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1、肿瘤学动物实验技能培训第1页，共22页，编辑于2022年，星期二一、常用实验动物及选择一、常用实验动物及选择品系选择品系选择 名称名称毛色毛色免疫特性免疫特性适合实验适合实验BALB/cBALB/c白色野生型同基因型肿瘤实验C57BLC57BL黑色野生型同基因型肿瘤实验Nude BALB/c,Nude BALB/c,裸鼠裸鼠无毛胸腺缺陷，T细胞缺陷人移植瘤实验SCIDSCID白色T、B细胞减少，细胞免疫和体液免疫缺陷，巨噬细胞和NK细胞正常免疫功能重建，肿瘤学NOD/SCIDNOD/SCID白色与SCID相比，NK细胞减少免疫功能重建，肿瘤学NOG/NSGNOG/NSG白色IL-2受体缺陷，与
2、NOD/SCID相比，天然和获得性免疫缺陷更高免疫功能重建，肿瘤细胞治疗BALB/cC57BL裸鼠裸鼠SCIDNOD/SCIDNOG/NSG第2页，共22页，编辑于2022年，星期二 成年动物的年龄、体重和寿命比较成年动物的年龄、体重和寿命比较 小鼠小鼠 大鼠大鼠 豚鼠豚鼠 兔兔 狗狗 成年日成年日龄龄（天）（天）6590 85110 90120 120180 250360 成年体重（成年体重（g）2028 200280 350600 20003500 800015000 平均寿命（年）平均寿命（年）12 23 2 56 1317 最高寿命（年）最高寿命（年）3 4 6 13 34 一、常用实
3、验动物及选择一、常用实验动物及选择年龄选择年龄选择 一般购买一般购买6-8周小鼠，用于实验周小鼠，用于实验 第3页，共22页，编辑于2022年，星期二二、小鼠的饲养二、小鼠的饲养环境环境 n 微生物控制等级选择微生物控制等级选择 v 普通级动物：示教、预实验普通级动物：示教、预实验v 清洁级动物：适用大多数科研。清洁级动物：适用大多数科研。v 无无特特定定病病原原体体动动物物（SPFSPF）：为为理理想想的的健健康康动动物物，适用于所有科研、检定。适用于所有科研、检定。v 无菌动物（无菌动物（GFGF）：适用于特殊研究。）：适用于特殊研究。第4页，共22页，编辑于2022年，星期二n 动物室环
4、境控制要求值动物室环境控制要求值项目项目控制要求值控制要求值备注备注温度温度2127按动物品种而有若干差别按动物品种而有若干差别湿度湿度4555%气流速度气流速度1025cm/秒秒避免直吹风避免直吹风换气次数换气次数815次次/小时小时100%新鲜空气（如使用循环空气，不新鲜空气（如使用循环空气，不应超过总空气量的应超过总空气量的1/3）照明照明75300lux定时人工照明（分置小瓦数日光灯）定时人工照明（分置小瓦数日光灯）氨浓度氨浓度20ppm以下以下噪音噪音50分贝以下分贝以下无动物时（有动物时，除狗居外，不高无动物时（有动物时，除狗居外，不高于于65分贝）分贝）二、小鼠的饲养二、小鼠的饲
5、养环境环境 第5页，共22页，编辑于2022年，星期二n 动物饲养密度动物饲养密度 动物饲养密度应符合卫生标准，有一定的活动面积，不能过分拥动物饲养密度应符合卫生标准，有一定的活动面积，不能过分拥挤。挤。各种动物所需笼具的面积和体积因饲养目的而异，哺乳期所需各种动物所需笼具的面积和体积因饲养目的而异，哺乳期所需面积较大，面积较大，一般小鼠一般小鼠4-6只只/笼笼。二、小鼠的饲养二、小鼠的饲养密度密度 第6页，共22页，编辑于2022年，星期二二、小鼠的饲养二、小鼠的饲养垫料、饲料、水垫料、饲料、水 n 垫料、饲料均需经过辐照并密封包装。垫料、饲料均需经过辐照并密封包装。n 水，自来水水，自来水
6、121度高压灭菌度高压灭菌20min。n 饲料选择营养均衡的配方饲料即可，特殊情况才选饲料选择营养均衡的配方饲料即可，特殊情况才选 择高蛋白，高脂肪饲料。择高蛋白，高脂肪饲料。第7页，共22页，编辑于2022年，星期二三、肿瘤建模三、肿瘤建模 n 肿瘤模型类型：肿瘤模型类型：皮下移植瘤、肺转移模型、原位移植瘤；皮下移植瘤、肺转移模型、原位移植瘤；n 查阅文献确定细胞接种浓度：查阅文献确定细胞接种浓度：一般一般1*101*106 6 个细胞左右；个细胞左右；n 预实验：预实验：以以2 2倍比例选择三个细胞浓度开展预实验；倍比例选择三个细胞浓度开展预实验；n 准备细胞：准备细胞：细胞重悬于细胞重悬
