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1、第十章吸光光度法第十章吸光光度法第1页，此课件共78页哦Al3+Cu2+KMnO4Ni2+Fe3+n n通过比较溶液颜色深浅而求得其浓度的分通过比较溶液颜色深浅而求得其浓度的分析方法称为比色分析法析方法称为比色分析法第2页，此课件共78页哦n n比色分析的基本依据是有色物质对光的选比色分析的基本依据是有色物质对光的选择性吸收作用。择性吸收作用。n n光吸收的本质：光吸收的本质：第3页，此课件共78页哦n n吸收光谱有原子吸收光谱和分子吸收光谱。吸收光谱有原子吸收光谱和分子吸收光谱。吸收光谱有原子吸收光谱和分子吸收光谱。吸收光谱有原子吸收光谱和分子吸收光谱。n n原子吸收光谱是由原子（而不是分子
2、）外层电子选择性地吸收某些波长的原子吸收光谱是由原子（而不是分子）外层电子选择性地吸收某些波长的原子吸收光谱是由原子（而不是分子）外层电子选择性地吸收某些波长的原子吸收光谱是由原子（而不是分子）外层电子选择性地吸收某些波长的电磁波而引起的，原子吸收分光光度法就是根据原子的这种性质建立起来电磁波而引起的，原子吸收分光光度法就是根据原子的这种性质建立起来电磁波而引起的，原子吸收分光光度法就是根据原子的这种性质建立起来电磁波而引起的，原子吸收分光光度法就是根据原子的这种性质建立起来的。的。的。的。n n分子吸收光谱是分子轨道中外层电子吸收某一波长范围的能量而引起分子吸收光谱是分子轨道中外层电子吸收某
3、一波长范围的能量而引起分子吸收光谱是分子轨道中外层电子吸收某一波长范围的能量而引起分子吸收光谱是分子轨道中外层电子吸收某一波长范围的能量而引起的，通常吸收的是紫外及可见光部分。这种价电子跃迁而产生的分子的，通常吸收的是紫外及可见光部分。这种价电子跃迁而产生的分子的，通常吸收的是紫外及可见光部分。这种价电子跃迁而产生的分子的，通常吸收的是紫外及可见光部分。这种价电子跃迁而产生的分子光谱又称为电子光谱。光谱又称为电子光谱。光谱又称为电子光谱。光谱又称为电子光谱。n n电子跃迁时必须伴有分子的振动和转动能级的变化，所以分子光谱不是线电子跃迁时必须伴有分子的振动和转动能级的变化，所以分子光谱不是线电子
4、跃迁时必须伴有分子的振动和转动能级的变化，所以分子光谱不是线电子跃迁时必须伴有分子的振动和转动能级的变化，所以分子光谱不是线光谱而是带状光谱。若用红外光照射，不能引起电子的跃迁，只能引起振光谱而是带状光谱。若用红外光照射，不能引起电子的跃迁，只能引起振光谱而是带状光谱。若用红外光照射，不能引起电子的跃迁，只能引起振光谱而是带状光谱。若用红外光照射，不能引起电子的跃迁，只能引起振动和转动能级的变化，这样引起的吸收光谱称为振动转动光谱或红外光动和转动能级的变化，这样引起的吸收光谱称为振动转动光谱或红外光动和转动能级的变化，这样引起的吸收光谱称为振动转动光谱或红外光动和转动能级的变化，这样引起的吸收
5、光谱称为振动转动光谱或红外光谱。它的吸收与分子结构密切相关，用于研究分子结构。谱。它的吸收与分子结构密切相关，用于研究分子结构。谱。它的吸收与分子结构密切相关，用于研究分子结构。谱。它的吸收与分子结构密切相关，用于研究分子结构。第4页，此课件共78页哦第5页，此课件共78页哦电磁波电磁波波长范围波长范围跃迁类型跃迁类型分析方法分析方法X-X-射线射线1010-1-1-10nm-10nmK K、L L层电子层电子X X射线光谱法射线光谱法远紫外光远紫外光10-200nm10-200nm中层电子中层电子真空紫外光度法真空紫外光度法近紫外光近紫外光200-400nm200-400nm价电子价电子紫外
6、光度法紫外光度法可见光可见光400-750nm400-750nm比色及可见光度法比色及可见光度法近红外光近红外光0.75-2.50.75-2.5 mm分子振动分子振动红外光谱法红外光谱法中红外光中红外光 2.5-502.5-50 mm第6页，此课件共78页哦第一节、吸光光度法概述第一节、吸光光度法概述n n吸光光度法是基于物质对光的选择性吸收而建立起吸光光度法是基于物质对光的选择性吸收而建立起来的分析方法，来的分析方法，n n包括：包括：包括：包括：n n比色分析法，比色分析法，比色分析法，比色分析法，n n可见光度法，可见光度法，可见光度法，可见光度法，n n紫外分光光度法，紫外分光光度法，
