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1、保健食品安全性毒理学保健食品安全性毒理学检验及评价检验及评价仲 伟 鉴上海市疾病预防控制中心2009.11培训专用第一部分第一部分中国保健食品简介中国保健食品简介培训专用保健食品定义保健食品定义 保健食品（保健食品（Functional FoodFunctional Food）系指具有调）系指具有调节人体生理功能、适宜特定人群食用、不以治节人体生理功能、适宜特定人群食用、不以治疗为目的的一类食品。疗为目的的一类食品。培训专用特特 点点q 具有特定的保健功能；具有特定的保健功能；q 无毒副作用，食用安全；无毒副作用，食用安全；q 有别于食品和药品；有别于食品和药品；q 增强体质、预防疾病为主；增
2、强体质、预防疾病为主；q 适用于特定人群。适用于特定人群。培训专用特特 定定 功功 能能q 由国家管理部门指定由国家管理部门指定q 允许申报的功能目前有允许申报的功能目前有27种种q 27种以外的功能，生产企业在获得足够种以外的功能，生产企业在获得足够的技术资料后（包括评价方案，试验数据的技术资料后（包括评价方案，试验数据及结果）向有关管理部门提出受理申请，及结果）向有关管理部门提出受理申请，接受评审。接受评审。培训专用特特 定定 人人 群群q正常成人以外，包括婴幼儿、孕妇、乳正常成人以外，包括婴幼儿、孕妇、乳母、青少年、中老年、特殊工种的工作母、青少年、中老年、特殊工种的工作者以及常见病病人
3、者以及常见病病人q对于营养保健有特殊的需要对于营养保健有特殊的需要 膳食结构的不同膳食结构的不同 营养素需求的不同营养素需求的不同培训专用保健食品的发展历程保健食品的发展历程第一代保健食品第一代保健食品：在保健食品的管理方法颁布以前市：在保健食品的管理方法颁布以前市场上已有的保健食品。场上已有的保健食品。第二代保健食品第二代保健食品：经动物和人体实验证实具有某种生：经动物和人体实验证实具有某种生理调节功能的食品。理调节功能的食品。第第三三代代保保健健食食品品：不不仅仅需需要要经经人人体体及及动动物物实实验验证证实实具具有有某某种种功功能能，而而且且需需要要研研究究提提供供该该功功能因子、含量及
4、其作用机理。能因子、含量及其作用机理。培训专用发发 展展 趋趋 势势q根据新的疾病谱和健康问题，开发新的保健功能根据新的疾病谱和健康问题，开发新的保健功能q根据新的养生保健概念，开发新的保健功能根据新的养生保健概念，开发新的保健功能q根据现代营养科学理论，开发新的膳食有效成分根据现代营养科学理论，开发新的膳食有效成分q根据中医药理论，开发中药类有效成分根据中医药理论，开发中药类有效成分q根据生命科学理论，开发新的人体所需营养素根据生命科学理论，开发新的人体所需营养素培训专用保健食品开发中的注意点保健食品开发中的注意点q中草药中草药q新资源新资源q野生动植物及其产品野生动植物及其产品q核酸类核酸
5、类q真菌类真菌类q益生菌类益生菌类q酶制剂、氨基酸螯合物、金属硫蛋白以及直接酶制剂、氨基酸螯合物、金属硫蛋白以及直接以微生物发酵的以微生物发酵的培训专用中草药类中草药类q 中草药作为原料应注意中草药作为原料应注意：1.1.不不 能能 采采 用用 有有 明明 显显 毒毒 副副 作作 用用 的的 中中 药药 材材、获获国国家家药药政政管管理理部部门门批批准准的的中中成成药药、受国家中药保护的中药成方受国家中药保护的中药成方2.2.用量应控制在临床用量的用量应控制在临床用量的50%50%以下以下培训专用新资源类新资源类q 新资源作为原料时必须具备的有关资料新资源作为原料时必须具备的有关资料：1.1.
