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1、常用化学药品检验方法检验仪器的使用 化学药品检验室化学药品检验室内容：n n高效液相色谱仪器n n（高效液相）色谱理论n n滴定分析法高效液相色谱仪高效液相色谱仪一、结构示意图一、结构示意图.二、部件介绍二、部件介绍一般由输液泵、进样器、一般由输液泵、进样器、一般由输液泵、进样器、一般由输液泵、进样器、色谱柱、检测器、数据记录色谱柱、检测器、数据记录色谱柱、检测器、数据记录色谱柱、检测器、数据记录及处理装置等组成。及处理装置等组成。及处理装置等组成。及处理装置等组成。现在的仪器还一般配置有现在的仪器还一般配置有现在的仪器还一般配置有现在的仪器还一般配置有在线脱气机、自动进样器、在线脱气机、自动
2、进样器、在线脱气机、自动进样器、在线脱气机、自动进样器、柱温箱等。制备型柱温箱等。制备型柱温箱等。制备型柱温箱等。制备型HPLCHPLC仪还配备有自动馏分收集装仪还配备有自动馏分收集装仪还配备有自动馏分收集装仪还配备有自动馏分收集装置。置。置。置。泵n n恒压泵、恒流泵。恒流泵按结构又可分为螺旋注射泵、恒压泵、恒流泵。恒流泵按结构又可分为螺旋注射泵、恒压泵、恒流泵。恒流泵按结构又可分为螺旋注射泵、恒压泵、恒流泵。恒流泵按结构又可分为螺旋注射泵、柱塞往复泵和隔膜往复泵。目前应用的根本上是柱塞柱塞往复泵和隔膜往复泵。目前应用的根本上是柱塞柱塞往复泵和隔膜往复泵。目前应用的根本上是柱塞柱塞往复泵和隔
3、膜往复泵。目前应用的根本上是柱塞往复泵。（单元泵、四元泵、高压二元泵）往复泵。（单元泵、四元泵、高压二元泵）往复泵。（单元泵、四元泵、高压二元泵）往复泵。（单元泵、四元泵、高压二元泵）n n柱塞往复泵使用时的本卷须知：柱塞往复泵使用时的本卷须知：柱塞往复泵使用时的本卷须知：柱塞往复泵使用时的本卷须知：1 1 防止固体微粒进入泵体造成磨损。防止固体微粒进入泵体造成磨损。防止固体微粒进入泵体造成磨损。防止固体微粒进入泵体造成磨损。2 2 流动相不应含有对泵体造成腐蚀的化学物质。流动相不应含有对泵体造成腐蚀的化学物质。流动相不应含有对泵体造成腐蚀的化学物质。流动相不应含有对泵体造成腐蚀的化学物质。3
4、 3 泵空转也会磨损柱塞，防止流动相跑空。泵空转也会磨损柱塞，防止流动相跑空。泵空转也会磨损柱塞，防止流动相跑空。泵空转也会磨损柱塞，防止流动相跑空。4 4 压力过高会使密封环变形，产生漏液。压力过高会使密封环变形，产生漏液。压力过高会使密封环变形，产生漏液。压力过高会使密封环变形，产生漏液。5 5 防止流动相中析出盐晶，应开启柱塞冲洗功能。防止流动相中析出盐晶，应开启柱塞冲洗功能。防止流动相中析出盐晶，应开启柱塞冲洗功能。防止流动相中析出盐晶，应开启柱塞冲洗功能。进样器n n主要部件为定量环及六通阀。主要部件为定量环及六通阀。主要部件为定量环及六通阀。主要部件为定量环及六通阀。n n使用时应
5、注意：使用时应注意：使用时应注意：使用时应注意：1 1 样品溶液进样前必须用样品溶液进样前必须用样品溶液进样前必须用样品溶液进样前必须用0.45m0.45m0.45m0.45m滤膜过滤，以减少微粒滤膜过滤，以减少微粒滤膜过滤，以减少微粒滤膜过滤，以减少微粒对进样阀的磨损对进样阀的磨损对进样阀的磨损对进样阀的磨损2 2 2 2 进样量应不大于定量环体积的进样量应不大于定量环体积的进样量应不大于定量环体积的进样量应不大于定量环体积的50%50%50%50%3 3 3 3 每次分析结束后应冲洗进样阀，现在大局部进样器能每次分析结束后应冲洗进样阀，现在大局部进样器能每次分析结束后应冲洗进样阀，现在大局
6、部进样器能每次分析结束后应冲洗进样阀，现在大局部进样器能自动实现此功能。自动实现此功能。自动实现此功能。自动实现此功能。n n局部自动进样器还能实现柱前衍生化等操作。局部自动进样器还能实现柱前衍生化等操作。局部自动进样器还能实现柱前衍生化等操作。局部自动进样器还能实现柱前衍生化等操作。（AgilentAgilentAgilentAgilent）色谱柱n n色谱柱是色谱系统的心脏。对色谱柱的要求是柱效高、色谱柱是色谱系统的心脏。对色谱柱的要求是柱效高、色谱柱是色谱系统的心脏。对色谱柱的要求是柱效高、色谱柱是色谱系统的心脏。对色谱柱的要求是柱效高、选择性好、分析速度快等。选择性好、分析速度快等。选
