《菲急性毒理实验和腐植酸吸附转化菲的能力测定实验实施方案汇总.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《菲急性毒理实验和腐植酸吸附转化菲的能力测定实验实施方案汇总.docx（12页珍藏版）》请在taowenge.com淘文阁网|工程机械CAD图纸|机械工程制图|CAD装配图下载|SolidWorks_CaTia_CAD_UG_PROE_设计图分享下载上搜索。
1、菲急性毒理试验和腐植酸吸附转化菲的力量测定实 验实施方案试验目的：做毕业论文正式的攻毒和解毒试验；探究菲的致毒机理；依据毒理试验得出 2 周菲半数致死剂量，探究腐植酸对其最正确解毒浓度及机理。试验地点：623 室试验时间：15d试验用鱼：出膜 5d30d 的海水青鳉仔稚鱼。选择安康、活泼、较全都者，数量为 1200*33+3200=42800 尾。注：1 个空白比照组和 10 个试验组，共 11 组 试验用品：1、养殖用品：66 个 6L 养殖槽其中33 个用于试验，33 个用来替换、消毒用，400L 养殖桶 1 个，盛放毒液的 15L 水桶 10 个，吸管假设干；2、仪器设备：烧杯，容量瓶，
2、玻璃棒，移液枪，样品瓶，分析天平，样品袋，口罩，一次性手套；3、试验试剂：菲，丙酮，腐植酸，蒸馏水，海水。4、其他：养殖记录本，仔鱼死亡量统计表格，标签纸和胶带等。试验步骤：一、攻毒和解毒试验设计及溶液配制： 试验分 11 组进展，每组 3个平行(各组 Phe、腐植酸浓度如下表，其他条件如温度、操作、换水等均同)。组别菲的浓度g/L腐植酸浓度(mg C/L)G000G12500G25000G37500G410000G512500G67505G77501010G875015G975020G1075025重申规章：为防止过失，每次配溶液前，务必先计算、记录、核对、再配母液与稀释、 分到各组桶、槽。
3、而且务必 2 人同时操作，一人为主，一人为辅兼校对，二人同时在试验记录本上签名对该操作负责！一母液的配制：1、菲母液的配制：丙酮作为溶剂，菲为溶质，配制成浓度为 0.8g/L 的母液。雷欢，黄栩，田蕴等. 一株菲降解细菌的筛选及其降解条件的优化J. 海洋科学集刊，2023，49: 104-111.。假设需要配置 10mL 母液，则需要称取菲粉末 0.008g，溶于 10ml 丙酮中。先用少量丙酮(1-2mL)将菲溶解在小烧杯中，然后用玻璃棒引流将烧杯中的溶液转移到 10mL 容量瓶中，用丙酮清洗烧杯 3-4 次(每次 1mL)， 清洗液用玻璃棒引流转移到之前的 10mL 容量瓶中，并不时用玻璃
4、棒搅拌均匀， 然后用吸管吸取丙酮将玻璃棒冲洗干净，最终用吸管定容到 10mL，充分搅拌和摇匀。2、不同浓度的腐植酸溶液的计算：我们承受的酒精下脚料制备的腐植酸百分含量为 11.79%，即 1g 中腐植酸的含量为 11.79mg。分析方法见万攸红. 容量法测定腐植酸的含量. 有色金属分析通讯,2023, 113:9-11.详见附件；腐植酸中的碳含量为 100g/L分析方法见冯苍旭. 光谱法快速测定腐植酸 C 含量.中国地质,2023,37(3):831-834。详见附件。用不同体积的液体腐植酸原液稀释可得不同浓度的毎升腐植酸浓度【计算 备用，不配制溶液】：5 mg C/L 腐植酸解毒液的配制：每
5、升海水中需添加 0.05ml 腐植酸；10 mg C/L 腐植酸解毒液的配制：每升海水中需添加 0.1ml 腐植酸；15 mg C/L 腐植酸解毒液的配制：每升海水中需添加 0.15ml 腐植酸；20 mg C/L 腐植酸解毒液的配制：每升海水中需添加 0.20ml 腐植酸；25 mg C/L 腐植酸解毒液的配制：每升海水中需添加 0.25ml 腐植酸。3、母液的存放：一次可配制数毫升，并标记清楚，配好后存放于 4的冰箱中以备后用。存放时，应留意与其他试剂的隔离，防止穿插污染。二暴露液Phe 溶液+特定浓度的腐植酸的配制：坚持逐级稀释原则Chena P J, Sua C H, Tsenga C