7、紫外分光光度法，紫外分光光度法，n n红外分光光度法。红外分光光度法。红外分光光度法。红外分光光度法。第7页，此课件共78页哦比色分析法和分光光度法特点比色分析法和分光光度法特点:n n(1)(1)、灵敏度高、灵敏度高n n 测定的最低浓度可达测定的最低浓度可达测定的最低浓度可达测定的最低浓度可达1010-5-51010-6-6 mol/Lmol/L，相当于含量，相当于含量，相当于含量，相当于含量0.0010.0001%0.0010.0001%的微量组分的微量组分的微量组分的微量组分.n n(2)、准确度较高、准确度较高、准确度较高、准确度较高n n 分光光度法的相对误差为分光光度法的相对误差
8、为分光光度法的相对误差为分光光度法的相对误差为 25%.25%.n n(3)(3)、操作简便，测定速度快、操作简便，测定速度快、操作简便，测定速度快、操作简便，测定速度快 n n(4)、应用广泛、应用广泛第8页，此课件共78页哦第二节、吸光光度法的基本原理第二节、吸光光度法的基本原理n n一、互补色光一、互补色光n n白光：复合光白光：复合光n n复合光复合光 单色光单色光n n 单色器单色器单色器单色器n n单色光单色光1 单色光单色光2 白光白光n n 互补色光互补色光互补色光互补色光第9页，此课件共78页哦第10页，此课件共78页哦第11页，此课件共78页哦白白 光光第12页，此课件共7
9、8页哦第13页，此课件共78页哦二、物质的颜色和对光的选择吸收二、物质的颜色和对光的选择吸收n n(1)(1)、光吸收程度最大处的波长，称为、光吸收程度最大处的波长，称为、光吸收程度最大处的波长，称为、光吸收程度最大处的波长，称为最大吸收波长，常用最大吸收波长，常用最大吸收波长，常用最大吸收波长，常用 maxmax表示表示表示表示.n n(2)(2)、光吸收曲线与物质特性有关，、光吸收曲线与物质特性有关，、光吸收曲线与物质特性有关，、光吸收曲线与物质特性有关，这些特性客作为物质定性鉴定的依据这些特性客作为物质定性鉴定的依据这些特性客作为物质定性鉴定的依据这些特性客作为物质定性鉴定的依据.n n
10、(3)(3)、组成量度不同的同种物质的溶、组成量度不同的同种物质的溶、组成量度不同的同种物质的溶、组成量度不同的同种物质的溶液，在一定波长处吸光度随溶液的液，在一定波长处吸光度随溶液的液，在一定波长处吸光度随溶液的液，在一定波长处吸光度随溶液的组成量度增加而增大，这个特性可组成量度增加而增大，这个特性可组成量度增加而增大，这个特性可组成量度增加而增大，这个特性可作为物质定量分析的依据作为物质定量分析的依据作为物质定量分析的依据作为物质定量分析的依据.第14页，此课件共78页哦IoItIaIo=Ia+It+IrIrn n设入射光，吸收光，透射光和反射光的强度依次为设入射光，吸收光，透射光和反射光
11、的强度依次为设入射光，吸收光，透射光和反射光的强度依次为设入射光，吸收光，透射光和反射光的强度依次为I I o o，I I a a，I I t t，I I r r，则他，则他，则他，则他们之间的关系为们之间的关系为们之间的关系为们之间的关系为:第三节第三节 光吸收的基本定律光吸收的基本定律第15页，此课件共78页哦一、朗伯定律一、朗伯定律n n溶液对光的吸收程度与液层厚度的成正比。溶液对光的吸收程度与液层厚度的成正比。第16页，此课件共78页哦二、比耳定律二、比耳定律溶液对光的吸收程度与浓度成正比。溶液对光的吸收程度与浓度成正比。第17页，此课件共78页哦n nKK为比例常数，它与入射光的波长
12、，有色物质的性质和溶液的温度为比例常数，它与入射光的波长，有色物质的性质和溶液的温度为比例常数，它与入射光的波长，有色物质的性质和溶液的温度为比例常数，它与入射光的波长，有色物质的性质和溶液的温度等因数有关等因数有关等因数有关等因数有关.n n上式表示当一束平行单色光通过均匀的溶液时，溶液对光的吸收程度上式表示当一束平行单色光通过均匀的溶液时，溶液对光的吸收程度上式表示当一束平行单色光通过均匀的溶液时，溶液对光的吸收程度上式表示当一束平行单色光通过均匀的溶液时，溶液对光的吸收程度与溶液的组成量度和液层厚度的乘积成正比与溶液的组成量度和液层厚度的乘积成正比与溶液的组成量度和液层厚度的乘积成正比与