6、名称及国内外研究利用情况；名称及国内外研究利用情况；2.2.名称、配方及生产工艺；名称、配方及生产工艺；3.3.产产品品成成分分（包包括括营营养养物物质质、有有生生物物效效应应物物质质及及有有毒毒有有害害物物质等）的分析报告；质等）的分析报告；4.4.安全性毒理学评价报告或有关文献资料；安全性毒理学评价报告或有关文献资料；5.5.个个别别地地区区有有食食用用习习惯惯的的应应提提供供有有关关食食用用历历史史的的证证明明资资料；料；6.6.质量标准。质量标准。培训专用野生动植物及其产品类野生动植物及其产品类q 以野生动植物及其产品为原料的有关限制以野生动植物及其产品为原料的有关限制：1.1.受保护
7、的野生动物。受保护的野生动物。2.2.禁禁止止使使用用自自然然的的、人人工工驯驯养养繁繁殖殖或或人人工工栽栽培培的的国国家家一一级和自然的二级保护野生动植物及其产品。级和自然的二级保护野生动植物及其产品。3.3.人人工工驯驯养养繁繁殖殖或或人人工工栽栽培培的的国国家家二二级级保保护护野野生生动动植植物物及及其其产产品品，国国家家保保护护的的有有益益的的或或者者有有重重要要经经济济、科科学学研研究究价价值值的的陆陆生生野野生生动动物物及及其其产产品品应应提提供供省省级级以以上上农农业业（渔渔业）、林业行政主管部门的批准文件。业）、林业行政主管部门的批准文件。培训专用q以野生动植物及其产品为原料的
8、有关限制以野生动植物及其产品为原料的有关限制：4.4.中中华华人人民民共共和和国国林林业业植植物物新新品品种种保保护护名名录录中中植植物物及及其其产产品品，如如果果该该种种植植物物已已获获“品品种种权权”，应应提提供供该该种种植植物物品品种种权权所所有有人人许许可可使使用用的的证证明明；如如该该种种植植物物尚尚未未取取得得品品种种权权，应应提提供供国国务务院院林林业业主主管管部部门门出出具具的的该该种种品品种种尚尚未未取取得得品品种种权权的的证明。证明。5.5.进进口口保保健健食食品品中中使使用用濒濒危危野野生生动动植植物物种种国国际际贸贸易易公公约约名名录录中中动动植植物物及及其其产产品品的
9、的，应应提提供供国国务务院院农农业业（渔渔业业）、林林业业行行政政主主管管部部门门批批准准文文件件、进进出出口口许许可可证证及及海海关关的的证证明明文件。文件。野生动植物及其产品类野生动植物及其产品类培训专用核酸类核酸类q核酸类保健食品申报时需提供的特殊资料核酸类保健食品申报时需提供的特殊资料：1.1.具体成份名称、来源、含量；具体成份名称、来源、含量；2.2.与所申报功能直接相关的科学文献依据；与所申报功能直接相关的科学文献依据；3.3.企企业业标标准准中中标标出出核核酸酸各各成成份份的的含含量量、纯纯度度和和相相应应的的定定性性、定量检测方法以及质量标准；定量检测方法以及质量标准；4.4.
10、详细生产工艺（包括加工助剂名称、用量）；详细生产工艺（包括加工助剂名称、用量）；5.5.核酸原料纯度的检测报告。核酸原料纯度的检测报告。培训专用核酸类核酸类q核酸类保健食品申报时的注意事项核酸类保健食品申报时的注意事项：1.1.不得以单一的不得以单一的DNADNA或或RNARNA作为原料申报。作为原料申报。2.2.单一原料纯度应大于单一原料纯度应大于8080。3.3.功功能能申申报报范范围围暂暂限限定定为为免免疫疫调调节节功功能能。如如申申报报其其他他功功能能，需向卫生部提交申请并纳入审批范围后，方可申报。需向卫生部提交申请并纳入审批范围后，方可申报。4.4.核酸成份的每日推荐食用量为核酸成份
11、的每日推荐食用量为0.6g-1.2g0.6g-1.2g。5.5.不得以不得以“核酸核酸”命名。命名。6.6.说说明明书书及及标标签签中中的的“不不适适宜宜人人群群”除除按按保保健健食食品品相相关关规规定定标注外，应明确标注出标注外，应明确标注出“痛风患者痛风患者”。培训专用真菌类真菌类q真菌类保健食品的部分规定真菌类保健食品的部分规定 ：1.1.生产企业应建立有关的档案资料。生产企业应建立有关的档案资料。2.2.生产企业应具备相应的生产条件。生产企业应具备相应的生产条件。3.3.对生产菌种及工艺变更的相应规定。对生产菌种及工艺变更的相应规定。4.4.冠名规定。冠名规定。5.5.发发酵酵过过程程