6、 Y, et al. Toxicity assessments of nanoscale zerovalent iron and its oxidation products in medaka (Oryzias latipes) fish. Marine Pollution Bulletin, 2023, 63(5-12):339-346。首次配制暴露液的计算、配制具体过程如下(由 1 人负责计算后，务必经 2人以上认真审核、校对配制毒液浓度：配制原则：首先计算好需要的暴毒液，依据暴毒液计算需要的各母液体积， 然后依据操作标准，准确地量取各母液，通过稀释配制暴毒液，留意搅拌均匀， 即配即用。
7、我们暂定的每个养殖槽放养仔鱼 1200 尾依据解毒试验前仔鱼总数调整，每组三个平行共计 3600 尾，养殖密度为 1 尾/5ml，即每个槽盛放暴毒液(菲毒液+特定浓度的腐植酸)6L。换水承受吸出多少暴毒液，添加相应体积暴毒液的原则。具体配制：10mL1、配制菲的稀释液8mg/L：用移液枪准确移取Phe 母液0.8g/L移到 1000mL 容量瓶中，然后参加颖海水定容，菲稀释液在稀释完之后放在通风厨中挥发 1 小时左右去除丙酮，再参加等体积的颖海水。赵作媛, 朱江, 陆贻通等. 镉-菲复合污染对蚯蚓急性毒性效应的争论J. 上海交通大学学报, 2023, 24(6): 553-557.，使用前容量
8、瓶上下震荡搅匀。剩余稀释液标记好密封存放于 4 度冰箱，其次次配毒液的时候连续使用。560mL2、18L 250g/L 的Phe 毒液：用 1000mL 量筒和移液枪分别准确移取和2.5mLPhe 稀释液8mg/L移到 18L 塑料桶中，然后用 1000mL 量筒分别量取437.5mL 和 1000mL 海水，再用 2023mL 烧杯准确量取海水 8 次【即 562.5mL 菲稀释液 + 17437.5 mL 海水= 18 L】，标记为“G1”，用玻璃棒充分搅匀，使用前再用玻璃棒搅匀。1000mL125mL3、18L 500g/L 的 Phe 毒液：用 1000mL 量筒准确移取和Phe稀释液
9、8mg/L移到18L 塑料桶中，然后用1000mL 量筒量取 875mL 海水，再用2023mL 烧杯准确量取海水 8 次【即 1125mL 菲稀释液 + 16875 mL 海水= 18 L】， 标记为“G2”，用玻璃棒充分搅匀，使用前再用玻璃棒搅匀。1685mL4、18L 750g/L 的 Phe 毒液：用 1000mL 量筒和移液枪分别准确移取2.5mL和Phe 稀释液8mg/L移到 18L 塑料桶中，然后用 1000mL 量筒分别量取312.5mL 海水，再用 2023mL 烧杯准确量取海水 8 次【即 1687.5 mL 菲稀释液 +16312.5 mL 海水= 18 L】，标记为“G
10、3”，用玻璃棒充分搅匀，使用前再用玻璃棒搅匀。2250mL5、18L 1000g/L 的 Phe 毒液：用 1000mL 量筒准确移取Phe 稀释液8mg/L移到 18L 塑料桶中，然后用 1000mL 量筒分别量取 750mL 和 1000mL 海水，再用 2023mL 烧杯准确量取海水 7 次【即 2250 mL 菲稀释液 + 15750 mL 海水= 18 L】，标记为“G4”，用玻璃棒充分搅匀，使用前再用玻璃棒搅匀。2810mL6、18L 1250g/L 的 Phe 毒液：用 1000mL 量筒和移液枪分别准确移取2.5mL和Phe 稀释液8mg/L移到 18L 塑料桶中，然后用 10