13、溶液的组成量度和液层厚度的乘积成正比.这一定律称为朗伯这一定律称为朗伯这一定律称为朗伯这一定律称为朗伯-比耳比耳比耳比耳定律，也称为定律，也称为定律，也称为定律，也称为光吸收定律光吸收定律光吸收定律光吸收定律.三、朗伯三、朗伯-比耳定律比耳定律第18页，此课件共78页哦四、透光率，吸光度，吸光系数，摩四、透光率，吸光度，吸光系数，摩尔吸光系数尔吸光系数n n当液层厚度当液层厚度当液层厚度当液层厚度b b的单位为的单位为的单位为的单位为cmcm，组成量度组成量度组成量度组成量度c c的单位为的单位为的单位为的单位为g/Lg/L时，时，时，时，则常数则常数则常数则常数KK用用用用a a表示，它的单
14、位表示，它的单位表示，它的单位表示，它的单位为为为为L L g g-1-1 cmcm-1-1，a a称为吸光系称为吸光系称为吸光系称为吸光系数数数数.n n当当当当b b的单位为的单位为的单位为的单位为cmcm，组成量度，组成量度，组成量度，组成量度c c的单位为的单位为的单位为的单位为mol/Lmol/L时，则常数时，则常数时，则常数时，则常数KK用用用用 表示，它的单位为表示，它的单位为表示，它的单位为表示，它的单位为L L molmol-1-1 cmcm-1-1，称为摩尔吸光称为摩尔吸光称为摩尔吸光称为摩尔吸光系数系数系数系数.第19页，此课件共78页哦n n摩尔吸光系数摩尔吸光系数摩尔
15、吸光系数摩尔吸光系数 时有色物质在一定波长下的特征常数，它可时有色物质在一定波长下的特征常数，它可时有色物质在一定波长下的特征常数，它可时有色物质在一定波长下的特征常数，它可以衡量显色反应的灵敏度以衡量显色反应的灵敏度以衡量显色反应的灵敏度以衡量显色反应的灵敏度.n n 值越大，表示该有色物质对该波长光的吸收能力越强，显色反值越大，表示该有色物质对该波长光的吸收能力越强，显色反值越大，表示该有色物质对该波长光的吸收能力越强，显色反值越大，表示该有色物质对该波长光的吸收能力越强，显色反应越灵敏应越灵敏应越灵敏应越灵敏.第20页，此课件共78页哦第21页，此课件共78页哦第四节、吸光光度法的仪器部
16、件第四节、吸光光度法的仪器部件n n一、目视比色法一、目视比色法n n用肉眼比较被测溶液同标准溶液颜色深浅，以确定被测物用肉眼比较被测溶液同标准溶液颜色深浅，以确定被测物用肉眼比较被测溶液同标准溶液颜色深浅，以确定被测物用肉眼比较被测溶液同标准溶液颜色深浅，以确定被测物质含量的方法，称为玛纳斯比色法质含量的方法，称为玛纳斯比色法质含量的方法，称为玛纳斯比色法质含量的方法，称为玛纳斯比色法.n n最常用的目视比色法是标准系列法最常用的目视比色法是标准系列法最常用的目视比色法是标准系列法最常用的目视比色法是标准系列法.第22页，此课件共78页哦n n标准系列法的优点是仪器简单，操作简便，而且可在复
17、合光下标准系列法的优点是仪器简单，操作简便，而且可在复合光下标准系列法的优点是仪器简单，操作简便，而且可在复合光下标准系列法的优点是仪器简单，操作简便，而且可在复合光下进行测定进行测定进行测定进行测定.其缺点是配制标准色阶比较费时，由于某些有色溶液不其缺点是配制标准色阶比较费时，由于某些有色溶液不其缺点是配制标准色阶比较费时，由于某些有色溶液不其缺点是配制标准色阶比较费时，由于某些有色溶液不够稳定，常常现用现配够稳定，常常现用现配够稳定，常常现用现配够稳定，常常现用现配.C C1 C C2 2 C3 3 C4 4 C C5 C Cx第23页，此课件共78页哦二、光电比色法与分光光度法二、光电比
18、色法与分光光度法n n(一一)、基本原理和特点、基本原理和特点n n1、标准曲线法、标准曲线法n n光度法与目视法比较，其优光度法与目视法比较，其优光度法与目视法比较，其优光度法与目视法比较，其优点是点是点是点是:用用用用光电池光电池光电池光电池代替肉眼进行代替肉眼进行代替肉眼进行代替肉眼进行测量，消除了肉眼的主观误差，测量，消除了肉眼的主观误差，测量，消除了肉眼的主观误差，测量，消除了肉眼的主观误差，提高了分析结果的准确度提高了分析结果的准确度提高了分析结果的准确度提高了分析结果的准确度.第24页，此课件共78页哦第25页，此课件共78页哦2、比较法、比较法.第26页，此课件共78页哦(二二
19、)光度计的基本部件光度计的基本部件n n一般光度计是由光源，滤光片，比色皿，光电池和检流计等一般光度计是由光源，滤光片，比色皿，光电池和检流计等一般光度计是由光源，滤光片，比色皿，光电池和检流计等一般光度计是由光源，滤光片，比色皿，光电池和检流计等五大部件组成五大部件组成五大部件组成五大部件组成.第27页，此课件共78页哦1、光源、光源第28页，此课件共78页哦2、单色器、单色器n n1、滤色片、滤色片n n目前普遍使用的是国产型光电目前普遍使用的是国产型光电目前普遍使用的是国产型光电目前普遍使用的是国产型光电比色计，有三种配套的滤光片比色计，有三种配套的滤光片比色计，有三种配套的滤光片比色计
