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1、第第7章章 分子发光分析法分子发光分析法 7-1 概述概述 分子吸收一定能量后,跃迁到较高能级(即激发态),在退激发时可能会有光辐射,有光辐射的现象叫分子发光。根据分子发光建立起来的分析方法叫分子发光分析法。1 上述“一定的能量”,可以是光能、化学能,分子吸收光能后发光可有两种。荧光:荧光:光照停止,发光停止。燐光:光照停止,发光继续。这种现象通常叫光致发光。2分子吸收化学能而激发发光,叫化学发光。如果化学反应发生在生物体内,发生的化学发光叫生物发光。举一些例子说明。e.g.日光灯荧光灯。Hg(g)hv 线光谱 卤磷酸钙(发出粉红色的荧光)+蓝色的汞的线光谱 互补成白色。3电视机屏-“荧屏”-
2、实为“燐屏”-余辉1/24 s(可看见动作,“视觉暂停”)。雷达屏-燐屏。萤火虫-生物发光,能量转化几乎100%(生化能光能)。分子发光分析法的用途:一般用作有机物测定,有简易便宜的仪器。47-2 荧光分析法基本原理荧光分析法基本原理 一、荧光和燐光的产生 基态分子吸收光能后,分子中的价电子跃迁至高能级成为激发态。激发态/基态的转变过程中,分子的电子可以有不同的自旋状态。S-singlet state 单重态。T-triplet state 三重态。6两者之间的区别:(1)S 抗磁性 T顺磁性(2)跃迁概率T1 S1 (3)能量 T1 S1,T2 S2,T1 为亚稳定状态,“能量越低越稳定”。
3、故的寿命较长(达数秒数十秒)。2、内部转换和系间窜越 木高于林、风必摧之。7VR:振动弛豫,碰撞变成热。ISC:系间窜越。IC:内部转换。3、荧光和燐光的产生 荧光:分子从S1态的最低振动能级跃迁到S0态的各个振动能级产生辐射去激。需时不长,约10-910-6秒,叫快速荧光。即 S1(min)S0(all)8二、荧光激发光谱和荧光发射光谱(自看)三、荧光量子产率 :吸收的光子数(光强)有多少转变成荧光。定义是1、对非荧光物质 2、对荧光物质 10e.g.硫酸奎宁 色氨酸 四、荧光分析的定量依据根据朗伯比尔定律11c很小时,可略去高次项:荧光发射强度的讨论:13 e.g.液相色谱仪的固定波长荧光检测器(荧光计)。e.g.赤霉素含量测定仪(荧光计)。荧光是一种分子发光,向四面八方发出,荧光检测器与荧光源的角度可随意设置,为了避免激发光的干扰,一般与激发光成直角。样品池:石英方池,四面都是光学面,使用时拿棱且靠近池口。15