12、中中，除除培培养养基基外外，不不得得加加入入具具有有功功效效成成分分的的动动植植物及其它物质。物及其它物质。6.6.不能使用经过基因修饰的菌种。不能使用经过基因修饰的菌种。培训专用益生菌类益生菌类q益生菌类保健食品的部分规定益生菌类保健食品的部分规定：1.1.生产用菌种应满足一定的条件。生产用菌种应满足一定的条件。2.2.生产企业应具备的一定条件。生产企业应具备的一定条件。3.3.菌种及生产工艺不得变更，否则产品必须重新申报。菌种及生产工艺不得变更，否则产品必须重新申报。4.4.不提倡以液态形式生产活菌产品。不提倡以液态形式生产活菌产品。5.5.在保存期内活菌数目不得少于在保存期内活菌数目不得
13、少于 106cfu/mL(g)106cfu/mL(g)。培训专用益生菌类益生菌类q益生菌类保健食品的部分规定益生菌类保健食品的部分规定：6.6.如需在特殊条件下保存，应在标签和说明书中标示如需在特殊条件下保存，应在标签和说明书中标示7.7.所所用用菌菌种种在在其其发发酵酵过过程程中中，除除培培养养基基外外，不不得得加加入入具具有有功功效效成分的动植物及其物质成分的动植物及其物质8.8.不能使用经过基因修饰的菌种不能使用经过基因修饰的菌种培训专用其他类别其他类别q对对酶酶制制剂剂、氨氨基基酸酸螯螯合合物物、金金属属硫硫蛋蛋白白以以及及直直接以微生物发酵为原料限制的部分规定接以微生物发酵为原料限制
14、的部分规定：1.1.未未列列入入食食品品添添加加剂剂使使用用卫卫生生标标准准或或卫卫生生部部公公告告名名单单中中的的食品添加剂新品种的酶制剂不得用于保健食品的生产。食品添加剂新品种的酶制剂不得用于保健食品的生产。2.2.不再审批以金属硫蛋白为原料生产的保健食品。不再审批以金属硫蛋白为原料生产的保健食品。培训专用其他类别其他类别q使使用用微微生生物物发发酵酵直直接接生生产产保保健健食食品品的的，需需提提供供的的特殊资料特殊资料：1.1.菌种来源及菌种检定报告菌种来源及菌种检定报告2.2.菌种的毒力试验报告及安全性评价报告菌种的毒力试验报告及安全性评价报告 3.3.国内外该菌种使用于食品生产的文献
15、资料国内外该菌种使用于食品生产的文献资料 4.4.发酵终产物的质量标准（包括纯度、杂质成分及含量）发酵终产物的质量标准（包括纯度、杂质成分及含量）培训专用其他类别其他类别q使使用用氨氨基基酸酸螯螯合合物物生生产产保保健健食食品品的的，需需提提供供的的特殊资料特殊资料：1.1.提提供供明明确确的的化化学学结结构构式式、理理化化性性质质，配配体体与与金金属属离离子子之之比比、游离元素和总元素之比。游离元素和总元素之比。2.2.提供定性、定量的检测方法及验证报告。提供定性、定量的检测方法及验证报告。3.3.急急性性毒毒性性试试验验加加做做停停食食1616小小时时后后空空腹腹一一次次灌灌胃胃试试验验和
16、和3030天天喂喂养试验的组织病理报告。养试验的组织病理报告。4.4.国内外使用于食品生产的文献资料。国内外使用于食品生产的文献资料。培训专用安全，无毒、副作用安全，无毒、副作用功能，保健功效功能，保健功效理化、微生物特性：理化、微生物特性：有害成分物质和污染物有害成分物质和污染物毒理学特性：毒理学特性：剂量反应（效应）关系剂量反应（效应）关系保健食品质量控制保健食品质量控制生物活性物质生物活性物质功效成分功效成分通过检通过检验和评验和评价，加价，加以控制以控制培训专用第二部分第二部分保健食品安全性毒理学保健食品安全性毒理学检验及评价检验及评价培训专用主主 要要 内内 容容q 检验评价依据检验
17、评价依据q 审评基本要求审评基本要求q 选择毒理学试验的基本原则选择毒理学试验的基本原则q 实验动物的选择实验动物的选择q 样品的预处理原则样品的预处理原则q 毒理学试验项目要点介绍毒理学试验项目要点介绍q毒理学安全性评价时应考虑的问题毒理学安全性评价时应考虑的问题q审评结论的判定审评结论的判定培训专用毒性及功能检验评价依据毒性及功能检验评价依据19961996年年3 3月卫生部保健食品的管理方法月卫生部保健食品的管理方法 保健食品的标准、功能评价、审批程序和监督管理办法保健食品的标准、功能评价、审批程序和监督管理办法19961996年年7 7月月GB15193GB15193食品安全性毒理学评
18、价程序和方法食品安全性毒理学评价程序和方法 卫生部保健食品功能学评价程序和检验方法卫生部保健食品功能学评价程序和检验方法 仅包含了仅包含了1212项功能检验及评价方法项功能检验及评价方法20012001年年7 7月月 卫生部保健食品功能学评价程序和检验方法卫生部保健食品功能学评价程序和检验方法 可受理和评价的功能调整到可受理和评价的功能调整到3131项项20032003年年2 2月卫生部保健食品检验与评价技术规范月卫生部保健食品检验与评价技术规范 将功能学、毒理学、功效成分及卫生指标检验评价方法三者合一将功能学、毒理学、功效成分及卫生指标检验评价方法三者合一培训专用审评的基本要求审评的基本要求
