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1、DNADNA的粗提取和鉴定的粗提取和鉴定一、基础知识1、提取、提取DNA的方法的方法（1）DNA的溶解性的溶解性DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液溶液中溶解度不同，利用这一特点，选择适当的中溶解度不同，利用这一特点，选择适当的盐溶液就能使盐溶液就能使DNA充分溶解，而使杂质沉淀，或充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反，以达到分离目的。者相反，以达到分离目的。DNA不溶于不溶于酒精溶液酒精溶液，但是细胞中的某些蛋，但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精。利用这一原理，可以将白质则溶于酒精。利用这一原理，可以将DNA与与蛋白质进一步分离。蛋白质进一步分离。（2）D
2、NA对酶、高温和洗涤剂的耐受性对酶、高温和洗涤剂的耐受性蛋白酶蛋白酶能能水解蛋白质水解蛋白质，但是对，但是对DNA没有影响。没有影响。大多数蛋白质不能忍受大多数蛋白质不能忍受6080的的高温高温，而，而DNA在在80 以上才会变性。以上才会变性。洗涤剂洗涤剂能够能够瓦解细胞膜瓦解细胞膜，但对但对DNA没有影响。没有影响。在沸水浴的条件下，在沸水浴的条件下，DNA遇遇二苯胺二苯胺会被染成会被染成蓝色蓝色。因。因此，二苯胺可以作为鉴定此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂的试剂。DNA+DNA+冰醋酸、少量浓硫酸冰醋酸、少量浓硫酸+二苯胺二苯胺 蓝色物蓝色物2、DNA的鉴定的鉴定100在沸水浴的条件下
3、，在沸水浴的条件下，DNA遇遇二苯胺二苯胺会被染成会被染成蓝色蓝色。因。因此，二苯胺可以作为鉴定此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂的试剂。DNA+DNA+冰醋酸、少量浓硫酸冰醋酸、少量浓硫酸+二苯胺二苯胺 蓝色物蓝色物100二、实验设计（一）实验材料的选取（一）实验材料的选取（一）实验材料的选取（一）实验材料的选取（二）破碎细胞，获取含（二）破碎细胞，获取含（二）破碎细胞，获取含（二）破碎细胞，获取含DNADNADNADNA的滤液的滤液的滤液的滤液1 1、动物细胞的破碎：、动物细胞的破碎：以鸡血为例，在鸡血细胞液中以鸡血为例，在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，过滤后加入一定量
4、的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液即可。收集滤液即可。2 2、植物细胞的破碎：、植物细胞的破碎：提取洋葱提取洋葱DNADNA时，在切碎的洋时，在切碎的洋葱中加入一定的洗涤剂和食盐，进行充分的搅拌和葱中加入一定的洗涤剂和食盐，进行充分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液。研磨，过滤后收集研磨液。（三）去除滤液中的杂质（三）去除滤液中的杂质（三）去除滤液中的杂质（三）去除滤液中的杂质方案一：方案一：在滤液中加入在滤液中加入NaCl，使，使NaCl溶液浓度为溶液浓度为2mol/L，过滤除去不溶的杂质，再调节，过滤除去不溶的杂质，再调节NaCl溶液浓度为溶液浓度为0.14mol/L，析出，析出DNA
5、，过滤去除溶液中的杂质，再用，过滤去除溶液中的杂质，再用2mol/L的的NaCl溶解溶解DNA。方案二方案二：直接在滤液中加入嫩肉粉，反应直接在滤液中加入嫩肉粉，反应1015min，嫩肉中的木瓜蛋白酶能够分，嫩肉中的木瓜蛋白酶能够分解蛋白质。解蛋白质。方案三：方案三：将滤液放在将滤液放在6075的恒温水浴中保温的恒温水浴中保温1015，注意严格控制温度范围。注意严格控制温度范围。（四）（四）（四）（四）DNADNADNADNA的析出与鉴定的析出与鉴定的析出与鉴定的析出与鉴定1 1、DNADNA的析出：的析出：将处理后的溶液过滤，加入将处理后的溶液过滤，加入与滤液体积相等的、冷却的与滤液体积相等