7、于PBSPBS、生理盐水或基础培养基中，定量；、生理盐水或基础培养基中，定量；n 接种：接种：皮下接种可选择乙醚麻醉，皮下接种可选择乙醚麻醉，100 ul/100 ul/位点；肺转移位点；肺转移 尾静脉注射，用小鼠固定器，尾静脉注射，用小鼠固定器，200ul/200ul/只；只；n 对于皮下移植瘤，如需细胞数量较大，可以接种组织块儿；对于皮下移植瘤，如需细胞数量较大，可以接种组织块儿；n 皮下接种部位：皮下接种部位：FlankFlank，背颈部，腋窝。，背颈部，腋窝。第8页，共22页，编辑于2022年，星期二四、标记与分组四、标记与分组 n n 编号与标记方法编号与标记方法编号与标记方法编号与
8、标记方法 染色法染色法染色法染色法 剪耳法剪耳法剪耳法剪耳法 穿耳孔法穿耳孔法穿耳孔法穿耳孔法 标牌法标牌法标牌法标牌法 烙印法烙印法烙印法烙印法 剪毛法剪毛法剪毛法剪毛法第9页，共22页，编辑于2022年，星期二 在每组动物不超过在每组动物不超过在每组动物不超过在每组动物不超过l0l0l0l0只或一个实验不超过只或一个实验不超过只或一个实验不超过只或一个实验不超过40404040只的只的只的只的情况下适用情况下适用情况下适用情况下适用 染色剂：染色剂：染色剂：染色剂：3-53-53-53-5苦味酸溶液，可染成黄色苦味酸溶液，可染成黄色苦味酸溶液，可染成黄色苦味酸溶液，可染成黄色n n 染色法
9、：单色涂染法染色法：单色涂染法染色法：单色涂染法染色法：单色涂染法四、标记及分组四、标记及分组单色染色法单色染色法第10页，共22页，编辑于2022年，星期二 涂染原则：从左到右、从上到下涂染原则：从左到右、从上到下涂染原则：从左到右、从上到下涂染原则：从左到右、从上到下 左前肢为左前肢为左前肢为左前肢为1 1 1 1号、左侧腹部号、左侧腹部号、左侧腹部号、左侧腹部2 2 2 2号、左后肢号、左后肢号、左后肢号、左后肢3 3 3 3号，号，号，号，两耳后部两耳后部两耳后部两耳后部4 4 4 4号、背部号、背部号、背部号、背部5 5 5 5号、后肢背部号、后肢背部号、后肢背部号、后肢背部6 6
10、6 6号，号，号，号，右前肢右前肢右前肢右前肢7 7 7 7号、右侧腹部号、右侧腹部号、右侧腹部号、右侧腹部 8 8 8 8号、右后肢号、右后肢号、右后肢号、右后肢9 9 9 9号号号号 头部为头部为头部为头部为40404040号、尾巴根为号、尾巴根为号、尾巴根为号、尾巴根为10101010号。号。号。号。n n 方法步骤方法步骤方法步骤方法步骤四、标记及分组四、标记及分组单色染色法单色染色法第11页，共22页，编辑于2022年，星期二 在每组动物不超过在每组动物不超过在每组动物不超过在每组动物不超过100100100100只的情况下适用只的情况下适用只的情况下适用只的情况下适用 常常常常用用
11、用用染染染染色色色色剂剂剂剂：3-53-53-53-5苦苦苦苦味味味味酸酸酸酸溶溶溶溶液液液液，可可可可染染染染成成成成黄黄黄黄色色色色，作作作作为为为为“个个个个”位数位数位数位数 常常常常用用用用染染染染色色色色剂剂剂剂：0.5%0.5%0.5%0.5%中中中中性性性性红红红红或或或或品品品品红红红红溶溶溶溶液液液液，可可可可染染染染成成成成红红红红色，作为色，作为色，作为色，作为“十十十十”位数位数位数位数四、标记及分组四、标记及分组双色染色法双色染色法第12页，共22页，编辑于2022年，星期二 用两种颜色同时进行染色标记用两种颜色同时进行染色标记用两种颜色同时进行染色标记用两种颜色同
12、时进行染色标记 用苦味酸用苦味酸用苦味酸用苦味酸(黄色黄色黄色黄色)染色标记作为个位数，个位数的染色标记作为个位数，个位数的染色标记作为个位数，个位数的染色标记作为个位数，个位数的染色标记方法同单色涂染法染色标记方法同单色涂染法染色标记方法同单色涂染法染色标记方法同单色涂染法 用品红用品红用品红用品红(红色红色红色红色)染色标记作为十位数染色标记作为十位数染色标记作为十位数染色标记作为十位数四、标记及分组四、标记及分组双色染色法双色染色法n n 方法步骤方法步骤方法步骤方法步骤第13页，共22页，编辑于2022年，星期二 左前肢为左前肢为左前肢为左前肢为10101010号、号、号、号、左侧腹部