20、，有三种配套的滤光片（红色（红色（红色（红色650650，绿色，绿色，绿色，绿色530530，蓝色，蓝色，蓝色，蓝色440440）n n2、棱镜、棱镜第29页，此课件共78页哦第30页，此课件共78页哦n n3、光栅、光栅n n1000 条条/mm第31页，此课件共78页哦3、比色皿、比色皿(吸收池吸收池)第32页，此课件共78页哦4、光电池或光电管、光电池或光电管第33页，此课件共78页哦第34页，此课件共78页哦5、检流计、检流计第35页，此课件共78页哦第36页，此课件共78页哦第37页，此课件共78页哦第38页，此课件共78页哦第39页，此课件共78页哦第40页，此课件共78页哦n n
21、(二二)、分光光度计、分光光度计n n1、72型风光光度计型风光光度计n n2、75型分光光度计型分光光度计第41页，此课件共78页哦721型可见分光光度计型可见分光光度计n n特点：特点：特点：特点：n n棱镜单色器。棱镜单色器。棱镜单色器。棱镜单色器。n nT.AT.A直读。直读。直读。直读。n n使用消光片，可供高含量比色使用消光片，可供高含量比色使用消光片，可供高含量比色使用消光片，可供高含量比色测定。测定。测定。测定。n n技术指标：技术指标：技术指标：技术指标：n n波长范围：波长范围：波长范围：波长范围：360800nm360800nmn n波长精度：波长精度：波长精度：波长精度
22、：3nm(360600nm)3nm(360600nm)n n表面刻度：（表面刻度：（表面刻度：（表面刻度：（T T）01000100（A A）0202第42页，此课件共78页哦第43页，此课件共78页哦722型可见分光光度计型可见分光光度计n n特点：特点：特点：特点：n n能在可见光谱区域内对物能在可见光谱区域内对物能在可见光谱区域内对物能在可见光谱区域内对物质作定性定量分析。质作定性定量分析。质作定性定量分析。质作定性定量分析。n n采用光栅单色器、具有波采用光栅单色器、具有波采用光栅单色器、具有波采用光栅单色器、具有波长精度高，单色性好等优长精度高，单色性好等优长精度高，单色性好等优长精
23、度高，单色性好等优点。点。点。点。n n采用采用采用采用3 3 位位位位LEDLED数字显示，数字显示，数字显示，数字显示，T.A.CT.A.C直读。直读。直读。直读。n n波长范围：波长范围：波长范围：波长范围：330330800nm800nmn n波长准确度：波长准确度：波长准确度：波长准确度：2nm2nm第44页，此课件共78页哦第45页，此课件共78页哦752型紫外可见分光光度计型紫外可见分光光度计n n特点：特点：特点：特点：n n采用全息闪耀光栅单色器，具有波采用全息闪耀光栅单色器，具有波采用全息闪耀光栅单色器，具有波采用全息闪耀光栅单色器，具有波长精度高，单色性好，杂散光低等长精
24、度高，单色性好，杂散光低等长精度高，单色性好，杂散光低等长精度高，单色性好，杂散光低等优点。优点。优点。优点。n n能自动切换钨卤灯和氘灯。能自动切换钨卤灯和氘灯。能自动切换钨卤灯和氘灯。能自动切换钨卤灯和氘灯。n n采用采用采用采用3 3 位位位位LEDLED数字显示，具有数字显示，具有数字显示，具有数字显示，具有T.A.CT.A.C直读能。直读能。直读能。直读能。n n技术指标技术指标技术指标技术指标:n n波长范围：波长范围：波长范围：波长范围：200200800nm800nmn n稳定性：暗电流漂移稳定性：暗电流漂移稳定性：暗电流漂移稳定性：暗电流漂移0.50.5()3min()3mi
25、n第46页，此课件共78页哦第47页，此课件共78页哦754型紫外可见分光光度计型紫外可见分光光度计n n特点特点:n n自动调整自动调整”0”和调整和调整”100”具有超群的测具有超群的测量读数重现性和稳定量读数重现性和稳定性性.n n由微处理机控制的打由微处理机控制的打印机可作实时记录印机可作实时记录.n n可使用直线回归测量可使用直线回归测量线线,具有高准确度的浓具有高准确度的浓度运算程序度运算程序.第48页，此课件共78页哦732型可见分光光度计型可见分光光度计n n自动调整自动调整自动调整自动调整“0 0”“”“100100”，可直接，可直接，可直接，可直接消除比色皿配对误差。消除比