7、择性好、分析速度快等。选择性好、分析速度快等。n n使用色谱柱时应本卷须知：使用色谱柱时应本卷须知：使用色谱柱时应本卷须知：使用色谱柱时应本卷须知：1 1 防止压力和温度的急剧变化及任何机械震动。防止压力和温度的急剧变化及任何机械震动。防止压力和温度的急剧变化及任何机械震动。防止压力和温度的急剧变化及任何机械震动。2 2 应逐渐改变溶剂的组成，不应直接从有机溶剂改变为全应逐渐改变溶剂的组成，不应直接从有机溶剂改变为全应逐渐改变溶剂的组成，不应直接从有机溶剂改变为全应逐渐改变溶剂的组成，不应直接从有机溶剂改变为全部是水，反之亦然。部是水，反之亦然。部是水，反之亦然。部是水，反之亦然。3 3 一般
8、不能反冲，否则会迅速降低柱效。一般不能反冲，否则会迅速降低柱效。一般不能反冲，否则会迅速降低柱效。一般不能反冲，否则会迅速降低柱效。4 4 使用适宜的流动相（尤其是使用适宜的流动相（尤其是使用适宜的流动相（尤其是使用适宜的流动相（尤其是pHpH），以防止固定相被破），以防止固定相被破），以防止固定相被破），以防止固定相被破坏。坏。坏。坏。5 5 流动相应先脱气，防止气泡进入柱体。流动相应先脱气，防止气泡进入柱体。流动相应先脱气，防止气泡进入柱体。流动相应先脱气，防止气泡进入柱体。6 6 测试基质复杂的样品时，应用保护柱。测试基质复杂的样品时，应用保护柱。测试基质复杂的样品时，应用保护柱。测试基
9、质复杂的样品时，应用保护柱。7 7 定期用强溶剂冲洗色谱柱，去除驻留在柱内的杂质。定期用强溶剂冲洗色谱柱，去除驻留在柱内的杂质。定期用强溶剂冲洗色谱柱，去除驻留在柱内的杂质。定期用强溶剂冲洗色谱柱，去除驻留在柱内的杂质。8 8 保存色谱柱时应将柱内充满乙腈或甲醇后塞紧。保存色谱柱时应将柱内充满乙腈或甲醇后塞紧。保存色谱柱时应将柱内充满乙腈或甲醇后塞紧。保存色谱柱时应将柱内充满乙腈或甲醇后塞紧。高效液相色谱的主要类型及其别离原理高效液相色谱的主要类型及其别离原理类型类型类型类型（按固定相分子聚集状态和别离机制分）（按固定相分子聚集状态和别离机制分）（按固定相分子聚集状态和别离机制分）（按固定相分
10、子聚集状态和别离机制分）：分配色谱分配色谱(液液-液色谱液色谱)；吸附色谱；吸附色谱(液液-固色谱固色谱)；离；离子交换色谱；空间排阻色谱；亲和色谱等。子交换色谱；空间排阻色谱；亲和色谱等。一、液一、液一、液一、液-液色谱液色谱液色谱液色谱（一）反相键合相色谱（一）反相键合相色谱（一）反相键合相色谱（一）反相键合相色谱 化学键合相：利用化学反响将固定液的官能团键合在载体化学键合相：利用化学反响将固定液的官能团键合在载体外表外表 特点：特点：不易流失不易流失 热稳定性好热稳定性好 化学性能好化学性能好 载样量大载样量大 适于梯度洗脱适于梯度洗脱 1别离机制：分配+吸附疏溶剂理论疏溶剂理论疏溶剂理
11、论疏溶剂理论 流动相与溶质排斥力越强，作用时间流动相与溶质排斥力越强，作用时间流动相与溶质排斥力越强，作用时间流动相与溶质排斥力越强，作用时间 ，k k，组分，组分，组分，组分t tR R 流动相与溶质排斥力越弱，作用时间流动相与溶质排斥力越弱，作用时间流动相与溶质排斥力越弱，作用时间流动相与溶质排斥力越弱，作用时间，k k，组分，组分，组分，组分t tR R 2 2固定相：极性小的烷基键合相固定相：极性小的烷基键合相固定相：极性小的烷基键合相固定相：极性小的烷基键合相 C C C C8 8 8 8柱，柱，柱，柱，C C C C18181818柱（十八烷基柱（十八烷基柱（十八烷基柱（十八烷基O
12、ctadecylsilylOctadecylsilylOctadecylsilylOctadecylsilyl，简称，简称，简称，简称ODS ODS ODS ODS）3 3流动相：极性大的甲醇流动相：极性大的甲醇流动相：极性大的甲醇流动相：极性大的甲醇-水或乙腈水或乙腈水或乙腈水或乙腈-水水水水 流动相极性流动相极性流动相极性流动相极性 固定相极性固定相极性固定相极性固定相极性 （RPRPRPRP）底剂底剂底剂底剂+有机调节剂（极性调节剂）有机调节剂（极性调节剂）有机调节剂（极性调节剂）有机调节剂（极性调节剂）n n 例：水（缓冲盐溶液）例：水（缓冲盐溶液）例：水（缓冲盐溶液）例：水（缓冲盐溶