11、00mL 量筒分别量取187.5mL 和 1000mL 海水，再用 2023mL 烧杯准确量取海水 7 次【即 2812.5mL 菲稀释液 + 15187.5 mL 海水= 18 L】，标记为“G5”，用玻璃棒充分搅匀，使用前再用玻璃棒搅匀。7、18L 750g/L 的 Phe 和 5mg C/L 腐植酸混合液：用 1000mL 量筒和移液枪1685mL2.5mL分别准确移取和Phe 稀释液8mg/L移到 18L 塑料桶中，然后用移液枪量取 0.9mL 腐植酸原液，然后用 1000mL 量筒分别量取 311.6mL 海水， 再用 2023mL 烧杯准确量取海水 8 次【即 1687.5 mL
12、菲稀释液 + 0.9 mL 腐植酸原液 + 16311.6 mL 海水= 18 L】，标记为“G6”，用玻璃棒充分搅匀，使用前再用玻璃棒搅匀。8、18L 750g/L 的 Phe 和 10mg C/L 腐植酸混合液：用 1000mL 量筒和移液1685mL2.5mL枪分别准确移取和Phe 稀释液8mg/L移到 18L 塑料桶中，然后用移液枪量取 1.8mL 腐植酸原液，然后用 1000mL 量筒分别量取 310.7mL 海水， 再用 2023mL 烧杯准确量取海水 8 次【即 1687.5 mL 菲稀释液 + 1.8 mL 腐植酸原液 + 16310.7 mL 海水= 18 L】，标记为“G7
13、”，用玻璃棒充分搅匀，使用前再用玻璃棒搅匀。9、18L 750g/L 的 Phe 和 15mg C/L 腐植酸混合液：用 1000mL 量筒和移液1685mL2.5mL枪分别准确移取和Phe 稀释液8mg/L移到 18L 塑料桶中，然后用移液枪量取 2.7mL 腐植酸原液，然后用 1000mL 量筒分别量取 309.8mL 海水， 再用 2023mL 烧杯准确量取海水 8 次【即 1687.5 mL 菲稀释液 + 2.7 mL 腐植酸原液 + 16309.8 mL 海水= 18 L】，标记为“G8”，用玻璃棒充分搅匀，使用前再用玻璃棒搅匀。10、18L 750g/L 的 Phe 和 20mg
14、C/L 腐植酸混合液：用 1000mL 量筒和移液1685mL2.5mL枪分别准确移取和Phe 稀释液8mg/L移到 18L 塑料桶中，然后用移液枪量取 3.6mL 腐植酸原液，然后用 1000mL 量筒分别量取 308.9mL 海水， 再用 2023mL 烧杯准确量取海水 8 次【即 1687.5 mL 菲稀释液 + 3.6 mL 腐植酸原液 + 16308.9 mL 海水= 18 L】，标记为“G9”，用玻璃棒充分搅匀，使用前再用玻璃棒搅匀。11、18L 750g/L 的 Phe 和 25mg C/L 腐植酸混合液：用 1000mL 量筒和移液1685mL2.5mL枪分别准确移取和Phe
15、稀释液8mg/L移到 18L 塑料桶中，然后用移液枪量取 4.5mL 腐植酸原液，然后用 1000mL 量筒分别量取 308mL 海水， 再用 2023mL 烧杯准确量取海水 8 次【即 1687.5 mL 菲稀释液 + 4.5 mL 腐植酸原液 + 16308 mL 海水= 18 L】，标记为“G10”，用玻璃棒充分搅匀，使用前再用玻璃棒搅匀。每次依据实际需要量现配现用。以下为溶液配制简表：组别Phe:g/L，HA:mg C/LPhe(8mg/L)mLHA 原液mL海水mL总体积LG00，0001800018G1250，0562.5017437.518G2500，0112501687518G
