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1、杀虫剂生物测定技术第1页，共62页，编辑于2022年，星期六u标准试虫u杀虫剂生物测定方法u毒力的表示方法u杀螨剂生物测定方法u杀虫剂田间药效试验第2页，共62页，编辑于2022年，星期六一、标准试虫 标准试虫是指数种被普遍采用的具有一定代表性和经济意义及耐药能力较稳定而均匀的昆虫群体。标准试虫的大量供应与质量均匀是影响生物测定结果正确、稳定与可靠的最基本因子，同时也是保证顺利地开展和完成生物测定最基本的条件之一。第3页，共62页，编辑于2022年，星期六（1）粘虫（Leucania separate Walker），代表鳞翅目咀嚼式口器食叶性害虫。（可人工饲养）（2）玉米螟（Ostrinia
2、 nubilalis），代表为害杂粮作物的钻蛀性害虫。（可人工饲养）（3）二化螟（Chilo suppressalis）,代表钻蛀性水稻害虫。（可人工饲养）常用的供试昆虫有：第4页，共62页，编辑于2022年，星期六（4）还有三化螟、棉铃虫、地老虎农业害虫等。（5）卫生害虫（如蚊、蝇类）（6）仓库害虫（米象、赤拟谷盗等）（7）刺吸性害虫（蚜螨类）第5页，共62页，编辑于2022年，星期六（1）在分类上或经济上有一定的代表性的不同种类的昆虫；（2）对药物敏感性符合要求；（3）容易饲养，能终年提供试材，使测定工作不受地区或季节的限制；（4）在试验中便于控制操作。供试昆虫的要求供试昆虫的要求第6页，
3、共62页，编辑于2022年，星期六二、杀虫剂生物测定方法（1）胃毒作用（2）触杀作用（3）熏蒸作用（4）内吸作用 第7页，共62页，编辑于2022年，星期六u夹毒叶片法夹毒叶片法u液滴饲喂法液滴饲喂法 u口腔注射法口腔注射法 胃毒作用（胃毒作用（stomach action）的测定方法）的测定方法 第8页，共62页，编辑于2022年，星期六 叶片夹毒法适合于植食性、取食量大的咀嚼式口器的昆虫，如鳞翅目幼虫、蝗虫等。其基本原理是用2张叶片，中间均匀地分布一层杀虫药剂，饲喂试虫，按吞食叶片的面积计算吞食药量。夹毒叶片法夹毒叶片法（sandwich method）第9页，共62页，编辑于2022年，
4、星期六对于舐吸式口器的昆虫不宜用夹毒叶片法，如家蝇、果蝇、蜜蜂等昆虫喜欢食糖液，可将一定量的杀虫剂加入到糖液中，用微量注射器形成一定大小的液滴（0.0010.01ml），直接饲喂昆虫。液滴饲喂法液滴饲喂法（Feeding of measured drops）第10页，共62页，编辑于2022年，星期六 一般适用个体较大的咀嚼式昆虫，如家蚕，鳞翅目幼虫等，处理时，将药剂溶解后用微量注射器或手细管点滴定量的药液注入试虫口器中，昆虫吞食药液后，转入放有新鲜饲料的容器中培养观察。这种方法由于从口腔注入药液时易刺破口腔内软组织，技术难以掌握。因此，应用较少。口腔注射法口腔注射法第11页，共62页，编辑于
5、2022年，星期六触杀作用（触杀作用（contact action）测定方法）测定方法u点滴法点滴法u药膜法或残膜法药膜法或残膜法u浸液法浸液法第12页，共62页，编辑于2022年，星期六 室内定量测定触杀毒力最常用的方法。在测定触杀毒力时，应尽量避免药剂从口器或气孔进入虫体。直接将药液点滴到昆虫的某一部位。多为幼虫的前胸背板，溶剂迅速挥发，药剂在体壁上形成药膜而侵入体内。点滴法点滴法第13页，共62页，编辑于2022年，星期六 用喷雾法及喷粉法将药剂定量地分布于一定表面上，如滤纸、玻璃容器内壁及植物叶片等而形成一层均匀的药膜。使昆虫在药膜上接触一定时间（424h），检查击倒率或死亡率。求出药