13、液）+甲醇，乙腈，甲醇，乙腈，甲醇，乙腈，甲醇，乙腈，THFTHFTHFTHF4 4流动相极性与流动相极性与流动相极性与流动相极性与k k的关系：的关系：的关系：的关系：流动相极性流动相极性流动相极性流动相极性，洗脱能力，洗脱能力，洗脱能力，洗脱能力，kk，组分，组分，组分，组分t tR R 5 5出柱顺序：出柱顺序：出柱顺序：出柱顺序：极性大的组分先出柱极性大的组分先出柱极性大的组分先出柱极性大的组分先出柱 极性小的组分后出柱极性小的组分后出柱极性小的组分后出柱极性小的组分后出柱6 6适用：适用：适用：适用：非极性非极性非极性非极性 中等极性组分中等极性组分中等极性组分中等极性组分（二）正相
14、键合相色谱1 1别离机制：别离机制：别离机制：别离机制：溶质分子与固定相之间定向作用力、溶质分子与固定相之间定向作用力、溶质分子与固定相之间定向作用力、溶质分子与固定相之间定向作用力、诱导力、或氢键作用力（有分配和吸附两种说法）诱导力、或氢键作用力（有分配和吸附两种说法）诱导力、或氢键作用力（有分配和吸附两种说法）诱导力、或氢键作用力（有分配和吸附两种说法）2 2固固固固定定定定相相相相：极极极极性性性性大大大大的的的的氰氰氰氰基基基基、氨氨氨氨基基基基、二二二二氨氨氨氨基基基基、芳芳芳芳硝硝硝硝基基基基等等等等键键键键合合合合相相相相3 3流动相：流动相：流动相：流动相：极性小（同极性小（同
15、极性小（同极性小（同LSCLSC）底剂底剂底剂底剂 +有机极性调节剂有机极性调节剂有机极性调节剂有机极性调节剂 n n 例：正己烷例：正己烷例：正己烷例：正己烷 +氯仿氯仿氯仿氯仿-甲醇，氯仿甲醇，氯仿甲醇，氯仿甲醇，氯仿-乙醇乙醇乙醇乙醇4 4流动相极性与流动相极性与流动相极性与流动相极性与k k的关系：的关系：的关系：的关系：流动相极性流动相极性流动相极性流动相极性，洗脱能力，洗脱能力，洗脱能力，洗脱能力，组分，组分，组分，组分t tR R，kk5 5出出出出柱柱柱柱顺顺顺顺序序序序：结结结结构构构构相相相相近近近近组组组组分分分分，极极极极性性性性小小小小的的的的组组组组分分分分先先先先
16、出出出出柱柱柱柱极极极极性大的组分后出柱性大的组分后出柱性大的组分后出柱性大的组分后出柱6 6适用：适用：适用：适用：n n 氰氰氰氰基基基基键键键键合合合合相相相相与与与与硅硅硅硅胶胶胶胶的的的的柱柱柱柱选选选选择择择择性性性性相相相相似似似似（极极极极性性性性稍稍稍稍小小小小），别离物质也相似别离物质也相似别离物质也相似别离物质也相似n n 氨氨氨氨基基基基键键键键合合合合相相相相与与与与硅硅硅硅胶胶胶胶性性性性质质质质差差差差异异异异大大大大，碱碱碱碱性性性性，分分分分析析析析极极极极性性性性大大大大物质、酚、羧酸、核苷酸、糖类、氨基酸等物质、酚、羧酸、核苷酸、糖类、氨基酸等物质、酚、羧
17、酸、核苷酸、糖类、氨基酸等物质、酚、羧酸、核苷酸、糖类、氨基酸等n n（也也也也可可可可用用用用作作作作反反反反相相相相固固固固定定定定相相相相，氨氨氨氨基基基基柱柱柱柱不不不不能能能能用用用用于于于于别别别别离离离离甾甾甾甾酮酮酮酮、复复复复原原原原糖）糖）糖）糖）二二.液液-固色谱法（或液固色谱法（或液-固吸附色谱法）固吸附色谱法）1.1.特点：流动相为液体，固定相为吸附相。特点：流动相为液体，固定相为吸附相。2.2.别离机制：别离机制：X Xm m+nS+nSa a=X=Xa a+nS+nSm m K=X K=Xa aSSm m n n/X/Xm mSSa a n n3.3.结论：结论：
18、显然，分配系数大的组分，吸附剂对它的吸附显然，分配系数大的组分，吸附剂对它的吸附力强，保存值就大。力强，保存值就大。4.4.作用：作用：a.a.适用别离相对分子质量中等油性试样。适用别离相对分子质量中等油性试样。b.b.对对具具有有不不同同官官能能团团的的化化合合物物和和异异构构体体有有较较高高的选择性。的选择性。缺点：由于非线性等温吸附常引起峰的拖尾现象。缺点：由于非线性等温吸附常引起峰的拖尾现象。三三.离子交换色谱法离子交换色谱法 1.1.1.1.别离机制；离子与离子别离机制；离子与离子别离机制；离子与离子别离机制；离子与离子之间的电荷吸引力之间的电荷吸引力 2.2.2.2.适用范围；凡能
19、在溶剂中电离的物质一般均可用该法进适用范围；凡能在溶剂中电离的物质一般均可用该法进适用范围；凡能在溶剂中电离的物质一般均可用该法进适用范围；凡能在溶剂中电离的物质一般均可用该法进行别离。行别离。行别离。行别离。3.3.3.3.交换：交换：交换：交换：K K K KX X X X=-NR=-NR=-NR=-NR4 4 4 4+X X X X-ClClClCl-/-NR/-NR/-NR/-NR4 4 4 4+ClClClCl-XXXX-D D D DX X X X=-NR=-NR=-NR=-NR4 4 4 4+X X X X-/X/X/X/X-=K=K=K=KX X X X-NR-NR-NR-NR