16、3750，01687.5016312.518G41000，0225001575018G51250，02712.5015187.518G6750，51687.50.916311.618G7750，101687.51.816310.718G8750，151687.52.716309.818G9750，201687.53.616308.918G10750，251687.54.51630818二、仔稚鱼的选取、暴露、投喂、清理与补充暴露液：选取 42800 尾于连续数天内出膜的安康、活泼、摄食良好、体色正常、全都的仔稚鱼。试验前将这些天内出膜的仔稚鱼混合于一个大桶中。随机取 0 周样品3200 尾，称
17、重因仔稚鱼太小，可随机取样后分 4 袋称重、标清每袋 800 尾和净重量、观看、记录后即存于 -80，用于组织、毒理、生理、生化和分子生物学检测及分析。剩余的仔稚鱼再随机分组，每组 3 个养殖槽，共 33 个养殖槽，每个养殖槽 1200 尾，共 1200 X 33 = 39600 尾。为了消退仔稚鱼对选鱼、合拼和分鱼操作的应激反响，于分鱼后先暂养数天(3 天左右),待仔稚鱼稳定并补充替换不抱负仔稚鱼后,才开头正式试验!投喂和暴露液的更换：每天定时于 8:00-9:00、14:00-15:00 和 20:00-21:00 用 200 目饵料投喂各组鱼3 次的总投喂量为鱼体重的 5%。试验开头后常
18、常亲热观看各组仔鱼状况并记录活动、摄食、体色等，定于每天9：00、15：00、21： 00 统计仔鱼死亡数并进展清理，把各桶死鱼装袋标记清楚，暂存于-20冰箱中， 一天完毕后速存于-80待分析用。每天吸粪便时顺便更换暴露液，吸出多少暴露液添加多少暴露液。常常留意认真观看、记录和汇报仔稚鱼活动、摄食、饲料或丰年虫剩余、 沉淀、粪便颜色及外形、生长、发育、体色等，并分析其缘由。三、跟踪检测暴露液、鱼体的菲含量变化：每次取出死鱼，统计不同日期、不同浓度、不同养殖槽的死鱼数量，分槽装入小样品袋，再按组装入中样品袋，分别标记清楚后先暂存于-20 或-30，一天完毕后将当天全部死鱼装入一个较大样品袋，标记
19、清楚后存于-80，急性试验完毕后，把该试验的全部死鱼样品装在一个大袋，标记好存于-80 (大、较大、中、小袋都必需具体标记清楚，并确保用透亮胶带固定结实这些标记，不出过失不掉标签！)。2.用 0 周和完毕的鱼样品测定鱼体的菲含量变化，中间不取1.每天定时拟于 16:00取各槽暴露液取样品多少以测定需要量而定，跟踪测定各槽暴露液的菲含量，做好具体记录，最终作数理统计并制图表。鱼样品。四、试验记录1、试验记录本：记录日期、天气、温度、投喂量、活动性能、摄食状况和觉察的主要问题及解决方法等状况。2、死亡仔鱼记录表：按附件填写 Excel 表格。五、取样及样品袋计算：试验人员：解毒试验由全体同学共同负
20、责，每个人务必真正自觉、高度负责 任，相互协作、监视、提示和准时订正，预防过失，以免影响试验。0 周上述和试验完毕采集鱼样品，分别称重可按桶随机取样装袋称重、标清尾数和净重量、观看、记录后暂放于 -20 或-30，取样完毕后再转移至-80超低温冰箱中，用于组织、毒理、生理、生化和分子生物学检测及分析。 试验完毕采集鱼样品务必按桶分装小袋，再按组装在一个中袋，然后把每次取样的中袋装在一个较大袋，一个试验完毕后，把该试验的全部样品装在一 个大袋。大、较大、中、小袋都必需具体标记清楚，并确保用透亮胶带固定牢 固这些标记，不出过失不掉标签！认真比较观看各组鱼早期生长发育的摄食情 况、形态变化、畸变率和
21、存活率。样品袋数量计算：1、零周取样：小袋子 4 个，中袋子 1 个，较大袋子 1 个。2、死鱼存放：每天每个养殖容器所取死鱼存放于一个小袋(5cm)，每组合放于一个中袋(8cm)，全部死鱼存放于一个较大袋(14cm)，最终(14 天之后)将全部袋子放在一个大袋子20cm中。全部袋子标记好组别、日期和数量。每个时间点所取死鱼暂存于-20 或-30，一天完毕之后放到-80保存。14 天共需袋子量：小袋 33*3*14=1386 个，中袋 11*3*14=462 个，较大袋子14 个，大袋子 1 个。3、样品鱼存放：每次每组每个养殖槽取样品鱼放于 4 个小袋中，每个小袋80-250 尾依据各槽活鱼
