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1、植物中蛋白质的测定第1页，共22页，编辑于2022年，星期六肽的功能肽的功能 由于多肽这类生物活性物质是生命活动重要的参与者，它影响和调节着细胞与细胞，组织与组织间的生理活动，并且反馈着细胞与组织的化学反应信息。第2页，共22页，编辑于2022年，星期六 功能肽是由氨基酸构成，活性高，在极微量的使用下，都能发挥作用，它们在人体内被利用后迅速的被代谢，最终变为氨基酸和水，无残留，无副作用。第3页，共22页，编辑于2022年，星期六 很早以来科学家就想把它们应用到人们的日常饮食中，作为营养补充剂和功能因 子，用以影响或改善人们的营养代谢、脂肪代谢、糖代谢、调节神经系统等。第4页，共22页，编辑于2
2、022年，星期六双缩脲比色法一 原理二 试剂三 操作步骤四 计算测定方法测定方法半微量凯氏滴氮法（水蒸气蒸馏法）Folin-酚试剂法紫外吸收法考马斯亮蓝染色法测定面粉中蛋白质的含量五 注意事项第5页，共22页，编辑于2022年，星期六一 原理二 实验材料与仪器三 操作步骤四 计算双缩脲比色法测定面粉中蛋白质的含量五 注意事项第6页，共22页，编辑于2022年，星期六 1.双缩脲（NH2CONHCONH2）是两个尿素分子经180 左右加热，放出一个分子氨后得到的产物。原理原理第7页，共22页，编辑于2022年，星期六原理 2.在强碱性溶液中，双缩脲与 CuSO4形成紫色络合物，称为双缩脲反应。凡
3、具有两个肽键或两个直接连接的肽键，或能过一个中间碳原子相连的肽键，这类化合物都有双缩脲反应。第8页，共22页，编辑于2022年，星期六原理 3.测定：在一定的浓度范围内，紫色络合物颜色深浅与蛋白质含量呈线性关系。而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关，故可在540 nm处比色再与同样处理的标准蛋白质来比较测定蛋白质含量。测定范围为110mg蛋白质/ml。干扰这一测定的物质主要有：硫酸铵、Tris缓冲液和某些氨基酸等。第9页，共22页，编辑于2022年，星期六实验材料与仪器 1.仪器和材料：分光光度计、7支试管、1mL 刻度吸管3支、移液器、坐标纸、摇床、离心机、具塞三角瓶、分析天平。2.试剂：四氯化
4、碳溶液、少许面粉、双缩脲试剂、9 g/L的 NaCl溶液、蛋白质标准液 （10 g/L)。第10页，共22页，编辑于2022年，星期六分析天平第11页，共22页，编辑于2022年，星期六具塞三角瓶第12页，共22页，编辑于2022年，星期六离心机第13页，共22页，编辑于2022年，星期六摇床第14页，共22页，编辑于2022年，星期六.样品处理样品处理 1.0.25 g小麦面粉2ml四氯化碳；2.加塞，在摇床上振摇30分钟，使之充分混匀、反应，然后于实验台上静置10分钟；操作步骤操作步骤第15页，共22页，编辑于2022年，星期六 3.离心，4000dr/min，离心15分钟；4.取上清液比
5、色操作步骤操作步骤第16页，共22页，编辑于2022年，星期六操作步骤 标准曲线的制作与标准曲线的制作与 样品中蛋白质的测定样品中蛋白质的测定 1.取7支试管，编号，按照表1数据操作。2.利用分光光度计测光吸收值并记录。第17页，共22页，编辑于2022年，星期六表1 管号管号 试剂试剂0 0标准管标准管测定管测定管1 12 23 34 45 56 6蛋白质蛋白质标准液标准液(10mg/(10mg/mL)mL)-0.20.20.40.40.60.60.80.81 1-面粉溶面粉溶液上清液上清液液mLmL-1 1氯化钠氯化钠溶液溶液 mLmL1 10.80.80.60.60.40.40.20.2
6、-双缩脲双缩脲试剂试剂 mLmL4 44 44 44 44 44 44光吸光吸收值收值0 00.0850.0850.1810.1810.2610.2610.3540.3540.4380.4380.317各管浓各管浓度度 mg/ml mg/ml 0 00.40.40.80.81.21.21.61.62 2？第18页，共22页，编辑于2022年，星期六 3.在坐标纸上以各管蛋白质含量为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制标准曲线。操作步骤操作步骤第19页，共22页，编辑于2022年，星期六计算从标准管中选一管与测定管光吸收值接近值，按公式 计算待测血清样本的蛋白质浓度，从上可选 A测=0.317 g/L，C标=0.354 g/L，A标=1.6 g/L；则得到：C测=1.432 g/L。第20页，共22页，编辑于2022年，星期六 1.本实验是定量实验，要求所有玻璃仪器必须清洁，整齐、干燥。蛋白质标准液和淀粉上清液取量必须准确。2.各管加好样后必须充分混匀。3.显色反应需在20到30min才完成。注意事项注意事项第21页，共22页，编辑于2022年，星期六谢谢观赏第22页，共22页，编辑于2022年，星期六