6、的、冷却的酒精溶液（体积分数为酒精溶液（体积分数为95%95%），静置），静置2 23min3min，溶液，溶液中会出现白色丝状物，这就中会出现白色丝状物，这就是粗提取的是粗提取的DNADNA。用玻璃棒。用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸去上面的水物，并用滤纸吸去上面的水分。分。2 2、DNADNA的鉴定：的鉴定：取两支取两支20mL20mL的试管，各加入物质的试管，各加入物质的量浓度为的量浓度为2mol/L2mol/L的的NaClNaCl溶液溶液5mL5mL，将丝状物放入其中一支试，将丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌，使丝状物管中，用玻璃棒搅拌，使丝
7、状物溶解。然后，向两支试管中各加溶解。然后，向两支试管中各加入入4mL4mL的的二苯胺试剂二苯胺试剂。混合均匀。混合均匀后，将试管置于沸水中加热后，将试管置于沸水中加热5min5min，待试管冷却后，比较两支试管，待试管冷却后，比较两支试管中溶液颜色的变化，看看溶解有中溶液颜色的变化，看看溶解有DNADNA的溶液是否变蓝。的溶液是否变蓝。三、操作提示1 1、以鸡血为实验材料时，每、以鸡血为实验材料时，每100mL100mL血液中需要血液中需要加入加入3g3g柠檬酸钠，防止血液凝固。柠檬酸钠，防止血液凝固。2 2、加入洗涤剂后，动作要轻缓、柔和，否则容、加入洗涤剂后，动作要轻缓、柔和，否则容易产
8、生大量的泡沫，不利于后续步骤的操作。易产生大量的泡沫，不利于后续步骤的操作。加入酒精和用玻璃棒搅拌时，动作要轻缓，以加入酒精和用玻璃棒搅拌时，动作要轻缓，以免加剧免加剧DNADNA分子的断裂，导致分子的断裂，导致DNADNA分子不能形成分子不能形成絮状沉淀。絮状沉淀。3 3、二苯胺试剂要现配现用，否则会影响鉴定的、二苯胺试剂要现配现用，否则会影响鉴定的效果。效果。鸡血细胞液中鸡血细胞液中鸡血细胞液中鸡血细胞液中DNADNA的粗提取实验流程图的粗提取实验流程图的粗提取实验流程图的粗提取实验流程图2mol/L2mol/L鸡血细胞液中鸡血细胞液中鸡血细胞液中鸡血细胞液中DNADNA的粗提取实验流程图
9、的粗提取实验流程图的粗提取实验流程图的粗提取实验流程图过滤过滤过滤过滤取纱布上的滤物取纱布上的滤物取纱布上的滤物取纱布上的滤物纱布过滤纱布过滤纱布过滤纱布过滤再次溶解再次溶解再次溶解再次溶解DNADNA2mol/LNaCl2mol/LNaCl溶液溶液溶液溶液取滤物取滤物取滤物取滤物鸡血细胞液中鸡血细胞液中鸡血细胞液中鸡血细胞液中DNADNA的粗提取实验流程图的粗提取实验流程图的粗提取实验流程图的粗提取实验流程图加冷酒精使加冷酒精使加冷酒精使加冷酒精使DNADNA析出（纯化）析出（纯化）析出（纯化）析出（纯化）冷酒精冷酒精冷酒精冷酒精鸡血细胞液中鸡血细胞液中鸡血细胞液中鸡血细胞液中DNADNA的
10、粗提取实验流程图的粗提取实验流程图的粗提取实验流程图的粗提取实验流程图DNA的鉴定DNA的的粗粗提提取取与与鉴鉴定定实验原理实验原理DNA在不同浓度在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同溶液中溶解度不同DNA与其他细胞成分在酒精中溶解度不同与其他细胞成分在酒精中溶解度不同DNA和蛋白质对酶、高温和洗涤剂耐受性不同和蛋白质对酶、高温和洗涤剂耐受性不同DNA与二苯胺呈现蓝色反应与二苯胺呈现蓝色反应DNA粗提取粗提取选择适宜材料选择适宜材料破碎细胞破碎细胞DNA的溶解和析出的溶解和析出DNA的纯化的纯化鉴定鉴定DNA与二苯胺混合，沸水浴，呈现蓝色反应与二苯胺混合，沸水浴，呈现蓝色反应总结：总结：1.下列
11、关于下列关于DNA粗提取与鉴定的说法正确的是粗提取与鉴定的说法正确的是 A氯化钠的浓度越低，对氯化钠的浓度越低，对DNA的溶解度越大的溶解度越大 B人血也可代替鸡血进行实验人血也可代替鸡血进行实验 C柠檬酸钠的主要作用是加速血细胞破裂柠檬酸钠的主要作用是加速血细胞破裂 DDNA不能溶于酒精不能溶于酒精2.在破碎鸡血细胞时，要先加入在破碎鸡血细胞时，要先加入20ml的蒸馏水，其作用是的蒸馏水，其作用是A.DNA溶解于水溶解于水 B 血细胞破裂，血细胞破裂，DNA释放释放C稀释血液，防止凝固稀释血液，防止凝固 D 有利于搅拌有利于搅拌3.若选择的实验材料为植物细胞，破碎细胞时要加入一定量的洗若选择的实验材料为植物细胞，破碎细胞时要加入一定量的洗涤剂和食盐，加入食盐的目的是涤剂和食盐，加入食盐的目的是A.利于利于DNA的溶解的溶解 B.分离分离DNA和蛋白质和蛋白质C.溶解细胞膜溶解细胞膜 D.溶解蛋白质溶解蛋白质4.在在DNA粗提取实验中，向在溶解粗提取实验中，向在溶解DNA的的NaCl溶液中，不断加入溶液中，不断加入蒸馏水的目的是蒸馏水的目的是A有利于溶解有利于溶解DNA B有利于溶解杂质有利于溶解杂质C减少减少DNA的溶解度的溶解度 D减少杂质的溶解度减少杂质的溶解度