26、色皿配对误差。消除比色皿配对误差。消除比色皿配对误差。n n测量读数准确性高，重现性和测量读数准确性高，重现性和测量读数准确性高，重现性和测量读数准确性高，重现性和稳定性佳。稳定性佳。稳定性佳。稳定性佳。n n有浓度直读，线性回归，定时有浓度直读，线性回归，定时有浓度直读，线性回归，定时有浓度直读，线性回归，定时打印，打印，打印，打印，GOTOGOTO以及光谱扫描以及光谱扫描以及光谱扫描以及光谱扫描等高级功能。等高级功能。等高级功能。等高级功能。第49页，此课件共78页哦7230g型可见分光光度计型可见分光光度计n n自动调零、自动调满度、自动自动调零、自动调满度、自动自动调零、自动调满度、自
27、动自动调零、自动调满度、自动建立线性方程、建立线性方程、建立线性方程、建立线性方程、A A、C C自自自自动切换，浓度直读。动切换，浓度直读。动切换，浓度直读。动切换，浓度直读。n n比色室能放置比色室能放置比色室能放置比色室能放置100nm100nm比色皿，比色皿，比色皿，比色皿，并配有托架。并配有托架。并配有托架。并配有托架。n n具有自动调节的波长调整机具有自动调节的波长调整机具有自动调节的波长调整机具有自动调节的波长调整机构，调整时无须打构，调整时无须打构，调整时无须打构，调整时无须打 开机壳。开机壳。开机壳。开机壳。n n灯源采用固定电压、灵敏度在灯源采用固定电压、灵敏度在灯源采用固
28、定电压、灵敏度在灯源采用固定电压、灵敏度在全波长范围内由微机自动控制。全波长范围内由微机自动控制。全波长范围内由微机自动控制。全波长范围内由微机自动控制。第50页，此课件共78页哦第五节第五节 显色反应和显色条件的选择显色反应和显色条件的选择n n一、显色反应一、显色反应一、显色反应一、显色反应n n FeFe3+3+3NCS+3NCS-=Fe(NCS)=Fe(NCS)3 3 (血红色血红色血红色血红色)n n应用于比色分析的显色反应必须符合下列要求应用于比色分析的显色反应必须符合下列要求应用于比色分析的显色反应必须符合下列要求应用于比色分析的显色反应必须符合下列要求:n n(1)(1)、显色
29、反应的灵敏度要高、显色反应的灵敏度要高、显色反应的灵敏度要高、显色反应的灵敏度要高.n n(2)(2)、有色化合物组成要固定、有色化合物组成要固定、有色化合物组成要固定、有色化合物组成要固定.n n(3)(3)、有色化合物稳定性要高、有色化合物稳定性要高、有色化合物稳定性要高、有色化合物稳定性要高.n n(4)(4)、反应选择性要高、反应选择性要高、反应选择性要高、反应选择性要高.第51页，此课件共78页哦二、显色条件的选择二、显色条件的选择二、显色条件的选择二、显色条件的选择n n1、显色剂用量、显色剂用量第52页，此课件共78页哦二、显色条件的选择二、显色条件的选择二、显色条件的选择二、显
30、色条件的选择n n2 2、溶液的酸度、溶液的酸度、溶液的酸度、溶液的酸度n npHpHA第53页，此课件共78页哦二、显色条件的选择二、显色条件的选择二、显色条件的选择二、显色条件的选择n n3 3、显色时间、显色时间、显色时间、显色时间n nt mint minA第54页，此课件共78页哦二、显色条件的选择二、显色条件的选择二、显色条件的选择二、显色条件的选择n n4 4、显色温度、显色温度、显色温度、显色温度n nT T A第55页，此课件共78页哦第六节、吸光光度法的误差及测第六节、吸光光度法的误差及测量条件的选择量条件的选择n n一、偏离朗伯一、偏离朗伯-比耳定比耳定律所引起的误差律所
31、引起的误差n n1 1、不同波长的入射光，有的物质、不同波长的入射光，有的物质、不同波长的入射光，有的物质、不同波长的入射光，有的物质的吸光系数的吸光系数的吸光系数的吸光系数a a是不同的是不同的是不同的是不同的.n n2 2、由于介质不均匀而造成的、由于介质不均匀而造成的、由于介质不均匀而造成的、由于介质不均匀而造成的.n n3 3、由于化学变化所致、由于化学变化所致、由于化学变化所致、由于化学变化所致.第56页，此课件共78页哦二、仪器测量误差二、仪器测量误差n n当当A=0.434时，测量值时，测量值相对误差最小相对误差最小.第57页，此课件共78页哦第58页，此课件共78页哦第59页，