22、量而定，把全部鱼均分装于 4 个小袋，每组合并为 1个中袋，则所 11 组存放于 1 个较大袋，最终将全部样品放于 1 个大袋中。全部袋子标记好组别、日期和样品量。尽快存于-80。取样共需袋子数量：小袋子4*33=132 个，中袋子33 个，较大袋子1 个，大袋子 1 个。4、最少需要量：小袋子 1522 个，中袋子 496 个，较大袋子 16 个，大袋子2 个。留意事项1、菲有毒性，配制时应在通风厨或超净工作台中进展。2、试验过程穿着白大褂，带好口罩和手套，做好防护工作。3、在安全范围内操作。染毒暴露试验全部器具必需单独配套，试验过程尽量保证全部试验组不与正常养殖器具等穿插感染。4、全部染毒
23、用试剂、海水和用品，妥当保存，防止误用、错用。5、各暴露组之间暴露液浓度有差异，每个组使用器具应单独配套，严格分开使用，严防穿插污染。每次配制、补充暴露液操作必需由低浓度到高浓度!6、全部槽、吸管、样品袋标记好日期、浓度、数量、编号等。六、腐植酸的测定7、在试验中，要勤查询、动脑、科学、严谨、标准、举一反三，不断改进操作，完善程序，提高试验水平。一、腐植酸样品百分含量测定方法本方案承受修正后万攸红 .容量法测定腐植酸的含量 . 有色金属分析通讯,2023,113:9-11.的容量法进展测定。具体状况如下：一、试验器材1、仪器设备：容量瓶，锥形瓶，漏斗，恒温枯燥箱温度能可达 l50，恒温水浴锅。
24、2、药品试剂及配制：焦磷酸钠碱混合液：称取 26g 焦磷酸钠放于 1000mL 容量瓶中，加人 100mL 蒸馏水，7g 氢氧化钠溶解，加水定容，摇匀。重铬酸钾溶液 C( 1/ 6 K2Cr2O7 )=0.8mol/L：称取 39.2g 重铬酸钾(分析纯)于1000mL 容量瓶中，定容摇匀，无需标定。重铬酸钾标准溶液 C( 1/ 6 K 2Cr2O7 )=0.2023mol/L：准确称取经 l40150枯燥2h 的基准试剂重铬酸钾 9.8060g，加水溶解后倒人 1000mL 容量瓶中，定容，摇匀。硫磷混酸：在 1000 mL 烧杯中，参加 700mL 蒸馏水，一边搅拌一边缓缓参加 l50mL
25、浓硫酸和 150mL 浓磷酸。0.5%的二苯胺磺酸钠指示液：称取 0.5g 二苯胺磺酸钠溶于 100mL 蒸馏水中。硫酸亚铁铵标准溶液(0.2mo l/L)：称取 78g 硫酸亚铁铵(NH4)2Fe(SO4)26H2O溶于 200mL 稀硫酸(与蒸馏水体积比为 1:2)中，加水稀释至 1000ml，摇匀，静置。准确吸取已制备好的硫酸亚铁铵溶液 25.00mL 于 500mL 锥形瓶中，参加 10mL 硫磷混酸， 参加 80mL 蒸馏水，再参加34 滴二苯胺磺酸钠指示液，以重铬酸钾标准溶液滴定至紫色即为终点24.8ml，计算硫酸亚铁铵标准溶液的准确浓度。 0.5%的邻菲罗啉指示液：称取 0.5g
26、 邻菲罗啉溶于 100mL 蒸馏水中，参加 0.335g 硫酸亚铁铵固体，溶解，摇匀。二、操作步骤1、取腐植酸样品液体 1mL 于 500mL 三角烧瓶中，参加 70mL 焦磷酸钠碱混合液，摇匀后用棉塞封口不要记得太紧，沸水浴 30min，取出冷至室温，转移至 500mL 容量瓶中，蒸馏水定容，摇匀即得试样溶液。2 、 分取适量试样溶液 10ml 放入 500mL 三角烧杯中， 准确参加1.00mLC(1/6K2Cr2O4)=0.8mol/L 的重铬酸钾溶液，再加 5mL 浓硫酸，摇匀。3、沸水浴 30min，取出，参加 80mL 蒸馏水，冷却至室温。4、加 34 滴 0.5%的邻菲罗啉指示液