6、剂对试虫的毒力。药膜法或残膜法药膜法或残膜法第14页，共62页，编辑于2022年，星期六 对于水生昆虫（蚊幼虫、螨类和蚜虫）将药剂配成57个不同浓度有药液，摘取有一定数量蚜虫的豆苗叶片，在不同药液中浸35s，取出后，用吸水纸吸去多余的药液，统计叶片上的蚜虫数量，对照用清水处理。保湿24h，检查蚜虫的死亡数，计算死亡率及校正死亡率，求出LC50。浸液法第15页，共62页，编辑于2022年，星期六 某些药剂有内吸性如许多有机磷和氨基甲酸酯类杀虫剂可以通过植株的根、茎、叶等部位吸收到植株的内部，随着植物体液在体内的传导，当害虫取食或刺吸植物时，药剂也随之进入害虫的体内并将其杀死。内吸作用（内吸作用（
7、Systemic action）的试验方法）的试验方法第16页，共62页，编辑于2022年，星期六 内吸杀虫剂毒力的测定方法分为直接测定法和间接测定法2种。直接法包括茎或叶的局部涂药、根际施药及种子处理等。间接法是用处理后的植物，取其叶片研磨成为水剂，加在水中，测定对水生昆虫的毒力。第17页，共62页，编辑于2022年，星期六定定义义杀杀虫虫药药剂剂以以气气体体的的方方式式通通过过害害虫虫的的呼呼吸吸系系统统进进入入虫虫体体，而而起起到到毒毒杀杀的的作作用用称称熏熏蒸蒸作用。作用。目目的的熏熏蒸蒸作作用用毒毒力力的的测测定定的的目目的的主主要要有有2 2个个：一一是是用用鉴鉴别别杀杀虫虫剂剂有
8、有无无熏熏蒸蒸作作用用；二二是是测定熏蒸剂的杀虫毒力。测定熏蒸剂的杀虫毒力。注注意意要要求求在在一一个个密密闭闭的的条条件件下下进进行行，且药剂不与试虫接触。且药剂不与试虫接触。熏蒸作用（熏蒸作用（fumigation action）测定方法）测定方法第18页，共62页，编辑于2022年，星期六毒力的表示方法及计算致死中量（LD50：Median lethal dose）或致死中浓度（LC50：Median lethal concentration）：药剂杀死某种生物群体50所需的剂量（LD50）或浓度（LC50）。第19页，共62页，编辑于2022年，星期六结果检查与结果检查与LDLD505
9、0计算计算u胃毒作用u触杀作用第20页，共62页，编辑于2022年，星期六以夹毒叶片法以夹毒叶片法为例 昆虫取食后放在干净容器中，加入新鲜的植物叶片，在2472h后检查死亡率。由于各昆虫的取食量不同，因此必须单独观察记录。第21页，共62页，编辑于2022年，星期六根据取食面积、单位面积上的着药量（g/g），根据单位体重受药量，由小至大顺序排列，由于在取食量较小时试虫无死亡；随着取食量加大，出现死、活均有出现的剂量范围；再加大取食量，试虫全部死亡。这三种表现自然分成三组：（1）生存组（2）生死组（3）死亡组。如实验中三组数值均出现，则说明实验成功，如缺其中一组，应重做。生存组和死亡组是划分生死
10、组（中间组）界线的。第22页，共62页，编辑于2022年，星期六 将中间组死虫的每项单位体重药量累加，除以总死虫数得A；中间组活虫的每项单位体重相加除以活虫数得B。将AB除2即得致死中量（g/g），计算公式为 致死中量（LD50）（AB）/2第23页，共62页，编辑于2022年，星期六 供试药剂设计56个浓度梯度，每个浓度为一个处理，每个处理4060头，重复46次，每个重复10头。用微量点样器在供试昆虫的前胸背板上点一定体积的药量，2448h后检查死亡虫数。统计死亡率，计算LD50。触杀毒力结果检查第24页，共62页，编辑于2022年，星期六LD50（LC50）的计算死亡率（%）死虫数/供试虫