32、此课件共78页哦三三.测量条件的选择测量条件的选择n n1、入射光波长的选择、入射光波长的选择第60页，此课件共78页哦2、吸光度读数范围的选择、吸光度读数范围的选择T最小最小=0.368,A=-logT=0.434，第61页，此课件共78页哦3、参比溶液的选择、参比溶液的选择n n(1)(1)、当试液，显色剂及所用的其他试剂在测定波长处无吸收时，可、当试液，显色剂及所用的其他试剂在测定波长处无吸收时，可、当试液，显色剂及所用的其他试剂在测定波长处无吸收时，可、当试液，显色剂及所用的其他试剂在测定波长处无吸收时，可用纯溶剂用纯溶剂用纯溶剂用纯溶剂(或蒸馏水或蒸馏水或蒸馏水或蒸馏水)作参比作参比
33、作参比作参比;n n(2)(2)、如果显色剂无吸收，而待测试液在此波长处有吸收，那、如果显色剂无吸收，而待测试液在此波长处有吸收，那、如果显色剂无吸收，而待测试液在此波长处有吸收，那、如果显色剂无吸收，而待测试液在此波长处有吸收，那么采用不加显色剂的待测试液作参比溶液么采用不加显色剂的待测试液作参比溶液么采用不加显色剂的待测试液作参比溶液么采用不加显色剂的待测试液作参比溶液.n n(3)(3)、如果显色剂和待测试液均有吸收，可将一份试液，加入适当的、如果显色剂和待测试液均有吸收，可将一份试液，加入适当的、如果显色剂和待测试液均有吸收，可将一份试液，加入适当的、如果显色剂和待测试液均有吸收，可将
34、一份试液，加入适当的掩蔽剂将待测组分掩蔽起来，使之不再与显色剂反应，然后按操作掩蔽剂将待测组分掩蔽起来，使之不再与显色剂反应，然后按操作掩蔽剂将待测组分掩蔽起来，使之不再与显色剂反应，然后按操作掩蔽剂将待测组分掩蔽起来，使之不再与显色剂反应，然后按操作步骤加入显色剂及其它试剂，以此作参比溶液步骤加入显色剂及其它试剂，以此作参比溶液步骤加入显色剂及其它试剂，以此作参比溶液步骤加入显色剂及其它试剂，以此作参比溶液.第62页，此课件共78页哦试液显色剂参比液无色无色蒸馏水有色无色不加显色剂的试液有色无色(将被测组分掩蔽)显色剂试液第63页，此课件共78页哦第64页，此课件共78页哦第七节、吸光光度法
35、的应用第七节、吸光光度法的应用n n一、示差分光光度法一、示差分光光度法一、示差分光光度法一、示差分光光度法n n在分光光度法中，当被测组分含量高时，常常偏离朗伯在分光光度法中，当被测组分含量高时，常常偏离朗伯在分光光度法中，当被测组分含量高时，常常偏离朗伯在分光光度法中，当被测组分含量高时，常常偏离朗伯-比耳定律比耳定律比耳定律比耳定律.为了克服这一缺点，改用标准溶液代替空白溶为了克服这一缺点，改用标准溶液代替空白溶为了克服这一缺点，改用标准溶液代替空白溶为了克服这一缺点，改用标准溶液代替空白溶液来调节仪器的液来调节仪器的液来调节仪器的液来调节仪器的100%100%透光度，以提高方法准确度透
36、光度，以提高方法准确度透光度，以提高方法准确度透光度，以提高方法准确度.这种方法这种方法这种方法这种方法称为示差分光光度法，简称为示差法称为示差分光光度法，简称为示差法称为示差分光光度法，简称为示差法称为示差分光光度法，简称为示差法.n n示差分光光度法与普通分光光度法在具体操作步骤上主要不同之示差分光光度法与普通分光光度法在具体操作步骤上主要不同之示差分光光度法与普通分光光度法在具体操作步骤上主要不同之示差分光光度法与普通分光光度法在具体操作步骤上主要不同之处是处是处是处是:普通分光光度法采用试剂的空白溶液作参比溶液，普通分光光度法采用试剂的空白溶液作参比溶液，普通分光光度法采用试剂的空白溶
37、液作参比溶液，普通分光光度法采用试剂的空白溶液作参比溶液，而示差分光光度法则采用一个组成量度与试样接近的标而示差分光光度法则采用一个组成量度与试样接近的标而示差分光光度法则采用一个组成量度与试样接近的标而示差分光光度法则采用一个组成量度与试样接近的标准溶液准溶液准溶液准溶液(组成量度已知组成量度已知组成量度已知组成量度已知)代替空白溶液作参比溶液，根据测得代替空白溶液作参比溶液，根据测得代替空白溶液作参比溶液，根据测得代替空白溶液作参比溶液，根据测得的吸光度进行含量计算的吸光度进行含量计算的吸光度进行含量计算的吸光度进行含量计算.第65页，此课件共78页哦第66页，此课件共78页哦第67页，此