19、1.1.配方配方 原（辅）料、用量、理化性质原（辅）料、用量、理化性质2.2.剂量剂量 食用方法及用量食用方法及用量3.3.工艺工艺 规格化产品规格化产品 符合配方、工艺、质量标准符合配方、工艺、质量标准4.4.批号批号 注意批号是否一致注意批号是否一致,益生菌、奶制品等保质期短的除外益生菌、奶制品等保质期短的除外培训专用1.1.毒理学评价的四个阶段毒理学评价的四个阶段第一阶段：急性毒性试验第一阶段：急性毒性试验 经口急性毒性试验：经口急性毒性试验：LD50LD50，联合急性毒性，一次最大耐受量试验，联合急性毒性，一次最大耐受量试验第二阶段：遗传毒性试验，第二阶段：遗传毒性试验，3030天喂养
20、试验，传统致畸试验天喂养试验，传统致畸试验 遗传毒性试验：原核细胞和真核细胞，体内试验和体外试验相结合遗传毒性试验：原核细胞和真核细胞，体内试验和体外试验相结合AmesAmes或基因突变试验；微核试验或染色体畸变试验；精子畸变试验等或基因突变试验；微核试验或染色体畸变试验；精子畸变试验等第三阶段：亚慢性毒性试验第三阶段：亚慢性毒性试验 9090天喂养试验、繁殖试验、代谢试验天喂养试验、繁殖试验、代谢试验第四阶段：慢性毒性试验（包括致癌试验）第四阶段：慢性毒性试验（包括致癌试验）选择毒理学试验的基本原则选择毒理学试验的基本原则培训专用2.2.一般无需进行毒性试验的原料或成分一般无需进行毒性试验的
21、原料或成分属于普通食品和卫生部规定的药食同源的物质：属于普通食品和卫生部规定的药食同源的物质：q采用传统的工艺及食用方式采用传统的工艺及食用方式q水提取物，常规服用量，无不安全性报道水提取物，常规服用量，无不安全性报道q来源、工艺和质量符合国家要求的营养强化剂来源、工艺和质量符合国家要求的营养强化剂 或营养素补充剂或营养素补充剂选择毒理学试验的基本原则选择毒理学试验的基本原则培训专用3.3.需进行一阶段和三项致突变毒性试验的原料或成分需进行一阶段和三项致突变毒性试验的原料或成分 属于普通食品和卫生部规定的药食同源的物质且用水提以属于普通食品和卫生部规定的药食同源的物质且用水提以外的其它常用工艺
22、生产的：外的其它常用工艺生产的：（1 1）服用量与常规用量相同）服用量与常规用量相同 急性毒性、三项致突变试验急性毒性、三项致突变试验（2 2）服用量大于常规用量）服用量大于常规用量 还需加做还需加做3030天喂养试验，必要时进行传统致畸试验和第天喂养试验，必要时进行传统致畸试验和第三阶段毒性试验三阶段毒性试验选择毒理学试验的基本原则选择毒理学试验的基本原则培训专用4.4.需进行一、二阶段毒性试验的原料或成分需进行一、二阶段毒性试验的原料或成分q文献显示无危害，人群长期食用；文献显示无危害，人群长期食用；q具有国际性毒理学评价结果的已知的化学物质，产具有国际性毒理学评价结果的已知的化学物质，产
23、 品质量规品质量规格与国外产品一致；格与国外产品一致；q国外广泛食用且能提供安全性评价资料；国外广泛食用且能提供安全性评价资料；q卫生部规定允许使用的动植物及其提取物或微生物。卫生部规定允许使用的动植物及其提取物或微生物。选择毒理学试验的基本原则选择毒理学试验的基本原则培训专用5.5.需进行一至三阶段毒性试验的情况：需进行一至三阶段毒性试验的情况：q一、二阶段试验结果与国外产品不一致的一、二阶段试验结果与国外产品不一致的q国外少数国家或地区食用的原料或成分国外少数国家或地区食用的原料或成分q水提取物，大于常规服用量水提取物，大于常规服用量q用水提以外的其它常用工艺生产的，大于常规用量用水提以外
24、的其它常用工艺生产的，大于常规用量选择毒理学试验的基本原则选择毒理学试验的基本原则培训专用6.6.需进行一至四阶段毒性试验的原料和成分需进行一至四阶段毒性试验的原料和成分国内外均无食用先例国内外均无食用先例7.7.敏感指标及敏感试验的保健食品敏感指标及敏感试验的保健食品不同食用人群和（或）不同功能的保健食品不同食用人群和（或）不同功能的保健食品选择毒理学试验的基本原则选择毒理学试验的基本原则培训专用8.8.保健食品新原料保健食品新原料 保健食品新原料（以下简称新原料）是指不在国家保健食品新原料（以下简称新原料）是指不在国家食品药品监督管理局公布的可用于保健食品、卫生部公食品药品监督管理局公布的
