsh)染色荚膜染色(rns)第十九页，共二十三页。特殊(tsh)染色 负染色(rns)（墨汁染色）第二十页，共二十三页。特
8、殊(tsh)染色 第二十一页，共二十三页。小 结n1、细菌(xjn)形态学检查方法：不染色标本检查；染色标本检查n2、常用染色方法：1）革兰染色 2）抗酸染色 3）荧光染色第二十二页，共二十三页。内容(nirng)总结微生物基本检验技术。常用方法：压滴法、悬滴法、暗视野显微镜检查。碱性染料 电离后显色离子带正电荷，易与带负电荷的被染物结合。酸性染料:电离后显色离子带正电荷，易与带负电荷的被染物结合。荧光染料如荧光标记的抗体，荧光素常用异硫氢基荧光素。脂溶性染料 如Sudan black。阴性菌红色(hngs)。由丹麦医生Hans Christian Gram于1884年创立。抗酸菌红色(hngs)。非抗酸菌蓝色。3）荧光染色第二十三页，共二十三页。