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1、食用菌一级菌种的制作第1页，共17页，编辑于2022年，星期三教学目的：使学生学会母种的分离和保存方法教学目的：使学生学会母种的分离和保存方法教学重点：母种培养基的制作和组织分离法教学重点：母种培养基的制作和组织分离法教学难点：母种的接种方法教学难点：母种的接种方法教学方法：多媒体展示讲授与实验相结合教学方法：多媒体展示讲授与实验相结合第2页，共17页，编辑于2022年，星期三主要内容：主要内容：一、什么是母种一、什么是母种二、母种的制作流程二、母种的制作流程三、母种培养基制作与灭菌三、母种培养基制作与灭菌四、母种分离和培养四、母种分离和培养五、母种的继代培养五、母种的继代培养六、母种的保存六
2、、母种的保存单击按钮，单击按钮，就能链接到就能链接到相关内容哦相关内容哦？第3页，共17页，编辑于2022年，星期三 一、什么是母种？一、什么是母种？菌种是食用菌生产的基础，只有优良的菌种才可能有菌种是食用菌生产的基础，只有优良的菌种才可能有好的收成。菌种一般分为母种、原种或栽培种好的收成。菌种一般分为母种、原种或栽培种3级。级。无无论制作哪一级菌种，关键应强调无菌观念，严格按照无菌论制作哪一级菌种，关键应强调无菌观念，严格按照无菌技术要求进行操作。技术要求进行操作。母种：即一级种，是第一次用孢子分离法、组织分离法或母种：即一级种，是第一次用孢子分离法、组织分离法或基内菌丝获得的纯菌丝体及其经
3、过转管扩大培养得到的菌基内菌丝获得的纯菌丝体及其经过转管扩大培养得到的菌丝体丝体。本节主要介绍组织分离法制作本节主要介绍组织分离法制作母种母种。第4页，共17页，编辑于2022年，星期三二、母种的制作流程培养基配制 培养基灭菌 菌种分离 菌种培养转管纯化培养 一级种一级种培养基配制 培养基灭菌 培养基配制 培养基配制 培养基配制 培养基配制 培养基配制 培养基配制 第5页，共17页，编辑于2022年，星期三三、母种培养基制作与灭菌三、母种培养基制作与灭菌1、母种培养基配方：、母种培养基配方：应根据不同食用菌的不同营养需要配制不同的培养基。常应根据不同食用菌的不同营养需要配制不同的培养基。常用的
4、配方有：用的配方有：配方配方1：土豆葡萄糖琼脂培养基：土豆：土豆葡萄糖琼脂培养基：土豆(即马铃薯即马铃薯)200g、葡萄糖、葡萄糖20g、琼脂琼脂(凝固剂凝固剂)20g。配方配方2：土豆蔗糖琼脂培养基：土豆：土豆蔗糖琼脂培养基：土豆200g、琼脂、琼脂20g、水、水1000ml、蔗糖蔗糖20g；配方配方3：土豆胡萝卜琼脂培养基：土豆：土豆胡萝卜琼脂培养基：土豆20g、胡萝卜、胡萝卜25g、琼脂、琼脂20g、水水1000ml。配方配方4：土豆琼脂培养基：土豆：土豆琼脂培养基：土豆250-00g、琼脂、琼脂20g、水、水1000ml。第6页，共17页，编辑于2022年，星期三制作马铃薯液制作马铃薯
5、液将去皮的马铃薯，切成丝称取将去皮的马铃薯，切成丝称取200g，加，加1000ml煮煮沸沸20分钟。然后用分钟。然后用4层湿纱布过滤，再量取滤液层湿纱布过滤，再量取滤液1000ml，不足的应加水补足水分至，不足的应加水补足水分至1 000m。融化琼脂融化琼脂加入琼脂，搅拌使之融化，并加入葡萄糖等可溶加入琼脂，搅拌使之融化，并加入葡萄糖等可溶性物质，搅匀。性物质，搅匀。调节调节PH值值根据不同的菌种需要，用根据不同的菌种需要，用1molL NaOH 溶液溶液或盐酸调节好或盐酸调节好PH值值2、培养基制作：、培养基制作：分装试管分装试管培养基配好后应趁热用分装漏斗进行分装试管，培养基配好后应趁热用
6、分装漏斗进行分装试管，装入试管高度的装入试管高度的1/51/4，分装时应注意不，分装时应注意不得使培养基粘在试管的口壁上，以防污染杂菌得使培养基粘在试管的口壁上，以防污染杂菌。第7页，共17页，编辑于2022年，星期三高压灭菌高压灭菌1、将菌种置于手提式高压灭菌锅内，压强、将菌种置于手提式高压灭菌锅内，压强为为1.2-1.5kg/cm2g下灭菌下灭菌25分钟。分钟。摆培养基斜摆培养基斜面面2、将灭好菌的培养基趁热取出，摆成、将灭好菌的培养基趁热取出，摆成30度度左右的斜面。左右的斜面。包扎成捆包扎成捆塞好棉花塞，塞好棉花塞，5-8支包扎成一捆。支包扎成一捆。第8页，共17页，编辑于2022年，