25、可用于保健食品、卫生部公布或批准可以食用以及生产普通食品的范围内，拟用于布或批准可以食用以及生产普通食品的范围内，拟用于保健食品的原料。保健食品的原料。国家食品药品监督管理局和国家有关部门规定的国家食品药品监督管理局和国家有关部门规定的不可用于保健食品以及禁止使用的物品，不得作为新不可用于保健食品以及禁止使用的物品，不得作为新原料。原料。选择毒理学试验的基本原则选择毒理学试验的基本原则培训专用 在已批准的保健食品中使用过，或卫生部已批准为新资在已批准的保健食品中使用过，或卫生部已批准为新资源食品的原料，符合以下情况的仍按新原料进行管理：源食品的原料，符合以下情况的仍按新原料进行管理：未列入国家
26、食品药品监督管理局公布的可用于保健食品的物未列入国家食品药品监督管理局公布的可用于保健食品的物品名单；品名单；尚未列入卫生部公布或批准的食品新资源或新资源食品名单内；尚未列入卫生部公布或批准的食品新资源或新资源食品名单内；卫生部已批准为食品新资源或新资源食品，但保健食品注册申卫生部已批准为食品新资源或新资源食品，但保健食品注册申请人与食品新资源或新资源食品生产批件中载明的申报单位不请人与食品新资源或新资源食品生产批件中载明的申报单位不一致。一致。选择毒理学试验的基本原则选择毒理学试验的基本原则培训专用新原料安全性毒理学试验项目的选择新原料安全性毒理学试验项目的选择 无食用史无食用史 需做四阶段
27、试验需做四阶段试验 局部地区有食用史局部地区有食用史 需做三阶段试验需做三阶段试验 其中其中 ，100100倍倍 摄入量摄入量300300倍倍 需做第四阶段试验需做第四阶段试验 有食用史有食用史 需做二阶段试验需做二阶段试验 经评价后经评价后 下一阶段试验下一阶段试验 广泛食用的原料广泛食用的原料 二阶段试验二阶段试验 （食用史包括地区、年代、人群、食用量、频率等情况）（食用史包括地区、年代、人群、食用量、频率等情况）选择毒理学试验的基本原则选择毒理学试验的基本原则培训专用新原料安全性毒理学试验项目的选择新原料安全性毒理学试验项目的选择 已知化学物已知化学物:-1-1 可只做二阶段实验的包括可
28、只做二阶段实验的包括 已有权威机构进行系统的毒理学安全性评价已有权威机构进行系统的毒理学安全性评价 有资料证明所用原料与其一致有资料证明所用原料与其一致 -2-2 如试验结果与权威机构进行的评价不一致，需进如试验结果与权威机构进行的评价不一致，需进入下阶段的试验入下阶段的试验 有新原料的保健食品有新原料的保健食品:根据试验结果综合分析。根据试验结果综合分析。选择毒理学试验的基本原则选择毒理学试验的基本原则培训专用对受试保健食品的要求对受试保健食品的要求q 单一已知化学成分，应提供物理和化学性质单一已知化学成分，应提供物理和化学性质q 多种原料的配方产品，应提供配方多种原料的配方产品，应提供配方
29、q 配方产品，必要时还应提供各组分，功效成分的配方产品，必要时还应提供各组分，功效成分的 q 物理和化学性质及其检测报告物理和化学性质及其检测报告q 提供原料来源、生产工艺、人的可能摄入量。使提供原料来源、生产工艺、人的可能摄入量。使q 用说明书等有关资料用说明书等有关资料q 受试物应符合既定配方和生产工艺的规格化产品受试物应符合既定配方和生产工艺的规格化产品培训专用实验动物的选择及给样量实验动物的选择及给样量1.1.根据各项实验的具体要求，合理选择实验动物根据各项实验的具体要求，合理选择实验动物 常用大鼠和小鼠，品系不限，推荐使用近交系。常用大鼠和小鼠，品系不限，推荐使用近交系。2.2.动物
30、应符合实验动物管理条例动物应符合实验动物管理条例 清洁级或清洁级以上清洁级或清洁级以上 动物合格证号及动物实验室合格证号动物合格证号及动物实验室合格证号3.3.灌胃量灌胃量 大鼠：大鼠：10 ml/kg10 ml/kgBWBW（若以水为溶剂，推荐（若以水为溶剂，推荐 20 ml/kg 20 ml/kgBWBW）小鼠：小鼠：20ml/kg20ml/kgBWBW培训专用样品的预处理原则样品的预处理原则1.1.介质的选择介质的选择 应选择适合于受试动物的溶剂、乳化剂、助悬剂，要求无毒、与受试物应选择适合于受试动物的溶剂、乳化剂、助悬剂，要求无毒、与受试物不发生反应、稳定性好。不发生反应、稳定性好。常
31、用的介质有：蒸馏水、食用植物油、淀粉、明胶及羧甲基纤维素等。常用的介质有：蒸馏水、食用植物油、淀粉、明胶及羧甲基纤维素等。2.2.液体类液体类 受试物浓缩倍数应符合试验要求。受试物浓缩倍数应符合试验要求。浓缩方法不应破坏其有效成份，常用的有浓缩方法不应破坏其有效成份，常用的有60607070减压或常压减压或常压蒸发、冷冻干燥。蒸发、冷冻干燥。按工艺要求。按工艺要求。培训专用样品的预处理原则样品的预处理原则3.3.袋泡茶类袋泡茶类 处理方法与产品推荐饮用方法相同处理方法与产品推荐饮用方法相同 推荐用：推荐用：80-90 80-90 常压用水浸泡常压用水浸泡30min30min 水量为受试物的水量