20、4 4 4 4+ClClClCl-/Cl/Cl/Cl/Cl-4.4.4.4.结论：结论：结论：结论：a.a.a.a.分配系数分配系数分配系数分配系数D D D D愈大，表示溶质的离子与离子交换愈大，表示溶质的离子与离子交换愈大，表示溶质的离子与离子交换愈大，表示溶质的离子与离子交换剂的相互作用愈强。剂的相互作用愈强。剂的相互作用愈强。剂的相互作用愈强。b.b.b.b.亲合力高的，在柱中保存值就愈大。亲合力高的，在柱中保存值就愈大。亲合力高的，在柱中保存值就愈大。亲合力高的，在柱中保存值就愈大。5.5.5.5.应用：应用：应用：应用：a.a.a.a.别离离子或可离解的化合物。别离离子或可离解的化
21、合物。别离离子或可离解的化合物。别离离子或可离解的化合物。b.b.b.b.主要用于分析有机酸、氨基酸、核酸、多肽等主要用于分析有机酸、氨基酸、核酸、多肽等主要用于分析有机酸、氨基酸、核酸、多肽等主要用于分析有机酸、氨基酸、核酸、多肽等。离子对色谱法离子对色谱法 1.1.1.1.特点：特点：特点：特点：别离效能高，分析速度快，操作简便别离效能高，分析速度快，操作简便别离效能高，分析速度快，操作简便别离效能高，分析速度快，操作简便.2.2.2.2.别离机制：别离机制：别离机制：别离机制：又称偶离子色谱法，是液液色谱法的分又称偶离子色谱法，是液液色谱法的分又称偶离子色谱法，是液液色谱法的分又称偶离子
22、色谱法，是液液色谱法的分支。它是根据被测组别离子与离子对试剂离子形成中性支。它是根据被测组别离子与离子对试剂离子形成中性支。它是根据被测组别离子与离子对试剂离子形成中性支。它是根据被测组别离子与离子对试剂离子形成中性的离子对化合物后，在非极性固定相中溶解度增大，从的离子对化合物后，在非极性固定相中溶解度增大，从的离子对化合物后，在非极性固定相中溶解度增大，从的离子对化合物后，在非极性固定相中溶解度增大，从而使其别离效果改善。而使其别离效果改善。而使其别离效果改善。而使其别离效果改善。3.3.3.3.别离过程：别离过程：别离过程：别离过程：X X X X+水相水相水相水相+Y+Y+Y+Y水相水相
23、水相水相 X X X X+Y Y Y Y水相水相水相水相 K K K KXYXYXYXY=X X X X+Y Y Y Y 有机相有机相有机相有机相/X X X X+水相水相水相水相 Y Y Y Y 水相水相水相水相 D D D DX X X X=X X X X+Y Y Y Y 有机相有机相有机相有机相/X/X/X/X+水相水相水相水相=K=K=K=KXYXYXYXY Y Y Y Y 水相水相水相水相 4.4.4.4.a.a.a.a.可用可用可用可用C C C C18181818、C C C C8 8 8 8等常用色谱柱；等常用色谱柱；等常用色谱柱；等常用色谱柱；b.b.b.b.庚烷磺酸钠等离子
24、对试剂价格贵庚烷磺酸钠等离子对试剂价格贵庚烷磺酸钠等离子对试剂价格贵庚烷磺酸钠等离子对试剂价格贵.5.5.5.5.应应应应用用用用：解解解解决决决决了了了了以以以以往往往往难难难难别别别别离离离离混混混混合合合合物物物物的的的的别别别别离离离离问问问问题题题题.主主主主要要要要用用用用于于于于分析离子强度大的酸碱物质。（三聚氰胺）分析离子强度大的酸碱物质。（三聚氰胺）分析离子强度大的酸碱物质。（三聚氰胺）分析离子强度大的酸碱物质。（三聚氰胺）离子对色谱别离过程示意图 四、离子色谱法四、离子色谱法四、离子色谱法四、离子色谱法 1.1.1.1.固定相固定相固定相固定相:离子交换树脂，离子交换树脂，
25、常用苯常用苯 乙烯与二乙烯交联形成的聚合物骨乙烯与二乙烯交联形成的聚合物骨 架，在外表未端芳环上接上羧基、架，在外表未端芳环上接上羧基、磺酸基（称阳离子交换树脂）或季磺酸基（称阳离子交换树脂）或季 铵基（阴离子交换树脂）。铵基（阴离子交换树脂）。流动相流动相流动相流动相:电解质溶液电解质溶液电解质溶液电解质溶液 检测器检测器检测器检测器:电导检测器，安培电导检测器，安培电导检测器，安培电导检测器，安培 主配件：抑制柱主配件：抑制柱主配件：抑制柱主配件：抑制柱 2.2.2.2.流程图：流程图：流程图：流程图：fig3-2fig3-2fig3-2fig3-2 3.3.3.3.分类分类分类分类 a.