7、星期三四、菌种分离和培养四、菌种分离和培养关键：无菌操作关键：无菌操作第9页，共17页，编辑于2022年，星期三1、菌种分离设备：、菌种分离设备：接种室内有接种箱、或超净工作台及相应的接种工具。接种室内有接种箱、或超净工作台及相应的接种工具。注：接种工具要在培养灭菌时用牛皮纸包好置于高压灭菌锅中灭注：接种工具要在培养灭菌时用牛皮纸包好置于高压灭菌锅中灭菌，接种室和接种箱用气雾熏蒸剂进行熏蒸消毒，工作人员的菌，接种室和接种箱用气雾熏蒸剂进行熏蒸消毒，工作人员的手要用手要用75%酒精消毒。酒精消毒。第10页，共17页，编辑于2022年，星期三2、什么是组织分离？、什么是组织分离？3、组织分离有什么
8、好处？、组织分离有什么好处？菇体组织是菌丝的扭结物，具有很强的再生能力，将它菇体组织是菌丝的扭结物，具有很强的再生能力，将它移接在母种培养基上。经过适温培养，即可得到能保持移接在母种培养基上。经过适温培养，即可得到能保持原来菌株性状的母种。因此，用组织分离方法得到的菌原来菌株性状的母种。因此，用组织分离方法得到的菌丝体，如经过生产实践证明性状优良，即可做母种使用。丝体，如经过生产实践证明性状优良，即可做母种使用。所谓组织分离，是指取菇体或耳片一小部分组织进行所谓组织分离，是指取菇体或耳片一小部分组织进行分离培养菌种的方法。分离培养菌种的方法。第11页，共17页，编辑于2022年，星期三4、组织
9、分离和接种操作：、组织分离和接种操作：选择生长旺盛，强壮的幼菇，用解剖刀在菇盖选择生长旺盛，强壮的幼菇，用解剖刀在菇盖与菇柄交接处刻一与菇柄交接处刻一“田田”字，然后靠近火焰旁，字，然后靠近火焰旁，用接种针从用接种针从“田田”字中心处钩取一小块菌肉组织，迅字中心处钩取一小块菌肉组织，迅速移入培养基斜面中央，抽出接种针，塞上棉塞。速移入培养基斜面中央，抽出接种针，塞上棉塞。如下图如下图第12页，共17页，编辑于2022年，星期三5、菌丝培养、菌丝培养：在在25下下,遮光培养一遮光培养一5-7天天,白色粗壮的菌丝即可长满斜面。白色粗壮的菌丝即可长满斜面。注意：注意：12天后，天后，检查有无检查有无
10、污染，发污染，发现污染及现污染及时挑出时挑出 第13页，共17页，编辑于2022年，星期三6、菌种质量检查：、菌种质量检查：通过培养，在试管斜面上长出洁白、粗壮的菌丝体，说明接种成功。通过培养，在试管斜面上长出洁白、粗壮的菌丝体，说明接种成功。若在试管斜面上出现有光泽、粘液状培养物或呈黄、绿、灰、黑等若在试管斜面上出现有光泽、粘液状培养物或呈黄、绿、灰、黑等毛状物时，即是污染，不能使用。优良菌种的感观应具备毛状物时，即是污染，不能使用。优良菌种的感观应具备“纯、正、纯、正、壮、润、香壮、润、香”的特点。而菌种生产性能的特点。而菌种生产性能(产量高低、品质优劣、抗产量高低、品质优劣、抗逆性强弱逆
11、性强弱)的考核，通常只有根据栽培试验的结果才能得出结论。的考核，通常只有根据栽培试验的结果才能得出结论。“纯纯”指菌种的纯度高，无感染杂菌，无斑块，无抑制线，无指菌种的纯度高，无感染杂菌，无斑块，无抑制线，无“退菌、断退菌、断菌菌”现象。现象。“正正”指菌丝生长无异常，具有亲本正宗的特点。指菌丝生长无异常，具有亲本正宗的特点。“壮壮”指菌丝发育粗壮，长势旺盛，有力。指菌丝发育粗壮，长势旺盛，有力。“润润”指菌种含水量适中，无干缩、松散现象。指菌种含水量适中，无干缩、松散现象。“香香”指具有品种特有的香味，无异味。指具有品种特有的香味，无异味。第14页，共17页，编辑于2022年，星期三五、菌种继代培养：五、菌种继代培养：从分离获得的菌种中选取无污染、长势旺盛的试管进行继代培养。从分离获得的菌种中选取无污染、长势旺盛的试管进行继代培养。目的目的目的目的方法方法注意注意第15页，共17页，编辑于2022年，星期三六、母种的保存：六、母种的保存：方法有三种：方法有三种：第16页，共17页，编辑于2022年，星期三第17页，共17页，编辑于2022年，星期三