32、为受试物的1010倍，提取倍，提取2 2次，次，2 2次提取液合并浓缩至所需浓度次提取液合并浓缩至所需浓度 标明该浓缩液与受试物的比例标明该浓缩液与受试物的比例培训专用样品的预处理原则样品的预处理原则4.4.含乙醇类含乙醇类（1 1）不需浓缩的受试物）不需浓缩的受试物 乙醇浓度乙醇浓度151515 乙醇浓度应调至乙醇浓度应调至1515（2 2）需浓缩的受试物）需浓缩的受试物 乙醇浓度乙醇浓度151515 浓缩后调至浓缩后调至1515乙醇浓度乙醇浓度 在进行乙醇浓度调整时必须用原酒基在进行乙醇浓度调整时必须用原酒基培训专用样品的预处理原则样品的预处理原则5.5.膨胀系数较高的受试物膨胀系数较高的
33、受试物 选择可溶性介质选择可溶性介质 给受试物的方法：灌胃给受试物的方法：灌胃 其最高浓度最大灌胃量时达不到人体推荐量的其最高浓度最大灌胃量时达不到人体推荐量的100100倍，按实际达倍，按实际达到的倍数到的倍数 标明受试物的膨胀系数标明受试物的膨胀系数培训专用样品的预处理原则样品的预处理原则6.6.益生菌等微生物类保健食品益生菌等微生物类保健食品 在进行在进行 Ames Ames试验或体外细胞试验时需将受试物灭活。试验或体外细胞试验时需将受试物灭活。需浓缩的应采用低温干燥法或由企业提供所需浓度的受试物（附方法、技术参数）需浓缩的应采用低温干燥法或由企业提供所需浓度的受试物（附方法、技术参数）
34、。7.7.以食品为载体的受试物以食品为载体的受试物 （1 1）有营养价值：按设计量进行饲料的营养成份调整，提供详细的说明。）有营养价值：按设计量进行饲料的营养成份调整，提供详细的说明。（2 2）大豆蛋白、乳清蛋白）大豆蛋白、乳清蛋白 如质量、工艺等符合食品标准和安全要求，允许去除。如质量、工艺等符合食品标准和安全要求，允许去除。如仅以该原料生产的，可申请免做毒理学试验。如仅以该原料生产的，可申请免做毒理学试验。培训专用毒理学试验项目要点介绍毒理学试验项目要点介绍q 急性经口毒性试验急性经口毒性试验q 鼠伤寒沙门氏菌（鼠伤寒沙门氏菌（AmesAmes）试验）试验q 骨髓细胞微核试验骨髓细胞微核试
35、验q 哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验q 小鼠精子畸形试验小鼠精子畸形试验q 小鼠睾丸染色体畸变试验小鼠睾丸染色体畸变试验q 30 30天喂养试验天喂养试验培训专用急性经口毒性试验急性经口毒性试验目的：目的：测定测定LDLD5050，毒性分级。了解毒性强度、性质和可能的靶器官，为，毒性分级。了解毒性强度、性质和可能的靶器官，为进一步的毒性试验提供剂量和观察指标的选择依据。进一步的毒性试验提供剂量和观察指标的选择依据。原理：原理：急性毒性：经口一次性、急性毒性：经口一次性、24h24h内多次给予，短时间内的毒性反应。致内多次给予，短时间内的毒性反应。致死剂量通常用半数
36、致死剂量死剂量通常用半数致死剂量LDLD5050表示。表示。急性联合毒性：两种或两种以上的受试物，可能发生拮抗、相加或协急性联合毒性：两种或两种以上的受试物，可能发生拮抗、相加或协同的联合方式，可以根据一定的公式计算和判定标准来确定这三种不同的联合方式，可以根据一定的公式计算和判定标准来确定这三种不同的作用。同的作用。培训专用急性经口毒性试验急性经口毒性试验时间周期时间周期：一般为：一般为3 3周周 3-5 3-5天，大、小鼠适应期天，大、小鼠适应期 7-14 7-14天，染毒及实验观察期天，染毒及实验观察期 发生动物死亡时，应进行大体解剖发生动物死亡时，应进行大体解剖观察和评价指标观察和评价
37、指标：毒性反应症状：各器官系统的反常表现（中枢、自主神经、呼吸、心血管、毒性反应症状：各器官系统的反常表现（中枢、自主神经、呼吸、心血管、胃肠、生殖泌尿系统、皮毛、粘膜等）及体重变化胃肠、生殖泌尿系统、皮毛、粘膜等）及体重变化死亡情况：死亡的时间、数量、性别、表现等。死亡情况：死亡的时间、数量、性别、表现等。大体尸检结果：如果发生死亡动物大体尸检结果：如果发生死亡动物培训专用急性毒性（急性毒性（LDLD5050）剂量分级表）剂量分级表级级 别别大鼠口服大鼠口服LD50，mg/kg相当于人的致死量相当于人的致死量mg/kgg/人人极毒极毒150005000002500培训专用急性经口毒性试验急性
