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1、ICS67.050CCSX04团体标准T/SATA0402023食品中胆碱和左旋肉碱的测定液相色谱-串联质谱法DeterminationofcholineandL-carnitineinfoods-Liquidchromatography-tandemmassspectrometry2023-03-21发布2023-04-21实施深圳市分析测试协会发布T/SATA0402023目次前言.II1范围.12规范性引用文件.13术语和定义.14原理.15试剂与材料.1试剂.1试剂配制.1标准品.1标准溶液配制.16仪器和设备.27分析步骤.2样品前处理.2仪器参考条件.2标准曲线的制作.3定性和定量
2、.3试样溶液的测定.38分析结果的表述.49精密度.410其他.4附录A（资料性）胆碱和左旋肉碱标准溶液的液相色谱-串联质谱图.5IT/SATA0402023食品中胆碱和左旋肉碱的测定液相色谱-串联质谱法1范围本文件规定了胆碱和左旋肉碱的液相色谱-串联质谱测定方法。本文件适用于食品中胆碱和左旋肉碱的测定。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4原理
3、试样经酸水解后，得到游离的胆碱和左旋肉碱，用液相色谱-串联质谱测定，标准曲线内标法定量。5试剂与材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。试剂5.1.1甲醇（CH3OH）：色谱纯。5.1.2乙腈（CH3CN）：色谱纯。5.1.3甲酸（HCOOH）：色谱纯。5.1.4浓盐酸（HCl）：密度为1.19g/mL。试剂配制5.2.10.1%甲酸水溶液：准确吸取1mL甲酸（5.1.3）于1L容量瓶中，用水溶解并定容至刻度，混匀。标准品5.3.1胆碱标准品：酒石酸氢胆碱（C9H19NO7，CAS：87-67-2）。5.3.2左旋肉碱标准品：L-左旋肉碱（C7H15NO3
4、，CAS：541-15-1）。5.3.3氯化胆碱-三甲基-D9内标：氯化胆碱-三甲基-D9（C5H5ClD9NO，CAS：61037-86-3）。5.3.4左旋肉碱-D3内标：左旋肉碱-D3（C7H13D3ClNO3，CAS：350818-62-1）。标准溶液配制5.4.1标准储备液：准确称0.0418g（精确至0.0001g）酒石酸氢胆碱和0.0200g（精确至0.0001g）L-左旋肉碱于100mL容量瓶中，用甲醇（5.1.1）溶解，定容至刻度，配制成200g/mL标准储备液。1时间/min0.1%甲酸水溶液（%）乙腈（%）080200.580204.559578020T/SATA0402
5、0234冰箱保存，保存期六个月。分别称取标准物质左旋肉碱-D3和氯化胆碱-三甲基-D9各0.0200g于100mL容量瓶中，用甲醇（5.1.1）溶解，定容至刻度，配制成200g/mL的内标储备液。4冰箱保存，保存期六个月。5.4.2标准中间液：将储备液用甲醇（5.1.1）稀释，得到浓度均为2.00g/mL胆碱、L-左旋肉碱、左旋肉碱-D3和氯化胆碱-三甲基-D9中间液。4冰箱保存，保存期一周。5.4.3标准工作液：将中间液用甲醇（5.1.1）稀释，得到左旋肉碱-D3和氯化胆碱-三甲基-D9内标浓度均为40.0ng/mL，胆碱和L-左旋肉碱浓度均为10.0ng/mL、25.0ng/mL、50.0
6、ng/mL、100ng/mL、200ng/mL、400ng/mL的标准系列工作液。临用前配制。6仪器和设备液相色谱-串联质谱仪：配置电喷雾电离源。分析天平：感量0.001g和感量0.000lg。漩涡混合器。恒温水浴锅。离心机：转速不低于6500r/min。7分析步骤样品前处理称取2g（精确至0.001g）样品，用20mL40温水溶解，转移至50mL容量瓶中，定容。移取定容后的溶液5mL于100mL比色管，加入0.5mL浓盐酸（5.1.4），涡旋混匀。放置于70水浴锅中水解3h，将水解液转移至100mL容量瓶中定容，过滤。准确吸取滤液1mL至25mL容量瓶中，加入内标标准中间液0.5mL，用水定
7、容。涡旋摇匀后，过滤上机。仪器参考条件7.2.1液相条件a)色谱柱：C18柱(柱长100mm，内径2.1mm，粒径1.9m)，或相当者；b)流动相：乙腈和0.1%甲酸水溶液；c)流速：0.3mL/min；d)柱温：350.5；e)样量：5L；f)洗脱梯度见表1。表1超高效液相色谱洗脱梯度参考条件7.2.2质谱条件a)离子源：电喷雾离子源；b)离子模式：正离子；c)扫描方式：选择反应监测（SRM）；2监测化合物保留时间/min母离子/（m/z）子离子/（m/z）S-lens电压/V碰撞能量/V胆碱0.841045860*9130.817.7氯化胆碱-三甲基-D90.841136669*9231.
8、618.7左旋肉碱0.8616285103*6521.017.2左旋肉碱-D30.8616585103*6420.116.5离子丰度比50大于2050102010允许相对偏差/%20253050T/SATA0402023d)喷雾电压：3500V；e)蒸发温度：360；f)鞘气压力：42arb；g)反吹气压力：0arb；h)辅助气压力：10arb；i)离子传输毛细管温度：300；j)主要质谱参考条件见表2。表2胆碱和左旋肉碱的质谱参考条件注：带*为定量离子标准曲线的制作将标准系列工作液由低浓度到高浓度依次进样，以胆碱、L-左旋肉碱与相应同位素内标的峰面积比值为纵坐标，以胆碱、L-左旋肉碱标准系列
9、工作液浓度（ng/mL）为横坐标，分别绘制胆碱、L-左旋肉碱标准曲线。定性和定量7.4.1保留时间被测试样中目标色谱峰与相应标准色谱峰的保留时间相比较，相对误差应在2.5%之内。7.4.2离子丰度比在相同的实验条件下测定试样溶液和标准工作液，如果试样中的质量色谱峰保留时间与标准工作溶液一致，试样中目标化合物的两个子离子的相对丰度与浓度和标准溶液的相对丰度和浓度一致，相对丰度偏差不超过表3规定的范围，则可判定试样中存在目标物。表3定性时离子丰度比的最大允许偏差试样溶液的测定将试样溶液注入液相色谱-串联质谱中，得到胆碱和氯化胆碱-三甲基-D9、L-左旋肉碱和左旋肉碱-D3的峰面积比值，根据各自的标
10、准曲线分别计算待测液中胆碱和L-左旋肉碱的浓度。3T/SATA04020238分析结果的表述试样中胆碱和左旋肉碱的含量按式（1）计算：=101000(1)式中：试样中各组分的含量，单位为毫克每百克（mg/100g）；由标准曲线计算得到的试液中各组分的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）；试液的定容体积，单位为毫升（mL）；试样的质量，单位为克（g）；稀释倍数。计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。9精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15%。10其他方法检出限为0.01mg/100g，定量限为0.03mg/100g。4T/SATA0402023AA附录A（资料性）胆碱和左旋肉碱标准溶液的液相色谱-串联质谱图图A.1胆碱和左旋肉碱标准溶液的液相色谱-串联质谱图5