26、a.a.a.双柱型：化学抑制型离子色谱法；双柱型：化学抑制型离子色谱法；双柱型：化学抑制型离子色谱法；双柱型：化学抑制型离子色谱法；b.b.b.b.单柱型：非抑制型，用低电导的洗脱液；单柱型：非抑制型，用低电导的洗脱液；单柱型：非抑制型，用低电导的洗脱液；单柱型：非抑制型，用低电导的洗脱液；4.4.4.4.别离机制别离机制别离机制别离机制 （阴离子为例）（阴离子为例）（阴离子为例）（阴离子为例）被别离组分在色谱柱上别离原理是树脂上可电离离子与流被别离组分在色谱柱上别离原理是树脂上可电离离子与流动相中具有相同电荷的离子及被测组分的离子进行可逆交换，动相中具有相同电荷的离子及被测组分的离子进行可逆
27、交换，根据各离子与离子交换基团具有不同的电荷吸引力而别离。根据各离子与离子交换基团具有不同的电荷吸引力而别离。5.5.5.5.应用：应用：应用：应用：从无机和有机阴离子到金属阳离子，从有机阳离子到糖类、氨从无机和有机阴离子到金属阳离子，从有机阳离子到糖类、氨基酸、多肽、核酸等均可用该法分析。基酸、多肽、核酸等均可用该法分析。n n离子色谱中发生的根本过程就是离子交换，因此，离子色谱本离子色谱中发生的根本过程就是离子交换，因此，离子色谱本质上就是离子交换色谱。质上就是离子交换色谱。n n在离子色谱的根本组成中，重要的和与其他高效液相色谱不同在离子色谱的根本组成中，重要的和与其他高效液相色谱不同的
28、就是抑制器和电导检测器，离子色谱用的泵是的就是抑制器和电导检测器，离子色谱用的泵是PEEKPEEK材料衬里材料衬里的不锈钢泵。的不锈钢泵。药典品种应用离子色谱法：l l阳离子交换柱阳离子交换柱山梨醇及制剂山梨醇及制剂甘油果糖氯化钠注射液甘油果糖氯化钠注射液甘露醇及制剂甘露醇及制剂利巴韦林及制剂利巴韦林及制剂盐酸二甲双胍及制剂盐酸二甲双胍及制剂苹果酸及制剂苹果酸及制剂富马酸及制剂富马酸及制剂l l阴离子交换柱阴离子交换柱肝素钠及制剂肝素钠及制剂帕米磷酸二钠及制剂帕米磷酸二钠及制剂氯膦酸二钠及制剂氯膦酸二钠及制剂硫酸软骨素钠及制剂硫酸软骨素钠及制剂色色谱谱柱柱类类型型品种个数品种个数阳离子交阳离子
29、交换换柱柱2323个个阴离子交阴离子交换换柱柱1414个个五、空间排阻色谱法五、空间排阻色谱法五、空间排阻色谱法五、空间排阻色谱法 1.1.1.1.固定相：凝胶固定相：凝胶固定相：凝胶固定相：凝胶 2.2.2.2.机制：类似于分子筛作用，机制：类似于分子筛作用，机制：类似于分子筛作用，机制：类似于分子筛作用，别离只与凝胶的孔径分布别离只与凝胶的孔径分布别离只与凝胶的孔径分布别离只与凝胶的孔径分布和溶质的流体力学体积和和溶质的流体力学体积和和溶质的流体力学体积和和溶质的流体力学体积和分子大小有关分子大小有关分子大小有关分子大小有关.3.3.3.3.别离示意图，别离示意图，别离示意图，别离示意图，
30、fig3-3fig3-3fig3-3fig3-3 a.a.a.a.排斥极限排斥极限排斥极限排斥极限A A A A点点点点;b.b.b.b.全渗透极限全渗透极限全渗透极限全渗透极限B B B B点点点点 相对分子质量介于上述两相对分子质量介于上述两相对分子质量介于上述两相对分子质量介于上述两个极限之间的化合物，将个极限之间的化合物，将个极限之间的化合物，将个极限之间的化合物，将按相对分子质量降低的次按相对分子质量降低的次按相对分子质量降低的次按相对分子质量降低的次序被洗脱序被洗脱序被洗脱序被洗脱.4.4.4.4.常用于别离高分子化合物，常用于别离高分子化合物，常用于别离高分子化合物，常用于别离高
31、分子化合物，如组织提取物、多肽、蛋白如组织提取物、多肽、蛋白如组织提取物、多肽、蛋白如组织提取物、多肽、蛋白质、质、质、质、核酸等。核酸等。核酸等。核酸等。2023202320232023版药典二部采用常压凝胶色谱的品种版药典二部采用常压凝胶色谱的品种版药典二部采用常压凝胶色谱的品种版药典二部采用常压凝胶色谱的品种门冬酰胺酶（埃希）门冬酰胺酶（埃希）分子量分子量500060000500060000色谱亲水改性硅胶色谱亲水改性硅胶,UV,UV,纯度纯度门冬酰胺酶（欧文）门冬酰胺酶（欧文）分子量分子量500060000500060000色谱亲水改性硅胶色谱亲水改性硅胶,UV,UV,纯度纯度注射用门