38、经口毒性试验试验结果的判定：试验结果的判定：1.LD501.LD50人可能摄入量的人可能摄入量的100100倍，放弃；反之继续下一步倍，放弃；反之继续下一步试验。试验。2.LD5010g/kgbw2.LD5010g/kgbw或按最大耐受量染毒而未出现动物或按最大耐受量染毒而未出现动物死亡的，可继续下一步试验。死亡的，可继续下一步试验。培训专用鼠伤寒沙门氏菌（鼠伤寒沙门氏菌（Ames）试验）试验目的：目的：检测受试物的诱变性，预测其遗传危害和潜在致癌作用的可能性。检测受试物的诱变性，预测其遗传危害和潜在致癌作用的可能性。时间周期：时间周期：一般为一般为2 2周周 第一周，鼠伤寒沙门氏菌种、试剂、
39、培养基准备第一周，鼠伤寒沙门氏菌种、试剂、培养基准备 第二周，染毒，培养第二周，染毒，培养48h48h，读平板，菌落计数，读平板，菌落计数剂量设计：剂量设计：决定受试物最高剂量的因素是对细菌的毒性及其溶解度。最低剂量为决定受试物最高剂量的因素是对细菌的毒性及其溶解度。最低剂量为0.2ug/0.2ug/皿；最高剂量为皿；最高剂量为5mg/5mg/皿，或最大溶解剂量，最大饱和剂量以及最小毒性剂量。皿，或最大溶解剂量，最大饱和剂量以及最小毒性剂量。可设五个剂量组，组间距不超过可设五个剂量组，组间距不超过5 5倍。同时设：阳性对照组，溶剂对照组和未处理倍。同时设：阳性对照组，溶剂对照组和未处理对照组。
40、对照组。培训专用鼠伤寒沙门氏菌（鼠伤寒沙门氏菌（Ames）试验）试验观察及评价指标：观察及评价指标：各受试物组及三个对照组的四种菌株（各受试物组及三个对照组的四种菌株（TA97aTA97a，TA98TA98，TA100TA100和和TA102TA102）分别在加和不加）分别在加和不加S9S9情况下的菌落计数。情况下的菌落计数。结果评价（掺入法）：结果评价（掺入法）：受试物组回变菌落数增加一倍以上（即回变菌落数受试物组回变菌落数增加一倍以上（即回变菌落数22未未处理对照组数），并有剂量反应关系或有可重复的阳性反应，即处理对照组数），并有剂量反应关系或有可重复的阳性反应，即可判试验阳性。可判试验阳
41、性。培训专用骨髓细胞微核试验骨髓细胞微核试验目的目的：检测整体动物体内骨髓嗜多染红细胞微核发生率，以评价受试检测整体动物体内骨髓嗜多染红细胞微核发生率，以评价受试物致突变的可能性。物致突变的可能性。原理原理：微核是在细胞有丝分裂后期染色体有规律地进入子细胞形成细胞微核是在细胞有丝分裂后期染色体有规律地进入子细胞形成细胞核时，仍然留在细胞质中的色单体或染色体的无着丝点断片核时，仍然留在细胞质中的色单体或染色体的无着丝点断片 。末期之后，单独形成一个或几个规则的次核，被包含在细胞胞质末期之后，单独形成一个或几个规则的次核，被包含在细胞胞质内，因比主核小，故称为微核。内，因比主核小，故称为微核。培训
42、专用骨髓细胞微核试验骨髓细胞微核试验时间周期时间周期：一般为：一般为2 2周周 3-5 3-5天适应期天适应期 小鼠经口染毒，小鼠经口染毒，30h30h给受试物法给受试物法 取胸骨或股骨，收集骨髓，涂片，染色，镜检取胸骨或股骨，收集骨髓，涂片，染色，镜检剂量设计剂量设计：至少设置：至少设置3 3个剂量，最高剂量组为动物出现严重中毒表个剂量，最高剂量组为动物出现严重中毒表现和现和/或个别动物出现死亡的剂量。低剂量组应不出现毒性反应。或个别动物出现死亡的剂量。低剂量组应不出现毒性反应。一般取一般取LD50LD50的的1/21/2、1/41/4、1/81/8作为三个剂量。当受试物的作为三个剂量。当受
43、试物的LD5010g/kg.bwLD5010g/kg.bw时，最高剂量通常采用时，最高剂量通常采用10g/kg.bw10g/kg.bw。同时设阳性对。同时设阳性对照组和溶剂对照组。照组和溶剂对照组。培训专用骨髓细胞微核试验骨髓细胞微核试验观察及评价指标观察及评价指标：每只动物计数每只动物计数10001000个嗜多染红细胞个嗜多染红细胞 ，记录含有微核的细胞，记录含有微核的细胞数，并计算微核千分率。观察嗜多染红细胞与成熟红细胞数，并计算微核千分率。观察嗜多染红细胞与成熟红细胞的比例。的比例。结果评价结果评价：受试物组与对照组微核率相比，增高呈剂量反应关系并有统计学受试物组与对照组微核率相比，增高
44、呈剂量反应关系并有统计学意义，试验结果为阳性。意义，试验结果为阳性。培训专用哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验目的目的：检测受试物对整体动物骨髓细胞染色体畸变的致突变：检测受试物对整体动物骨髓细胞染色体畸变的致突变性，以评价其致突变的可能性。性，以评价其致突变的可能性。原理原理：当受试物作用于细胞周期：当受试物作用于细胞周期G1G1期和期和S S期时，可诱发染色期时，可诱发染色体型畸变，而作用于体型畸变，而作用于G2G2期时则诱发染色体单体型畸变。给期时则诱发染色体单体型畸变。给动物腹腔注射秋水仙素，抑制细胞分裂时纺锤体的形成，动物腹腔注射秋水仙素，抑制细胞分裂时纺锤