27、，用 0.2mo1/L 的硫酸亚铁铵标准溶液滴定至溶液突变为红色不褪为终点。5、空白试验重复以上步骤。三、计算公式参考戴丽明戴丽明. 腐植酸含量测定的方法. 河北化工, 2023, 1:60-61.0.003 V -V C VX =321 100a mV4式中，V3滴定空白所耗硫酸亚铁铵标准溶液的体积，ml； V2滴定试样所耗硫酸亚铁铵标准溶液的体积，ml； C添加的硫酸亚铁铵的浓度；m试样的质量，g； V1试样溶液的总体积，ml；V4测定时所取试样溶液的总体积，ml； a腐植酸碳系数泥炭或生化腐植酸 0.51我们承受的腐殖酸样品的含量为： V3=3.08，V2=2.62，m=1.2270，V
28、1=10V4： X=18.026。二、毒液稀释液中腐植酸 C 含量测定本方案承受冯苍旭. 光谱法快速快速测定腐植酸C 含量. 中国地质, 2023, 37(3): 831-834.的容量法进展测定。具体状况如下：1. 所需器皿万分之一电子天平；移液管：50 mL 容量瓶(6 个)；500 mL 容量瓶(1 个)；50 mL高脚烧杯(6 个)；100 mL 容量瓶(4 个)；1000 mL 容量瓶(1 个)。2. 所需试剂浓硫酸(AR)；重硌酸钾溶液(0.8 molL)。3试剂的配置浓硫酸：H2SO4(AR)重铬酸钾(0.8mol/L 的 1/6 K2Cr2O7)：称取 3.923 g 重铬酸钾
29、(AR)于 100 mL 溶量瓶中，溶解并定溶。0.5C 标准液：称取 1.25g 葡萄糖 C6H12O6(AR)于 100mL 容量瓶中溶解后加 1 mL 浓硫酸定溶浓度为 5mgL。0.05C 标准液：量取 10 mL 5mgL 的 C 标准液于 100 mL 容量瓶中， 定溶，浓度为 0.5 mgL，500gL。0.025C 标准液：量取 5 mL 5 mgL 的 C 标准液于 100 mL 容量瓶中， 定溶，浓度为 0.25 mgL，250gL。0.01C 标准液：量取 10 mL 5 mgL 的 C 标准液于 500 mL 容量瓶中， 定溶，浓度为 0.1 mgL，100gL。0.0
30、05C 标准液：量取 10 mL 5 mgL 的 C 标准液于 1000 mL 容量瓶中， 定溶，浓度为 0.05 mgL，50gL。0.0005C 标准液：量取10 mL 0.05 mgL 的 C 标准液于 100 mL 容量瓶中，定溶，浓度为 0.005 mgL，5gL。4. 测定步骤上面配置了浓度为 5gL；50gL；100gL；250gL；500gL 5 种浓度的 C 标准液。取 6 个 50 mL 高脚烧杯，自左至右 1 号参加 3 ml 的蒸馏水，2 号参加 3mL 5gL 的 C 标准液，3 号参加 3 mL 50gL 的 C 标准液，4 号参加 3 mL100gL 的 C 标准
31、液，5 号参加 3 mL 250gL 的 C 标准液，6 号参加 3 mL 500gL 的C 标准液。分别参加 1 mL 重铬酸钾，再参加 5 mL 浓硫酸并不断摇动然后分别参加10 mL 水停 20min待用。于 100 mL 容量瓶中定溶后即可测试，测试时用蒸馏水校零。依据上述所得数据制作标准曲线。横坐标为吸光度值，纵坐标为 C 含量。取目标毒液(已加腐植酸)3mL，参加 10 mL 重铬酸钾，再参加 10 mL 浓硫酸并不断摇动然后分别参加 10 mL 水停 20min 之后用分光光度计测 650nm 的吸光度值，并计算出 C 含量。标准曲线碳含量标准曲线600500y = 30861x - 23.684R2 = 0.977400L/g300u量含碳200系列1线性 (系列1)100000.0050.010.0150.02-100吸光度值吸光度值与碳含量关系00.0020.0050.010.016050100250500我们承受的腐殖酸碳含量为：稀释 105倍时，吸光度值为 0.005，则腐殖酸中碳含量为 100g/L。