32、冬酰胺酶（埃希）注射用门冬酰胺酶（埃希）分子量分子量500060000500060000色谱亲水改性硅胶色谱亲水改性硅胶,UV,UV,纯度纯度注射用门冬酰胺酶（欧文）注射用门冬酰胺酶（欧文）分子量分子量500060000500060000色谱亲水改性硅胶色谱亲水改性硅胶,UV,UV,纯度纯度抑肽酶抑肽酶亲水的改性硅胶，高分子蛋白质亲水的改性硅胶，高分子蛋白质注射用抑肽酶注射用抑肽酶亲水的改性硅胶，高分子蛋白质亲水的改性硅胶，高分子蛋白质乌司他丁乌司他丁亲水改性硅胶，有关物质亲水改性硅胶，有关物质乌司他丁溶液乌司他丁溶液亲水改性硅胶，有关物质亲水改性硅胶，有关物质胰岛素胰岛素亲水改性硅胶，高分子
33、蛋白质亲水改性硅胶，高分子蛋白质中性胰岛素注射液中性胰岛素注射液亲水改性硅胶，高分子蛋白质亲水改性硅胶，高分子蛋白质精蛋白锌胰岛素注射液精蛋白锌胰岛素注射液亲水改性硅胶，高分子蛋白质亲水改性硅胶，高分子蛋白质2023202320232023版药典二部采用高效凝胶色谱的品种版药典二部采用高效凝胶色谱的品种版药典二部采用高效凝胶色谱的品种版药典二部采用高效凝胶色谱的品种右旋糖酐右旋糖酐2020亲水性球形高聚物，分子量与分子量分布亲水性球形高聚物，分子量与分子量分布右旋糖酐右旋糖酐2020葡萄糖注射液葡萄糖注射液亲水性球形高聚物，分子量与分子量分布亲水性球形高聚物，分子量与分子量分布右旋糖酐右旋糖酐
34、2020氯化钠注射液氯化钠注射液亲水性球形高聚物，分子量与分子量分布亲水性球形高聚物，分子量与分子量分布右旋糖酐右旋糖酐4040亲水性球形高聚物，分子量与分子量分布亲水性球形高聚物，分子量与分子量分布右旋糖酐右旋糖酐4040葡萄糖注射液葡萄糖注射液亲水性球形高聚物，分子量与分子量分布亲水性球形高聚物，分子量与分子量分布右旋糖酐右旋糖酐4040氯化钠注射液氯化钠注射液亲水性球形高聚物，分子量与分子量分布亲水性球形高聚物，分子量与分子量分布右旋糖酐右旋糖酐7070亲水性球形高聚物，分子量与分子量分布亲水性球形高聚物，分子量与分子量分布右旋糖酐右旋糖酐7070葡萄糖注射液葡萄糖注射液亲水性球形高聚物
35、，分子量与分子量分布亲水性球形高聚物，分子量与分子量分布右旋糖酐右旋糖酐7070氯化钠注射液氯化钠注射液亲水性球形高聚物，分子量与分子量分布亲水性球形高聚物，分子量与分子量分布右旋糖酐铁右旋糖酐铁亲水性球形高聚物，分子量与分子量分布亲水性球形高聚物，分子量与分子量分布右旋糖酐铁注射液右旋糖酐铁注射液亲水性球形高聚物，分子量与分子量分布亲水性球形高聚物，分子量与分子量分布头孢地嗪钠头孢地嗪钠球状蛋白色谱用亲水硅胶（分子量球状蛋白色谱用亲水硅胶（分子量100010000100010000），有关物质），有关物质注射用头孢地嗪钠注射用头孢地嗪钠球状蛋白色谱用亲水硅胶（分子量球状蛋白色谱用亲水硅胶（分
36、子量100010000100010000），有关物质），有关物质2023202320232023版药典二部采用高效凝胶色谱的品种版药典二部采用高效凝胶色谱的品种版药典二部采用高效凝胶色谱的品种版药典二部采用高效凝胶色谱的品种n1919世纪世纪7070年代中期，年代中期，HPLCHPLC仪开始出现，主要填料：仪开始出现，主要填料：10 m 10 m 的无定型硅胶颗粒。的无定型硅胶颗粒。n7070年代后期，开展了反相液相色谱。年代后期，开展了反相液相色谱。n8080年代，年代，HPLC HPLC 被广泛应用于化合物的别离，主要填料：粒径为被广泛应用于化合物的别离，主要填料：粒径为5 5 10 m
37、10 m 球形硅胶。球形硅胶。n9090年代早期，粒径为年代早期，粒径为 5 m 5 m 的高纯硅胶，即所谓的的高纯硅胶，即所谓的 B B 型硅胶被开展，并成为型硅胶被开展，并成为这个行业填料的标准，这种这个行业填料的标准，这种 B B 型硅胶含有微量的金属。型硅胶含有微量的金属。n9090年代后期，为了满足快速别离的需求，开展了年代后期，为了满足快速别离的需求，开展了 3 m 3 m 或或 3.5 m 3.5 m 的球形硅胶，的球形硅胶，其作用和性能逐渐的获得了人们的认同和接受。手性色谱柱的开辟。其作用和性能逐渐的获得了人们的认同和接受。手性色谱柱的开辟。n2121世纪早期，为适应超快速的别