11、数X100%校正死亡率（%）处理组死亡率对照组死亡度/100对照组死亡率X100 单位体重受药量（g/g）处理浓度（ppm）X点滴药量(l)/试虫平均体重(g)X100第25页，共62页，编辑于2022年，星期六LD50的计算方法u作图法作图法uExcelExcel法法u最小最小2 2乘法乘法第26页，共62页，编辑于2022年，星期六 例：用点滴法测定辛硫磷对玉米螟5龄幼虫的毒力，试虫平均体重为0.046g/头，每头试虫点滴0.8l药剂丙酮液，48h检查试虫死亡率，结果如表1-1。试计算辛硫磷对玉米螟5龄幼虫的LD50。第27页，共62页，编辑于2022年，星期六第28页，共62页，编辑于2
12、022年，星期六第29页，共62页，编辑于2022年，星期六第30页，共62页，编辑于2022年，星期六第31页，共62页，编辑于2022年，星期六第32页，共62页，编辑于2022年，星期六第33页，共62页，编辑于2022年，星期六第34页，共62页，编辑于2022年，星期六第35页，共62页，编辑于2022年，星期六第36页，共62页，编辑于2022年，星期六第37页，共62页，编辑于2022年，星期六用计算器求毒力方程及LD50或LC50v打开计算器的开关，先按MODE2进入“LR”v按INVAC 清除旧存数字v按INVMR清除贮存数字v将浓度的对数值作为X输入到XD,YD，将死亡率查
13、机率值作为Y输入到RUNv顺次输入，输完后，按Kout 3 检查输入数字的组数。第38页，共62页，编辑于2022年，星期六按INV7显示的数字为a值按INV8显示的数字为b值按INV9显示的数字为r值已知 a b，就可写出回归方程y=a+bx第39页，共62页，编辑于2022年，星期六求LC50或LD50、LC90、LC95 求LC50，按5INVYX；再按INVLog，显示的数字为LC50求LC90按6.2816 INV Y X；再按INVLog，显示的数字为LC90 LC95 按6.6449 INV Y X；再按INVLog，显示的数字为LC95 第40页，共62页，编辑于2022年，星
14、期六第41页，共62页，编辑于2022年，星期六（1）死亡率的校正：一般情况，若有对照死亡，需要校正，若对照死亡超过20%，应重做；如对照死亡率小于5%时，也可不必校正。（2）死亡率的范围：一般，至少有4个浓度处理试虫的死亡率应在1090%。这样计算得到的LD50更可靠。（3）相关系数R：一般应在0.9以上。注意事项注意事项第42页，共62页，编辑于2022年，星期六u叶片浸液法u玻片浸液法u叶片残毒法 杀螨剂的毒力测定方法第43页，共62页，编辑于2022年，星期六1 用盆栽豆苗（大豆苗）繁殖叶螨（如棉叶螨），测定时用成螨，且发育时间（日龄）一致。2 将成螨转到无虫豆苗上，每株40头左右。叶
15、片浸液法第44页，共62页，编辑于2022年，星期六3 将待测药剂（乳油或可湿性粉剂）用水稀释成系列浓度，每一浓度可配4050ml，置于小烧杯中。4 将接上螨的豆苗浸入药液6s，取出后用吸水纸吸去多余药液。处理时先用清水处理对照(CK)，再由低浓度至高浓度处理，每一浓度重复45次。第45页，共62页，编辑于2022年，星期六5 处理后豆苗置于25恒温箱中，保持24h后检查死亡率。为了防止红蜘蛛逃逸，可在叶柄基部涂上一圈凡士林。6 将药剂浓度取对数值，24h校正死亡率（或减退率）取机率值，用统计分析法求出毒力回归式Ya+bx及LC50值。第46页，共62页，编辑于2022年，星期六 本法适于测定