45、体的形成，增加中期分裂相细胞的比例，并使染色体丝缩短、分散，增加中期分裂相细胞的比例，并使染色体丝缩短、分散，轮廓清晰。在显微镜下便可观察染色体数目和形态。轮廓清晰。在显微镜下便可观察染色体数目和形态。培训专用哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验时间周期时间周期：一般为：一般为3 3周周 3-5 3-5天适应期天适应期 小鼠或大鼠经口染毒小鼠或大鼠经口染毒2-42-4次，每次间隔次，每次间隔24h24h，在末次染，在末次染毒毒18-24h18-24h进行取材（取材前进行取材（取材前2-4h2-4h，腹腔注射秋水仙素）。，腹腔注射秋水仙素）。取股骨，收集骨髓，制片，染色，
46、镜检取股骨，收集骨髓，制片，染色，镜检剂量设计剂量设计：同骨髓细胞微核试验：同骨髓细胞微核试验培训专用哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验观察及评价指标观察及评价指标：每只动物分析每只动物分析100100个中期相细胞个中期相细胞 ，每个剂量组不少于，每个剂量组不少于10001000个。记个。记录染色体数目及结构的改变。录染色体数目及结构的改变。结果评价结果评价：受试物组与对照组染色体畸变率相比，增高呈剂量反应关系并受试物组与对照组染色体畸变率相比，增高呈剂量反应关系并有统计学意义，试验结果为阳性。有统计学意义，试验结果为阳性。培训专用小鼠精子畸形试验小鼠精子畸形试验目的
47、目的：检测整体动物体内精子畸形发生率，以评价受试物对体内生殖细检测整体动物体内精子畸形发生率，以评价受试物对体内生殖细胞的致突变作用。胞的致突变作用。原理原理：小鼠精子畸形受基因控制，具有高度遗传性，许多常染色体小鼠精子畸形受基因控制，具有高度遗传性，许多常染色体及及X X、Y Y性染色体基因决定精子形态。精子的畸形主要是指形性染色体基因决定精子形态。精子的畸形主要是指形态的异常，已知精子的畸形是决定精子形成的基因发生突变态的异常，已知精子的畸形是决定精子形成的基因发生突变的结果。因此形态的改变提示有关基因及其蛋白产物的改变。的结果。因此形态的改变提示有关基因及其蛋白产物的改变。培训专用小鼠精
48、子畸形试验小鼠精子畸形试验时间周期时间周期：一般为：一般为7 7周周 3-5 3-5天适应期天适应期 小鼠经口连续染毒小鼠经口连续染毒5 5天，于首次给样后的天，于首次给样后的3535天处天处死动物死动物 取两侧附睾，收集精子，滴片，染色，镜检取两侧附睾，收集精子，滴片，染色，镜检剂量设计剂量设计：同骨髓细胞微核试验：同骨髓细胞微核试验培训专用小鼠精子畸形试验小鼠精子畸形试验观察及评价指标观察及评价指标：每只动物检查每只动物检查10001000个精子个精子 ，记录精子畸形数目及类型。，记录精子畸形数目及类型。结果评价结果评价：受试物组与对照组精子畸变率相比，增高呈剂量反应关系受试物组与对照组精
49、子畸变率相比，增高呈剂量反应关系并有统计学意义，试验结果为阳性。并有统计学意义，试验结果为阳性。培训专用小鼠睾丸染色体畸变试验小鼠睾丸染色体畸变试验目的目的：检测整体动物睾丸染色体畸变发生率，以评价受试物：检测整体动物睾丸染色体畸变发生率，以评价受试物对整体哺乳动物睾丸生殖细胞的致突变性。对整体哺乳动物睾丸生殖细胞的致突变性。原理原理：不同周期的雄性生殖细胞对化学物质的敏感性不同，：不同周期的雄性生殖细胞对化学物质的敏感性不同，多数情况下化学诱变剂诱发染色体畸变必须经过多数情况下化学诱变剂诱发染色体畸变必须经过DNADNA复制期，复制期，故在前细线期处理。第故在前细线期处理。第121214d1
50、4d采样，以观察作用于前细线采样，以观察作用于前细线期引起的精母细胞染色体畸变效应。期引起的精母细胞染色体畸变效应。培训专用小鼠睾丸染色体畸变试验小鼠睾丸染色体畸变试验时间周期时间周期：一般为：一般为7 7周周 3-5 3-5天适应期天适应期 小鼠经口连续染毒小鼠经口连续染毒5 5天，与首次给样后的天，与首次给样后的12-1412-14天处死动物取材，（取材前天处死动物取材，（取材前6h6h，腹腔注，腹腔注 射秋水射秋水仙素）。取两侧睾丸，收集生殖细胞，滴片，染色，仙素）。取两侧睾丸，收集生殖细胞，滴片，染色，镜检镜检剂量设计剂量设计：同骨髓细胞微核试验：同骨髓细胞微核试验培训专用小鼠睾丸染色