38、离要求，粒径小于世纪早期，为适应超快速的别离要求，粒径小于 2 m 2 m 的填料被开辟出来，的填料被开辟出来，开展出了整体柱、无机和有机杂化硅胶。开展出了整体柱、无机和有机杂化硅胶。n目前，市场上流行的分析用的目前，市场上流行的分析用的 HPLC HPLC 硅胶基质填料主要为硅胶基质填料主要为 B B 型硅胶。型硅胶。填料开展史填料开展史填料开展史填料开展史无定形硅胶和键合相硅胶示意图：填料开展史填料开展史填料开展史填料开展史色谱法的应用：液相色谱常用检测器n n光学检测器：紫外、荧光、示差折光、蒸发光散射光学检测器：紫外、荧光、示差折光、蒸发光散射（通用型检测器）（通用型检测器）n n电化
39、学检测器：极谱、库仑、安培电化学检测器：极谱、库仑、安培n n电学检测器：电导、介电常数电学检测器：电导、介电常数n n质谱检测器质谱检测器n n选择性检测器：灵敏度较高选择性检测器：灵敏度较高检测检测器器类类型型品种个数品种个数紫外紫外检测检测器器13331333个个蒸蒸蒸蒸发发发发光散射光散射光散射光散射检测检测检测检测器器器器2828个个示差示差检测检测器器1010个个电导检测电导检测器器5 5个个20232023版药典二部采用检测器情况版药典二部采用检测器情况色谱法的应用：蒸发光散射检测器n n优点：优点：优点：优点：n n适用于没有特征紫外汲取或紫外汲取很弱的待测物，使适用于没有特征
40、紫外汲取或紫外汲取很弱的待测物，使用用UVUV时灵敏度更低；无需衍生化而直接测定，防止了时灵敏度更低；无需衍生化而直接测定，防止了衍生带来的误差。衍生带来的误差。n n可以应用有强紫外汲取的试剂，如氯仿、丙酮等。可以应用有强紫外汲取的试剂，如氯仿、丙酮等。n n适用于组分复杂样品的分析，可以进行梯度洗脱，基线适用于组分复杂样品的分析，可以进行梯度洗脱，基线平稳。平稳。n n通用型检测器，只要待测物挥发性低于溶剂，即可适用。通用型检测器，只要待测物挥发性低于溶剂，即可适用。对不同物质，对不同物质，ELSDELSD相应因子的变化比其它检测器要小相应因子的变化比其它检测器要小得多。得多。n n对环境
41、影响不灵敏，室温下即可操作。对环境影响不灵敏，室温下即可操作。n n没有溶剂前缘峰，适用于保存时间短的物质的检测。没有溶剂前缘峰，适用于保存时间短的物质的检测。n n与与LC-MSLC-MS的色谱条件一致，可直接进行方法转换。的色谱条件一致，可直接进行方法转换。色谱法的应用：蒸发光散射检测器n n影响影响影响影响ELSDELSD响应的因素响应的因素响应的因素响应的因素n n载气流速、雾化器设计与温度、流动相的组成和流速等载气流速、雾化器设计与温度、流动相的组成和流速等影响雾化过程。影响雾化过程。n n被分析物的浓度和体积质量决定了进入光散射池的气溶被分析物的浓度和体积质量决定了进入光散射池的气
42、溶胶中的颗粒的直径。胶中的颗粒的直径。n n被分析物的折射指数、光源发出的光的强度和波长、光被分析物的折射指数、光源发出的光的强度和波长、光电倍增管的位置等影响散射光强度。电倍增管的位置等影响散射光强度。n n光电倍增管的灵敏度和入射光的强度决定了检测的效率，光电倍增管的灵敏度和入射光的强度决定了检测的效率，反映为实验者所观测的峰面积。反映为实验者所观测的峰面积。20232023版药典二部应用蒸发光散射检测器的品种版药典二部应用蒸发光散射检测器的品种妥布霉素妥布霉素硫酸硫酸庆庆大霉素大霉素妥布霉素滴眼液妥布霉素滴眼液硫酸硫酸庆庆大霉素注射液大霉素注射液硫酸妥布霉素注射液硫酸妥布霉素注射液硫酸奈
43、替米星硫酸奈替米星硫酸奈替米星硫酸奈替米星硫酸小硫酸小诺诺霉素霉素硫酸奈替米星注射液硫酸奈替米星注射液硫酸小硫酸小诺诺霉素口服溶液霉素口服溶液硫酸依替米星硫酸依替米星硫酸小硫酸小诺诺霉素片霉素片硫酸依替米星注射液硫酸依替米星注射液硫酸小硫酸小诺诺霉素注射液霉素注射液注射用硫酸依替米星注射用硫酸依替米星硫酸巴硫酸巴龙龙霉素霉素硫酸核糖霉素硫酸核糖霉素硫酸卡那霉素硫酸卡那霉素注射用硫酸核糖霉素注射用硫酸核糖霉素硫酸卡那霉素注射液硫酸卡那霉素注射液硫酸硫酸链链霉素霉素硫酸卡那霉素滴眼液硫酸卡那霉素滴眼液注射用硫酸注射用硫酸链链霉素霉素注射用硫酸卡那霉素注射用硫酸卡那霉素大豆磷脂大豆磷脂硫酸西索米星硫
44、酸西索米星硫酸西索米星硫酸西索米星胆固醇胆固醇硫酸西索米星注射液硫酸西索米星注射液蛋黄卵磷脂蛋黄卵磷脂色谱法的应用：蒸发光散射检测器图图 硫酸核糖霉素有关物质色谱图硫酸核糖霉素有关物质色谱图（蒸发管温度：（蒸发管温度：6565，分流模式），分流模式）总杂质：5.26%色谱法的应用：蒸发光散射检测器图图 硫酸核糖霉素有关物质色谱图硫酸核糖霉素有关物质色谱图（蒸发管温度：（蒸发管温度：110110，不分流模式），不分流模式）总杂质：4.18%蒸发光散射检测器应用要点：n n谨慎使用，充分优化实验条件。谨慎使用，充分优化实验条件。谨慎使用，充分优化实验条件。谨慎使用，充分优化实验条件。企业质控人员和