38、课件共78页哦第68页，此课件共78页哦n n二、多组分的分析二、多组分的分析二、多组分的分析二、多组分的分析n n1.1.吸收曲线不重叠吸收曲线不重叠吸收曲线不重叠吸收曲线不重叠第69页，此课件共78页哦n n2.2.吸收曲线单向重叠吸收曲线单向重叠吸收曲线单向重叠吸收曲线单向重叠第70页，此课件共78页哦n n3.3.吸收曲线双向重叠吸收曲线双向重叠吸收曲线双向重叠吸收曲线双向重叠第71页，此课件共78页哦本章小结本章小结n n1 1吸光光度法的原理吸光光度法的原理吸光光度法的原理吸光光度法的原理n n知道朗伯知道朗伯知道朗伯知道朗伯 比耳定律是吸光光度法的定量依据，掌握朗伯比耳定律是吸光
39、光度法的定量依据，掌握朗伯比耳定律是吸光光度法的定量依据，掌握朗伯比耳定律是吸光光度法的定量依据，掌握朗伯 比耳定律的数学比耳定律的数学比耳定律的数学比耳定律的数学表达式及其意义，正确理解摩尔吸光系数的意义及单位，并会有关计算，掌表达式及其意义，正确理解摩尔吸光系数的意义及单位，并会有关计算，掌表达式及其意义，正确理解摩尔吸光系数的意义及单位，并会有关计算，掌表达式及其意义，正确理解摩尔吸光系数的意义及单位，并会有关计算，掌握互补色光的原理和影响朗伯握互补色光的原理和影响朗伯握互补色光的原理和影响朗伯握互补色光的原理和影响朗伯 比耳定律偏离的因素。掌握吸收曲线在吸光光比耳定律偏离的因素。掌握吸
40、收曲线在吸光光比耳定律偏离的因素。掌握吸收曲线在吸光光比耳定律偏离的因素。掌握吸收曲线在吸光光度分析中的作用。度分析中的作用。度分析中的作用。度分析中的作用。2 2吸光光度法和测量条件的选择吸光光度法和测量条件的选择吸光光度法和测量条件的选择吸光光度法和测量条件的选择n n了解各种吸光光度法的原理、特点、区别及应用，掌握标准曲线的制了解各种吸光光度法的原理、特点、区别及应用，掌握标准曲线的制了解各种吸光光度法的原理、特点、区别及应用，掌握标准曲线的制了解各种吸光光度法的原理、特点、区别及应用，掌握标准曲线的制作方法，并能根据标准曲线作方法，并能根据标准曲线作方法，并能根据标准曲线作方法，并能根
41、据标准曲线(工作曲线工作曲线工作曲线工作曲线)计算分析结果。知道吸光光度法仪计算分析结果。知道吸光光度法仪计算分析结果。知道吸光光度法仪计算分析结果。知道吸光光度法仪器的主要部件，掌握吸光光度法测量条件的选择和仪器的测量误差。器的主要部件，掌握吸光光度法测量条件的选择和仪器的测量误差。器的主要部件，掌握吸光光度法测量条件的选择和仪器的测量误差。器的主要部件，掌握吸光光度法测量条件的选择和仪器的测量误差。n n3 3显色反应显色反应显色反应显色反应n n了解显色反应，掌握显色反应的要求和显色反应条件。了解显色反应，掌握显色反应的要求和显色反应条件。了解显色反应，掌握显色反应的要求和显色反应条件。
42、了解显色反应，掌握显色反应的要求和显色反应条件。n n4 4吸光光度法的应用吸光光度法的应用吸光光度法的应用吸光光度法的应用n n了解吸光光度法的应用，掌握单一组分的测量方法。了解吸光光度法的应用，掌握单一组分的测量方法。了解吸光光度法的应用，掌握单一组分的测量方法。了解吸光光度法的应用，掌握单一组分的测量方法。第72页，此课件共78页哦综合练习题：综合练习题：n n一、填空题：一、填空题：一、填空题：一、填空题：n n1 1可见分光光度法主要用于对试样溶液进行可见分光光度法主要用于对试样溶液进行可见分光光度法主要用于对试样溶液进行可见分光光度法主要用于对试样溶液进行_；以不；以不；以不；以不
43、同波长单色光作为入射光测得的某一溶液的吸光度为纵坐标，入射同波长单色光作为入射光测得的某一溶液的吸光度为纵坐标，入射同波长单色光作为入射光测得的某一溶液的吸光度为纵坐标，入射同波长单色光作为入射光测得的某一溶液的吸光度为纵坐标，入射光波长为横坐标作图，所得曲线称为光波长为横坐标作图，所得曲线称为光波长为横坐标作图，所得曲线称为光波长为横坐标作图，所得曲线称为_。n n2 2为提高测定的准确度，溶液的吸光度应调节在为提高测定的准确度，溶液的吸光度应调节在为提高测定的准确度，溶液的吸光度应调节在为提高测定的准确度，溶液的吸光度应调节在_范围，这范围，这范围，这范围，这可通过控制溶液的可通过控制溶液
44、的可通过控制溶液的可通过控制溶液的_和选用和选用和选用和选用_来实现。来实现。来实现。来实现。n n3 3常用的参比溶液常用的参比溶液常用的参比溶液常用的参比溶液(空白溶液空白溶液空白溶液空白溶液)有有有有_、_和和和和_。n n4 4当温度和溶剂种类一定时，溶液的吸光度与当温度和溶剂种类一定时，溶液的吸光度与当温度和溶剂种类一定时，溶液的吸光度与当温度和溶剂种类一定时，溶液的吸光度与_和和和和_成正比，这称为成正比，这称为成正比，这称为成正比，这称为_定律。定律。定律。定律。n n5 5摩尔吸光系数摩尔吸光系数摩尔吸光系数摩尔吸光系数 是物质的是物质的是物质的是物质的_，其值越大，表明溶，其