13、左侧腹部左侧腹部左侧腹部20202020号、左后肢号、左后肢号、左后肢号、左后肢30303030号号号号 两耳后部两耳后部两耳后部两耳后部40404040号、号、号、号、背部背部背部背部50505050号、号、号、号、后肢背部后肢背部后肢背部后肢背部60606060号号号号 右前肢右前肢右前肢右前肢70707070号、右侧腹部号、右侧腹部号、右侧腹部号、右侧腹部 80 80 80 80号、右后肢号、右后肢号、右后肢号、右后肢90909090号号号号 第第第第100100100100号不作染色标记号不作染色标记号不作染色标记号不作染色标记方法步骤第14页，共22页，编辑于2022年，星期二 穿耳
14、孔法穿耳孔法穿耳孔法穿耳孔法：用专用耳空器在动物耳朵不同部位打一小孔或缺口表：用专用耳空器在动物耳朵不同部位打一小孔或缺口表：用专用耳空器在动物耳朵不同部位打一小孔或缺口表：用专用耳空器在动物耳朵不同部位打一小孔或缺口表示一定号码的方法。原则是：左耳代表十位，右耳代表个位。示一定号码的方法。原则是：左耳代表十位，右耳代表个位。示一定号码的方法。原则是：左耳代表十位，右耳代表个位。示一定号码的方法。原则是：左耳代表十位，右耳代表个位。标牌法标牌法标牌法标牌法：一般挂在动物的颈部、耳朵、脚上。：一般挂在动物的颈部、耳朵、脚上。：一般挂在动物的颈部、耳朵、脚上。：一般挂在动物的颈部、耳朵、脚上。烙印
15、法烙印法烙印法烙印法 剪毛法剪毛法剪毛法剪毛法四、标记及分组四、标记及分组其他方法其他方法 第15页，共22页，编辑于2022年，星期二四、标记及分组四、标记及分组分组分组 n 一致性原则一致性原则 n 差异是绝对的，一致是相对的差异是绝对的，一致是相对的 n 利用随机数字表进行随机分组，最大限度避免人为因素利用随机数字表进行随机分组，最大限度避免人为因素 第16页，共22页，编辑于2022年，星期二五、治疗、给药五、治疗、给药 n 治疗起点和途经根据不同的肿瘤和治疗药物不同而定；治疗起点和途经根据不同的肿瘤和治疗药物不同而定；n 皮下移植瘤，尾静脉给药：皮下移植瘤，尾静脉给药：50 mm3,
16、100 mm3；n 皮下移植瘤，瘤内给药：皮下移植瘤，瘤内给药：200-300 mm3；n 腹腔给药。腹腔给药。第17页，共22页，编辑于2022年，星期二六、肿瘤的测量六、肿瘤的测量 n 皮下移植瘤：皮下移植瘤：游标卡尺测量，称重，小动物活体成像；游标卡尺测量，称重，小动物活体成像；n 肺转移瘤：肺转移瘤：肺表面结节数，小动物活体成像；肺表面结节数，小动物活体成像；第18页，共22页，编辑于2022年，星期二n皮下移植瘤实验：皮下移植瘤实验：生存期较长，有如下情况者处死小鼠，生存期较长，有如下情况者处死小鼠，记为死亡：记为死亡：l 肿瘤长径达到肿瘤长径达到2cm，或体积大于，或体积大于1cm
17、3；l 蜷缩不动；蜷缩不动；l 毛发蓬松脏乱无光；毛发蓬松脏乱无光；l 对外界刺激无反应；对外界刺激无反应；l 体重明显下降的（体重明显下降的（24h内下降内下降2-3g）。）。七、小鼠生存期统计七、小鼠生存期统计治疗终点治疗终点 n 转移瘤实验：转移瘤实验：一般生存期较短；一般生存期较短；第19页，共22页，编辑于2022年，星期二八、动物组织标本采集八、动物组织标本采集 l 收集心、肝、脾、肺、肾等主要脏器，福尔马林固定，收集心、肝、脾、肺、肾等主要脏器，福尔马林固定，HE染色观察治疗毒性；染色观察治疗毒性；n 治疗实验：治疗实验：l 收集肿瘤组织，福尔马林固定，观察肿瘤指标；收集肿瘤组织
18、，福尔马林固定，观察肿瘤指标；n 免疫荧光实验：免疫荧光实验：收集新鲜组织，做冰冻切片；收集新鲜组织，做冰冻切片；第20页，共22页，编辑于2022年，星期二九、动物实验伦理九、动物实验伦理 n 悉心照料动物，保证正常生存条件；悉心照料动物，保证正常生存条件；n 皮下移植瘤体积最大长至长径皮下移植瘤体积最大长至长径2cm或体积或体积1cm3；n 实验结束对小鼠进行安乐死，拖颈或实验结束对小鼠进行安乐死，拖颈或CO2处死；处死；第21页，共22页，编辑于2022年，星期二十、动物实验安全十、动物实验安全 n 抓取小鼠时小心被小鼠咬伤；抓取小鼠时小心被小鼠咬伤；n 注射给药时注意给药安全；注射给药时注意给药安全；n 实验过程中有毒化学试剂、标本的存放；实验过程中有毒化学试剂、标本的存放；第22页，共22页，编辑于2022年，星期二