45、药检企业质控人员和药检所人员均需要所人员均需要。n n漂移管温度的优化漂移管温度的优化漂移管温度的优化漂移管温度的优化：温度对响应值的影响无明显的规：温度对响应值的影响无明显的规律性。最优温度为在流动相根本挥发的根底上，产生律性。最优温度为在流动相根本挥发的根底上，产生可接受噪音的最低温度。可接受噪音的最低温度。n n雾化气流速的优化雾化气流速的优化雾化气流速的优化雾化气流速的优化：流速越大，响应值越低。最优气：流速越大，响应值越低。最优气体流速应是在可接受噪音的根底上，产生最大检测响体流速应是在可接受噪音的根底上，产生最大检测响应值的最低气体流速。应值的最低气体流速。色谱法的应用：示差折光检
46、测器色谱法的应用：示差折光检测器色谱法的应用：示差折光检测器色谱法的应用：示差折光检测器原理：连续测定流通池中溶液折射率来测定试样中各组分浓度。原理：连续测定流通池中溶液折射率来测定试样中各组分浓度。优点：通用型检测器优点：通用型检测器缺点：缺点：1 1）对温度变化敏感）对温度变化敏感 2 2）对溶剂组成变化敏感，不能用于梯度检测）对溶剂组成变化敏感，不能用于梯度检测 3 3）属于中等灵敏度的检测器）属于中等灵敏度的检测器n n山梨醇山梨醇n n山梨醇注射液山梨醇注射液n n甘露醇甘露醇n n甘露醇注射液甘露醇注射液n n乳果糖口服溶液乳果糖口服溶液n n葡甲胺葡甲胺n n麦芽糖麦芽糖n n乳
47、糖乳糖n n倍他环糊精倍他环糊精n n羟丙基倍他环糊精羟丙基倍他环糊精色谱法的应用：电导检测器原理：根据物质在某些介质中电离后所产生的电导变化来原理：根据物质在某些介质中电离后所产生的电导变化来测定电离物质含量。测定电离物质含量。优点：对流动相流速和压力的改变不敏感，可用于梯度洗优点：对流动相流速和压力的改变不敏感，可用于梯度洗脱。脱。缺点：对温度变化敏感（每升高缺点：对温度变化敏感（每升高1 1度，电导率增加度，电导率增加2%-2%-2.5%)2.5%)。广泛应用于离子色谱。主要用于检测水溶性无机和有机离广泛应用于离子色谱。主要用于检测水溶性无机和有机离子。子。n n帕米膦酸二钠注射液帕米膦
48、酸二钠注射液n n注射用帕米膦酸二钠注射用帕米膦酸二钠n n盐酸头孢吡肟盐酸头孢吡肟n n注射用盐酸头孢吡肟注射用盐酸头孢吡肟n n氯膦酸二钠氯膦酸二钠n n氯膦酸二钠注射液氯膦酸二钠注射液n n氯膦酸二钠胶囊氯膦酸二钠胶囊几种检测器主要特性比较表检测器检测器检测信号检测信号选择性选择性流速影流速影响响检出限检出限g/mlg/ml梯度洗脱梯度洗脱UVUV吸光度吸光度有有无无1010-10-10适宜适宜FDFD荧光强度荧光强度有有无无1010-13-13适宜适宜ADAD电流电流有有有有1010-13-13不宜不宜ELSDELSD散射光强散射光强度度无无1010-9-9适宜适宜RIDRID折光率折
49、光率无无无无1010-7-7不宜不宜液相色谱法流动相液相色谱法流动相1.1.重要性：重要性：GCGC载气仅三四种，要提高柱效选择性，主要载气仅三四种，要提高柱效选择性，主要改变固定相的性质；改变固定相的性质；LC LC则不同，当固定相选定时，流动相的种类，配比能则不同，当固定相选定时，流动相的种类，配比能显著地影响别离效果，因此流动相的选择很重要。显著地影响别离效果，因此流动相的选择很重要。2.2.选择流动相应注意的因素选择流动相应注意的因素3.3.溶剂的选择：溶剂的选择：a.a.依据：溶剂的极性是重要依据。依据：溶剂的极性是重要依据。b.b.溶剂极性顺序，水最大，正已烷最小。溶剂极性顺序，水
50、最大，正已烷最小。c.c.采用多元组合溶剂系统作为流动相（底液和洗脱液）采用多元组合溶剂系统作为流动相（底液和洗脱液）d.d.根据不同的方法选择适宜的底液和洗脱液根据不同的方法选择适宜的底液和洗脱液 具体操作时还应注意的事项n n 流动相滤过后，注意观察有无肉眼能看到的微粒、纤流动相滤过后，注意观察有无肉眼能看到的微粒、纤流动相滤过后，注意观察有无肉眼能看到的微粒、纤流动相滤过后，注意观察有无肉眼能看到的微粒、纤维。有请重新滤过。维。有请重新滤过。维。有请重新滤过。维。有请重新滤过。开机后把要用到的管路进行开机后把要用到的管路进行开机后把要用到的管路进行开机后把要用到的管路进行purgepur