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1、生物化学实验11 氨基酸总量的测定-甲醛法电子课件 生物化学实验技术生物化学实验技术氨基酸总量的测定（甲醛法）实验类型：验证性实验类型：验证性实验类型：验证性实验类型：验证性教学时数：教学时数：教学时数：教学时数：3 3生物化学实验技术一、实验目的一、实验目的 学习学习用指示剂滴定法测定氨基酸含量。用指示剂滴定法测定氨基酸含量。生物化学实验技术二、实验二、实验原理原理（一）单指示剂甲醛滴定法（一）单指示剂甲醛滴定法 氨氨基基酸酸具具有有酸酸、碱碱两两重重性性质质，因因为为氨氨基基酸酸含含有有-COOH显显示示酸酸性性，又又含含有有-NH2显显示示碱碱性性。由由于于这这二二者者的的相相互互作作用
2、用，使使氨氨基基酸酸成成为为中中性性的的内内盐盐。当当加加入入甲甲醛醛溶溶液液时时，-NH2与与甲甲醛醛结结合合，其其碱碱性性消消失失，破破坏坏内内盐盐的的存存在在，就就可可用用碱碱来来滴滴定定-COOH，以间接方法测定氨基酸的，以间接方法测定氨基酸的量。量。生物化学实验技术（二）双指示剂甲醛滴定法（二）双指示剂甲醛滴定法 与与单单色色法法相相同同，只只是是在在此此法法中中使使用用了了两两种种指指示示剂剂。从从分分析析结结果果看看，双双指指示示剂剂甲甲醛醛滴滴定定法法与与亚亚硝硝酸酸氮氮气气容容量量法法相相近近。单单色色滴滴定定法法稍稍偏偏低低，主主要要因因为为单单指指示示剂剂甲甲醛醛滴滴定定
3、法法是是以以氨氨基基酸酸溶溶液液pH值值作作为为麝麝香香草草酚酚酞酞的的终终点点。pH值值在在9.2，而而双双指指示示剂剂是是以以氨氨基基酸酸溶溶液液的的pH值值作作为为中中性性红红的的终终点点，pH值值为为7.0，从从理理论论计计算算看看，双双色色滴滴定定法较为准确。法较为准确。生物化学实验技术三、仪器与试剂三、仪器与试剂1、仪器：铁架台、滴定管、烧杯、锥形瓶、仪器：铁架台、滴定管、烧杯、锥形瓶2、试剂：、试剂：40%中性甲醛溶液，中性甲醛溶液，0.1%麝香草酚麝香草酚酞乙醇溶液，酞乙醇溶液，0.100N氢氧化钠标准溶液，氢氧化钠标准溶液，0.1%中性红（中性红（50%乙醇溶液）。乙醇溶液）
4、。生物化学实验技术四、实验内容四、实验内容（一）单指示剂甲醛滴定法（一）单指示剂甲醛滴定法 称称取一定量样品（约含取一定量样品（约含20mg左右的氨基酸）左右的氨基酸）于烧杯于烧杯中，中，加加23滴指示剂，用滴指示剂，用0.100N NaOH溶溶液滴定至淡蓝色。加入中性甲醛液滴定至淡蓝色。加入中性甲醛20mL，摇匀，摇匀，静置静置1min，此时蓝色应消失。再用，此时蓝色应消失。再用0.100N NaOH溶液滴定至淡蓝色。记录两次滴定所消溶液滴定至淡蓝色。记录两次滴定所消耗的碱液毫升数，用下述公式耗的碱液毫升数，用下述公式计算：计算：生物化学实验技术氨基酸态氮氨基酸态氮()=(NV0.01410
5、0)/W NNaOH标准溶液当量浓渡。标准溶液当量浓渡。VNaOH标准溶液消耗的总量标准溶液消耗的总量(mL)W样品样品溶液相当样品重量溶液相当样品重量(g)0.014氮氮的毫克的毫克当量当量生物化学实验技术（二）双指示剂甲醛滴定法（二）双指示剂甲醛滴定法 取取相同的两份样品，分别注入相同的两份样品，分别注入100mL三角三角烧瓶中烧瓶中，一份加入中性红指示剂一份加入中性红指示剂23滴，用滴，用0.100N NaOH溶液滴定终点溶液滴定终点(由红变琥珀色由红变琥珀色)，记录记录用量用量。另另一份加入麝香草酚酞一份加入麝香草酚酞3滴和中性滴和中性甲醛甲醛20mL，摇匀，以，摇匀，以0.100N NaOH准溶液滴准溶液滴定至淡蓝色。按下述公式定至淡蓝色。按下述公式计算计算：生物化学实验技术氨基酸氨基酸态氮态氮(%)=N(V2-V1)0.014 /W100 V2用用麝香草酚酞为指示剂时标准碱液消麝香草酚酞为指示剂时标准碱液消耗量耗量(mL)V1用用中性红作指示剂时碱液的消耗量中性红作指示剂时碱液的消耗量(mL)N标准标准碱液当量浓度。碱液当量浓度。0.014氮氮的毫克当量。的毫克当量。