16、各种雌成螨，饲养时必须将螨种鉴别、纯化，使之为单一种类。以苹果实生苗饲养山楂红蜘蛛，以柑桔苗饲养柑桔红蜘蛛，螨的龄期应一致。浸玻片法第47页，共62页，编辑于2022年，星期六1将双面尼龙胶带剪成2cm长，贴在常用的载玻片的一端。2用零毫毛笔挑起34日龄的雌成螨，将其背部粘在胶带上，每行10头，粘23行或用毛笔将雌成螨集中在一起。然后将贴在胶带的玻片的胶面部分轻轻地压向成螨背部，以粘着为准，再用毛笔将重叠或不规则的或死亡的挑去，使其成行保留，这样比较省时也省工。第48页，共62页，编辑于2022年，星期六3用水将药剂配成系列浓度，置于小烧杯中，用手持纸片无螨的一端，将粘有螨的一端置药液中浸5秒
17、钟，取出后用吸水纸吸去多余药液。对照用清水处理。各处理重复4次。第49页，共62页，编辑于2022年，星期六4取一白瓷盘，盘底铺厚2cm的海绵，其上铺一块略小一点的蓝布，再铺一层塑料薄膜，然后加蒸馏水至蓝布。将粘有螨的玻片平放在盘中，再用纱布罩住，置25，相对湿度85左右温室中，经24h检查死亡率。用毛笔尖轻轻触动螨足，以不动者为死亡。求出毒力回归式及LC50值。第50页，共62页，编辑于2022年，星期六编号浓度名称日期。浸玻片法示意图浸玻片法示意图注：。表示为成螨第51页，共62页，编辑于2022年，星期六叶片残效法叶片残效法此法适用于测定卵、若螨及背部刚毛过长的雌成螨（不易用浸玻片法）。
18、1 在直径为9cm的培养皿内放入保温的叶片2 在叶片上接20头雌成雌成螨，让其在叶片上产卵，24h后移去成螨，保留螨卵。3 将待测药剂用水稀释成5个系列浓度第52页，共62页，编辑于2022年，星期六4 将有螨卵的叶片在待测药液中浸5s，每一药液浓度重复5次，对照用清水处理。5 将培养皿保持在22，相对湿度95恒温箱内，每天观察记载卵的孵化数及若螨存活数，直至对照组全部孵化成若螨。6 计算药剂各浓度的杀卵或杀死若虫的效果。求出药剂杀卵或若虫的毒方程及LC50。第53页，共62页，编辑于2022年，星期六杀虫剂田间药效试验第54页，共62页，编辑于2022年，星期六 处理组死亡率对照组死亡率校正
19、死亡率（%）1对照组死亡率X100注意：u自然死亡在20 以内，可以用上面的公式计算，否则不行；u自然死亡在5以内，不必校正死亡率。第55页，共62页，编辑于2022年，星期六田间防治试验中最常用的是虫口减退率：田间防治试验中最常用的是虫口减退率：第56页，共62页，编辑于2022年，星期六Henderson-Tilton（享德森（享德森递尔顿）公式：递尔顿）公式：Ta处理区防治后存活的个体数量；Tb处理区防治前存活的个体数量；Ca对照区防治后存活的个体数量；Cb对照区防治前存活的个体数量。第57页，共62页，编辑于2022年，星期六一、填空1。胃毒作用的测定方法有夹毒叶片法、液滴饲喂法和口腔
20、注射法。2。触杀作用的测定方法有点滴法、药膜法或残膜法和浸液法。3。内吸杀虫剂毒力的测定方法分为直接测定法和间接测定法2种。第58页，共62页，编辑于2022年，星期六4。杀螨剂的毒力测定方法有叶片浸液法、玻片浸液法和叶片残毒法。第59页，共62页，编辑于2022年，星期六1.供试昆虫有哪些要求？2.在杀虫剂的毒力测定实验中有哪些注意事项？3.依据的熏蒸作用原理，设计一个对根结线虫的方案。二、简答题第60页，共62页，编辑于2022年，星期六4.依据的内吸作用原理，设计一个对蔬菜蚜虫的毒杀作用方案（用直接法）。第61页，共62页，编辑于2022年，星期六三、计算题根据所给的数，计算LD50或EC50第62页，共62页，编辑于2022年，星期六