45、值越大，表明溶，其值越大，表明溶，其值越大，表明溶液对入射单色光液对入射单色光液对入射单色光液对入射单色光_，测定的，测定的，测定的，测定的_ _ _愈高。一般愈高。一般愈高。一般愈高。一般 大于大于大于大于_就可进行分光光度法测定。就可进行分光光度法测定。就可进行分光光度法测定。就可进行分光光度法测定。第73页，此课件共78页哦n n二、是非题：二、是非题：二、是非题：二、是非题：n n1 1分光光度法是根据溶液对光有选择性吸收及朗伯比耳分光光度法是根据溶液对光有选择性吸收及朗伯比耳分光光度法是根据溶液对光有选择性吸收及朗伯比耳分光光度法是根据溶液对光有选择性吸收及朗伯比耳定律对物质进行定性
46、和定量分析的一种方法。定律对物质进行定性和定量分析的一种方法。定律对物质进行定性和定量分析的一种方法。定律对物质进行定性和定量分析的一种方法。n n2 2分光光度法灵敏度高，特别适用常量组分的测定。分光光度法灵敏度高，特别适用常量组分的测定。分光光度法灵敏度高，特别适用常量组分的测定。分光光度法灵敏度高，特别适用常量组分的测定。n n3 3在分光光度分析中，吸光度愈大，测量的误差愈小。在分光光度分析中，吸光度愈大，测量的误差愈小。在分光光度分析中，吸光度愈大，测量的误差愈小。在分光光度分析中，吸光度愈大，测量的误差愈小。n n4 4当溶液中无干扰物质存在时，应选择波长为当溶液中无干扰物质存在时
47、，应选择波长为当溶液中无干扰物质存在时，应选择波长为当溶液中无干扰物质存在时，应选择波长为maxmax的光作为入射的光作为入射的光作为入射的光作为入射光进行分光光度法测定。光进行分光光度法测定。光进行分光光度法测定。光进行分光光度法测定。n n5 5可见分光光度计使用的吸收池是用石英制造的。可见分光光度计使用的吸收池是用石英制造的。可见分光光度计使用的吸收池是用石英制造的。可见分光光度计使用的吸收池是用石英制造的。第74页，此课件共78页哦n n三、选择题：三、选择题：三、选择题：三、选择题：1 1符合比耳定律的有色溶液浓度改变时，其最大的吸收峰位置符合比耳定律的有色溶液浓度改变时，其最大的吸
48、收峰位置符合比耳定律的有色溶液浓度改变时，其最大的吸收峰位置符合比耳定律的有色溶液浓度改变时，其最大的吸收峰位置有何变化有何变化有何变化有何变化()()a a、向长波移动、向长波移动、向长波移动、向长波移动b b、向短波移动、向短波移动、向短波移动、向短波移动c c、不改变，峰高也不改变、不改变，峰高也不改变、不改变，峰高也不改变、不改变，峰高也不改变d d、不改变，峰高改变、不改变，峰高改变、不改变，峰高改变、不改变，峰高改变2 2对显色反应产生影响的因素是下面哪一种对显色反应产生影响的因素是下面哪一种对显色反应产生影响的因素是下面哪一种对显色反应产生影响的因素是下面哪一种()()a a、显
49、色酸度、显色酸度、显色酸度、显色酸度b b、比色皿、比色皿、比色皿、比色皿c c、测量波长、测量波长、测量波长、测量波长d d、仪器精密度、仪器精密度、仪器精密度、仪器精密度第75页，此课件共78页哦n n5 5在光度法测定中，当试剂和显色剂均有颜色时，参比溶液可选用哪在光度法测定中，当试剂和显色剂均有颜色时，参比溶液可选用哪在光度法测定中，当试剂和显色剂均有颜色时，参比溶液可选用哪在光度法测定中，当试剂和显色剂均有颜色时，参比溶液可选用哪种溶液种溶液种溶液种溶液()()a a、水、水、水、水b b、加了试剂和显色剂的溶液、加了试剂和显色剂的溶液、加了试剂和显色剂的溶液、加了试剂和显色剂的溶液
50、c c、将、将、将、将1 1份试液加入掩蔽剂掩蔽被测组分，再加试剂与显色剂份试液加入掩蔽剂掩蔽被测组分，再加试剂与显色剂份试液加入掩蔽剂掩蔽被测组分，再加试剂与显色剂份试液加入掩蔽剂掩蔽被测组分，再加试剂与显色剂d d、未加显色剂只加入试剂的溶液、未加显色剂只加入试剂的溶液、未加显色剂只加入试剂的溶液、未加显色剂只加入试剂的溶液n n6 6朗伯朗伯朗伯朗伯-比耳定律说明，当一束单色光通过均匀的有色溶液时，有色溶液的比耳定律说明，当一束单色光通过均匀的有色溶液时，有色溶液的比耳定律说明，当一束单色光通过均匀的有色溶液时，有色溶液的比耳定律说明，当一束单色光通过均匀的有色溶液时，有色溶液的吸光度与